β2GPI/抗β2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用。方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达。结果:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物(100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1 h和2 h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰。TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达。结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进脐静脉内皮细胞迁移及炎症因子表达北大核心CSCD

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI antibody)复合物促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和炎症因子的表达以及与Toll样受体4(TLR4)的关系。方法 oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、脂多糖(LPS)等刺激物处理HUVEC,采用划痕实验观察HUVEC的迁移能力;根据实验分组,收集HUVEC的总蛋白和总RNA,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4的mRNA和蛋白表达。利用上述刺激物分别刺激经TLR4抑制剂TAK-242预处理和未经处理的HUVEC,实时定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、IL-1β、IL-6的蛋白水平。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物加速HUVEC迁移和诱导TLR4表达,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进MCP-1、IL-1β、IL-6三种因子的mRNA和蛋白表达,TAK-242能够显著抑制该现象。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进HUVEC迁移和相关炎症因子的表达,该过程与TLR4密切相关。     

TRAF6在抗β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达组织因子时的活化

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在抗β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用.方法:采用一定剂量抗β2 GPI/β2 GPI复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,实时定量PCR检测细胞TF mRNA水平,发色底物法检测细胞TF活性;RT-qPCR及Western blot分别检测细胞TRAF6mRNA和蛋白表达情况;进一步采用蛋白酶体抑制剂MG-132,观察是否能够干预抗β2 GPI/β2 GPI复合物对细胞的刺激效应.结果:抗β2 GPI/β2 GPI复合物(100 mg/L)能够刺激THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);使细胞TRAF6 mRNA和蛋白表达均增加,并显示时间相关性,分别在刺激15 min和30 min时表达至高峰;MG-132(5μmol/L)明显抑制抗β2 GPI/β2 GPI复合物(100 mg/L)对THP-1细胞TRAF6 mRNA和蛋白的刺激效应及TF的诱导表达.结论:抗β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,TRAF6被激活并发挥重要作用.     

信号分子IRAK1/4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨IRAK1和IRAK4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性;Western blot检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达IRAK1、磷酸化-IRAK1(p-IRAK1)、IRAK4情况;观察IRAK1/4抑制物是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1表达TF。结果:Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF显著增加(P<0.05 vs control);Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达IRAK1、p-IRAK1、IRAK4(蛋白)显著升高(P<0.05 vscontrol);IRAK1/4抑制物(50μmol/L)能够阻断antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1表达TF及IRAK1磷酸化的效应。结论:antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,信号分子IRAK1/4被激活进而发挥重要作用。     

MAPKs在anti-β2GPI/β2GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。     

β2GPI/aβ2GPI通过激活TLR4抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取

目的探讨β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物(β2GPI/aβ2GPI)对巨噬细胞脂质摄取功能和B型清道夫受体CD36表达的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用100 ng/mL佛波酯(PMA)将THP-1人单核细胞诱导为THP-1巨噬细胞,通过形态学变化和1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚碳花菁高氯酸盐标记的氧化低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)吞噬试验加以鉴定。用RPMI1640培养液、β2GPI、抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)和β2GPI/aβ2GPI处理THP-1巨噬细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4 mRNA和蛋白水平。用RPMI1640培养液、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI和oxLDL联合LPS处理THP-1巨噬细胞,油红O染色观察胞内脂质积累,免疫荧光细胞化学染色法检测CD36的表达,实时荧光定量PCR检测CD36 mRNA水平,Western blot法检测CD36蛋白水平。利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理THP-1巨噬细胞,观察抑制TLR4对上述刺激下THP-1巨噬细胞脂质积累和CD36表达的影响。结果PMA处理后,THP-1细胞呈现巨噬细胞形态并具备脂质吞噬能力;与RPMI1640相比,β2GPI/aβ2GPI处理可显著增加THP-1巨噬细胞TLR4表达;与单独oxLDL处理相比,oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI能够抑制THP-1巨噬细胞的脂质积累和CD36表达,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2GPI/aβ2GPI能激活TLR4抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取和CD36表达。     

抗β2GPI抗体与β2GPI在血栓形成中作用的研究进展

自身抗体在血栓性疾病的发病中的作用受到广泛关注。β2GPI又称载脂蛋白H（ApoH）,主要由肝脏合成。抗β2GPI抗体（anti—β2GPI）是以β2GPI为靶抗原的抗磷脂抗体,研究表明体内高滴度的anti—β2GPI在体内血栓形成过程中具有极其关键的作用。Anti-β2GPI与β2GPI结合后与细胞表面的磷脂、脂蛋白等多种带负电荷的蛋白作用可引起细胞活化,通过多种途径促使血栓形成。深入研究anti-β2GPI／β2GPI在血栓性疾病发病机制可为自身抗体引起的血栓性疾病的治疗提供新的治疗靶点。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞钙化及炎症因子表达

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对大鼠血管平滑肌A7r5细胞钙化、炎症因子表达的影响以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法分别用oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物干预刺激大鼠A7r5细胞系不同时间,采用或不采用TLR4抑制剂TAK-242处理。茜素红染色观察细胞钙化结节,实时荧光定量PCR和Western blot法检测平滑肌蛋白22α(SM22α)和RUNX家族转录因子2(RUNX2)的mRNA和蛋白水平, ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平; A7r5细胞给予TNF-α刺激后,进一步检测SM22α和RUNX2 mRNA和蛋白水平的变化。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够促进A7r5细胞钙化结节增多, SM22α表达减少而RUNX2明显上升,促进炎症因子TNF-α的表达, TLR4抑制剂能够缓解这一现象;外加不同浓度的TNF-α能够使A7r5细胞SM22α表达下降, RUNX2表达增加。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促使A7r5细胞表达炎症因子TNF-α增加,并由此促进细胞发生钙化,同时使细胞由收缩表型向成骨表型发生转变,TLR4参与这一过程。     

ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进小鼠RAW264.7细胞凋亡和炎症因子表达

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对小鼠RAW264.7细胞凋亡和炎症因子表达的影响及机制.方法 分别用培养基、ox-LDL、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、ox-LDL/β2GPI复合物、ox-LDL/抗β2GPI抗体复合物和ox-LDL...     

Toll样受体4在β2GPI诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟过程中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白I(β2GPI)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟过程中的作用。方法体外联合使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导TLR4正常(C3H/HeN)及TLR4缺陷(C3H/HeJ)小鼠的骨髓细胞为未成熟树突状细胞(iDC)。用β2GPI或LPS(阳性对照)对iDC进一步刺激后,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表面分子变化,ELISA测定细胞因子IL-12和TNF-α的分泌水平。结果同C3H/HeJ小鼠相比,C3H/HeN小鼠iDC经β2GPI或LPS刺激后,细胞突起较多,形态上更成熟;细胞表面分子CD11c和MHC-Ⅱ的表达量更高(P0.05);细胞因子IL-12和TNF-α的分泌更强(P0.01)。结论 TLR4在β2GPI诱导小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞成熟过程中起重要作用。     

TLR4在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-timePCR)检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ诱导THP-1细胞TFmRNA表达,采用试剂盒检测细胞TF活性;利用自制的β2GPⅠ胶联亲和层析柱(β2GPⅠ-Affi-Gel)分析β2GPⅠ与THP-1细胞表面相应受体结合情况;Real-timePCR及Western蛋白印迹检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88、MD-2情况;观察TLR4途径抑制物——紫杉醇是否干预anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的作用。结果:Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞TF表达显著增加(P0.05);THP-1细胞表面的TLR4能够结合于β2GPⅠ-Affi-Gel柱;Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达TLR4、MyD88、MD-2显著升高(P0.05);紫杉醇(1μmol/L)能够抑制anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应。结论:TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中具有重要作用。     

NF-κB在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达组织因子中的作用探讨

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:使用一定剂量的抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性;Western blot检测细胞NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκB-α的表达情况;进一步采用NF-κB抑制剂(PDTC)观察是否能干预抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应,并利用上游信号分子MAPKs的抑制剂观察抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对NF-κB p65磷酸化的影响。结果:抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)能够诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);能够增强细胞内NF-κB p65磷酸化(P<0.05 vs media),降低IκB-α水平(P<0.05 vs media);NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)能够抑制抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF及NF-κB磷酸化的效应;MAPKs抑制剂均能影响抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞NF-κB p65磷酸化。结论:在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,NF-κB被激活并发挥重要作用,MAPKs为NF-κB的关键上游分子。     

ANX A2在抗磷脂抗体诱导THP-1细胞组织因子表达中的作用

目的： 构建针对人膜联蛋白A2（ANX A2）的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体,转染THP-1细胞,探讨ANX A2在抗磷脂抗体（APL）诱导单核细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法：设计4条ANX A2特异性RNAi的寡核苷酸序列,与慢病毒载体pGCSIL-GFP连接,PCR及测序鉴定正确后,Western蛋白印迹法筛选出有效干扰序列。包装293T细胞获得重组慢病毒LV-RNAi-ANX A2,感染单核细胞株THP-1,观察细胞ANX A2 mRNA和蛋白表达下降程度。再用APL/β2GPI复合物刺激干扰后的THP-1细胞,观察TF mRNA表达及TF活性变化。结果：成功构建RNAi慢病毒载体并筛选出有效干扰片段;包装293T细胞后病毒滴度为3×1012TU/L;感染THP-1后细胞ANX A2 mRNA和蛋白均被沉默。APL/β2GPI复合物刺激干扰后的THP-1细胞,其TF表达下降至基础水平。结论：构建的慢病毒表达载体能显著抑制THP-1细胞ANX A2的表达,进而影响APL诱导的TF表达,证明ANX A2在APL诱导的单核细胞表达TF过程中具有重要作用。     

抗磷脂抗体的共辅因子β_2GPI的研究进展

抗磷脂抗体的共辅因子β_2GPI是一分子量为50kD的糖蛋白,由326个氨基酸组成,可分为5个功能区,期磷脂结合部位于第五功能区.众多事实表明自身免疫性疾病中的抗磷脂抗体作用的抗原是磷脂与β_2GPI结合形成的复合抗原.β_2GPI的抗原表位及与磷脂的关系研究,对于提示抗磷脂抗体的产生,抗磷脂抗体综合征的血栓发生病理制的研究具有重要意义.     

阻断TLR2结合降低β2GP1-抗β2GP1复合物刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的表达

目的探讨β2糖蛋白1(β2GP1)-抗β2GP1复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)中Toll样受体2(TLR2)的作用。方法用β2GP1-抗β2GP1复合物、TLR2激动剂Pam3CSK4及TLR4激动剂脂多糖(LPS)、TLR2阻断剂抗小鼠TLR2-Ig G(m TLR2-Ig G)及TLR4阻断剂TAK-242对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞进行体外处理。用实时荧光定量PCR检测TNF-αmRNA水平,Western blot法及免疫荧光细胞化学方法检测TNF-α蛋白表达;采用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2的水平。结果β2GP1-抗β2GP1复合物、Pam3CSK4及LPS均能够显著增加BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-αmRNA及蛋白水平,抗m TLR2-Ig G能够抑制上述刺激物促进细胞TNF-α表达的效应,但弱于TAK-242的抑制效应,抗m TLR2-Ig G与TAK-242联合使用未显示更强的抑制效应。流式细胞术结果显示,β2GP1-抗β2GP1复合物、Pam3CSK4及LPS均能增加小鼠腹腔巨噬细胞TLR2的表达,而抗m TLR2-Ig G、TAK-242以及二者联合使用均未显示对TLR2表达的抑制效应。结论TLR4、TLR2都增强β2GP1-抗β2GP1复合物对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的刺激作用。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物通过激活AKT通路抑制小鼠RAW264.7细胞自噬

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬的影响及机制。方法分别用培养基、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/抗β2GPI抗体复合物和β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理RAW264.7细胞。采用Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62的蛋白水平,采用携带双荧光蛋白和LC3基因的腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染巨噬细胞检测自噬体形成以及自噬流情况,采用蛋白激酶B(AKT)通路抑制剂LY294002 (50μmol/L)预处理,观察AKT通路在oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物介导的RAW264.7细胞自噬中的作用。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够降低LC3Ⅱ蛋白水平,减少自噬体数量,增加P62蛋白水平,阻断自噬流; LY294002预处理可部分恢复细胞自噬水平,改善自噬流阻断情况。结论oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物可以通过激活AKT通路抑制RAW264.7细胞的自噬。     

抗β2GPI抗体对系统性红斑狼疮患者血栓形成的影响

目的:探讨抗β2GPI抗体对系统性红斑狼疮患者血栓形成的作用及对疾病诊断的临床意义.方法:选取系统性红斑狼疮(SLE)并发血栓患者20例,单纯SLE患者30例,正常对照23例,采用AggRAM-四通道血小板聚集仪检测血小板聚集率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗β2GPI抗体.结果:SLE血栓组患者和SLE非血栓组患者抗β2GPI抗体滴度和抗体阳性率都显著高于正常对照组(P＜0.05),并且SLE血栓组患者抗β2GPI抗体滴度和抗体阳性率高于SLE非血栓组患者;SLE血栓组患者血小板聚集率比SLE非血栓组和正常对照组显著升高(P＜0.05),SLE非血栓组患者血小板聚集率和正常对照组没有统计学差异;所有SLE患者中抗β2GPI抗体阳性组比抗体阴性组血小板聚集率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抗β2GPI抗体和血小板聚集率升高可为SLE患者继发血栓性疾病提供辅助诊断;抗β2GPI抗体促进SLE患者血小板聚集率上升,加速SLE患者血栓形成.     

青蒿琥酯对结核分枝杆菌诱导的TNF-α、IL-6表达的影响

目的探讨青蒿琥酯(artesunate, ASN)对结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, Mtb)诱导THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6的影响及机制研究。方法体外培养THP-1细胞。MTT法检测ASN对细胞的活性影响;RT-qPCR检测细胞因子TNF-α、IL-6和TLR2mRNA表达;ELISA检测TNF-α、IL-6分泌,Western blot检测TLR2受体表达。结果 MTT法检测ASN浓度在0～20μg/mL范围内培养48h均对细胞无毒性;与对照组相比,Mtb显著增加TNF-α、IL-6mRNA及蛋白表达,而20μg/mL ASN能显著抑制TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。此外,20μg/mLASN能显著抑制TLR2mRNA及蛋白表达。结论 ASN可能通过抑制TLR2受体表达缓解Mtb诱导的炎症反应。     

提取人血浆中β2GPI的一种简便高效方法及其在自身免疫病诊断中的应用研究

目的：利用聚乙二醇（PEG）4000沉淀配合亲和层析和离子交换层析的方法从人血浆中提取β2GPI蛋白，并研究相关的临床意义。方法：用180g/L的PEG4000从人血浆沉淀含β2GPI的组分，所得组分重溶后进行Heparin-Sepha-rose CL-6B亲和柱层析和Source 15 S离子交换柱层析，用分离纯化的β2GPI和购买的纤溶酶原（Plasminogen，PLG）建立反复妊娠丢失患者血清抗体抗β2GPI和抗PLG抗性的ELISA检测方法。结果：经SDS-PAGE和Western blot检测，本方法分离提取得到的蛋白为纯度大于95％的β2GPI。抗p2GPI和抗PLG抗性的检测结果呈正相关关系（r=0．750），且两者检出的阳性率无统计学意义（P〉0．05）。结论：结合了PEG沉淀和两步层析方法可以有效地从人血浆中提取得到p2GPI蛋白用于相关检测和研究。     

卵巢癌细胞株SKOV3对THP-1细胞TLR信号通路的作用

卵巢癌是目前死亡率最高的妇科生殖道肿瘤,Toll样受体在组织损伤修复、组织损伤诱导炎症及肿瘤进展中发挥重要作用,其中单核-巨噬细胞中的TLR在炎症与肿瘤间发挥桥梁作用。本研究利用THP-1和卵巢癌细胞系SK-OV-3共培养体系及抗TLR1、TLR2、TLR6抗体中和实验,荧光定量PCR法检测细胞中促炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA表达水平;利用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果显示THP-1与SK-OV-3共培养组较单独培养组,TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调,IL-1β、IL-8及TNF-α促炎症细胞因子的mRNA表达水平显著增加(Fold=4.27,Fold=4.92,Fold=3.08,P0.05),而IL-6 mRNA表达水平无显著改变。抗体中和实验显示,anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组THP-1中促炎症细胞因子IL-1β(Fold=0.43,Fold=0.38,Fold=0.44)、IL-8(Fold=0.43,Fold=0.48,Fold=0.42)、TNF-a(Fold=0.23,Fold=0.21,Fold=0.23)mRNA表达水平较未加单抗共培养组显著下调,差异有统计学意义(P0.05);IL-6 mRNA表达水平则无显著改变。anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB、P-NF-κB表达水平较未加单抗共培养组下调。以上结果提示卵巢癌生长微环境中,TLR1/TLR2/TLR6介导的信号通路活化可诱导THP-1中促炎症细胞因子表达上调,在卵巢癌的发生、发展中发挥一定作用。