GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化

目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象,以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒(野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT;第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸,由此不能再被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β突变质粒GSK3β-S9A;第85、86位点上赖氨酸突变为丙氨酸、失去激酶活性的GSK3β突变质粒GSK3β-KD)转染细胞,观察肾脏纤维化的标志性分子纤维连接素蛋白(fibronectin,FN)表达水平的改变,以及对TGF-β/Smad信号通路的作用。结果 LiCl增加HK-2细胞GSK3β的磷酸化,抑制GSK3β的活性,同时降低了细胞基础水平和TGF-β1诱导的FN表达。过表达的GSK3β-WT增强TGF-β1诱导的FN表达,而这种效应在GSK3β-S9A转染细胞更为显著。过表达GSK3β-KD抑制TGF-β1诱导的FN表达。分析对TGF-β/Smad信号通路的作用,LiCl可以抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化,而对Smad2磷酸化水平无影响。同时,LiCl也不改变Smad3的总蛋白表达。结论 GSK3β通过TGF-β1/Smad3信号通路促HK-2细胞纤维化,抑制GSK3β可以抗纤维化。     

GSK-3β参与抑制肺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)对肺癌A549细胞增殖的影响及可能机制.方法:MTT法检测不同浓度曲古抑菌素A(TSA)和联合GSK-3β抑制剂SB216763对A549细胞增殖的影响;Western Blot法检测各组细胞中GSK-3β和磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)蛋白表达的变化;流式细胞仪分析细胞周期;免疫细胞化学法检测p27蛋白水平.结果:TSA以剂量依赖性抑制A549细胞生长,使细胞周期阻滞于GdG1期,用SB216763预处理后明显减弱了TSA对A549细胞的生长抑制作用和细胞周期阻滞.TSA对细胞GSK-3β蛋白表达无明显影响,却降低了pGSK-3β蛋白水平.p27蛋白表达增加;抑制剂SB216763使pGSK-3β表达增加,下调p27蛋白水平.结论:GSK-3β参与并促进了TSA对肺癌细胞的生长抑制和细胞周期阻滞效应,其机制可能与GSK-3β对p27蛋白的调节有关.     

GSK3β/eEF2K信号通过调控自噬参与肺成纤维细胞诱导分化

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/真核延伸因子2激酶(eEF2K)在肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中的表达,以及对细胞自噬和纤维化的影响。方法 将L-929细胞(对照组)于适宜条件下培养48 h,加入5 ng/mL TGF-β1诱导其表型转化为肌成纤维细胞(TGF-β1组)。将空质粒、si-eEF2K及si-GSK3β转染肌成纤维细胞,培养48 h后采用免疫荧光染色法检测p-eEF2K和α-SMA蛋白表达情况,蛋白质印迹法检测各组eEF2K、p-eEF2K、GSK3β、P62及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达情况。结果 与对照组相比,TGF-β1组细胞p-eEF2K、GSK3β蛋白和α-SMA蛋白表达显著增加(P<0.05);转染si-eEF2K及si-GSK3β后,L-929细胞p-eEF2K/eEF2K表达下降(P<0.05),P62和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平增加(P<0.05),α-SMA蛋白表达降低(P<0.05)。结论 GSK3β/eEF2K信号可能通过降低自噬活性促进肺成纤维细胞向肌纤维细胞的表型转化,促进细胞纤维化进程。     

PI3K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现。随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为PI3K/AKT/GSK-3β信号通路。该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨。     

GSK-3β在肾脏疾病中的作用

糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是一种丝/苏氨酸激酶,GSK调节多种细胞反应,如细胞生长、分化、程序性死亡和炎性反应。目前研究发现,GSK-3β调控着促炎因子核因子κB(NF-κB)的活化,及NF-κB介导的趋化因子的表达。近年来一些研究揭示GSK-3β参与人和实验模型中的炎症性疾病,如急性肾衰竭、糖尿病肾病、慢性移植肾肾病。因此,抑制GSK-3β的活性可作为治疗肾脏疾病的靶点。     

GSK-3β介导七氟醚对脓毒症相关性脑病大鼠的脑保护作用

目的探讨糖原合成激酶3β(GSK-3β)介导七氟醚对脓毒症相关性脑病大鼠的脑保护作用。方法健康雄性SD大鼠48只,随机分为假手术(Sham)组、脓毒症相关性脑病(SAE)组、SAE+七氟醚后处理组和SAE+七氟醚后处理+GSK-3β抑制剂组四组,每组各12只。用腹腔注射脂多糖(LPS)建立SAE模型。建模后连续吸入2.5%的七氟醚30 min,利用Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能,七氟醚处理后1 d检测大鼠海马区细胞凋亡率、IL-6浓度、GSK-3β表达。结果与Sham组相比,SAE组、SAE+七氟醚后处理组和SAE+七氟醚后处理+GSK-3β抑制剂组大鼠逃避潜伏期均延长,穿越平台次数均减少,原平台所在象限停留时间均缩短,海马区细胞凋亡率增加,IL-6浓度升高,GSK-3β表达减少;与SAE组相比,SAE+七氟醚后处理组大鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增加,原平台所在象限停留时间延长,海马区细胞凋亡率降低,IL-6浓度降低,GSK-3β表达增加;与SAE+七氟醚后处理组相比,SAE+七氟醚后处理+GSK-3β抑制剂组大鼠逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,原平台所在象限停留时间缩短...     

马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨马钱苷对tau蛋白过度磷酸化的影响及其作用机制。方法 马钱苷（500、1 000 μmol/L）与人神经母细胞瘤细胞株（SK-N-SH细胞）预孵育24 h,之后加入PI3K抑制剂Wortmannin（WT）及PKA抑制剂GF-109203X（GFX）与SK-N-SH细胞孵育3 h,采用Western blotting方法观察马钱苷对tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的磷酸化,GSK-3β-Ser9、GSK-3β、PP2A催化亚基C（protein phosphatase 2A catalytic subunit C,PP2Ac）磷酸化/甲基化及PP2Ac的表达。结果 WT/GFX明显抑制p-GSK-3β-ser9的表达,引起GSK-3β活性增高,从而导致tau蛋白Thr205、Thr217、PHF-1位点高度磷酸化。马钱苷能够明显抑制模型细胞tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的过度磷酸化,但是不能增高p-GSK-3β-ser9的表达,提示马钱苷抑制tau蛋白磷酸化的作用不是通过影响GSK-3β通路实现的。但是实验显示马钱苷能够抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,但对Leu309位点甲基化无影响。结论 马钱苷能够抑制tau蛋白过度磷酸化,机制可能与其抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,提高PP2A活性有关,与GSK-3β通路无关。     

TGFβ1对人肾小管上皮细胞表达糖原合成酶激酶-3β的影响

目的 研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)对人肾小管上皮细胞株(human kidney proximal tubular epithelial cell line, HKCs)表达糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响.方法 将体外培养的的HKCs随机分为4组:正常对照组(C组):无血清培养基(free serum medium, FSM)培养; Ta组、Tb组和Tc组:用含不同浓度TGFβ1(Ta组:ng/ml,Tb组:0ng/ml,Tc组:0ng/ml)的FSM培养.12h后,分别用RT-PCR、Western blot检测HKCs GSK-3β的mRNA、总蛋白表达量以及蛋白磷酸化水平.结果 (1)GSK-3β mRNA和总蛋白在各组间表达量差异无统计学意义(P＞0.05),和C组相比各T组GSK-3β蛋白磷酸化水平显著升高(P＜0.01);(2)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平更高(P＜0.01);(3)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGFβ1虽不影响HKCs的GSK-3β mRNA和总蛋白表达量,但能提高GSK-3β蛋白磷酸化水平,后者可能参与TGFβ1诱导的 HKCs转分化过程.     

中药调控GSK-3β治疗阿尔茨海默病研究进展

阿尔茨海默病（AD）致病机制复杂,糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)已被证实可以通过参与多条信号通路,介导AD的进程。近年来,大量研究发现多种中药提取物、复方能够明显改善AD患者的症状,其机制可能与其抑制GSK-3β激活从而调控β-淀粉样蛋白（Aβ）的生成、tau蛋白过度磷酸化、细胞凋亡及细胞炎症反应等神经病理进程有关。对近年来国内外中药抑制GSK-3β干预AD的相关研究进行综述,探讨其内在机制,为深入研究中药参与AD的作用机制拓展思路。参考文献47篇。     

二苯乙烯苷通过调节GSK-3β/PP2A活性干预Aβ25-35致拟痴呆大鼠模型Tau蛋白磷酸化进程

目的 探讨二苯乙烯苷（2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glycoside,TSG）通过调节Aβ25-35致拟痴呆大鼠模型脑组织中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)、环磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（PKA）的表达干预Tau蛋白磷酸化的机制。方法 采用Morris水迷宫定位航行实验对50只24月龄老年雄性SD大鼠进行筛选,剔除天生痴呆大鼠后,筛选出36只,随机分为正常组、假手术组、模型组、TSG低剂量组（0.033g/kg）、TSG中剂量组（0.1g/kg）、TSG高剂量组（0.3g/kg）,每组6只。大鼠手术造模14d后,TSG各剂量组大鼠按相应剂量灌胃药物（连续28d）;其余3组大鼠每天灌胃等量生理盐水。灌胃结束后,采用避暗箱实验对大鼠学习记忆能力进行检测;免疫荧光法（IF）检测各组大鼠脑组织GSK-3β蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测GSK-3β、PP2A、PKA mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Tau、PP2A、PKA蛋白表达情况。结果 正常组、假手术...     

氯化锂通过抑制糖原合酶激酶3β维持缺氧心肌的缝隙连接

目的 在心肌慢性缺氧环境下,研究氯化锂对心肌间缝隙连接的影响.方法 将25只C57BL/6J小鼠分为常氧组、缺氧组、常氧对照组、缺氧+生理盐水组和缺氧+氯化锂组.缺氧组采用10％氧浓度缺氧4周.缺氧+生理盐水组和缺氧+氯化锂组分别腹腔注射生理盐水和氯化锂.用电生理和心导管检查,评价心律失常情况、心率和射血分数.用免疫荧光观察连接蛋白43(Cx43)的分布情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Cx43、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)和糖原合酶激酶3β(GSK-3β)的水平.结果 与常氧组比,缺氧组小鼠心率较快[(448±18)次/min vs.(401±13)次/min,P＜0.05],左心室射血分数降低[(56±5)％ vs.(73±4)％,P＜0.05],心律失常评分增加[(3.4±0.5)分vs.(0.6±0.5)分,P＜0.05],Cx43表达减少.与缺氧+生理盐水组比,缺氧+氯化锂组的小鼠心率降低[(412±11)次/min vs.(454±18)次/min,P＜0.05],射血分数增加[(69±3)％vs.(55±4)％,P＜0.05],心律失常评分减少[(1.8±0.4)％vs.(3.0±0.7)％,P＜0.05],Cx43增加,p-GSK-3β与总GSK-3β的比值增加.结论 在心肌慢性缺氧中,氯化锂能通过抑制GSK-3β信号,维持缝隙连接,降低心律失常发生率.     

糖原合成酶激酶-3β与肿瘤的研究进展

糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）是普遍存在于真核细胞中的一种多功能丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,参与Wnt／β-eatenin、NF-κB及PI3K／AKT／mTOR等多条细胞信号转导通路。近年研究发现,GSK-3β除了参与糖代谢外,还参与细胞内多种生理病理过程,如细胞的分化、增殖和凋亡等,其活性异常与多种肿瘤的发生、发展、侵袭、转移和预后密切相关,已成为许多疾病治疗的靶点。     

糖原合成酶激酶3β对卵巢癌顺铂耐药性的影响及其机制研究

目的 :探讨糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)对卵巢癌顺铂耐药性的影响及机制。方法 :运用氯化锂(lithium chloride,Li Cl)增加失活性GSK-3β即p-GSK-3β表达,MTT法筛选合适的Li Cl浓度和作用时间并检测顺铂的半数抑制浓度,流式细胞仪检测p-GSK-3β(ser9)的表达量,免疫荧光观察其细胞内定位情况。结果:据MTT结果选择Li Cl 20 mmol/L处理6 h,处理后24、48、72 h,SKOV3细胞顺铂的半数抑制浓度从处理前的(20.37±0.56)、(7.79±0.72)、(2.8±0.32)μg/ml增加至(27.57±0.81)、(12.15±1.00)、(5.84±0.64)μg/ml,差异均有统计学意义。流式结果显示,Li Cl处理后SKOV3细胞内p-GSK-3β(ser9)的平均荧光强度由处理前的661.67±37.63增加到1 191.33±30.37,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果提示,Li Cl处理后SKOV3细胞核内p-GSK-3β(ser9)表达上调。结论:Li Cl预处理后卵巢癌细胞顺铂耐药性的增强可能与GSK-3β失活性磷酸化水平增加,尤其是与核内水平上调有关。     

糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用.方法 体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120 μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%、(15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-36表达上调;流式结果还显示,P13K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%.结论 磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡.     

GSK-3β特异的siRNA腺病毒对高脂诱导内皮细胞GSK-3β表达的影响

目的构建糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒,观察其抑制高游离脂肪酸（FFA）诱导下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）GSK-3β的表达情况。方法利用体外同源重组技术构建GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体,在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑以实验法测定病毒滴度。GSK-3p特异的siRNA腺病毒感染HUVEC,以Western印记法测定其对GSK-3β蛋白表达的影响。结果成功构建了GSK-3β特异的siRNA腺病毒,获得高滴度的腺病毒液;构建的重组腺病毒感染HUVEC,可显著抑制正常培养及游离脂肪酸诱导下的细胞的GSK-3β蛋白的表达,Ad—DEST组与Ad-640组比较,Ad-640组明显下降（P〈0．05）。结论构建的GSK3特异的RNAi腺病毒能有效抑制HUVECGSK-3β蛋白的表达,有可能保护高脂诱导的HUVEC损伤。     

PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的 研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响.方法 制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型.进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录.结果 ①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P＜0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P＞0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P＜0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的表达,减少神经元凋亡.LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用.     

GSK-3β在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用.方法 用含不同浓度葡萄糖的1640培养基处理足细胞36 h ,采用Western blot与间接免疫荧光的方法检测足细胞表面标记蛋白nephrin、podocin和间充质细胞表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Fibronectin的表达 ;用 Transwell小室检测不同处理组足细胞清蛋白流入量的变化.用GSK-3β激酶检测试剂盒检测高糖环境下足细胞GSK-3β表达量及活性的变化 ;应用GSK-3βsiRNA干扰高糖组GSK-3β后检测足细胞表型及功能变化.结果 足细胞标记蛋白nephrin、podocin的蛋白表达水平随葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性下调(P＜0 .05) ,间充质标记蛋白α-SMA的表达水平随葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性上调(P＜0 .05);清蛋白流入量随葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性上调(P＜0 .05).高糖组足细胞GSK-3β表达量增多(P＜0 .05).GSK-3βsiRNA处理组与对照组相比足细胞表面标记蛋白nephrin、podocin表达量增多 ,间充质标记蛋白α-SM A表达减少.结论 足细胞在高糖环境下发生表型改变与功能受损 ;GSK-3β参与高糖环境下足细胞的转分化过程.     

饮食对胰岛素抵抗大鼠脂肪组织中糖原合成酶激酶3β表达的影响

目的探讨饮食治疗对胰岛素抵抗大鼠脂肪组织中糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）表达的影响。方法30只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为2组，正常对照组（10只，常规饲料喂养）、模型组（20只，高脂饲料喂养；4w后模型形成）。模型组随机分为2个亚组（胰岛素抵抗组和饮食干预组，每组10只），胰岛素抵抗组继以高脂饲料喂养，饮食干预组给予普通饲料喂养。6w后，用Western-blot方法检测各组大鼠附睾脂肪组织中GSK-3β的表达，对比各组的表达差异；定期检测大鼠体重、空腹血糖及血浆胰岛素、血甘油三酯和胆固醇，并计算胰岛素敏感指数。结果高脂饲料喂养4w后，与正常对照组比较，模型组大鼠体重、空腹血糖、胰岛素、胆固醇、甘油三酯显著升高（P〈0．05或P〈0．01），胰岛素敏感指数显著下降（P〈0．01），胰岛素抵抗模型诱导成功；饮食干预6w后与胰岛素抵抗组大鼠比较，脂肪组织中GSK-3β的表达显著下降（P〈0．05）；与正常对照组比较，差异无统计学意义。结论饮食干预能改善大鼠机体胰岛素抵抗，可能与下调脂肪组织GSK-3β的表达有关。