蛋黄免疫球蛋白制备和应用研究进展

用抗原免疫鸡从蛋黄中提取抗体，已用于各种免疫检测中，过去，用哺乳动物产生的抗体，往往能活化标本中的补体系统，并可能与类风湿因子结合，对免疫学试验产生干扰。而蛋黄抗体（Ｙｏｌｋ ＩｇＧ简称ＩｇＹ）不激活补体，也不与类风湿因子结合，具有突出的优占。ＩｇＹ比较稳定，耐酸，耐热，可以内服，可用于某些肠道疾病及其他疾病的防治。鸡经免疫１０天左右，即在蛋黄中产生了抗体，约２０天达到高峰，如再继续免疫加强，一般     

继续医学教育试题(6)

继续医学教育试题(6)一、选择题1.大肠癌的血行微转移:()A.可用RT-PCR法测定细胞角蛋白20的mRNA判定;B.可用RT-PCR法测定人端粒酶催化亚单位的mRNA判定;C.以上mRNA表达水平与癌细胞分化程度无关;D.以上mRNA表达水平与肿瘤的Dukes分期无关。2.日本血吸虫抗原SjMP10是:()A.含无蚴的虫卵分泌的;B.可能引起血吸虫病患者形成肝脏虫卵肉牙肿;C.可用作ELISA法检测特异抗体的包被抗原;D.用于检测急性、慢性血吸虫病患者的IgM类特异抗体。3.抗人P53IgY抗体是:()A.用P53免疫鸡后自鸡卵黄中提取的;B.不激活补体;C.不与类风湿因子反…     

抗变形链球菌卵黄抗体的初步研制

目的通过用变形链球菌作为疫苗免疫蛋鸡,从鸡蛋中获得抗变形链球菌特异性抗体(抗S.mutans抗体).方法以变形链球菌Ingbritt珠(血清型c型)作为抗原免疫蛋鸡,取鸡蛋卵黄以水溶-硫酸铵沉淀-超滤提取纯化的卵黄抗体(IgY),以直接凝集法测定鸡血清及蛋黄中的抗体.结果血清中首先产生抗变形链球菌的抗体,在初免后2周逐步增高,在4～5周达到高峰,而后抗体转移到卵黄中,制备的卵黄抗体经电泳检测,相对分子质量约为210 000,纯度达到75%以上,每只鸡蛋中能提取约150 mg的IgY.结论变形链球菌菌苗免疫蛋鸡可使鸡蛋产生高效价IgY.     

抗铜绿假单胞菌IgY的制备优化及抑菌效果

目的探讨高效价、高纯度且生物活性好的抗铜绿假单胞菌(PA)的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备工艺。方法采用超声破碎、共振裂解、研磨破碎等方法裂解PA,筛选出最佳裂解抗原,然后将裂解抗原或经甲醛灭活的全菌抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法(SDS-PAGE)和二喹啉甲酸(BCA)法测定抗体纯度和浓度,平板法评价IgY对PA的抑菌效果,并以蒸馏水作为对照;扫描电镜法检测细菌形态变化。结果超声破碎法裂解的PA抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5mL的1×109CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可高达1∶25 600;硫酸铵沉淀,超滤纯化后的抗体纯度可达94%,浓度为27.02mg/mL;IgY体外抑菌试验表明,2.7mg的抗体能明显抑制PA生长,与蒸馏水对照组相比,IgY试验组菌落数减少了9/10,并且明显抑制了细菌绿色色素的产生;扫描电镜观察IgY试验组菌体较长、较大且皱缩。结论采用灭活全菌免疫母鸡,经水稀释、硫酸铵沉淀、超滤纯化的制备方法可得到高纯度和高效价的抗PA IgY,所制抗体具有特异性和显著抑菌活性。     

抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY)的制备

目的 制备抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体（IgY）,并观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度及稳定性。方法 用载脂蛋白apoB免疫本地良种产蛋鸡,通过水溶法提取蛋黄中抗体IgY,Bradford法测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,Western blot免疫印迹法测定抗体的特异性,ELISA检测热处理后的抗体活性。结果 经提纯的抗体含量为7.5 mg/ml,抗体纯度达到90%,Western blot免疫印迹法证明该抗体具有高度的特异性,70℃以下稳定性良好。结论 抗载脂蛋白apoBIgY抗体的制备为下一步免疫学检测奠定了基础。     

用淋菌抗原免疫鹌鹑从蛋黄提取抗体的研究

用淋菌抗原免疫鹌鹑从蛋黄提取抗体的研究王德春，朱忠勇，徐元斌，黄梁浒目前，在免疫学检测中所用的多为哺乳动物抗体，此类抗体大部能激活标本中的补体系统或产生非特异性结合，常影响试验结果。用抗原免疫鸡并从鸡蛋黄中提取抗体，可消除上述干扰现象，且不需抽血，即...     

抗变形链球菌卵黄抗体的初步研制

目的 通过用变形链球菌作为疫苗免疫蛋鸡，从鸡蛋中获得抗变形链球菌特异性抗体（抗S.mutans抗体）。方法 以变形链球菌Ingbritt珠（血清型c型）作为抗原免疫蛋鸡，取鸡蛋卵黄以水溶－硫酸铵沉淀－超滤提取纯化的卵黄抗体（IgY)，以直接凝集法测定鸡血清及蛋黄中的抗体。结果 血清中首先产生抗变形链球菌的抗体，在初免后2周逐步增高，在4－5周达到高峰，而后抗体转移到卵黄中，制备的卵黄抗体经电泳检测，相对分子质量约为210000，纯度达到75％以上，每只鸡蛋中能提取约150mg的IgY。结论 变形链球菌菌苗免疫蛋鸡可使鸡蛋产生高效价IgY。     

抗多种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白的制备研究

目的:探讨一种新的获得IgY多克隆抗体的方法和效果。方法:用三种常见的细菌病原体金黄色葡萄球菌(SA)、大肠埃希氏菌(EC)、铜绿假单胞菌(PA)制备复合抗原,并经过灭活后免疫来亨蛋鸡产生IgY多克隆抗体。从免疫后的蛋中提取出IgY多克隆抗体,ELISA法测IgY抗体特异性及浓度滴度。SA、EC、PA三种标准菌株体外抑制实验检测IgY抗体抑菌效果。结果:用SA、EC、PA复合抗原成功地免疫来亨蛋鸡产生IgY多克隆抗体,ELISA法检测抗体浓度滴度为100,000;IgY抗体明显抑制SA、EC、PA三种标准菌株的生长。结论:SA、EC、PA三种细菌复合抗原可以刺激来亨蛋鸡产生高浓度滴度抗体IgY,该抗体能明显抑制SA、EC、PA三种标准菌株的生长。     

类风湿性关节炎患者荷C3免疫复合物的检测结果

类风湿性关节炎(RA)患者血清中可以检出类风湿因子(RF)等多种自身抗体,这些自身抗体形成的免疫复合物可以激活补体,具有在关节局部或其他部位造成损伤的可能。我们用PEG沉淀法检测RA患者总免疫复合物,用抗人C3抗体捕获ELISA法测定了患者血清中荷C3的CIC(C3／IgG和C3／IgM),报告如下。     

脂质体免疫测定技术

脂质体免疫试验(LIA)是以脂质体裂解释出内容指示剂为特征的高度敏感、特异的新型免疫测定技术,依其在脂质体裂解中是否需要补体可分为补体依赖和补体非依赖系统,此二类系统又各有数种测定模式。LIA 用于地高辛、茶碱等治疗药物、微生物抗原或抗体以及自身抗体、甲胎蛋白(AFP)、C 反应蛋白等血清学指标的检测,充分显示了其所具有的独特优越性。     

类风湿关节炎患者自身抗体的检测

类风湿关节炎(RA)是临床常见的原因不明的以慢性多关节炎为特征的自身免疫性疾病,主要引起关节滑膜炎症.以前诊断RA主要依靠临床表现和类风湿因子(RF),近年来,相继发现一些特异的自身抗体,如抗角蛋白抗体(AKA)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体等.本院自2009年2月以来开展了AKA、CCP抗体的检测.现对RA患者中3种自身抗体(RF、AKA、CCP抗体)进行回顾性分析,探讨其在RA患者中的诊断作用.     

组织型纤溶酶原激活剂抗血清的制备及初步应用

在研究ｔ－ＰＡ过程中，区分ｔ－ＰＡ与其它纤溶药物的较特异方法是采用抗体中和抑制试验。本文用２００μｇ ｔ－ＰＡ经背部皮下多点免疫家兔、待产生的抗体效价理想后，经兔动脉放血收集抗血清。该血清用ＤＥ－３２直接过滤法纯化、检定其纯度及特异性后，用于中和抑制试验检定ｔ－ＰＡ的基因工程产品。结果表明本组构建表达的野生型ｔ－ＰＡ和突变体ｔ－ＰＡ的活性均能被兔抗ｔ－ＰＡ抗体抑制，为特异产品。     

二步免疫印迹法的建立及在诊断类风湿关节炎中的意义

建立类风湿关节炎(RA)的特异性诊断方法。方法 用制得的可溶性核提取物为抗原,用免疫印迹法检测类风湿疾病患者血清中的RA33抗体。再以ENA为抗原,第2次用免疫印迹法检测RA33抗体阳性的病人血清中的RNP和Sm抗体。结果和结论 60例RA病人中22例阳性(36.6％),60例系统性红斑狼疮(SLE)病人中12例阳性(20％),两病的RA33抗体阳性率有显著性差别(P<0.05),而122例其他风湿性疾病和正常对照血清全为阴性。第2次免疫印迹法检测发现83％的RA33抗体阳性的SLE病人抗RNP(75％)和(或)抗Sm(33％)抗体为阳性,RA病人全阴性。这样用二步免疫印迹法检测可相对特异地诊断RA。     

抗风疹病毒卵黄免疫球蛋白的间接酶联免疫法检测的研究

风疹病毒(RV)感染孕妇,可导致死产、流产或胎儿畸形等先天性风疹综合征(CRS) [1] 。因此,及时准确快捷的诊断RV具有重要意义。卵黄免疫球蛋白IgY)具有不与类风湿因子结合,不激活补体系统等特点[2 ,3 ] ,可作为诊断试剂替代哺乳动物血清IgG ,提高诊断的准确性和特异性。本实验用RV免疫产蛋鸡,获得抗RVIgY的高免蛋,建立了间接酶联免疫检测方法(ELISA)。一、材料和方法1.实验材料:取18周龄健康产蛋鸡,隔离饲养1周,5只进行免疫,2只作为阴性对照。2 .试剂和仪器:完全福氏佐剂与不完全福氏佐剂(美国Sigma公司) ,标准鸡IgG及辣根过氧化物…     

抗环瓜氨酸肽抗体测定对类风湿关节炎诊断的临床价值

目的　分析评价抗环瓜氨酸肽抗体定量检测对类风湿关节炎的临床诊断价值以及结合类风湿因子测定的互补作用。方法　ELISA定量检测 5 0 6例血清样本抗环瓜氨酸肽抗体 ,散射免疫比浊法检测血清类风湿因子。结果　类风湿关节炎患者 2 0 3例 ,抗环瓜氨酸肽抗体阳性 16 6例 (81 8% ) ,平均浓度为 5 4 9RU ml。类风湿因子阳性 176例 (86 7% )。非类风湿关节炎患者 30 3例 ,抗环瓜氨酸肽抗体阳性 15例(4 9% ) ,类风湿因子阳性 6 8例 (2 2 4 % )。抗环瓜氨酸肽抗体特异性达 95 0 % ,敏感性 81 8%。结论　抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿关节炎诊断的特异性很高 ,联合类风湿因子的检测明显地提高了类风湿关节炎早期诊断的准确性。     

人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B抗体体外抑制组织蛋白酶B活性的试验

目的　体外试验人 鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗CatB)抗体对CatB的抑制作用。方法　培养 1株分泌人 鼠嵌合抗人CatB抗体细胞 ,收集细胞培养上清 ,分离纯化人 鼠嵌合抗人CatB抗体 ,用于体外抑制CatB活性试验。结果　该抗体在体外能抑制CatB活性。结论　抗CatB抗体能特异结合CatB并抑制其酶活性 ,将可能用于CatB过度表达的癌症治疗。     

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157∶H7抗体的制备与特性研究

目的研究制备特异性抗E.coliO157∶H7鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)及酶标记抗体(IgY-HRP)的工艺条件。方法分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡,水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY,再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记,各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果可获得纯度为79.6%~85.3%的IgY,提取率74%~77%;过碘酸钠氧化法标记效果较好,IgY-HRP(1mg/ml)最高效价640。结论免疫制备IgY方法可行,过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。     

抗角蛋白抗体、抗环瓜氨酸多肽抗体在类风湿关节炎诊断中的应用

目的：探讨抗角蛋白抗体、抗环瓜氨酸多肽抗体间的关系及其在类风湿关节炎诊断中的意义。方法：采用ELISA法测定抗环瓜氨酸多肽抗体、间接免疫法测定抗角质蛋白抗体、乳胶凝集法测类风湿因子。共检测82例类风湿患者，80例非类风湿关节炎患者，40例正常对照。结果：82例类风湿患者中抗环瓜氨酸多肽抗体、抗角蛋白抗体、类风湿因子阳性率分别为47．6％(39／82)，32．9％(27／82)，75．6％(62／82)，非类风湿关节炎患者中抗环瓜氨酸多肽抗体、抗角蛋白抗体、类风湿因子阳性率分别为3．75％(3／80)，2．5％(2／80)，15％(12／80)，正常对照仅有1例抗环瓜氨酸多肽抗体弱阳性及1例抗角蛋白抗体低滴度阳性。结论：抗环氨酸多肽抗体和抗角蛋白抗体均是类风湿特异性诊断指标，抗环瓜氨酸多肽抗体敏感性高于抗角蛋白抗体，与类风湿因子相结合有助于提高类风湿关节炎诊断的敏感性和特异性。     

斑点免疫结合法测定卵黄抗体的活性

背景:哺乳动物产生的抗体和鸡产生的卵黄抗体在物理、生物活性方面存在差异。卵黄抗体能耐酸耐热,可口服用来防治动物和人类的肠内感染疾病,且对发展常规的诊断免疫实验有益。传统的ELISA法检测卵黄抗体比斑点免疫结合法费时。目的:应用斑点免疫结合法检测卵黄抗体的稳定性。设计:开放性实验。单位:解放军成都军区昆明总医院输血科。材料:实验于2006-01/06在解放军成都军区昆明总医院完成。选取30周龄的白色莱杭母鸡2只,以HLA-A*0201α链作为抗原,纯化抗原的总蛋白浓度0.04g/L,相对分子质量为32000(自行制备);硝酸纤维素膜(进口分装);脱脂奶粉(安怡产品,批号20051220);DAB(博士德公司);辛酸(上海星火化工厂生产);硫酸铵(汕头市光华化学厂生产)。方法:①抗原HLA-A*0201α链以总蛋白浓度0.04g/L纯化后,进行鸡卵黄抗体的纯化,采用SDS-PAGE电泳检测卵黄抗体的纯化结果。②1μL抗原被点样在硝酸纤维素膜的中心,于37℃孵箱中烤干,浸于1mL的PBST中,37℃孵箱90r/min封闭振荡15min,重新更换1mL的PBST,加入一抗卵黄抗体,终浓度为10mg/L。在37℃孵箱振荡30min后,硝酸纤维素膜用PBST洗3次。加入二抗标记HRP的鼠抗鸡卵黄抗体,孵育30min后,硝酸纤维素膜用PBST洗3次,通过用DAB试剂孵育来显色。阳性反应产生一个深棕色的斑点,表明卵黄抗体具有较好的活性;斑点变浅表明失去部分活性;斑点消失表明失去全部活性。根据斑点的灰度值变化对照标准样品,可计算卵黄抗体剩余的百分活性。③卵黄抗体用磷酸盐缓冲液调整为1,0.1,0.01g/L3种蛋白浓度,室温下放置4个月,每个月分别从各种浓度的样品中取10μg,采用斑点免疫结合法检测卵黄抗体室温稳定性。④卵黄抗体分别置于7个EP管,100μL/管,编号1～7。1～3号管用1mol/L的HCL分别调整pH值为5,3,2;4～6号管用1mol/L的NaOH分别调整pH值为9,11,12;7号管的pH值为7(中性),不加酸或碱。1～7号管均放在37℃孵箱中3h,每隔1h各管分别取10μg样品,采用斑点免疫结合法检测卵黄抗体不同pH值条件下的稳定性。⑤卵黄抗体分别置于6个EP管,10μL/管,编号1～6。按顺序编号各管分别于30,40,50,60,70,80℃水浴15min,然后4℃冰箱冷却,每管取样10μg,以未经过加热处理的样品作为标准对照,采用斑点免疫结合法检测卵黄抗体热稳定性。主要观察指标:①卵黄抗体SDS-PAGE电泳检测。②卵黄抗体室温稳定性检测。③卵黄抗体不同pH值稳定性检测结果。④卵黄抗体热稳定性检测。结果:①纯化的卵黄抗体经SDS-PAGE电泳后有两条主带,重链相对分子质量约66000,轻链相对分子质量约25000。②1,0.1,0.01g/L的卵黄抗体,室温下放置4个月后仍然保留部分活性。③pH5～9时37℃孵育3h后,卵黄抗体仍有部分活性;在pH低于5或高于9的条件下37℃孵育3h后,卵黄抗体失去全部活性。④纯化的卵黄抗体分别置于6个EP管中,1～4号管的卵黄抗体仍有活性,第5管和第6管出现白色沉淀,可能是较高温度下蛋白变性引起的。结论:卵黄抗体稳定性较好,斑点免疫结合法能够快速简单的证明和描述卵黄抗体的功能活性,且只需要微量抗原和抗体,斑点特异,能同时处理大量样品。     

用人IgG共价包被贮存的红细胞检测类风湿因子的血凝反应法

在大多数类风湿关节炎患者血清中发现的类风湿因子(RF),是一些能与IgG-Fc起反应的抗体,其中多数属IgM类,而IgG和IgA的RF效价较低。在RF的常规检测中,使用最广的是用IgG包被的微粒(或细胞)的凝集反应,如Rose-Waaler血凝反应和胶乳微粒凝集反应。前者,致敏的RBC贮存时间短,而且试验样品必须加热灭活补体和用未致敏的绵羊红细胞(SRBC)吸收。后者虽方法比较简单,但有易受pH和离子强度的影响、发生自然凝集和特异性不及血凝法等缺点。为了克服这些不足之处,作者研究了一种新方法,即在福尔马林固定的贮存SRBC上用正常人IgG进行共价包被,用以检测RF,从而使试验血清不须加热灭活或用未包被的SRBC吸收,且具有稳定、特异和操作简单等优点,适合血清IgM-RF的常规测定。