荧光定量PCR法对淋球菌、解脲支原体和沙眼衣原体的检测分析

淋球菌 (ＮＧ)、解脲支原体 (ＵＵ)和沙眼衣原体 (ＣＴ)是临床常见的性传播疾病和泌尿生殖道感染的主要病原体 ,荧光定量ＰＣＲ主要采用ＰＣＲ结合荧光探针的体外ＤＮＡ扩增和检测技术 ,快速、特异、灵敏地定量检测临床标本中的病原体。本文对应用荧光定量ＰＣＲ法对 4 0 2例可疑性传播疾病的患者进行以上 3种病原体的检测进行分析 ,结果报告如下。1　对象与方法1.1对象　 2 0 0 0年 7月— 2 0 0 1年 3月来我院门诊就诊的可疑性传播疾病患者 4 0 2例 ,其中男 316例 ,女 86例 ,年龄 2 2～38岁。1.2　方法1.2 .1　试剂　 3项检测项目均采用中…     

聚合酶链反应在慢性泌尿系统及性病诊断中的应用

淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体均可引起泌尿生殖道炎症 ,分泌物常规涂片及淋病奈瑟氏菌培养对急性淋病大多能正确诊断 ,但对慢性淋病或非淋球菌性尿道炎患者 ,分泌物涂片结果不可靠 (尤其是女性患者 ) ,细菌培养分离率偏低 ,常会引起漏诊或误诊。本实验采用ＰＣＲ技术 ,对 10例慢性尿道炎和 34例性病患者的泌尿生殖道分泌物进行检测[1,2 ] ,结果报道如下。1　材料与方法1.1　试剂ＰＣＲ试剂盒 (上海复华公司 ) ,10 0 0ｍｌ 5 0ｘＴＡＥ电泳缓冲液 (2 4 2 ｇＴｒｉｓ ,5 7.1ｍｌ冰醋酸 ,10 0ｍｌ 0 .5ＭＥＤＴＡ ,蒸镏水补到 10 0 0ｍｌ,ｐ…     

611例性传播疾病病原DNA检测结果及分析

８０年代以来，我国不少地区性病再度流行，病种有所增加，发病率呈逐年上升趋势。由于部分病人未经正规治疗，导致许多病例就诊时症状和体征不明显，给临床诊断带来不少困难。为深入了解当地ＳＴＤ（性传播疾病）流行的主要病种及混合感染情况，用ＰＣＲ（聚合酶链反应）...     

应用PCR检测泌尿生殖道NG CT UU感染的初步探讨

近年来,淋球菌(Ｎ.ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ,ＮＧ)、沙眼衣原体(Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ,ＣＴ)和解脲支原体(Ｕ.ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ,ＵＵ)感染逐渐增多,且呈现混合感染的趋势。为了探讨淋病和非淋病性尿道(宫颈)炎(ＮＧＵ)感染和/或混合感染情况,笔者自1996年10月至1999年3月对来我科就诊的1100例泌尿生殖道感染、拟诊性传播疾病的患者,应用多聚酶链反应(ＰＣＲ)进行了ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ三种性病病原体联合检测,现将结果分析如下。1　资料和方法1.1　一般资料　共1100例,男873例,女227例;年龄16～53岁,平均27岁;病程3ｄ…     

应用荧光定量PCR技术检测淋球菌等性传播疾病病原微生物

在性传播疾病中 ,淋球菌 (ＮＧ) ,沙眼衣原体 (ＣＴ) ,解脲支原体 (ＵＵ)的感染较为常见。我们采用的ＰＣＲ方法结合了荧光探针的体外扩增和检测技术[1,2 ] ,不仅把假阳性率降低到最低限度 ,同时还保留了常规ＰＣＲ的高灵敏性和特异性。通过对人生殖道分泌物样本中以上 3种病原体ＤＮＡ的测定 ,检测了112 2例临床送检可疑标本 ,为上述 3种病原体感染的早期诊断以及性病高危人群的初筛等 ,提供了核酸水平上的参考依据。现报告如下。1　材料和方法1 1　材料1.1 1　标本来源及取材方法　　标本均由本院门诊妇科、皮肤性病科以及泌尿科等科室从…     

720例泌尿生殖道感染者病原检测结果分析

目的　了解目前本地区性病患者体内病原体的感染状况和分布规律。　方法　对就诊的 72 0例有泌尿生殖道炎症表现者采样进行淋球菌、支原体、衣原体、白色念球菌 4种常见病原体检测。　结果　实验室检查阳性者 43 8例 ,阳性率 60 8% ,其中男性阳性率为 64 5 % ,高于女性的 5 5 0 % (P <0 0 5 ) ;4种病原体中支原体检出率最高 ,为5 4 3 % ,淋球菌检出率最低 ,为 6 1% ;混合感染型占 5 5 0 % ,高于单纯感染型的 45 0 %。　结论　本市泌尿生殖道感染者中 ,支原体、衣原体感染引起的非淋菌性尿道炎 (NGU)多于淋病 ,支原体是目前本地区NGU的主要病原体 ;病原体以混合感染形式居多 ,提示临床性病诊断时应注意多种病原体同时检测 ,对混合感染者施行联合治疗措施。     

保定市225名暗娼性传播疾病感染情况调查

目的了解保定市中低档娱乐场所暗娼性传播疾病感染状况,为针对暗娼开展干预工作提供科学依据。方法随机抽取62家中低档娱乐场所225名暗娼进行一对一匿名从业基本情况、高危性行为信息和是否接受过干预服务等问卷调查,并采血进行HIV和梅毒抗体的检测,同时采集宫颈分泌物进行相关性病病原体检测。结果接受检查的225名暗娼中,有90名至少感染一种性病病原体,检出率为40.00%,HIV未检出。在国家要求监测的5种性病中,本文均进行了调查,其感染率分别为：淋病7.56%、梅毒3.56%、生殖道沙眼衣原体感染18.67%、尖锐湿疣11.56%、生殖器疱疹0.00%。结论中低档场所的暗娼性传播疾病感染严重。对暗娼进行有针对性的健康教育及性病等相关知识宣传、干预是有效遏制性病艾滋病在该人群中传播的根本措施。     

泸州地区5种STD聚合酶链反应检测结果分析

目的：调查泸州地区５种性传播疾病（ＳＴＤ）的发病情况。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１００９例ＳＴＤ患者同时检测淋球菌（ＮＧＨ）、沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲支原体（ＵＵ）、人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）、梅毒螺旋体（ＴＰ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）。结果：ＰＣＲ检测ＮＧＨ、ＣＴ、ＵＵ、ＨＰＶ、ＴＰ、ＨＳＶ的总检出率分别为２９．６３％、２４．７１％、１９．３４％、１８．３８％、０．３７％、７．５７％，单一病原体感染占６９．９７％，两种或两种以上病原体混合感染占３０．０３％。结论：ＰＣＲ可快速、敏感、特异地一次性检出ＮＧＨ、ＣＴ、ＵＵ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＴＰ泌尿生殖道感染。     

268例女性生殖道淋球菌、沙眼衣原体及解脲支原体感染分析

近年来 ,女性生殖道感染中淋球菌、沙眼衣原体及解脲支原体等性病病原体的检出率明显增高。由于其具有传染性 ,且易转为慢性 ,造成长期反复感染 ,治疗最为困难 ,因而倍受关注。 1998年 3月 2 0 0 1年 12月 ,我院诊治 2 68例 ,回顾分析如下。1　资料与方法1.1　一般资料　本组患者 2 68例 ,年龄 95 1岁 ,平均 3 1.5岁 ,病程 5ｄ2年。标本采用无菌棉拭子收集阴道及宫颈分泌物。1.2　方法　淋球菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)及解脲支原体(ＵＵ)的检查采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法 ,试剂盒由ＤＮＡ提取液、ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ＰＣＲ反应物阴性…     

利用基因芯片检测性传播疾病

目的 探讨基因芯片在性传播疾病检测中的应用。方法 针对中国主要流行的7种性传播疾病病原体,选择高度保守的特异基因片段为芯片探针．将其PCR扩增产物用MicroGrid Ⅱ型全自动点样仪点样于包埋有醛基的载玻片上,制备成性病检测基因芯片。对7种临床病原DNA样本及阴性样本进行扩增、标记,与芯片杂交后,用激光共聚焦荧光扫描仪检测并分析结果。结果 该芯片可以从病原体感染样本DNA中检测到阳性参照序列以及与病原体相对应的特异基因片段。结论 性病检测基因芯片能对性传播疾病病原体做出快速、准确的检测。     

广西北海地区590例性病门诊首诊患者泌尿生殖道感染病原分析及干预效果研究

目的检测广西北海地区性病门诊泌尿生殖道感染首诊患者解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、淋球菌(NG)、梅毒螺旋体(TP)、人类免疫缺陷病毒(HIV)等性传播疾病病原体的感染检出情况,并对规范化性病门诊的干预和防治效果进行探讨,为有效减少性传播疾病和对性传播疾病的有效干预治疗提供有价值的临床信息。方法收集590份(以泌尿生殖道症状为主诉)首诊性病患者泌尿生殖道标本的检测结果,包括病原学检测、血清TP抗体、HIV抗体检测;在干预治疗后分析治疗效果。结果 590例患者总阳性检出率为50.85%,其中泌尿生殖道感染UU、CT和NG(包括混合感染)阳性标本占49.66%,TP阳性占1.02%,HIV占0.17%。3种病原体UU、CT和NG单独感染的检出率分别为39.83%、4.58%和2.20%,三者比较差异有统计学意义(χ~2=406.33,P<0.01)。女性病原体总阳性率为68.67%,高于男性的44.78%,差异有统计学意义(χ~2=25.55,P<0.01)。支原体药敏结果显示交沙霉素、强力霉素是该地区支原体感染者较为敏感的首选治疗药物。UU和CT规范化治疗有效率较高,其余病原发生情况下,有效率均达100%,表明积极首诊后,都能取得理想的治疗效果。结论该地区就诊的泌尿生殖道感染首诊患者中,泌尿生殖道UU感染检出率在3种检测病原体中所占比例最高,有必要在高危人群中进行常规检查;女性在3种病原体总体传播过程中较男性更容易感染;根据药敏测试结果,建议北海地区支原体感染者应首选交沙霉素、强力霉素治疗;规范化治疗在北海地区取得了良好的效果。     

PCR快速检测小儿消眼衣原体肺炎病原体

采用ＰＣＲ对２８０名肺炎患儿咽分泌物进行了沙眼衣原体检测，其中１４例检出ＣＴ，检出率为５％。ＰＣＲ快速，简便，灵敏，克服了传统检测方法的不足、为临实验室检测ＣＴ肺炎病原体有效而实用的手段。     

326例非淋菌性尿道炎病原体检查及临床分析

近年来性传播疾病 ( STD)发病率有上升趋势 ,其中尤以非淋菌性尿道炎 ( NGU)病例增多更为明显 ,是目前性病防治的重点和难点。为了探讨 NGU的病原体及其临床特点 ,我们对 2 0 0 0年 1月— 2 0 0 1年 1 2月在我院性病门诊确诊的 32 6例男性 NGU患者的病原体检查结果和临床特点进行分析 ,为临床诊治提供参考。1　资料与方法1 .1　一般资料　所有病人均来自我院性病门诊 ,本人或其性伴有性乱史 ,均有不同程度的尿道刺痛、灼热、瘙痒、胀痛或分泌物等泌尿生殖系统症状 ,经临床病原学检查排除淋病而确诊为 NGU的患者 ,年龄 1 8～ 65岁 ,平…     

论我国现状性伴通知的不确切性

性传播疾病 (ｓｅｘｕａｌｌｙｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ ,ＳＴＤｓ)过去民间俗称“花柳病” ,主要由性接触所引起 ,约占性病的 95 %以上。性传播疾病在全世界广泛流行 ,对人类的健康和社会的影响越来越大 ,估计全世界每年的性病患者高达 2亿之多。1936年 ,当美国第一次出现梅毒流行高峰期的时候 ,首次提出了性伴通知为重点的预防概念 ,并有效地控制了梅毒的流行。其后它在英、美等国实践中不断加强和完善 ,至今仍然是控制性病流行的重要措施。性伴通知 (ｐａｒｔｎｅｒｎｏｔｉｆｉ ｃａｔｉｏｎ或ｃｏｎｔａｃｔｔｒａｃｉ…     

性传播疾病患者四种病原体523例检测结果分析

为了解性传播疾病 (ＳＴＤ)的发病情况、病种的分布及感染特点 ,我科性病实验室从 2 0 0 1年 10月至2 0 0 2年 10月对性病门诊 12 76例可疑ＳＴＤ患者进行了 4种病原体即淋球菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)、解脲脲原体 (Ｕｕ)、梅毒螺旋体 (ＴＰ)的检查 ,现将结果报告如下。1　资料与方法1.1　检查对象　 12 76例均为我科性病门诊患者 ,本人或配偶有婚外性关系史 ,加上本人或配偶有可疑临床症状或体征 ,均采集标本作相关性病实验室检查。其中男性 85 1例 ,女性 4 2 5例 ,最大年龄 78ａ ,最小年龄为 3ａ ,平均为 30 .5ａ。实验室检查结果阳性…     

1334例临床可疑性病患者病原体检测结果分析

近年来 ,性传播疾病 (ＳＴＤ)发病率上升 ,其有效治疗有赖于病原体的快速、准确诊断。涂片镜检法快速 ,但灵敏度、特异性差 ;淋病奈瑟氏菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体(ＣＴ)和解脲支原体 (ＵＵ)培养条件要求高 ,耗时较长 ,且不易培养成功 ;分子生物学技术已广泛用于病原体感染的快速、敏感的检测。本文对近 5年本院 1334例门诊病人采用ＰＣＲ技术检测常见性传播疾病病原体 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　 1997～ 2 0 0 1年本院门诊泌尿生殖系统感染病人 1334例 ,其中男 82 8例 ,女 5 0 6例 ,年龄15～ 6 1岁 ,平均年龄 30岁。男性用无…     

PCR扩增肺癌组织puma基因第四外显子的实验研究

目的探讨PCR扩增肺癌组织中puma基因第四外显子（GC含量76．44％）的最适实验条件．方法通过改变PCR反应体系各组分的浓度和反应条件,探讨PCR反应体系最适浓度和反应条件．结果PCR反应体系为dNTP200μmol／L,普通MgCl2 1．0mmol／L,引物500nmol／L,TaqDNA聚合酶0．1U／μL,模板量不低于4000ng,普通10×扩增体系缓冲液5μL,总体积50μL.反应条件为94℃预变性5min,94℃ 45s、61℃ 45s、72℃ 45s循环33次,最后72℃延伸5min．结论确立了puma基因第四外显子的PCR扩增条件,为后续的突变研究奠定了基础．     

PCR循环测序法检测K-ras和HCV 5'非编码区基因变异

目的：建立一种简单、快速、可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析Ｋｒａｓ基因和ＨＣＶ５′非编码区基因的变异情况。方法：ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立了以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶、荧光标记的２′，３′双脱氧核苷三磷酸（ｄｄＮＴＰ）直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Ｋｒａｓ癌基因和丙型肝炎病毒５′非编码区（ＨＣＶ５′ＮＴＲ）进行了序列测定。结果：肺癌组织中的Ｋｒａｓ基因第１外显子第３５位碱基发生点突变（ＧＧＴ→ＧＡＴ）；属于高度保守区的ＨＣＶ５′ＮＴＲ存在基因变异。结论：ＰＣＲ循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点，为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。     

技术进步与性病病原体检测学的发展关系

我国性传播疾病从70年代末期死灰复燃,目前呈不断上升的趋势,主要性传播疾病包括淋病、支原体、衣原体、艾滋病等,据世界卫生组织(WTO)估计每年新增3.33亿性病感染者[1]。因此,性传播疾病的防治任务非常艰巨,其中,对性病病原体的及时、准确的诊断,对性传播疾病的控制意义重大,而医学技术的进步发展不断带动着性病病原体检测学的发展。总的来看,性病病原体检测经历了形态学、免疫学、分子生物学三个大的发展阶段。1形态学发展阶段1.1涂片镜检法:主要通过涂片后进行革兰氏染色或巴氏染色等特殊染色,然后通过显微镜进行观察判定,优点为简单易…     

夫妻同患四种性病病例报告

1999年 5月我科性病门诊接治了一对夫妻同患四种性病、五种病原体感染的病例 ,现报告如下 :患者男 ,35岁 ,已婚 ,司机。 1999年 5月 14日因包皮起新生物二月、尿痛、尿道口流脓一周就诊。体检见尿道口明显红肿 ,有大量黄白色脓性分泌物溢出 ,包皮及冠状沟内见 3枚米粒至黄豆大小肉红色菜花状疣体 ,醋酸白试验阳性 ,双掌跖见附角化性鳞屑的褐红色斑丘疹 ,双侧腹股沟淋巴结触及肿大 ,无触痛 ,与周围无粘连。实验室检查 :⑴取尿道分泌物涂片镜检 ,白细胞内外见Ｇ- 双球菌 ,淋球菌培养阳性 ,解脲支原体培养阳性 ,ＰＣＲ -ＤＮＡ示淋球菌(ＮＧ)、…