氧化苦参碱抗上消化系肿瘤作用的研究进展

氧化苦参碱能抑制人胃癌MGC-803细胞移植瘤或人胰腺癌BxPC-3细胞移植瘤在裸鼠体内生长。体外实验发现氧化苦参碱能浓度相关地抑制人胃癌SGC-7901细胞、MGC803细胞、BGC823细胞、MKN-45细胞,人胰腺癌SW1990细胞,人食管癌Eca-109细胞增殖并诱导凋亡。体外实验发现氧化苦参碱能增强化疗药抗人胃癌SGC-7901细胞作用。临床上已试用于食管癌的治疗。     

广藿香醇下调PD-L1的表达对人胃癌细胞抗肿瘤作用的研究

目的 研究广藿香醇能否通过下调人胃癌细胞中关键促癌因子PD-L1的表达进而抑制人胃癌细胞的恶性行为以及下调PD-L1表达的机制。方法 使用不同剂量的广藿香醇作用于常规培养的人胃癌细胞SGC-7901和BGC-823,用CCK-8实验、细胞划痕实验和流式细胞技术分别检测不同浓度的广藿香醇对SGC-7901和BGC-823细胞的增殖能力、迁移能力和凋亡能力的影响,用荧光定量PCR法检测SGC-7901和BGC-823细胞中PD-L1、NF-κB的mRNA表达水平的变化,用Western-blot法检测SGC-7901和BGC-823细胞中PD-L1、NF-κB的蛋白表达水平的变化。结果 经实时荧光定量PCR法检测人胃正常上皮细胞GSY和胃癌细胞系细胞BGC-823、MGC-803、SGC-7901、MKN-74中mRNAPD-L1、NF-κB mRNA表达水平,最终筛选出BGC823、SGC7901进行后续实验。与对照组比较,0.08、0.1、0.3、0.5 mmol/L药物组中BGC-823、SGC-7901细胞的增殖能力显著降低,且降低幅度随加药浓度升高而增大。经计算SGC-7901的...     

miR-217靶向MAPK1抑制胃癌细胞侵袭转移作用研究

目的：研究miR-217靶向MAPK1与胃癌侵袭转移的关系。方法在3个不同分化的胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823中通过qRT-PCR技术检测miR-217情况,Western blot检测MAPK1表达,Transwell实验分析miR-217下调MAPK1表达后胃癌细胞侵袭转移能力改变。结果低分化人胃癌细胞株中MAPK1低表达,而miR-217高表达,中、高分化人胃癌细胞株中MAPK1高表达,而miR-217低表达（P＜0.05）;SGC-7901-miR-217mimics细胞株中miR-217表达增高,而MAPK1表达下调（P＜0.05）;而SGC-7901、SGC-7901-miR-Scramble、SGC-7901-miR-217-PM 3个细胞株中miR-217表达水平较低,而MAPK1表达水平较高（P＞0.05）。 SGC-790-miR-217 mimics侵袭细胞计数明显低于其他3组（P＜0.05）,SGC-7901、SGC-7901-miR-Scramble、SGC-7901-miR-217-PM 3组之间侵袭细胞计数无显著性差异（P＞0.05）。结论 miR-217能靶向结合MAPK1,降低其表达水平并抑制胃癌细胞的侵袭和转移。     

黄荆子乙酸乙酯提取物体内外对胃癌SGC-7901细胞作用的研究

目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)在体内外对人胃癌SGC-7901细胞的作用。方法细胞计数法检测EVn-50对人胃癌SGC-7901细胞生长增殖的抑制作用,并绘制细胞生长曲线;平板克隆试验测定细胞集落形成率;建立SGC-7901裸鼠异种移植瘤模型,绘制移植瘤生长曲线,计算经EVn-50治疗后的肿瘤抑制率;光镜和电镜观察肿瘤组织病理变化。结果在体外,1、10、100mg·L-1的EVn-50均能抑制人胃癌SGC-7901细胞生长和增殖,呈浓度和时间依赖性;与对照组比较,细胞集落形成率明显下降(P<0.05);在体内,EVn-50能够抑制SGC-7901细胞裸鼠异种移植瘤生长,5、10、20mg·kg-1的EVn-50对移植瘤的瘤重抑制率分别为32%、43%和56%,且呈浓度依赖性;病理学观察结果,EVn-50可引起SGC-7901细胞坏死,诱导SGC-7901细胞凋亡。结论EVn-50在体内外均可抑制SGC-7901细胞生长和增殖,并在体内诱导其凋亡。     

苦参碱促进胃癌细胞凋亡及对STAT3、Cleaved-caspase3、MMP-2蛋白表达的影响研究

目的　探讨苦参碱对胃癌细胞凋亡的影响及对信号转导与转录活化因子3（STAT3）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Cleaved-caspase 3）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达的影响。方法　以胃癌细胞SGC-7901、BGC823 为研究对象,用0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL浓度的苦参碱作用于胃癌细胞48 h,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖情况,并计算出半数抑制浓度为1 mg/mL。用1 mg/mL苦参碱作用胃癌细胞12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,MTT 检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测苦参碱作用后胃癌细胞的凋亡情况。Western blot 检测苦参碱对胃癌细胞STAT3、Cleaved-caspase 3、MMP-2 蛋白表达的影响。结果　不同浓度（0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL）苦参碱作用于胃癌细胞后,细胞存活率均显著下降。1 mg/mL苦参碱作用于胃癌细胞12 h、24 h、48 h、72 h、96 h后,细胞增殖均受到抑制,与作用前比较,差异有统计学意义（P<0.05）。1 mg/mL苦参碱作用48 h 后,胃癌细胞SGC-7901、BGC823 凋亡率明显增加,与作用前比较,差异有统计学意义（P<0.01）。1 mg/mL苦参碱作用后,胃癌细胞SGC-7901、BGC823 中STAT3 蛋白表达无显著变化（P>0.05）,p-STAT3、MMP-2 蛋白表达明显下降,Cleaved-caspase 3 蛋白表达明显增加,与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论　苦参碱可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制胃癌细胞中p-STAT3、MMP-2 蛋白表达,促进Cleaved-caspase 3 蛋白表达。     

刺梨提取物CL对胃癌细胞的抑制作用

目的观察刺梨提取物CL的体外抗肿瘤作用。方法采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑2)-2,5-二苯基四氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2.5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测法测定CL对胃癌-7901和MKN-45细胞的细胞毒性作用,台盼蓝排染法计数不同浓度药物作用下,不同时间点的活细胞数,绘制细胞生长曲线。结果MTT法检测显示,0.01μl·ml1～100μg·ml-1的CL 处理12～96h胃癌SGC-7901细胞和MKN-45细胞生长的抑制率均呈现剂量依赖性和时间依赖性, 细胞生长曲线显示:随CL浓度的升高曲线逐渐右移,且100μg·ml1的CL对SGC-7901细胞的生长曲线呈逐渐下降趋势。结论CL对胃癌7901和MKN-45细胞的体外生长具有一定的抑制作用,这种抑制作用均呈刺量依赖性和时间依赖性,提示CL有一定的体外抗肿瘤作用。     

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。     

紫杉醇诱导胃癌BGC-823和SGC-7901细胞凋亡作用的比较

目的研究胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞对紫杉醇诱导凋亡的敏感性。方法用0．1～0．5μmol·L^-1紫杉醇作用于BGC-823和SGC-7901细胞,再用0．3μmol·L^-1紫杉醇对BGC-823和SGC-7901细胞分别作用0、6、12、24、36、48h,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果（1）紫杉醇对两种胃癌细胞均有明显诱导凋亡作用,且均呈时间依赖性及剂量依赖性;（2）中分化的SGC-7901细胞株对紫杉醇的敏感性明显高于低分化的BGC-823细胞株。结论不同分化程度的胃癌细胞株对紫杉醇的敏感性不同。     

阿司匹林对人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生长和自噬的影响

目的:研究阿司匹林对人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生长和自噬的影响。方法:以SGC-7901、BGC-823细胞为研究对象,磷酸盐缓冲液(PBS)为阴性对照组,作用时间为48 h,采用MTT法检测1、2、4、6、8、10 mmol/L阿司匹林以及5 mmol/L阿司匹林单用和分别与2.5μmol/L氯喹、2.5μmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对胃癌细胞存活率的影响;采用流式细胞术检测2、5mmol/L阿司匹林以及5 mmol/L阿司匹林单用和分别与2.5μmol/L氯喹、2.5μmol/L 3-MA联用对胃癌细胞凋亡率和细胞周期分布的影响;采用Hoechst33258染色观察5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞核形态学的影响;采用Transwell小室试验检测5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞迁移的影响;采用激光共聚焦扫描显微镜观察5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞内自噬体形成的影响;采用Western blot法检测2、5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞内自噬标志物LC3-Ⅱ蛋白表达的影响。结果:与阴性对照组比较,阿司匹林能明显抑制SGC-7901、BGC-823细胞的存活率,且呈浓度依赖性,但对SGC-7901、BGC-823细胞的凋亡率没有明显影响,能够诱导细胞周期阻滞在G_1期。与阿司匹林单用组比较,阿司匹林+氯喹和阿司匹林+3-MA作用后SGC-7901、BGC-823细胞存活率明显升高,G_1期细胞分布率明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与阴性对照组比较,阿司匹林作用后SGC-7901、BGC-823细胞均未见明显的DNA裂解片段、凋亡小体以及碎块状的浓密亮蓝色,迁移数量明显减少(P<0.001),自噬体明显增加,LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论:阿司匹林能够显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长,使其细胞周期停滞在G_1期,其作用机制可能与激活细胞自噬有关。     

四君子汤及拆方含药血清对胃癌细胞株侧群细胞的生长抑制研究

目的:考察四君子汤及拆方含药血清对胃癌细胞株侧群(Side population,SP)细胞的生长抑制作用.方法:选择不同分化程度的人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823,以荧光染料Hoechst 33342染色,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪检测并分选出SP细胞和non-SP细胞;MTT法观察两组细胞的体外增殖活性;克隆形成实验考察两组细胞的集落形成能力;应用中药血清药理学方法,酶标仪MTT比色法观察四君子汤及拆方不同剂量、不同浓度含药血清对胃癌细胞SP细胞的生长抑制作用.结果:胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823中SP细胞比例分别为3.40％、2.00％、1.07％,与non-SP细胞相比,SP细胞具有较强的体外增殖活性(P＜0.05)和较强的克隆形成能力(P＜0.01);加药组以20％高剂量血清组最为明显.四君子汤及拆方含药血清对这3株细胞的SP细胞增殖均有明显的抑制作用,呈剂量和浓度依赖性.结论:四君子汤及拆方含药血清能明显抑制胃癌SP细胞的生长.     

A new bisphosphonate derivative,CP, induces gastric cancer cell apoptosis via activation of the ERK1/2 signaling pathway

Aim:

To investigate the effects of a new derivative of bisphosphonates, [2-(6-aminopurine-9-yl)-1-hydroxy-phosphine acyl ethyl] phosphonic acid (CP), on human gastric cancer.

Methods:

Human gastric cancer cell lines (SGC-7901, BGC-823, MKN-45, and MKN-28) and human colon carcinoma cell lines (LoVo and HT-29) were tested. Cell growth was determined using the MTT assay. Flow cytometry, Western blot, caspase activity assay and siRNA transfection were used to examine the mechanisms of anticancer action. Female BALB/c nude mice were implanted with SGC-7901 cells. From d6 after inoculation, the animals were injected with CP (200 μg/kg, ip) or vehicle daily for 24 d.

Results:

CP suppressed the growth of the 6 human cancer cell lines with similar IC₅₀ values (3239 μmol/L). In SGC-7901 cells, CP arrested cell cycle progression at the G₂/M phase. The compound activated caspase-9, increased the expression of pro-apoptotic proteins Bax and Bad, decreased the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2. Furthermore, the compound selectively activated ERK1/2 without affecting JNK and p38 in SGC-7901 cells. Treatment of SGC-7901 cells with the specific ERK1/2 inhibitor PD98059 or ERK1/2 siRNA hampered CP-mediated apoptosis. In the human gastric cancer xenograft nude mouse model, chronic administration of CP significantly retarded the tumor growth.

Conclusion:

CP is a broad-spectrum inhibitor of human carcinoma cells in vitro, and it also exerts significant inhibition on gastric cancer cell growth in vivo. CP induces human gastric cancer apoptosis via activation of the ERK1/2 signaling pathway.     

连翘三萜类化合物对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡诱导机制的研究

目的：观察连翘中分离所得两种三萜类化合物：达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇[20（s）-dammar-24-ene-3β,20-diol-3β-acetate,DM]和五环齐墩果烷型三萜类化合物安博立酸（ambrolicacid,AA）对5种人消化道肿瘤细胞的抑制作用,以及AA对人胃癌细胞株SGC-7901的凋亡诱导作用。方法：MTT法观察AA和DM对5株人消化道肿瘤细胞株MKN-45、MKN-28、SGC-7901、PNAC-1、HepG-2的生长抑制作用,Annex-in-V/PI染色流式细胞术测定SGC-7901细胞的凋亡率,Western blotting检测相关凋亡蛋白表达。结果：两种三萜类化合物对人消化道肿瘤细胞有较好的抑制作用,其作用呈剂量依赖性;AA作用细胞72h后可以明显诱导细胞凋亡,而DM对细胞未有凋亡诱导作用;AA可下调pro-caspase3、6、8、9蛋白和Bcl-2蛋白表达水平,同时可上调Bax蛋白水平。结论：AA和DM对5株人消化道肿瘤细胞有明显抑制作用,AA诱导SGC-7901细胞凋亡的主要途径可能为调节凋亡相关蛋白的表达。     

N_3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶通过凋亡作用抑制人胃癌细胞生长

目的N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(N3-O-toluyl-flu-orouracil,TFU)是N1-乙酰基-N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶的降解产物和5-氟脲嘧啶(5-FU)前体物,本研究观察TFU体内外对人胃癌细胞生长抑制活性及作用特点。方法体外实验,以MTT法测定TFU对人胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长抑制作用,并与肝微粒体酶存在条件下的结果比较。在肝微粒体酶存在时,将人胃癌细胞与低剂量TFU孵育10h,以吖啶橙/溴乙锭染色(AO/EB)观察肿瘤细胞形态;分别以琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪分析肿瘤细胞DNA断裂特点;Western blot法检测肿瘤细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。体内实验,以裸鼠移植人胃癌细胞并灌胃给药观察TFU对肿瘤细胞生长抑制作用。取肿瘤组织切片,以TUNEL(ter-minal deoxynucleoid transferase nick-end labeling)染色法,观察肿瘤细胞核染色比例,计算凋亡率。结果TFU对胃癌细胞生长抑制作用较弱,而在肝微粒体酶存在时能够明显提高TFU对胃癌细胞生长的抑制率。TFU对裸鼠移植人胃癌细胞生长抑制作用较强,对动物体重抑制作用弱。进一步实验,在肝微粒体酶存在下,低剂量TFU能够诱导肿瘤细胞凋亡。吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色后,胃癌细胞呈现剂量依赖性凋亡形态改变。细胞染色体DNA断裂呈现Ladder现象和亚二倍体(sub-G1)凋亡峰。TFU上调胃癌细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白水平。TUNEL法检测裸鼠移植人胃癌细胞凋亡,TFU能够提高胃癌细胞核TUNEL染色水平。结论TFU对人胃癌细胞生长具有抑制作用,该作用可能与肝微粒体酶缓慢水解释放出低水平5-FU有关,低水平5-FU可能通过调节Bcl-2和Bax表达活性诱导胃癌细胞凋亡。     

金刚藤正丁醇提取物对胃腺癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响

目的探讨金刚藤正丁醇提取物对人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖及迁移的影响。方法体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞,给予不同浓度(25、50、100μg·mL-1)金刚藤正丁醇提取物处理,并以环孢素A处理的SGC-7901细胞作为阳性对照,采用细胞增殖抑制试验(MTT法)检测胃腺癌细胞的增殖情况;采用划痕实验检测胃腺癌细胞的迁移情况。结果不同浓度(25、50、100μg·mL-1)的金刚藤正丁醇提取物对人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05),且呈时间、剂量依赖性;金刚藤正丁醇提取物可降低人胃腺癌SGC-7901细胞的迁移能力,且呈时间、剂量依赖性(P<0.05)。随着金刚藤正丁醇提取物浓度的增加及培养时间的延长,人胃腺癌SGC-7901细胞迁移率由78.1%下降至58.4%(P<0.05)。结论金刚藤正丁醇提取物可以浓度和时间依赖性的方式抑制体外培养的人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖和迁移。     

siRNA沉默胃癌SGC-7901细胞COX-2基因对VEGF-C表达与细胞迁移的影响

目的：探讨RNA干扰技术（RNAi）沉默环氧化酶-2（COX-2）基因对血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及细胞迁移能力的影响。方法：利用siRNA干扰胃癌SGC-7901细胞COX-2基因,RT-PCR和免疫荧光检测干扰前后COX-2基因和VEGF-C基因在mRNA和蛋白水平表达差异;细胞划痕实验比较COX-2基因对细胞迁移能力变化的影响。结果：COX-2基因干扰后,胃癌SGC-7901细胞中COX-2基因和VEGF-C基因的mRNA和蛋白水平明显下调,组间差异具有统计学意义（P〈0.05）,且COX-2与VEGF-C的表达呈显著正相关性（P〈0.05）;同时胃癌细胞的迁移能力也明显降低。结论：siRNA能特异性地抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2基因的表达,进而抑制VEGF-C的表达,降低胃癌细胞的迁移能力,减少胃癌细胞转移。     

藤梨根乙醇提取物联合CIK细胞对胃癌细胞SGC-7901杀伤作用的研究

目的观察抗肿瘤中药藤梨根的乙醇提取物与CIK细胞在体外联合对胃癌细胞SGC-7901的杀伤作用。方法运用倒置显微镜观察体外培养的胃癌细胞SGC-7901在分别加入不同浓度的藤梨根醇提物以及不同效靶比的CIK细胞24、48 h后的形态变化;采用MTT法检测藤梨根醇提物、CIK细胞以及两者联合作用后的胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制率。结果当1 mg/ml的藤梨根醇提物与效靶比为20：1的CIK细胞相联合24 h,杀伤效率高于单用藤梨根醇提物及CIK细胞（P〈0.05）。结论藤梨根醇提物与CIK细胞在一定条件下联合,具有协同杀伤胃癌细胞的作用。