实验性哮喘豚鼠内脏感觉传入部位SP免疫反应的研究

用免疫组织化学方法结合显微图像分析 ,观察哮喘豚鼠脊神经节、结状神经节、脊髓和孤束核内 P物质的变化。正常豚鼠 C7～ T5 脊神经节及结状神经节内存在 SP阳性反应细胞 ,其细胞质内充满棕色阳性反应颗粒 ,并可见大量的阳性反应纤维。 P物质免疫反应也见于 C7～ T5 脊髓后角板层 、板层 、中间带外侧核 ,呈点状分布 ,偶见阳性纤维。孤束核内可见大量的 P物质阳性反应。哮喘豚鼠结状神经节、C7～ T5 脊神经节和相应节段脊髓后角、孤束核内 P物质阳性反应的密度明显增多而平均灰度值却明显地低于对照组。上述结果表明 ,哮喘豚鼠内脏感觉传入部位 P物质表达增强 ,提示这些部位的 P物质可能参与哮喘的发病过程     

哮喘豚鼠结状神经节,脊神经节和中枢内神经激肽A含量变化

应用放射免疫分析方法，检测16只哮喘豚鼠一级传入系统和中枢内神经激肽A（NKA）的水平。与正常对照组（结状神经节62．82±11.09pg/gw.w，C7～C8段脊神经节53．78±12．63，T1～T2段脊神经节54．23±19．08，T3~T5段脊神经节50．53±14．23pg／gw．w;C7～T5段脊髓后角45．86±19．56，孤束核55．27±19．68pg/gw．w．和延髓腹侧浅层37.36±18．29pg/gw．w．）相比，哮喘豚鼠一级传入系统和中枢内（结状神经节83．81±15．23pg/gw．w．C7～C8段脊神经节72．11±17．16．T1～T2段脊神经节73．95±23．76，T3～T5段脊神经节70.53±14．23pg／gw．w，C7~T5段脊髓后角60.25±21．38pg／gww．孤束核71．36±18．76pg／gw．w和延髓腹侧线层49．58±20．19pg／gw．w．）NKA水平明显升高（P＜0．05）．这些结果提示，一级传入系统和中枢内的NKA可能参与哮喘的发病机制。     

哮喘豚鼠内脏感觉传入部位P物质含量的变化

目的：研究哮喘豚鼠内脏感觉传入各部位内P物质含五的变化,探讨P物质在哮喘发病中的作用机制。方法：放射免疫分析。结果：哮喘豚鼠内脏感觉传入部位P物质水平（结状神经88.23±16.32,C7－C8段脊神经节对．77.22±13.26T1-T2段脊神经节75.96±15.67,T3－T5段脊神经节75．50±19．28,C7－T5段脊阅后角68．25±13．39,孤束核（81．63±17．68）pg/gW．W）明显高于正常对照组（结状神经节70．28±12．29,C7－C8段脊神经节59．87±17．36,T1-T2段脊神经节65．35±13．24,T3－T5段脊神经63．23±12.88,C7－T5段脊伍后角57．52±18．69,孤束核（68．37±16．89)pg/gW.W（P＜0.05）。结论：下呼吸道和肺的内脏感觉传入征路各部位的P物质可能参与哮喘发病过程。     

哮喘豚鼠下呼吸道及内脏传入部位NGF表达的研究

目的　探讨哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统神经生长因子 (NGF)的作用。　方法　利用免疫组织化学和原位杂交结合显微图像分析 ,研究哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统NGF免疫反应及mRNA表达的变化。　结果　与对照组相比 ,哮喘豚鼠NGF免疫反应在气道上皮、C7～T5段脊神经节及脊髓背角明显上调 (P <0 0 1) ,NGFmRNA表达在气道上皮明显增多 (P <0 0 1) ,而在C7～T5段脊神经节及脊髓背角却未见明显改变。　结论　气道上皮、C7～T5段脊神经节及对应节段脊髓背角的NGF可能参与哮喘的发病过程 ;C7～T5段脊神经节细胞及对应节段脊髓背角神经细胞本身能合成NGF。     

神经生长因子对哮喘豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在哮喘豚鼠内脏感觉传入部位的表达及神经生长因子(NGF)对MMP-2的调节作用。方法应用免疫组织化学方法检测豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2免疫反应的变化。用W estern b lot蛋白印迹方法检测豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果①免疫组织化学结果显示:豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角内MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值(0-深色,255-浅色),生理盐水组(175.50±4.67、166.47±6.20)与单纯致敏组(172.63±9.51、165.20±5.14)比较没有显著差异(P>0.05);哮喘组(139.87±4.88、125.93±4.49)明显低于生理盐水组和单纯致敏组(P<0.01);哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体,169.73±6.24、152.37±8.67)则明显高于哮喘组(P<0.01)。②W estern b lot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中MMP-2和NGF阳性产物的IDV(Integrated Density Value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2的表达。结论C7~T5段脊神经节以及相应节段脊髓背角内的MMP-2可能也参与哮喘的发病过程,NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时MMP-2的表达有可能延缓气道重塑的发生,可能是治疗哮喘的新途径。     

降钙素基因相关肽在哮喘豚鼠内脏传入系统的定量分析

本文应用放射免疫分析方法研究了实验性哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统内降钙素基因相关肽含量的变化 ,藉以探讨降钙素基因相关肽在哮喘发病时的作用机制。结果表明 ,哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统 (结状神经节、C7～T5 节段脊神经节和脊髓后角、孤束核等处 )中的降钙素基因相关肽含量明显高于各对照组 ( P<0 .0 5)。本研究提示 ,下呼吸道和肺的内脏传入成分中的降钙素基因相关肽可能参与哮喘发病的病理生理过程。     

NGF对哮喘小鼠肺及初级传入神经元SH2-Bβ表达的调节作用

目的探讨NGF对哮喘小鼠肺及初级传入神经元(C7-T5脊神经节及相应脊髓后角)SH2-Bβ表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组、anti-NGF组,每组10只。利用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lot)测定各组SH2-Bβ的免疫反应变化;M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7-T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值(MOD)分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P<0.01)。而Anti-NGF组小鼠SH2-Bβ免疫阳性产物MOD分别为0.252±0.015、0.158±0.012、0.251±0.024,明显低于哮喘组(P<0.01)。W estern B lot显示哮喘小鼠的C7-T5节段脊髓及肺内SH2-BβMOD与-βactin MOD的比值(0.738±0.021和1.526±0.022)明显高于对照组(0.346±0.017和0.512±0.018,P<0.01);而Anti-NGF组小鼠在肺、C7-T5节段脊髓SH2-Bβ免疫阳性产物MOD与β-actioin MOD的比值(0.436±0.011和0.682±0.015)明显低于哮喘组(P<0.01)。结论肺内、C7-T5脊神经节及对应脊髓后角神经元的SH2-Bβ可能参与NGF介导的哮喘的发病过程。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内、脊神经节及脊髓背角内蛋白激酶C表达的抑制作用

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内蛋白激酶C（PKC）表达的抑制作用。方法利用免疫组织化学和Western blotting方法。研究哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC的免疫反应变化。结果哮喘组豚鼠肺内、C—L脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC平均光密度值明显高于对照组（P〈0．01），而地塞米松组则明显低于哮喘组（P〈0．01）。结论PKC可能参与哮喘的发病过程，地塞米松抑制哮喘豚鼠PKC的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

实验性哮喘时神经生长因子对P物质的上调作用

目的：探讨实验性哮喘时神经生长因子（NGF）对P物质（SP）的调节机制。 方法： 应用放射免疫分析方法检测了NGF缺失时（鼻腔吸入NGF抗体）哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位SP含量的变化。 结果： NGF缺失时哮喘豚鼠气管、支气管、肺、C7-T5段脊神经节及相应节段脊髓后角、结状神经节和孤束核区SP含量明显低于哮喘组和对照组（P<0.01）。 结论： 实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的P物质水平，两者共同参与支气管哮喘的发病过程。     

哮喘时豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位Trk A的表达以及神经生长因子对其影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。方法：应用免疫组织化学方法检测豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位 NGF 高亲和力受体酪氨酸激酶 A(TrkA),用 Western blot 蛋白印迹方法检测豚鼠肺、脊神经节和脊髓背角 NGF 和 TrkA 的表达。结果：(1)与对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓背角内 TrkA 阳性反应产物的平均灰度值均明显降低；哮喘 NGF 抗体组则明显高于哮喘组。(2)哮喘组豚鼠肺、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓样品中 TrkA 或 NGF 目标带的 IDV 与内参照 IDV 的比值均明显升高,而哮喘 NGF 抗体组则明显低于哮喘组。结论：NGF 可上调 TrkA 的表达,TrkA 介导的细胞内信号传导系统可能是 NGF 参与哮喘发病的主要途径之一。     

实验性哮喘时神经生长因子对神经激肽A的上调作用

目的:探讨实验性哮喘时神经生长因子(NGF)对神经激肽A(NKA)的调节机制。方法: 应用放射免疫分析方法检测了NGF缺失时(鼻腔吸入NGF抗体)哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位NKA含量的变化。结果:NGF缺失时哮喘豚鼠气管、支气管、肺C₇-T₅段脊神经节及相应节段脊髓后角、结状神经节和孤束核区NKA含量明显低于哮喘组和对照组(P＜0.01)。 结论: 实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的神经激肽A水平,二者可能参与支气管哮喘的发病过程。     

哮喘豚鼠脊神经节和结状神经节内的NKA

应用ＡＢＣ免疫组织化学方法，结合图像定量分析，研究了１８只哮喘豚鼠结状神经节和Ｃ７～Ｔ５段脊神经节内神经激肽Ａ（ＮＫＡ）的变化。结果表明，哮喘时结状神经节及Ｃ７～Ｔ，段脊神经节内ＮＫＡ阳性细胞教分别增加了约３０．６％和３５．１％；ＮＫＡ平均密度分别增加了３５．２％和３１．７％，ＮＫＡ灰度值的改变也有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。结果提示一级传入系统的ＮＫＡ可能参与了哮喘发作的病理生理过程，是其发作的重要因素之一     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入部位TrkA表达的抑制作用

为了探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)TrkA表达的影响,我们利用免疫组织化学和Westernblot方法,研究了哮喘豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA的免疫反应变化。结果显示:哮喘组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA表达明显高于对照组(P<0.01),而地塞米松组则明显低于哮喘组(P<0.01)。结果提示TrkA可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠TrkA的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

哮喘豚鼠脊髓内CGRP免疫反应的定量分析

应用免疫组织化学和显微图像分析方法，对１６ 只哮喘豚鼠Ｃ７～Ｔ５ 节段脊髓后角内的ＣＧＲＰ免疫反应产物进行了定量研究。结果表明，哮喘豚鼠Ｃ７～Ｔ５ 节段脊髓后角内ＣＧＲＰ阳性反应纤维的密度大大高于正常对照组和实验对照组（Ｐ＜ ０．０１），平均灰度值明显低于正常对照组和实验对照组（Ｐ＜ ０．０１）。本研究结果提示，Ｃ７ ～Ｔ５ 节段脊髓后角内的ＣＧＲＰ可能参与支气管哮喘发病的病理生理过程。本实验结果为进一步探讨哮喘发病的中枢机制提供了一定的形态学依据。