Survivin�ڶ�ͯ���԰�Ѫ���еı���P53������Լ����ٴ�����

目的探讨Survivin在儿童急性白血病(AL)中的表达及其与抑癌基因P53的相关性,同时观察Sur vivin与急性淋巴细胞白血病(ALL)临床分型的关系。方法应用免疫组织化学链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物(SABC)方法,检测华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科2004年1～7月收治的37例儿童AL骨髓细胞Survivin和P53的表达,对照组为10例非恶性血液病且骨髓正常患儿。结果在37例AL患儿中,Survivin蛋白表达阳性率为35.14%,P53表达阳性率为32.43%,显著高于正常骨髓组织(P均<0.05),Survivin和P53表达呈强相关性(P<0.05),Survivin在高危(HR)ALL患儿的表达为46.15%,在标危(SR)ALL患儿的表达为0,差异有显著性意义(P<0.05)。结论(1)Survivin在儿童AL中异常表达,且与ALL的临床分型有关,提示其在判定儿童ALL预后中有意义;(2)抑癌基因P53的失活与Survivin的表达可能在AL发生中起协同作用。     

黑色素瘤特异性抗原基因在儿童急性白血病中的表达及初步应用

目的探讨急性白血病(AL)儿童骨髓及外周血单个核细胞(MNC)中黑色素瘤特异性抗原(PRAME)基因表达情况,以及用于微小残留病监测的临床意义。方法釆用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测31例初发、6例复发、10例完全缓解期AL儿童骨髓及外周血PRAME mRNA的表达情况,同时检测10例非血液系统恶性疾病患儿骨髓、5例正常成人外周血中PRAME mRNA的表达情况,分析该基因与疗效、预后之间的关系。结果 37例初发及复发AL病例中15例PRAME mRNA表达阳性(40.5%),其中在急性淋巴细胞白血病(ALL)组、急性髓系白血病(ANLL)组的阳性率分别为37.9%、50.0%,两组比较差异无显著性(P0.05)。在初发组及复发组的表达率分别为38.7%、50.0%,两组比较差异无显著性(P0.05)。10例完全缓解期及15例对照组病例中PRAME mRNA表达均阴性。PRAME基因表达阳性的患儿完全缓解率(CR)显著低于表达阴性的患儿(CR率分别为60.0%,90.99%,P=0.042)。随访1例初诊PRAME基因表达阳性的ALL患儿,经化学治疗达完全缓解后PRAME基因表达转阴。结论 PRAME基因可在AL患儿中呈阳性表达,并可随疾病的缓解情况逐渐降低或转阴。因此,PRAME基因作为儿童AL的一个重要基因标记物,动态监测其表达水平在评估疗效、判断预后、预测复发方面有一定的意义。     

p73mRNA在急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义

p73基因是p53基因家族的一个新成员，所编码蛋白质结构和功能上都与p53相似。已有研究表明，p73基因在原发性急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia．ALL)存在较高的阴性表达。我们采用逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了p73mRNA在小儿ALL骨髓单个核细胞中的表达及其与影响预后的高危临床特征的相关性。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达及DNA含量与临床相关性研究

目的探讨 p16蛋白表达及 DNA含量在小儿急性淋巴细胞白血病( ALL)中的临床意义.方法应用 S-P免疫组化法检测 31例 ALL患儿的 p16蛋白表达水平,流式细胞术检测白血病细胞 DNA含量.结果 31例 ALL的 p16蛋白表达缺失率?54.8%( 17/31例), p16蛋白缺失与高白细胞数( >2.5× 109/L)、肝脾肿大等高危临床特征显著相关;高危型 ALL的 p16基因缺失率( 70.5%)远高于标危型 ALL( 35.7%),两组比较差异有显著性( P=0.0459).小儿 ALL异倍体发生率为 41.8%, p16蛋白表达阴性者 17例中 DNA异倍体 9例, p16蛋白表达阳性者中异倍体 4例,两组差异无显著性( P=0.2749).结论 p16蛋白失活在小儿 ALL的发病过程中起重要作用, p16蛋白表达阴性者 DNA异倍体的发生率高,与临床高危因素有关, p16蛋白缺失者可能与 ALL复发有关.     

甲状腺激素受体结合蛋白3基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的 研究甲状腺激素受体结合蛋白3(TRIP3)基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达,探讨其与儿童ALL缓解的关系.方法 采集空腹静脉血2-4 mL,依地酸(EDTA)抗疑,采用Ficoll密度梯度离心法收集单个核细胞,Trizol试剂一步法提取总RNA.采用反转录一聚合酶链反应法(RT-PCR)检测73例不同阶段ALL及20例健康儿童外周血单个核细胞TRIP3基因表达水平,并分析其与儿童ALL缓解的关系.结果 1.TRIP3基因在ALL初治及复发组的表达水平均明显低于健康对照组(Pa＜0.01);在完全缓解的ALL患儿中的表达水平明显高于健康对照组(P＜0.01);2.TRIP3基因在初治组与复发组ALL中的表达水平无明显差异(P＞0.05);在缓解组表达水平明显高于复发及初治组(Pa＜0.01);3.在初治的ALL患儿中,TRIP3基因表达阴性者其治疗后完全缓解率明显低于TRIP3基因表达阳性者(缓解率分别为25.0% us 84.2%,P＜0.05).结论 TRIP3基因与儿童ALL的缓解有一定关系,其表达水平可作为评价ALL患儿化疗效果及评估预后的指标之一.     

儿童急性淋巴细胞白血病血型糖蛋白基因表达及其临床意义

目的 探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)不同阶段、不同类型患儿血型糖蛋白C(GYPC)基因的表达水平及其与治疗反应和免疫分型的关系.方法 研究对象为2005年1月至2005年11月哈尔滨市儿童医院血液科、哈尔滨医科大学一院儿科及哈尔滨市血液肿瘤研究所儿科住院的ALL患儿.应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测ALL初治患儿、缓解患儿、难治患儿、复发患儿及正常对照儿童GYPC基因的表达;采用流式细胞术检测初治患儿的免疫表型,观察GYPC基因与免疫表型的关系.结果 (1)初治患儿GYPC表达水平明显高于正常对照组(P＜0.01)和完全缓解组(P＜0.01);完全缓解后GYPC表达水平与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),复发患儿GYPC表达水平不仅高于正常对照组(P＜0.01)和完全缓解组(P＜0.01),也高于初治组(P＜0.01);(2)38例初治患儿GYPC阳性24例,GYPC阴性14例,GYPC阳性患儿的完全缓解率与GYPC阴性患儿差异无统计学意义(分别为75.0%、92.9%,P＞0.05),但完全缓解患儿治疗前GYPC表达水平低于未缓解患儿(P＜0.05);(3)38例初治患儿中25例为B系淋巴细胞白血病(B-ALL),10例为T系淋巴细胞白血病(T-ALL),T-ALL的GYPC阳性率高于B-ALL(分别为90.0%、48.0%,P＜0.05),且T-ALL的GYPC表达水平高于B-ALL(P＜0.05).结论 GYPC的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,GYPC可以作为监测病情、判断疗效、预测复发、评估预后的一个新指标;GYPC高表达可能是儿童ALL的不利因素,GYPC高表达者疗效差,易复发;GYPC表达水平与免疫分型具有相关性,GYPC在T-ALL具有高表达,可能是T-ALL的缓解率低、预后差的原因之一.     

小儿急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达的临床研究

探讨p16蛋白表达及DNA含量在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的临床意义。应用S P免疫组化法检测 3 1例小儿ALL白血病细胞的p16蛋白表达水平 ,流式细胞术检测白血病细胞DNA含量。结果 ,3 1例ALL的p16蛋白表达缺失率为5 4 8% ( 17 3 1) ,p16蛋白缺失与高白细胞数 ( >2 5× 10 9 L)、肝脾肿大等高危临床特征显著相关 ;高危型ALL的p16基因缺失率 ( 70 5 % )远高于标危型ALL( 3 5 7% ) ,两组差异有显著性 (P <0 0 1)。小儿ALL异倍体发生率为 3 8 7% ,p16蛋白表达阴性者17例中DNA异倍体 9例 ( 9 17) ,p16蛋白表达阳性者中异倍体 4例 ( 4 14 ) ,比较差异无显著性 ( χ2 =1 10 6,P >0 0 5 )。结果表明 :p16蛋白失活在小儿ALL的发病过程中起重要作用 ,p16蛋白表达阴性者DNA异倍体的发生率高 ,与临床高危因素有关 ,p16蛋白缺失者可能与ALL复发有关     

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中表达的意义

目的 探讨环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义.方法 1.实时定量反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ALL患儿骨髓单个核细胞CREB的mRNA表达量,以非白血病(NL)患儿10例作对照,对9例ALL患儿进行动态测定.2.ELISA法测定ALL患儿骨髓单个核细胞CREB总蛋白和蛋白磷酸化水平表达.结果 1.高危组(HR)CREB的mRNA表达量明显高于NL组、低危组(LR)、中危组(MR),分别为8.49 ±12.24、1.13±0.81、1.47±1.02、1.24±0.60,Pa＜0.05;而其他各组无明显差异.2.HR组CREB总蛋白量(ng/106个细胞)明显高于LR、MR组,分别为0.99±0.43、4.40±4.60,Pa＜0.05;HR组CREB蛋白磷酸化的量(U/106个细胞)明显高于LR、MR组,分别为1.95±1.82、8.67±8.19,Pa＜0.05.3.MICM分型与CREB高表达相结合,HR-ALL患儿的诊断符合率可达85.0%.4.CREB的mRNA表达量升高提示ALL未缓解或复发.结论 CREB在儿童HR-ALL中呈高表达.CREB的表达量及其动态监测对ALL患儿的临床分型和疗效判断有一定的意义.     

P73mRNA在急性淋巴细胞白血病细胞的表达及临床意义

目的 探讨P^73mRNA失表达在小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)中的临床意义。方法 RT-PCR法检测40例ALL患儿骨髓单个核细胞内P^73mRNA表达，并分析P^73mRNA失表达与影响ALL预后因素的关系。结果 ALL中存在较高频率的P^73mRNA失表达，又与高白细胞数、高肿瘤负荷、髓外浸润、高危临床分型显著相关。结论 P^73mRNA失表达在小儿ALL发病过程中起重要作用，P^73mRNA失表达与预后不良因素相关，P^73mRNA检测可能对评估小儿ALL预后、指导临床治疗有重要意义。     

黄芪注射液对儿童急性淋巴细胞白血病近期预后的影响

目的 探讨黄芪注射液对儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）近期预后的影响。方法 回顾性分析2009 年1 月至2012 年12 月105 例初诊ALL 患儿的临床资料,随机分为治疗组49 例,其中低危型18 例,中危型7 例,高危型24 例;对照组56 例,其中低危型21 例,中危型7 例,高危型28 例;两组均按相同危险度分型给予相同的诱导缓解治疗方案,治疗组同时给予静脉滴注黄芪注射液,每日0.5~1.0 mL/kg;对照组用0.9%氯化钠注射液进行替代输注,至诱导缓解治疗结束。对影响两组预后的因素分布及两组诱导缓解治疗后的完全缓解（CR）率进行比较;同时比较两组患儿在诱导缓解治疗第19 天以及两组B-ALL 患儿在诱导缓解治疗结束达CR 时不同微小残留病（MRD）水平的发生率。结果 105 例ALL 患儿中,B-ALL 型99 例,T-ALL 型6 例。两组患儿各预后因素分布比较差异均无统计学意义（均P>0.05）。105 例患儿的总CR 率为79%,治疗组（82%）与对照组（77%）的CR 率比较差异无统计学意义（P>0.05）,且不同临床危险度分型患儿CR 率在两组间比较差异亦均无统计学意义（均P>0.05）。诱导治疗第19 天,治疗组患儿MRD ≥ 10-4 的发生率（69%）低于对照组（95%,P<0.05）;80 例达CR 的B-ALL 患儿中,对照组43 例,治疗组37 例,治疗组MRD ≥ 10-4 的发生率（27%）低于对照组（58%,P<0.05）;且在上述两种情况下,治疗组高危型和低危型患儿MRD ≥ 10-4 的发生率均低于对照组（均P<0.05）。结论 黄芪注射液联合化疗可增强抗肿瘤作用,改善儿童ALL 近期预后,提高儿童ALL的临床疗效。     

血清miR-922及miR-506对儿童急性淋巴细胞白血病诊断及预后判断的价值

目的 探讨血清miR-922及miR-506表达水平对儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）诊断及预后判断的价值。 方法 前瞻性选取132例ALL患儿（ALL组）和80例健康儿童（健康对照组）纳入本研究,采用实时荧光定量PCR技术检测ALL组和健康对照组血清miR-922及miR-506表达水平。绘制受试者工作特征曲线分析miR-922及miR-506对儿童ALL的诊断价值。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用多因素COX回归模型分析影响ALL患儿预后不良的因素。 结果 ALL组血清miR-922及miR-506表达水平均明显高于健康对照组（P<0.001）。受试者工作特征曲线分析结果显示,miR-922及miR-506诊断儿童ALL的最佳截断值分别为1.46、2.17。miR-922高表达组（≥1.46）及miR-506高表达组（≥2.17）的淋巴结肿大、白细胞计数≥50×10⁹/L、中高危险度分层、MLL基因重排、染色体核型异常的发生率均明显高于miR-922及miR-506低表达组（P<0.05）。Kaplan-Meier分析结果显示,miR-922及miR-506高表达与ALL患儿生存期短有关（P<0.05）。多因素COX回归分析结果显示,白细胞计数≥50×10⁹/L、危险度分层为中高危、MLL基因重排、miR-922≥1.46及miR-506≥2.17可提示ALL患儿预后不良（P<0.05）。 结论 miR-922及miR-506表达水平对儿童ALL诊断及预后判断均有较好的价值。     

Follow-up of minimal residual disease in acute childhood lymphoblastic leukemia by WT1 gene expression in the peripheral blood: the Hungarian experience

The aim of the study was to investigate if monitoring WT1 gene expression in the peripheral blood is an appropriate approach to monitor the progression of childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). Forty-six patients have been enrolled into this study (24 ALL and 22 control, nonleukemic cases). The peripheral blood was tested for WT1 gene expression using a sensitive nested RT-PCR technique. The assay was sensitive enough to detect 10 2 leukemic cells among 10 6 normal leukocytes. In agreement with the literature 96% of childhood ALL (23/24) expressed WT1 independent of the prognostic factors of the disease. On the other hand, no WT1 gene expression was found in the peripheral blood of nonleukemic hematological diseases, except myelodysplasia. WT1 became negative in the peripheral blood of these patients at the end of the induction phase of the therapy in the majority of the cases (19/24), whereas clinical remission was achieved in all patients except one. WT1 gene expression changes in the peripheral blood was monthly monitored in 20 ALL patients for 1 year and in 16 cases during the second year (for a maximum of 21 months). Although continuous monitoring detected transient (1- to 3-month long) WT1 expression in the majority of the ALL cases (16/20), clinical relapse occurred in 2 cases only when the WT1 expression was maintained for 11-15 months. Follow up studies of the WT1 gene expression in the peripheral blood of WT1-positive childhood ALL may enable researchers to monitor MRD and detect a very low leukemic cell count (perhaps called "molecular relapse"). According to this study, the transient WT1 positivity for 1-3 months does not predict clinical relapse of childhood ALL, unlike a longer-lasting positivity.     

Influence of IL15 gene variations on the clinical features,treatment response and risk of developing childhood acute lymphoblastic leukemia in Latvian population

Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most common childhood malignancy. Modern treatment protocols allow achievement of long-term event-free survival rates in up to 85% of cases, although the treatment response varies among different patient groups. It is hypothesized that treatment response is influenced by the IL15 gene variations, although research results are conflicting. To analyze IL15 gene variations influence treatment response, clinical course and the risk of developing ALL we performed a case–control and family-based study. The study included 81 patients with childhood ALL. DNA samples of both or one biological parent were available for 62 of ALL patients and 130 age and gender adjusted healthy samples were used as a control group. Analyzed IL15 gene variations: rs10519612, rs10519613 and rs17007695 were genotyped using PCR-RFLP assay. Our results shows that IL15 gene variations haplotypes are associated with the risk of developing childhood ALL (p < 0.05), although there is no such association for the variations separately. The variations rs10519612 and rs1059613 in a recessive pattern of inheritance were associated with hyperdiploidy (p = 0.048). Analyzed genetic variations had no impact on other clinical features and treatment response (assessed by the minimal residual disease) in our study.     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨p1 6基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)发病中的作用 ,认识p1 6蛋白失活的分子机制。应用差异PCR技术检测 42例初治、1 7例缓解期小儿ALLp1 6基因的纯合缺失及甲基化。结果 42例ALL中p1 6基因纯合缺失率占38.1 % ,T系ALL占 80 % ,显著高于B系ALL2 2 .5 % ,P <0 0 1。 1 7例缓解期ALL均无基因缺失。 9例p1 6基因完整 ,但无蛋白表达的ALL患者 ,无一例发生基因外显子 1的甲基化。结果表明 ,p1 6基因纯合缺失是小儿ALL ,尤其T系ALL最常见的基因缺陷 ,是p1 6蛋白失活的主要分子机制。基因甲基化与p1 6蛋白失活可能无关。     

儿童急性淋巴细胞白血病常见融合基因的检测及意义

目的建立逆转录-巢式PCR检测融合基因的方法,检测4种常见融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病中阳性率,并对阳性患儿进行初步临床资料分析。方法对收治的92例初发的急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿,于化疗开始前抽取骨髓标本1.5～2.0 ml,采用巢式RT-PCR方法检测最常见的4种融合基因:TEL/AML1、E2A/PBX1、m-BCR/ABL和AF4/MLL。结果92例ALL患儿中TEL/AML1阳性21例,阳性率22.8%,占B细胞性ALL的24.7%(20/81例);6例E2A/PBX1阳性(6.5%),在前B细胞性ALL中占20.0%(3/15例);2例AF4/MLL阳性(2.2%),在婴儿ALL中占33.3%(2/6例);仅检测到1例m-BCR/ABL阳性(1.1%)。结论巢式RT-PCR方法是检测融合基因有效、敏感的方法。TEL/AML1在儿童ALL中阳性率最高,尤其是在B细胞性ALL中,该融合基因阳性的患儿病情较轻。     

实时荧光定量PCR检测细胞周期蛋白C在小儿急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：应用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）法检测人细胞周期蛋白C(CCNC)在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达，以探讨CCNC基因与儿童ALL的关系。方法：提取正常儿童、初治儿童ALL骨髓组织及ALL细胞系6T-CEM的总RNA并逆转录为cDNA，应用RQ-PCR法检测CCNC的表达。结果：在正常儿童、初治儿童ALL骨髓及6T-CEM细胞系的CCNC的阳性表达率均为100%，在正常儿童CCNC基因平均相对表达强度为13.5±0.30，而在初治儿童ALL中为2.35±0.83，两者比较有统计学意义（P＜0.05）。结论： CCNC在初治ALL患儿中低表达，提示其有可能是一个抑癌基因。     

肾母细胞瘤患儿p73基因的表达及其甲基化研究

目的：探讨肾母细胞瘤患儿血液中p73基因的转录表达、启动子甲基化状态及二者之间关系。方法：收集45例肾母细胞瘤患儿为病例组,以健康体检或因其他原因就诊的性别、年龄匹配的15例（排除肿瘤等恶性疾病）儿童为对照组。采集两组儿童外周血,运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和甲基化特异性PCR (MSP)法检测p73基因转录表达水平及其启动子甲基化状态,并分析病例组中p73基因的表达及甲基化与临床资料的关系,及p73基因的甲基化对其转录表达的影响。结果：病例组中p73 mRNA的相对表达量（3.2±0.9）高于对照组（1.6±1.1）,差异有统计学意义（P<0.01）;病例组p73基因甲基化阳性率（20%）低于对照组 (73%),差异有统计学意义（P<0.01）。病例组中甲基化p73 mRNA的相对表达量大于非甲基化p73 mRNA的相对表达量（P<0.01）,且大于对照组中甲基化p73 mRNA的相对表达量（P<0.01）;非甲基化p73 mRNA的相对表达量在两组间差异无统计学意义（P=0.810）。结论：肾母细胞瘤外周血中p73基因启动子的异常甲基化是其基因表达调节方式之一,并与肾母细胞瘤的发生发展有关;发生甲基化的p73基因在肾母细胞瘤中有可能充当癌基因的角色,转录水平的过度表达与其甲基化状态有关。     

CD45+和CD45-儿童急性B淋巴细胞白血病的临床特征分析

目的探讨CD45抗原表达与儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的临床相关性。方法利用多参数流式细胞术(FCM)以CD45/SSC设门对61例B-ALL患儿进行免疫分型检测;采用染色体核型分析和多重巢式RT-PCR技术进行染色体、融合基因分析。结果免疫表型分析显示CD45+组CD13、HLA-DR抗原表达明显高于CD45-组(P<0.05);CD45-组的融合基因主要为HOX11和E2A/PBX1,而CD45+组主要为TEL/AML1、MLL/AF9、HOX11;相关临床参数、染色体核型及疗效比较两组间差异均无显著性(P>0.05)。结论 CD45抗原的表达与否和B-ALL患儿的临床特征、染色体畸变、治疗效果无统计学相关性;CD45+组较CD45-组高表达CD13和HLA-DR。