奥曲肽对人肺腺癌A-549细胞系生长抑素受体亚型表达的影响

[目的]探讨奥曲肽作用前后人肺腺癌A-549细胞系生长抑素受体各亚型蛋白和mRNA的表达并分析其表达变化的临床意义以及奥曲肽对细胞株增殖的影响。[方法]免疫组化法测定人肺腺癌A-549细胞系中5种生长抑素受体亚型的表达;RT-PCR检测奥曲肽作用前后生长抑素受体亚型mRNA的表达,并进行半定量分析;MTT法检测奥曲肽对细胞株增殖的影响。[结果]人肺腺癌A-549细胞系中5种生长抑素受体亚型(SSTR1~SSTR5)均有表达,奥曲肽抑制人肺腺癌A-549细胞系增殖呈现浓度依赖性;人肺腺癌A-549细胞系表达5种生长抑素受体亚型的mRNA和蛋白,SSTR3和SSTR1的表达强度明显高于SSTR2、SSTR4、SSTR5(P<0.05)。奥曲肽作用后SSTR1的mRNA表达量明显高于其他4型,SSTR2、SSTR5mRNA的表达量明显高于对照组的mRNA表达量(P<0.05)。[结论]5种生长抑素受体亚型在人肺腺癌A-549细胞系中均有表达,八肽生长抑素奥曲肽可以明显抑制肺腺癌细胞系的增殖。SSTR1、SSTR2、SSTR5在抑制人肺腺癌A-549细胞系生长和增殖过程中发挥了关键性作用。     

生长抑素受体亚型介导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽诱导人肝癌细胞株细胞凋亡的作用,观察不同的人肝癌细胞株生长抑素受体(SSTR)亚型的表达情况.探讨SSTR亚型与肝癌细胞凋亡之间的关系.方法分别培养人肝癌细胞株(SMMC-7721,HHC-98,HepG2),荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测细胞SSTR亚型mRNA的表达.结果0.25～4.0μg/mL的奥曲肽作用48 h后,三种肝癌细胞部分呈现典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率呈浓度依赖性升高.3种肝癌细胞株均表达SSTR2、3、4,SSTR5则在两种肝癌细胞株SMMC-7721和HHC-98中表达,所有细胞株均未检测到SSTR1的表达.结论奥曲肽可以诱导肝癌细胞凋亡,其作用与肝癌细胞中广泛表达的SSTR亚型相关.     

Notch1 胞内段荧光表达质粒的构建及鉴定

目的：构建能够在鼻咽癌细胞株中高效表达人Notchl信号胞内段（NIC）的荧光质粒。方法：通过RT—PCR获得人NIC的cDNA;利用基因重组技术插入到pEGFP—N1中;在脂质体介导下转染人低分化鼻咽癌细胞CNE2后,经荧光显微镜、RT—PCR和Westernblot检测NIC的表达情况。结果：RT—PCR方法得到一条2424bp的特异性扩增产物,酶切和基因测序结果表明重组质粒构建成功。转染48h后,检测到绿色荧光表达,RT～PCR和Westernblot的结果显示NIC的表达量升高。结论：正确构建了人NIC荧光表达质粒。该质粒能够在鼻咽癌细胞株中高效表达,为研究Notch信号通路在鼻咽癌中的作用奠定了实验基础。     

孕酮调节人非小细胞肺癌A549细胞生长抑素受体亚型的表达

目的： 〖HT5"SS〗探讨人非小细胞肺癌细胞A549中孕酮对生长抑素受体（somatostatin recepter,SSTR）表达的调节。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗免疫组化法测定A549细胞孕激素受体的表达, RTPCR检测孕酮作用前后SSTR亚型mRNA的表达。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗 A549细胞表达孕激素受体,同时表达生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR1、SSTR4和SSTR5 mRNA,不表达SSTR3 mRNA。不同浓度的孕酮作用A549细胞24 h后,SSTR各亚型mRNA表达普遍上调（P<0.05）;10 nmol/L组及1 000 nmol/L组细胞出现了SSTR3 mRNA的表达。延长10 nmol/L孕酮作用时间至48 h, SSTR3与SSTR5 mRNA表达继续上调（P<0.05）。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗 孕酮上调A549细胞SSTR各亚型mRNA的表达,尤其是SSTR3与SSTR5 mRNA;调节作用与孕酮的作用时间和浓度有关。     

胃癌生长抑素受体mRNA表达的研究

目的:研究胃癌组织中生长抑素受体(SSTR)各亚型的分布与表达特性。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测24例胃癌肿瘤组织与癌旁正常组织中5种SSTR亚型mRNA的表达。结果:胃癌肿瘤组织及癌旁组织中SSTR1、2、5mRNA阳性表达率均为100%(24/24);SSTR3、4mRNA在肿瘤组织的阳性表达率分别为79%(19/24)和71%(17/24),在癌旁组织的阳性表达率分别为83%(20/24)和75%(18/24)。RT-PCR产物凝胶定量分析结果表明胃癌肿瘤组织各型生长抑素受体mRNA的表达量均较癌旁组织为低,但差异无统计学意义,P>0·05。胃癌肿瘤组织中以SSTR2mRNA表达量最高,其次为SSTR5、SSTR1、SSTR3mRNA,SSTR4mRNA表达量最低。结论:胃癌肿瘤组织中存在5种生长抑素受体亚型的表达,并以SSTR2的表达最为显著。     

生长抑素受体在垂体腺瘤中的表达及生物学作用

生长抑素对调节垂体功能包括激素分泌以及细胞增殖方面均有重要的作用，而其作用是通过与G蛋白偶联的生长抑素受体SSTR1—5来实现信号传导的。5个SSTR亚型在正常垂体组织和垂体腺瘤组织中均有表达,其中的SSTR2和SSTR5是最常见的表达的两个亚型。生长抑素受体的表达有组织特异性,而且具有种间差异和亚型选择性。SSTR在垂体腺瘤组织中的表达的差异尤其复杂。而新兴高特异性的单克隆抗体的出现使临床上对每个垂体腺瘤患者的病理组织进行SSTR表达分析成为可能。SSTR主要通过激活一系列酪氨酸激酶（PTP）来调节MAPK、P13K／Akt等信号传导通路而起到抑制细胞增殖的作用；同时，其抑制内分泌的作用主要通过调节环磷腺苷通路、钾离子通道以及钙离子通道来实现，随着对不同亚型生长抑素受体在垂体腺瘤中表达特点、生物学作用的了解的深入以及新药的出现，生长抑素受体类似物在垂体腺瘤的临床治疗上也起到了愈来愈重要的作用。     

生长抑素受体亚型在胃癌中的表达及意义

目的 检测生长抑素(SST)受体亚型SSTR1～3在胃癌组织中表达与分布,探讨其表达与胃癌临床病理特点的关系.方法 选取手术切除35例胃癌组织标本和35例胃良性组织,采用免疫组织化学方法检测SSTRl、SSTR3(二步法)SSTR2(三步法)的表达,染色后按着色细胞百分数进行评分判定,观察SSTR1～3在胃癌组织中表达与分布,并比较SSTR亚型表达与胃癌临床病理特点的关系.结果 这些抗体能特异检测到胃癌组织和胃良性组织受体的表达,35例胃癌组织中,SSTR1、SSTR2、SSTR3表达阳性率分别为80.0%(28/35),65.7%(23/35)与51.4%(18/35);35例胃良性组织表达阳性率为91.4%(32/35),88.6%(31/35)与80.0%(28/35),X2分析表明,SSTR2、SSTR3在胃癌与胃良性组织表达差异有统汁学意义(P<0.05),SSTR1在胃癌组织中的表达有降低,但无统计学差异.胃癌SSTR表达阳性率与患者性别、年龄,肿瘤大小、组织学分化类型、淋巴结转移、浆膜侵润以及肿瘤分期差异无统计学意义(P>0.05),但发现SSTR3与组织学分化类型相关(P=0.028).结论 胃癌组织和胃良性组织中有多种SSTR亚型表达,SSTR1、2亚型表达和肿瘤组织学分化类型及肿瘤分期无明显相关,SSTR3与组织学分化类型相关.应用SSTR特异型抗体做免疫组化可作为临床常规检测分析患者SSTR表达状况,并利于选用特异生长抑素类似物进行治疗.     

生长抑素受体在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 研究生长抑素受体(SSTR)在子宫内膜癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化法检测SSTR在40例子宫内膜癌中的表达.结果 在40例子宫内膜癌中SSTR各亚型的阳性表达率分别为SSTR175%、SSTR2 15%、SSTR3 20%、SSTR422.5%、SSTR517.5%.本组除SSTR4的表达在中高分化组明显高于低分化组,统计学分析有显著性差异(P＜0.05)外,余SSTR各亚型的表达与患者的年龄、临床分期、组织学分级、肌层浸润深度等无关.结论 在子宫内膜癌中存在着SSTR各亚型的表达,相应的生长抑素类似物可望为SSTR阳性表达的子宫内膜癌的诊治提供新的靶点.     

EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立

目的：建立表达Epstein-Barr(EB)病毒核抗原-l(EBNA1)的肿瘤细胞株，用于EB病毒相关肿瘤的研究。方法：将1200bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中，使用脂质体介导pcDNA3／EBNA1质粒进入人鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞，通过G418进行阳性克隆的筛选，PCR、RT-PCR进行鉴定。结果：成功建立EBNA1基因阳性的鼻咽癌和宫颈癌肿瘤细胞株，经PCR、RT-PCR检测证明两种转基因细胞株稳定表达EBNA1。结论：EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立，为体外进行EB病毒相关肿瘤的研究提供细胞模型：     

人Egr-1启动子调控的自杀基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞株中的放射诱导表达

[目的]构建由人Egr-1放射诱导性启动子调控的自杀基因靶向性真核表达载体,并转染人鼻咽癌细胞株CNE,比较射线诱导前后自杀基因在鼻咽癌细胞中的表达情况。[方法1根据Genebank数据库提供的人Egr—1启动子基因序列,设计-对引物克隆人Egr-1启动子,采用PCR、酶切、连接等分子生物学技术,构建pcDNA3．1（＋）-Egr-1-CD重组质粒表达载体,并利用脂质体转染方法转染人CNE细胞株,经G418筛选后获得阳性细胞克隆。RT—PCR分析鉴定0、5、10、15、20Gy放射剂量进行6MVX线照射对CD基因表达的影响。f结果1经PCR、酶切、测序等证实了pcDNA3．1（＋）-Egr．1．CD重组靶向性质粒表达载体构建成功,G418筛选所得到的CNE细胞阳性克隆经不同放射剂量的诱导后,RT—PCR结果显示体外放射线照射可显著提高CNE细胞中CDmRNA的表达水平,在10Gy及15Gy组CDmRNA的表达水平明显增高,尤以15Gy组CDmRNA的表达水平最高,在20Gy组CDmRNA的表达水平反而下降。[结论]pcDNA3．1（＋）-Egr-1-CD重组质粒表达载体构建成功,并成功转染人鼻咽癌细胞株．建立了基因表达与放射的剂量效应关系．为后续的临床应用研究奠定基础．     

miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.01).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460＞ CNE-2＞CNE-2R,且有显著统计学差异(P＜0.01).RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2.近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P ＜0.000 1).结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织.miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

siRNA抑制SOM基因表达的有效序列筛选

目的 研究siRNA对胃癌细胞BGC-823生长抑素（SOM）分泌的抑制效应。方法 设计2条针对SOM基因不同位点的寡核苷酸序列，应用RiboMAXT7体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823，经RT—PCR，免疫细胞化学法检测SOMmRNA和蛋白的表达水平，筛选抑制效果最佳的序列。结果 转染后24h、48h及72h，SOM基因的表达被抑制，抑制效率有差异。结论 体外合成siRNA可以抑制SOM基因的表达，抑制效率呈现浓度及时间依赖性。     

鼻咽癌表达下调基因NASG3′UTR可变剪接分析及其在多种肿瘤中的表达

背景与目的：采用抑制性消减杂交技术已分离获得了人鼻咽组织特异性基因NASG。本研究对人鼻咽组织特异性表达且在鼻咽癌表达下调的NASG基因3′非编码区(untranslated region,UTR)的可变剪接进行分析,并考察NASG基因在多种肿瘤组织中的表达。方法：在NASG基因3′UTR存在可变剪接部位的两端设计引物进行RT—PCR扩增,分离扩增产物并测序。用RT—PCR检测NASG基因在鼻咽癌中的表达,采用了肿瘤表达谱阵列(cancer profiling array)杂交分析NASG基因在多种肿瘤组织的表达状况。结果：NASG基因3′UTR存在3种剪接产物,NASG基因在71％的鼻咽癌活检组织中表达下调,25％的肺癌组织中表达上调．而在其他肿瘤及其配对的正常组织末见明显表达。结论：NASG基因3′UTR存在3种剪接产物,NASG基因的表达异常是鼻咽癌和肺癌发生、发展过程中重要的分子事件。     

TRAIL受体在人肝细胞癌中的表达及TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡

目的 研究了RAIL受体在肝癌组织及肝癌细胞中的表达,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在肝癌细胞凋亡诱导中的作用。 方法 应用RT-PCR法和免疫组化方法检测肝癌组织及细胞系SK-Hepl中TRAIL受体的表达,并以TRAIL蛋白和γ-干扰素作用于SK-Hepl细胞,观察其对细胞的凋亡诱导作用。 结果 在肝癌组织及肝癌SK-Hepl细胞系中均可检测到TRAIL受体,其中,死亡受体DR4、DR5在肝癌、癌旁组织以及SK-Hepl肝癌细胞系中均呈高表达,而诱骗受体DcR1及DcR2呈低表达,明显低于正常组织。TRAIL对肝癌细胞有凋亡诱导作用,与干扰素的协同时,其作用明显增强。 结论 肝癌组织中存在着TRAIL受体的表达,TRAIL可诱导肝癌SK-Hepl细胞系凋亡,其作用与DR4、DR5的高表达有关。     

生物节律相关基因 Cry1与肝癌的相关性探讨

目的研究生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展的相关性.方法逆转录PCR、Northern blot和免疫组织化学方法检测Cry1在各种肿瘤细胞系、人正常组织及人肝癌与配对的癌旁组织中的表达.构建Cry1重组的真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721.生长曲线和软琼脂克隆形成试验检测Cry1过表达的SMMC-7721细胞的体外增殖速度.逆转录PCR检测与Cry1相互作用的生物节律基因在Cry1过表达的SMMC-7721中的表达.结果Cry1在人各种正常组织中均有不同程度的表达.Cry1在人肝癌癌旁组织中的表达水平高于癌组织中的表达.过表达Cry1对SMMC-7721细胞的体外增殖没有明显影响.结论生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展可能有一定的相关性.     

人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析

目的：研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法：抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白,双向凝胶电泳（2－DE）分离、银杂显色,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的2－DE图像;根据获得的2－DE凝胶图像,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点,用胰蛋白酶原位水解,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行的时间质谱（MALDI－TOF－MS）测定Mr;以测得肽段Mr为肽质量指纹（PMF）,通过Pepldent软件搜索SWISS－PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果：建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的10个点相应的蛋白质。 结论：本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的2－DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。     

放射线诱导hEgr-1-CD对鼻咽癌CNE放射增敏作用的研究

目的 研究放射线诱导hEgr-1-CD自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE细胞株放射增敏作用。方法 将pcDNA3.1（＋）Egr-1-CD利用脂质体转染的方法 转染入鼻咽癌细胞株,给予不同剂量的X线照射观察基因表达与放射的剂量效应关系,观察不同的放射线及不同剂量的前药对鼻咽癌细胞的杀伤效应。结果 电离辐射可诱导增强自杀基因阳性鼻咽癌CNE细胞株中CD基因的表达,电离辐射与前药5-Fc的联合应用大大增强了对自杀基因阳性细胞的杀伤作用,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独照射。结论 hEgr-1-CD自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE细胞株有放射增敏作用,其与放射联合应用对CNE细胞有明显的协同杀伤作用。     

上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A

目的 证实上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白,确定所表达的免疫球蛋白的类别。方法 采用免疫组化、Western blot及ELISA等方法检测MCF－7（人乳腺癌细胞系）、SW480（人结肠癌细胞系）、MGC（人胃癌细胞系）、HeLa(人宫颈癌细胞系）、CNE1－LMP1（稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系）、HNE2（鼻咽癌细胞系）和Tet-on-LMP1-HNE2(受四环素诱导可调控的鼻咽癌细胞系）等7种上皮来源的细胞系的细胞蛋白提取液及培养上清中的免疫球蛋白。结果 在7种上皮来源的瘤细胞系的蛋白提取液及培养上清中均检测到了人免疫球蛋白A。结论 上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A。     

miR-17-5p 通过下调BRMS1L表达调控鼻咽癌CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的：探讨miR-17-5p 通过调控乳腺癌转移抑制基因1 相似基因（breast cancer metastasis suppressor 1 like,BRMS1-like 或BRMS1L）表达调控鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法：收集2014 年1 月至2017 年12 月间平煤神马医疗集团总医院收治的40 例鼻咽癌患者切除的鼻咽癌组织及其相应的癌旁组织标本,以及鼻咽癌细胞系CNE 2、HONE 1、C666-1 和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69,采用qPCR 检测miR-17-5p 在癌组织和癌细胞系中的表达水平。通过StarBase 数据库预测BRMS1L 与miR-17-5p 的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。WB检测转染miR-17-5p 模拟物和抑制物对CNE2 细胞中BRMS1L表达的影响;CCK-8、Transwell 和流式细胞术检测miR-17-5p/BRMS1L分子轴对CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：miR-17-5p 在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中呈高表达（P<0.05 或P<0.01）,下调miR-17-5p 显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移但促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。miR-17-5p 靶向作用于BRMS1L并下调其表达水平。过表达BRMS1L可显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移而促进细胞凋亡（均P<0.01）;而同时过表达miR-17-5p 和BRMS1L 可逆转上述作用（均P<0.01）。结论：miR-17-5p通过靶向下调BRMS1L的表达,进而促进CNE2 细胞增殖、侵袭和迁移而抑制细胞凋亡。