硒对心脏移植大鼠外周血单个核细胞免疫分子、基因表达的影响

 目的探讨微量元素硒对大鼠异体异位心脏移植后免疫排斥反应过程中免疫分子和基因表达的影响。方法大鼠分为对照及药物干预组。干预组分别于心脏移植术前后每天灌胃给予硒(40μg·kg^-1)及环孢素A(15mg·kg^-1),对照组给予同等体积生理盐水。3组分别在移植术前及术后1,3,7,10和12d取外周血,分离单个核细胞(PBMC)。荧光单克隆抗体(mAb)标记,流式细胞仪检测MHC-Ⅱ,CD4,CD8,IL2-R和ICAM-Ⅰ免疫分子表达水平。荧光基因差异显示分析法检测多基因表达水平。国际器官移植排斥反应病理诊断标准对移植心肌组织进行病理分级。结果①对照组移植心脏存活率于术后3d时下降,7～12d急剧下降;硒组移植心脏存活率术后7d时下降,10～12d存活率为43%;环孢素A组术后3d移植心脏存活率下降50%,12d时为30%。②对照组及环孢素A组术后24h移植心肌组织分别有12.5%和33.3%发生Ⅱ级以上病理损伤,硒组术后7d出现Ⅱ级以上病理损伤。③与对照组比较,心脏移植术前后,硒对PBMC表面免疫分子MHC-Ⅱ,CD8,IL-2R及ICAM-Ⅰ的表达均有抑制作用(P<0.05或P<0.01),环孢素A对IL-2R有较强的抑制作用。④硒及环孢素A对心脏移植术后2,3-bis-phosphoglycerate的mRNA表达均有抑制作用。与对照组比较,硒对gig18的mRNA为负调表达,环孢素A为正调表达。结论微量元素硒可能通过调节2,3-bisphosphoglycerate和gig18等细胞代谢和凋亡相关基因的转录,抑制PBMC表面免疫分子MHC-Ⅱ,CD8,IL-2R和ICAM-Ⅰ的表达,从而对心肌细胞起到保护作用,提高大鼠移植心脏存活率。     

环孢素A对心脏移植大鼠外周血单个核细胞免疫分子表达的影响

 目的　通过对大鼠心脏移植,探讨环孢素A对免疫排斥反应过程中免疫分子表达的影响。方法　将大鼠分为2组,用药组大鼠心脏移植术前后以15mg·kg^-1体重环孢素A灌胃给药;对照组灌胃给予同等体积的生理盐水。2组分别在移植前、移植术后 1,3,7,10和 12d取血 ,用荧光单克隆抗体(mAb)标记单个核细胞免疫分子,流式细胞仪检测MHC-II,CD4,CD8,ICAM-I和IL2-R的表达水平。结果　大鼠心脏移植前,环孢素A组外周血单个核细胞表面免疫分子CD4的表达水平明显低于对照组,移植术后,环孢素A组的CD4和ICAM-I的正调表达时相出现于移植后的前24h内,环孢素A组的CD8于移植后第24小时至第3天时,出现一个负调表达的低谷,这一负调表达期比对照组延长了2d,而环孢素A组CD8开始正调表达时相是移植后第3天,比对照组正调表达时相晚2d,比同组CD4和ICAM-I开始正调表达时相晚2～3d,比同组IL-2R开始正调表达时相晚2d。结论　①环孢素A不抑制急性器官移植排斥反应早期(抗原呈递期)外周血单个核细胞对MHC-Ⅱ-抗原肽复合物的表达过程;②环孢素A不能有效抑制ICAM-I的表达,而是促进其表达;③环孢素A不能有效抑制MHC-Ⅱ-抗原肽和ICAM-I通过TCR共同介导的CD4⁺T单个核细胞激活过程,以及活化的单个核细胞对IL-2R的表达;④环孢素A可以延缓单个核细胞对细胞免疫分子CD8的表达。     

环孢素A，庆大霉素和硒制剂对大鼠外因淋巴细胞分子和基因表达的影响

 目的为比较环孢素A，庆大霉素和硒制剂对细胞免疫功能的不同影响，本实验观察了大鼠短期服用环孢素A，庆大霉素和硒制剂后外周血多种淋巴细胞分子和基因的表达水平变化，并对3组药物进行了对比。方法将24只大鼠分为4组，分别ig给药。于第3天取血并分离淋巴细胞。用荧光单克隆抗体(mAb)标记淋巴细胞分子并提取淋巴细胞总RNA。流式细胞仪检测淋巴细胞分子MHC-Ⅱ，CD4，CD8，ICAM-Ⅰ和IL2-R的表达水平，基因差异显示分析法检测多基因表达水平。免疫组化法检测各组心肌组织中CD4⁺，CD8⁺淋巴细胞数。结果与对照组相比，环孢素A，庆大霉素和硒制剂都抑制淋巴细胞分子ICAM-I，CD4和CD8的表达，同时3组心肌组织中CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞数降低，心肌组织中CD4⁺淋巴细胞数与CD4分子表达水平明显正相关(P＜0.000 1)。3组的细胞分子表达和心肌淋巴细胞数的降低程度依次为环孢素A＞庆大霉素＞硒制剂。不同的是，环孢素A还负调MHC-Ⅱ和IL2-R的表达水平，而庆大霉素却正调MHC-II和IL2-R的表达，硒制剂负调MHC-Ⅱ，正调IL2-R的表达。3组都表现出对凋亡基因gig18和一个450 bp左右的待测基因的正调表达。结论①短期服用环孢素A，庆大霉素和硒制剂，都抑制大鼠外周血淋巴细胞对ICAM-I，CD4和CD8等细胞分子的表达，但抑制程度不同；②三者对淋巴细胞MHC-II和IL2-R的表达调控具有明显差异；③三者都正调淋巴细胞凋亡基因gig18的表达。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠慢性排斥移植心脏心肌生长因子含量的影响

目的:通过观察苏木提取物对心脏移植模型大鼠心肌病理形态学及生长因子表达的影响,探讨苏木提取物对慢性排斥反应的作用机理,为从中药学中研发出新型的免疫抑制剂奠定工作基础。方法:应用改良Ono术式行大鼠腹腔心脏移植,结合Cs A灌胃建立心脏移植慢性排斥动物模型。选择移植心脏跳动良好的大鼠随机分为3组。苏木组予苏木乙酸乙酯提取物溶液灌胃;环孢素组予Cs A溶液灌胃;模型对照组按体质量计算予等体积橄榄油灌胃,连续灌胃7 d后取下移植心脏。观察移植术后受体的一般情况,移植心脏收缩力情况,移植心脏心肌病理形态学改变,并进行慢性排斥反应诊断分级;采用Real-time-PCR法检测各组大鼠移植心脏心肌生长因子PDGF-A、VEGF-C、FGF-1、FGF-2的基因表达水平。结果:与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组PDGF-A的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);苏木组和环孢素A组移植心脏心肌组织PDGF-A的表达水平相当,差异无统计学意义(P0.05);与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组VEGF-C的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);苏木组和环孢素A组移植心脏心肌组织VEGF-C的表达水平相当,差异无统计学意义(P0.05);与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组FGF-1的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与苏木组相比,环孢素A组FGF-1的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组FGF-2的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与苏木组相比,环孢素A组FGF-2的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:苏木乙酸乙酯提取物能降低大鼠慢性排斥模型移植心肌PDGF-A、VEGF-C的基因表达,作用与Cs A相当。苏木乙酸乙酯提取物能降低大鼠慢性排斥模型移植心肌FGF-1、FGF-2的基因表达,作用不及Cs A。     

苏木有效成分免疫抑制作用的实验研究

目的:探讨苏木提纯物对淋巴细胞转化功能的影响及抗心脏移植急性排斥反应的机制。方法:用两种苏木提纯物给小鼠灌胃8d,取脾后应用MTT法测定T、B淋巴细胞的增殖情况;建立大鼠腹腔同种异位心脏移植模型。供体雄性Wistar大鼠,受体雄性SD大鼠,分别设模型对照组、环孢素A组和苏木乙酸乙酯提取物组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定移植心脏心肌组织FasL mRNA的表达情况。结果:苏木乙酸乙酯提取物35g/kg组具有较强的抑制淋巴细胞增殖的作用;在抑制心脏移植后FasL mRNA相对量表达水平方面,苏木乙酸乙酯提取物组与对照组相比有显著性差异,与环孢素A组相比无显著性差异。结论:苏木乙酸乙酯提取物有较强的免疫抑制作用,具有良好的开发前景。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠心脏移植慢性排斥模型血清IL-1O水平的影响

目的：通过观察苏木乙酸乙酯提取物对大鼠同种异位心脏移植慢性排斥反应血清中IL-10水平的影响,为进一步探讨苏木乙酸乙酯提取物对慢性排斥反应的作用机制奠定工作基础。方法：以Wistar大鼠为供体,以SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型。将手术成功后连续灌服21天环孢素A的大鼠,随机分为对照组、苏木组、环孢素A组,对照组按体质量计算等容量橄榄油灌胃;环孢素A组按12mg／kg／d环孢素A溶于橄榄油给药;苏木组按含生药量1．15g／kg／d溶于橄榄油中给药。灌胃7天后采血,用ELISA法检测血清中IL-10的含量。结果表明：1）与对照组相比,环孢素A组与苏木组血清中IL-10的含量明显增高（P〈0．01,P〈0．05）。2）环孢素A组与苏木组相比有显著差异（P〈0．01）。结论：苏木乙酸乙酯提取物能够升高移植心脏的大鼠血清IL-10的含量,这可能是抗慢性排斥反应的原因之一。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠心脏移植慢性排斥模型血清IL-10水平的影响

目的:通过观察苏木乙酸乙酯提取物对大鼠同种异位心脏移植慢性排斥反应血清中IL-10水平的影响,为进一步探讨苏木乙酸乙酯提取物对慢性排斥反应的作用机制奠定工作基础。方法:以Wistar大鼠为供体,以SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型。将手术成功后连续灌服21天环孢素A的大鼠,随机分为对照组、苏木组、环孢素A组,对照组按体质量计算等容量橄榄油灌胃;环孢素A组按12 mg/kg/d环孢素A溶于橄榄油给药;苏木组按含生药量1.15g/kg/d溶于橄榄油中给药。灌胃7天后采血,用ELISA法检测血清中IL-10的含量。结果表明:1)与对照组相比,环孢素A组与苏木组血清中IL-10的含量明显增高(P0.01,P0.05)。2)环孢素A组与苏木组相比有显著差异(P0.01)。结论:苏木乙酸乙酯提取物能够升高移植心脏的大鼠血清IL-10的含量,这可能是抗慢性排斥反应的原因之一。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠同种异位心脏移植急性排斥反应心肌GrB mRNA表达的影响

目的 观察苏木乙酸乙酯提取物对同种异位心脏移植大鼠移植心肌GrB mRNA表达的影响，探讨苏木免疫活性部位抗排斥反应作用机理。方法 以Wistar大鼠为供体，以SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型, 将手术成功鼠随机分为模型组、苏木组、环孢素A（CsA）组，采用RT-PCR法检测GrB mRNA表达。常规方法观察心肌病理形态学。 结果 (1) 病理组织学分级:与模型组（积分31）比较，CsA组（积分14）和苏木组（积分23）均能减轻移植心肌病理损伤（P<0.05,P<0.01）。(2) 移植心肌组织GrB mRNA的表达：与模型组（1.3000±0.1207）比较，CsA组（0.6700±0.0997）和苏木组（0.7070±0.1215）能明显下调GrB mRNA表达（P<0.01），CsA组与苏木组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 苏木乙酸乙酯提取物能够减轻移植心脏心肌的病理损伤，能够下调大鼠移植心脏心肌GrB的基因表达，这可能是抗急性排斥反应因素之一。     

凉血化瘀方对肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的调控作用

目的:应用功能分类基因芯片分析凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的影响,探讨其抗肝衰作用的分子机制。方法:腹腔注射GalN(500mg·kg^-1)+LPS(4.8μg·kg^-1),造成大鼠急性肝功能衰竭,应用美国SuperArray公司大鼠细胞凋亡Oligo基因芯片检测模型组和治疗组基因的差异表达。结果:模型组与正常组比较表达下调的基因有37条,表达上调的基因有10条;治疗组与模型组比较表达下调的基因有16条,其中诱导细胞凋亡基因有13条,表达上调的基因有12条,其中抗细胞凋亡基因7条。结论:凉血化瘀方能够调节细胞凋亡相关基因从而抑制肝细胞凋亡,主要是通过下调凋亡诱导相关基因的表达,同时也少量上调凋亡抑制基因的表达。     

黄芪糖蛋白诱导佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的研究

目的:探讨黄芪糖蛋白对佐剂性关节炎大鼠体内细胞凋亡的诱导作用。方法:建立大鼠佐剂性关节炎模型,治疗2周后,取外周血、膝关节滑膜组织,分别使用流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)法检测外周血淋巴细胞和膝关节滑膜组织的细胞凋亡情况,使用免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平。结果:低剂量黄芪糖蛋白可提高外周血CD4+、CD+8细胞的凋亡比例(P<0.05),低、中、高剂量黄芪糖蛋白均可增加膝关节滑膜组织的细胞凋亡率(P<0.01),同时降低Fas表达水平(P<0.01),增强FasL表达水平(P<0.01)。结论:黄芪糖蛋白可诱导佐剂性关节炎大鼠外周血淋巴细胞及膝关节滑膜组织细胞凋亡,且调节滑膜组织中Fas、FasL的蛋白表达水平。     

中药安胎养血合剂对肾移植大鼠IL-2的影响

目的:研究中药安胎养血合剂(Antai YangxueMixture,ATYXM)对肾移植大鼠存活时间和血IL-2(白介素2)的影响,探讨ATYXM免疫抑制作用的可能机制。方法:建立大鼠异体肾移植急性排斥反应模型(SD→Wistar),随机分为4组,每组12只。Ⅰ组,生理盐水对照组(NS组),NS灌胃10mg/(kg.d)。Ⅱ组,ATYXM组,中药灌胃10mL/(kg.d)。Ⅲ组,CsA(cyclosprorine,CsA)组,CsA灌胃10mg/(kg.d)。Ⅵ组,中西医结合组,中药和CsA灌胃,中药10mL/(kg.d)、CsA2.5mL/(kg.d),两者间隔30min。观察各组肾移植大鼠的存活时间,术后第6天取血测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的水平,酶联免疫法(ELISA)检测受体鼠血IL-2水平。结果:ATYXM可以延长受体鼠的存活时间,降低受体鼠血IL-2水平,对移植肾功能具有保护作用,并与低剂量CsA产生显著的协同效应。结论:ATYXM免疫抑制作用机制可能是抑制Th1细胞产生IL-2。     

Effect of acupuncture at Renying(ST 9) on gene expression profile of hypothalamus in spontaneously hypertensive rats

OBJECTIVE: To investigate changes in gene expression profiles in the hypothalamus related to the effects of acupuncture at the Renying(ST 9) acupoint in spontaneously hypertensive(SH) rats.METHODS: We randomly divided 18 SH rats into Renying(ST 9) group and model control group, 9 body weight-matched Wistar-Kyoto rats were used as blank controls. Acupuncture was performed manually for 20-min daily over 28 d in the Renying(ST 9) group. Rat Gene 2.0 array technology was used for the determination of gene expression profiles and the screened key genes were verified by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) analyses.RESULTS: The different groups exhibited differential gene expression: compared with the blank control group, 48 genes were up-regulated and 91 genes were down-regulated in the model group;compared with the model group, 79 genes were up-regulated and 80 genes were down-regulated in Renying(ST 9) group. The RT-PCR results of the key genes including Chi3 l1, Ephx2, Klk1, 5-HT1 A and Cbs were consistent with that of gene chip analysis.CONCLUTION: Acupuncture at Renying(ST 9)could significantly lower the blood pressure of SH rats and affect their hypothalamic gene expression profile. Genes associated with the contraction of vascular smooth muscle and the regulation of inflammation, neurotransmitters may be involved in acupuncture's antihypertensive mechanism.     

细辛脂素抗心脏移植急性排斥反应的作用及对黏附分子表达的影响

目的：实验筛选细辛免疫抑制作用的有效成分细辛脂素,探讨其抗心脏移植急性排斥反应作用及对黏附分子的影响。方法：提取细辛中的细辛脂素,健康雄性Wistar大鼠（供体）和SD大鼠（受体）各64只,建立大鼠异位心脏移植模型,将接受心脏移植的SD大鼠分成4组：阳性对照组,不给任何处置；环孢霉素A(CsA)组,术前1 d开始灌服CsA；细辛脂素组,术前1 d开始灌服细辛脂素；混合药物组,术前1 d开始灌服半量CsA和半量细辛脂素。每组各8只,术后第7天处死,另外8只用于观察移植物生存天数。移植心常规石蜡包埋、切片,显微镜观察并进行组织病理分级；免疫组化染色法检测移植物局部细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管内皮黏附分子-1（VCAM-1）含量。结果：移植心存活时间,CsA组、细辛脂素组和混合药物组均较阳性对照组显著延长（P<0.01）。与阳性对照组比较,细辛脂素可减轻心肌病理形态学的损伤。CsA组、细辛脂素组和混合药物组移植心局部ICAM-1和VCAM-1含量较阳性对照组明显减少。结论：细辛脂素可延长移植物存活时间并减轻病理形态的损伤,与CsA有相似的免疫抑制作用。ICAM-1和VCAM-1在发生排斥反应时表达增加,细辛脂素可抑制二者的表达。     

甘肃黄芪对多柔比星心肌病大鼠心肌组织部分基因表达的影响

 目的比较正常大鼠和多柔比星心肌病大鼠心肌组织部分基因表达谱的差异,探讨甘肃黄芪对上述基因表达谱的影响。方法30只Wistar大鼠随机分3组:对照组即生理盐水组(n=10),多柔比星组(n=10)和黄芪+多柔比星组(n=10)。分别从3组心肌组织中抽提总RNA,用Cy3,Cy5荧光标记,经逆转录合成动物来源的cDNA探针;cDNA探针与4000点基因表达谱芯片杂交,结果由软件分析表达信号。结果共有923条基因出现差异表达,其中586条基因表达下调,337条基因表达上调。凋亡相关基因表达在多柔比星心肌病时上调;氧化和能量代谢相关基因的表达在多柔比星心肌病时下调。6个在多柔比星组上调的基因在黄芪+多柔比星组下调,8个在多柔比星组下调的基因在黄芪+多柔比星组上调,3个在多柔比星组上调的基因在黄芪+多柔比星组表达进一步增强。结论凋亡和能量代谢障碍及免疫因素在多柔比星心肌病的发病机制中参与作用,甘肃黄芪对多柔比星诱导的心肌病大鼠的心脏保护作用是通过多基因多途径调节相关基因表达而实现的。     

肺气虚证患者T淋巴细胞相关基因的表达研究

目的：通过基因芯片技术研究肺气虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法：采集肺气虚证和肺阴虚证患者、正常人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Fieoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞，一步法提取总RNA，逆转录合成双链cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，片断化后，采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交，扫描后筛选出差异表达基因。结果：肺气虚证患者／正常人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条，其中上调41条，下调4条；肺气虚证／肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因43条，其中上调27条，下调16条；肺气虚证组／肺阴虚证组、正常人组均高表达的差异基因15条。结论：基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱，筛查出肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。     

回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠基因表达的调节机制

目的:观察回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠基因表达的调节机制,探讨调节的基因与神经组织保护、修复、生长和再生的关系。方法:采用Allen's法制备大鼠脊髓损伤模型,分为假手术组(A组),损伤组(B组),烙灸组(C组),应用表达谱基因芯片对脊髓损伤大鼠的基因表达分析,筛出先上调后下调及先下调后上调的基因,并用RT-PCR对其中8条基因表达水平验证。结果:电泳结果显示提取到高纯度的RNA,质量完好,无蛋白质及DNA残留。损伤组对比假手术组出现功能已有阐述差异基因1 146个,其中上调712个,下调434个。烙灸组对比B组出现功能已有阐述差异基因5 542个,其中上调3 006个,下调2 536个。模型组对比假手术组及烙灸组对比烙灸组基因差异表达取并集,然后从中挑选出样本中先上调后下调及先下调后上调的基因,共24个基因,其中先上调后下调的13个,先下调后上调的11个。抽取部分差异表达基因Olr1528、Trim72、Serpinb3a、GAP-43、Slc5a7、LOC288521、Vegp2、Cyp2d1进行RT-PCR验证,验证结果与芯片结果相符合。结论:回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠基因表达具有一定的调节作用,调节的基因与神经组织保护、修复、生长和再生密切相关。     

不同生长阶段线虫衰老相关基因的表达变化及川芎提取物的调控作用

目的:观察不同生长阶段秀丽隐杆线虫衰老相关基因的表达变化及川芎提取物(CXE)的调控作用。方法:按生长阶段不同分设2,6 d 2个时间点,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法检测上述时间点对照组和用药组的衰老相关基因表达情况,以2-ΔΔCT法比较分析其基因表达变化的差异及CXE的调控作用。结果:与2 d对照组比较,6 d对照组线虫的age-1,daf-2,let-363基因表达上调(P0.05),而ins-18,let-60,sir-2.1,sod-3基因表达下调(P0.05);与用药2 d组比较,用药6 d组age-1,daf-2,let-363基因表达显著下调(P0.01),ins-18,let-60,sir-2.1,sod-3基因表达显著上调(P0.01)。结论:age-1,daf-2,let-363基因进入衰老期后表达量增加,显示促进衰老作用;而ins-18,let-60,sir-2.1,sod-3进入衰老期后表达量下降,显示延缓衰老的作用。CXE主要通过抑制胰岛素信号通路和限食等通路的衰老基因表达,促进长寿基因表达发挥延寿作用。