抗家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体对感染乳鼠保护作用的初步研究

以家鼠型HFRS病毒R22株100LD_(50)感染2～4日龄乳鼠。于感染后0、48、96及120h分别经腹腔注射对该株病毒具有中和活性的单一McAb或混合McAb,同时设该病毒免疫血清、单注射该病毒和Sp2/0腹水3种对照,观察McAb对感染乳鼠的保护作用,观察时间为35d。结果在感染后96h内注射单一McAb、混合McAb及免疫鼠血清的保护率均可达100％,而Sp2/0腹水对照组与病毒对照组的乳鼠均在感染后第13～16d发病死亡。在死亡乳鼠的脑,肺组织中检出了HFRS病毒抗原,而在保护存活乳鼠的脑、肺组织中均未检出病毒抗原。McAb对感染乳鼠的保护率与其浓度相关。在感染后24h分别注射不稀释、10~(-1)、10~(-2)和10~(-3)稀释的混合McAb,其保护率依次为100％、88.7％、55.6％和16.7％。     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染新生乳鼠后24小时,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现,有5株McAb保护率为100％,1株McAb保护率为17％,另有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接种感染后不同时间的乳鼠,结果在48小时内接种保护率均达100％;但随接种时间推后,保护率逐渐下降,感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验,发现保护效果与接种剂量密切相关。采用固定抗体,稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5.8。     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒：陈株100LD50腹腔感染新生乳鼠后24小时，腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb，观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现，有5株McAb保护率为100％，1株McAb保护率为17％，并有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接神感染后不同时间的乳鼠，结果在48小时内接种保护率均连100％；但随接种时间推后，保护率逐渐下降，感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验，发现保护效果与接神剂量密切相关。采用固定抗体，稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5．8。     

汉滩病毒感染成龄鼠模型用于特异性单克隆抗体保护作用的研究

目的建立汉滩病毒感染成龄鼠的模型,以进行mAb的保护实验.方法将7～8wkBalb/c小鼠于感染病毒前1d及感染后1d,2d和4d,分别经腹腔注射环磷酰胺65mg/kg体重,总剂量为260mg/kg体重,观察其发病及死亡情况,并检测其体内不同脏器中汉滩病毒抗原的分布及滴度.用mAb对上述感染小鼠进行保护实验.结果经环磷酰胺处理的成龄鼠,由汉滩病毒隐性感染变为急性致死性感染(死亡率达100%).其发病症状与汉滩病毒感染的乳鼠类似,平均发病与死亡时间较感染乳鼠晚2～3d,且较为规律和集中.汉滩病毒抗原在感染的成龄鼠和乳鼠体内的分布及滴度基本相同.用mAb对感染的成龄鼠和乳鼠分别进行保护实验,结果完全一致.结论经环磷酰胺处理的成龄鼠,可作为汉滩病毒和HFRS研究用的动物模型.     

应用McAb和免疫血清对不同HERS病毒株感染乳鼠保护作用的比较

为进一步分析HFRS病毒不同株之间保护性抗原的差异,以保护性McAbs和免疫血清对不同株HFRS病毒感染新生乳鼠进行保护接种,以比较其保护作用。将HFRS病毒陈株、76-118株和R22株100LD_(50)分别感染乳鼠,感染后24h,经腹腔分别接种Mc-Ab(3D8、3G1、8F8、8G3和8G2)和免疫血清(陈株、76-118株和R22株),结果发     

McAb接种孕鼠体内对HFRS病毒感染子代乳鼠的被动保护作用

肾综合征出血热(HFRS)迄今尚无特异性有效的治疗制剂。本文在用小白鼠新生乳鼠人工感染HFRS病毒试验证明抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染动物有保护作用的基础上,在小白鼠孕鼠(BALB/c纯系小鼠,本室自行繁殖)产前3d和5d,皮下接种抗HFRS病毒血凝素McAbs(3D8、3G1、3G3及8F8等量混合制剂1ml,待其子鼠产后第3天,腹腔接种100LD_(50)HFRS陈株病毒悬液,观察两周。同法接种抗HF-     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素结构蛋白的初步研究

本文报告用蔗糖-丙酮法从肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株感染的乳鼠小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)3G_1与Se-pharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得了纯化的HFRS病毒血凝素结构蛋白,经特异性试验证实该洗脱物为HFRS病毒血凝素,并有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳属保护作用的研究

本文进一步观察了自制的24株抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染HFRS病毒新生乳鼠的保护作用。将HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染昆明种小鼠的新生乳鼠后24h,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发     

McAbs接种孕鼠体内对HFRS病毒感染新生子代乳鼠的被动保护作用

选BALB/c纯系小白鼠孕鼠于产前5d和3d,皮下接种抗HFRS病毒血凝素McAbs和多克隆免疫鼠血清,待其子鼠产后第3天,腹腔接种100LD_(50)HFRS病毒陈株攻击感染子代乳鼠。结果表明,接种孕鼠体内的该McAbs,可经胎盘进入子鼠体内,能被动地保护新生子代乳氧免于HFRS病毒致死性感染。孕鼠产前5d和3d,皮下接种该McAbs可100％保护新生子代乳鼠,而孕鼠产前4d接种多克隆免疫鼠血清,保护率只有42.9％,但感染对照组新生子代乳鼠则全部死亡。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharosc 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或童叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该50K血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

应用McAb和免疫血清对不同HFRS病毒株感染乳鼠保护作用的比较

HFRS病毒陈茱、76-118株和R22株100LD_(50)分别感染新生乳鼠。感染后24h,经腹腔分别接种McAb(3D8、3G1、8F8、8G3和8G2)和免疫血清(陈株、76-118株和R22株),结果发现,这5株McAb对陈林和76-118株感染乳鼠100％保护,而对R22株感染乳鼠只有McAb8F8有25％保护,而其佘McAb均无保护。免疫血清的保护实验也表明,陈株和76-118株可以交互保护。上述结果提示,陈株与76-118株保护性抗原较一致,但R22株与前两株差别较大。     

特异性单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染成年裸鼠保护作用的观察

研究证实抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝素单克隆抗体(McAb)对野鼠型HFRS病毒人工感染的小白鼠乳鼠有很好的保护作用。将McAb接种孕鼠后对新生子代乳鼠也可产生被动保护作用。本实验用该McAb对HFRS病毒攻击的成年裸鼠的保护作用进行了观察。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠,测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明,被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)的保护作用,其中3株有明显的保护作用,并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠，测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明，被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素莹克隆抗体(McAb)的保护作用，其中3株有明显的保护作用．并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

作者采用抗HFRS病毒血凝素McAb和HRP标记的同一种McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法具有高度特异性,重复性也良好。用本法和血凝试验平行地检测了10批粗提HFRS陈株感染鼠脑的血凝素抗原,检出率分别为100％和70％,而前法滴度明显高于后法(GMT 1:506和1:26),有显著性差异(P<0.01)。用本法检验了10种从不同疫区不同宿主分离的HFRS病毒株的感染鼠脑或Vero—E6培养上清,结果均为阳性,虽血凝素抗原滴度高低不一,却再次说明不同HFRS病毒株血凝素之间有群共同性,因此本法在HFRS的临床诊断,流行病学监测,疫苗效价鉴定中都有实用价值,可取代血凝试验。     

SARS病毒对乳鼠和鸡胚致病性的初步观察

目的　建立SARS病毒的动物模型。方法　选用 1～ 5日龄的BALB c乳鼠和昆明种乳鼠 ,通过脑内、腹腔和鼻腔 3种途径 ,分别接种自广州和北京地区非典型肺炎病人中分离的SARS病毒BJ0 1和GZ0 1株 ,观察该病毒对不同种系小鼠的致病性。同时 ,选用 8～ 10日龄鸡胚经尿囊腔接种这 2株病毒 ,观察对鸡胚的致病性。结果与结论　采用SARS病毒BJ0 1和GZ0 1株经脑内接种 ,均可使BALB c乳鼠和昆明种乳鼠发病或死亡 ,但这种致病性不规律 ;而从腹腔和鼻腔途径接种病毒均不能使乳鼠发病。鸡胚对该病毒不敏感。     

三种ELISA法检测HFRSV抗原的比较

本文报告了BA-ELISA、夹心法ELISA和抗体捕获法ELISA对五株肾综合征出血热病毒(HFRSV)细胞培养物和感染乳鼠脑中病毒抗原的检测情况,结果表明BA-EL ISA敏感性最高,对HFRSV细胞培养物的检测滴度平均达1:576～2304,对感染乳鼠脑研磨液上清平均达1:2000～11200。由于三种方法均采用了HFRS单克隆抗体,因此非特异反应显著降低,敏感性得以提高。文中对三种ELISA方法的优缺点进行了讨论。     

国产聚肌胞阻断HFRS.VJ_(10)在小白鼠乳鼠体内复制

为寻找伴肾综合征出血热(HFRS)的特效治疗,我们用动物试验筛选针对伴肾综合征出血热病毒(HFRS.V)的抗病毒药,发现国产聚肌胞(Poly I:C)可有效地阻断HFRS.VJ_(10)在小白鼠乳鼠体内复制,为临床使用该药提供了实验室依据。现报告如下:     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。