抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体的制备和初步鉴定

以纯化的鸡蛋黄IgG(IgY)为免疫原,免疫BACB/c小鼠.取其脾细胞与小鼠Sp/o骨髓瘤细胞融合,经间接EIISA筛选,3次克隆化后,获得2株能稳定分泌抗IgY单克隆抗体的杂交瘤细胞IGII和3A6.用琼脂双扩散法鉴定,两者均为IgG_1亚类.特异性鉴定表明,IGII和3A6两株单克隆抗体均与鸡血清IgG及鸡蛋黄IgG起强反应,而不与鸭蛋黄、鹌鹑蛋黄、小鼠血清、大鼠血清、兔血清、羊血清、马血清,以及人血清的IgG起反应.IGII与3A6的腹水效价分别为3.1×10~(-6)和6.4×10~(-6).     

抗人IgM（μ链）单克隆抗体的制备

本实验用可溶性抗原人 IgM 免疫 BALB/C 小鼠,按常规方法取免疫鼠脾细胞,分别与 NS-1、SP2/0细胞进行融合,ELISA 法筛选只与 IgM 反应阳性的抗体分泌杂交细胞,建立了6株杂交瘤株。经鉴定,此6株细胞分泌的抗体与 IgM 产生特异性反应,而不与其它免疫球蛋白重、轻链及 J 链交叉反应。经免疫电转印的硝酸纤维膜染色只显示分子量为72kD 的电泳带。放射免疫方法检测6个单克隆抗体,可分别识别4个不同的抗原决定簇。此组抗体识别 B 细胞胞浆内及膜表面μ链并可检测乙型病毒性肝炎患者血清中 HB_C-IgM 复合物。本组抗体间彼此加合可提高检测的灵敏性。抗 IgM(μ链)单克隆抗体对研究人 B 细胞的分化、成熟及功能提供了重要途径。     

兔抗鼠单克隆乙型肝炎核心抗体独特型的研究

自从提出免疫网络学说以来,抗独特型(anti-idio-type,简称抗Id)的研究受到重视。我们用小鼠单克佳抗-HB_c(MC抗-HB_c)IgG及其Fab片段免疫家兔进行特异性抗Id制备。为了连续观察免疫过程中动物产生抗Id的状况,建立了两种特异检测抗Id的方法,即ELISA中和法和抗原-抗体结合抑制法,来测定一系列稀释的待检兔血清中抗Id水平。前法系在待检兔血清中加入正常Balb/c小鼠(NBM)IgG中和掉抗同种型和同种异型抗体从而单独检出抗Id,如不加中和抗原即可检出抗鼠IgG/Fab的总抗体水平;后法是将待检标本与酶标记Id抗体共同温育,如标本中存在抗Id即可抑制Id抗体与抗原HB。Ag的结合。用兔抗鼠IgG做对照试验证实上述两法可以排除抗同种型和同     

细粒棘球绦虫高免动物血清的特异性和敏感性分析

目的获得用于诊断细粒棘球绦虫成虫感染时特异性和敏感性高的抗血清。方法用细粒棘球绦虫成虫抗原免疫兔2只，制备高免血清，血清用饱和硫酸铵沉淀、透析、获得比较纯化的抗体，测量浓度和效价后，3μg／ml兔抗体包被，检测感染了不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样，单克隆抗体补捉抗原（1：6000），再用HRP标记的兔抗小鼠IgM（...     

131I-抗CD45单抗对淋巴造血组织选择性照射的研究

目的 探讨^131I—抗CD45单克隆抗体(McAb)对小鼠淋巴造血组织选择性照射的效果。方法 由鼠尾静脉注入^131I—抗CD45 McAb和^125I—IgG，观察^131I—抗CD45 McAb在小鼠体内的分布情况。结果 ^131I—抗CD45 McAb较^125I-IgG从血液中清除更快。骨髓、脾脏可快速摄取^131I—抗CD45 McAb，其在骨髓、脾脏中有选择性积聚^125I-IgG呈非特异性分布。结论 ^131I—抗CD45 McAb在小鼠体内分布具有特异性，可对淋巴造血组织产生选择性照射。     

建立流行性出血热实验动物模型的研究 Ⅲ.酶标抗体染色和病理组织学检查

接种流行性出血热(EHF)病毒的小鼠乳鼠可以出现明显发病。经免疫荧光检查,发现在感染动物的脑、肾、肺、心、肝等许多内脏中存在病毒抗原,且可用Vero-E6细胞从病鼠的血、尿及内脏中分离出病毒,从血清中检查出抗体。本文报道对感染动物作病理学检查的结果,并用酶标抗体(IP)染色法确证病毒抗原在体内的分布情况。材料和方法一、病毒、动物、感染方法及检查标本的取材及处理方法参见前文。二、酶标抗体检测 1.特异抗血清:EHF病人血清及兔抗EHF“A-5”株免疫血清。 2.对照血清:森脑、登革热Ⅲ型和乙     

抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0-Ag骨髓瘤细胞融和,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。经多次传代,结果稳定。接种Balb/c小鼠腹腔后,腹水均为抗前S(2)阳性,效阶达8万。免疫球蛋白为鼠IgG1型。用其初步纯化的IgG酶标记物,以双抗体夹心法检测了乙肝病人血清中前S(2)蛋白,结果较满意,认为可在临床上推广使用。     

造血干细胞具有精细胞相关抗原

作者用免疫荧光技术证明小鼠造血干细胞具有某些特征的表面抗原。把相应的荧光抗体与抗原结合后通过激发荧光细胞分类器(Flourescence-activat-ed cell Sorter)来拣选富集小鼠骨髓造血干细胞。作者制备了家兔抗人脑、人抗人精细胞以及129小鼠抗小鼠 F_9胚胎血清,准备了小鼠抗 Ia 抗体,129小鼠预先免疫血清(Pre-immuno serum,)还用胃蛋白酶     

赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及直接竞争酶联免疫吸附法的建立

目的 建立快速且灵敏的赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫吸附检测(cdELISA)方法.方法 采用OTA与卵清蛋白(OVA)偶联作为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合、克隆筛选,获得鼠抗OTA的杂交瘤细胞株;以ELISA方法测定抗体效价并鉴定抗体的IgG及亚类;用辣根过氧化物酶(HRP)标记OTA,建立cdELISA方法.结果 获得了3株稳定分泌高效价抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株(S-17-8、S-212-7和S-225-11),3株重链均为IgG1亚型,轻链为κ亚型;建立了cdELISA检测方法,检测下限为0.5ng/ml.结论 以抗OTA单克隆抗体和OTA-HRP为基础,建立了灵敏且省时的检测OTA的cdELISA方法,为进一步OTA快速筛查提供了条件.     

抗人红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）的特异单克隆抗体,对研究ＧＰＡ基因突变和ＧＰＡ蛋白糖基化变异有重要意义。方法;分别用ＯＭ和纯化Ｍ－ＧＰＡ蛋白以及ＯＮ红细胞和纯化Ｎ－ＧＰＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓细胞Ｓｐ２／０融合,经正常和酶处理人细胞凝集筛选,间接免疫荧光,酶联免疫分析及蛋白质印迹鉴定。制备了鼠抗人ＧＰＡ的单克隆抗体。结果;获得抗ＧＰＡ蛋白１～３９位肽投入及相关糖链     

抗鼠IgG和IgM免疫血清的制备研究(摘要)

本文报告了从小鼠血清中提取IgG及IgM的方法,以及用此两种球蛋白免疫绵羊获得了两个相同效价(1:128琼脂双扩)的抗血清,此血清制备成的荧光     

PolyI:C诱导C57BL/6小鼠产生自身免疫样病变

目的探讨聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,PolyI:C)注射C57BL/6小鼠产生的血清学和组织学自身免疫现象。方法50只6周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为药物组和对照组,药物组按5 mg/kg剂量注射PolyI:C,对照组注射无菌PBS,每月每组取5只实验小鼠眼眶采血,间接免疫荧光法测定血清抗核抗体(ANA)和抗线粒体抗体(AMA)。同时取小鼠肝脏做HE染色,显微镜观察病理改变。结果PolyI:C组小鼠血清AMA阳性率逐渐增高,第4月达到80%,此后维持不变,对照组只有1例出现AMA弱阳性。PolyI:C组ANA阳性率在第2月达到100%,对照组随着时间的进行也出现ANA阳性,在第4月达到100%;HE染色发现药物组小鼠肝脏汇管区及部分血管周围均出现不同程度的炎细胞浸润。结论PolyI:C注射C57小鼠可以刺激机体产生自身抗体ANA,AMA,并引起肝脏炎细胞浸润,产生自身免疫样病变,有发生自身免疫性肝病倾向。     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体的研究

用人血清IgM球蛋白重链——μ链免疫的BALB/C小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤SP2/0细胞在聚乙二醇(PEG)作用下融合,用改进的免疫荧光技术筛选出6株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其中5株分泌物确定为抗人μ链McAb,1株未定.杂交瘤细胞经4次克隆,半年多传代,接种BALB/C鼠可稳定地产生腹水抗体.     

用琼脂区带电泳切割法分离纯化小鼠血清IgG

采用DEAE纤维素离子交换法进行分离纯化小鼠血清IgG不易获得理想的结果。为此参照我室工作经验利用电内渗作用使IgG向阴极移动的特点,采用琼脂区带电泳切割分离纯化,获得了纯度较好的小鼠血清IgG。免疫电泳琼脂板按常规方法制备,如图1,孔内加经50%饱和(NH_4)SO_4盐析小鼠血清粗制样品50微升,缓冲液为0.05MTris-HClpH8.0,电压4—6伏/厘米,电泳2小时左右,电泳后按图1切割和收集IgG部分的琼脂     

精神分裂症患者Ig/C_3双特异性循环免疫复合物与体液免疫的相关性研究

目的系统研究精神分裂症体液免疫各项目之间的相关性,探讨其免疫学意义。方法采用直线相关分析法系统研究了患者及对照组IgG/C3-TCIC(双特异性循环免疫复合物)、IgA/C3-TCIC、IgM/C3-TCIC水平与血清IgG、IgA、IgM及C3含量的相关性。结果健康人IgG/C3-TCIC、IgA/C3-TCIC、IgM/C3-TCIC水平与血清IgG、IgA、IgM及C3含量呈强弱不同的正相关;精神分裂症患者只显示IgG/C3-TCIC水平与血清IgG、C3呈负相关,其余均不相关。结论健康人Ig/C3-TCIC水平主要取决于血清总的IgG、IgA、IgM及补体C3的含量,而精神分裂症患者Ig/C3-TCIC水平的升降基本与血清免疫球蛋白(Ig)变化无关。Ig/C3-TCIC可作为观察患者免疫功能状态的独立指标。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

用陕西省分离的肾综合征出血热(HFRS)病毒82-010H株免疫BALB/c纯系鼠和CxS/2小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/O小鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株分泌HFRS病毒特异性抗体的杂交瘤细胞系,对其中3H_4和4B_9两株单克隆抗体进行了鉴定。用各地分离的16株HFRS病毒抗原片与该两株单克隆抗体作了间接免疫荧光试验,结果表明:4B_9单克隆抗体只能与重型(黑线姬鼠型)HFRS疫区的病毒呈现阳性免疫荧光反应,而对轻型(褐家鼠及大林姬鼠型)HFRS疫区分离的病毒株不呈现免疫荧光反应;而3H_4单克隆抗体又能将重型和轻型HFRS毒株再行区分,这可能对HFRS病毒血清学分型和抗原分析以及流行病学调查研究等均有意义。     

131I-抗KDR McAb在荷人膀胱癌SCID小鼠体内分布实验

笔者探讨了将抗血管内皮生长因子受体KDR单克隆抗体 (McAb)作为放射免疫导向剂的可能性 ,为膀胱肿瘤放免治疗提供实验依据 ,现报道如下。一、材料与方法细胞为浸润性人膀胱癌细胞系T2 4细胞和正常人移行上皮膀胱细胞。实验动物为严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠 9只 ,雌雄不拘 ,6～ 7周龄 ,体重 15～ 2 0g,由第三军医大学实验动物中心提供。鼠抗人、鼠KDRMcAb(3G9)由北京肿瘤防治研究所提供。常规方法培养T2 4细胞 ,制备细胞悬液 ,调整细胞浓度为 1× 10 7个 ml,每只SCID小鼠在无菌条件下于背部注射细胞悬液 0 .2ml,小鼠继续在无特定…     

抗T-2毒素单克隆抗体的制备及特性

目的 :建立敏感、特异和快速的针对T 2毒素的ELISA检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立抗T 2毒素的单克隆杂交瘤细胞株。结果 :用T 2 羊免疫球蛋白 (T 2 GIgG)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BALB/c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 /0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 2个稳定分泌抗T 2毒素抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 2A7和 6E4。将上述 2株杂交瘤细胞分别注入BALB/c小鼠腹腔 ,获得含抗T 2毒素单克隆抗体的腹水 ,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化 ,得到 2A7和 6E4单克隆抗体。两株单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为 6 .4× 10 6和 1.1× 10 7,参考工作浓度分别为1.0× 10 6和 3.2× 10 6。纯化后 2A7抗体的IgG含量为 16 .4g/L ,亲和常数为 8× 10 -8mol/L。 2A7抗体与其他结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。结论 :制备了具有高特异性和亲和力的抗T 2毒素单克隆抗体 ,初步建立了针对T 2毒素的ELISA检测方法。     

建立流行性出血热(EHF)实验动物模型的研究 Ⅱ.应用免疫荧光法检查EHF病毒实验感染小鼠

流行性出血热(EHF)病毒通过传代可在小鼠乳鼠引起明显的症状。本文以免疫荧光作为判断指标,报告了感染小鼠体内EHF病毒抗原分布、血清抗体产生水平、病毒在体内繁殖动态等结果,并对流行性出血热的发病原理进行了探讨。材料和方法一、病毒、动物、感染方法参见前文报告。二、检查标本的取材及处理方法感染动物发病后,眼球放血致死,血清4℃保存备作抗体测定。横切鼠脑取视丘、海马、小脑、延脑等部位标本。内脏取肾、肺、心、肝、脾、肠以及胸腺、颌下腺等组织。皆切成大小约5×5×2mm的组织块,在95％乙醇     

精神分裂症患者IgG,IgA,IgM及C_3,C_4含量分析

目的　探讨体液免疫异常在精神分裂症发病过程中的作用。方法　利用速率散射比浊法测定 2 5例首发精神分裂症患者、30例经抗精神病药物治疗患者血清中IgG ,IgA ,IgM及补体C3,C4 含量 ,并与正常人作对照分析。结果　未治疗组血清中IgG ,IgA含量显著高于正常人及治疗组 (P <0 .0 1) ,而IgM则无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,治疗组及未治疗组血清C3 含量显著低于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论　精神分裂症存在一定程度的体液免疫异常 ,在其发病机理上起到一定的直接或间接作用。