GAS5靶向miR-222-3p对牙周膜干细胞成骨分化的影响机制

成骨诱导hPDLSCs后,茜素红染色显示矿化增强GAS5表达升高(P<0.05),Runx2、ALP和OCN mRNA表达降低,miR-222-3p表达升高(P<0.05);miR-222-3p抑制剂可逆转GAS5低表达对hPDLSCs的作用(P<0.05)。提示hPDLSCs成骨分化后GAS5表达上调,下调GAS5可通过靶向调控miR-222-3p,抑制hPDLSCs成骨分化。     

血浆miR-136-5p表达水平对口腔鳞状细胞癌患者预后预测的价值

目的: 探讨血浆miR-136-5p表达水平对口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者预后预测的价值。方法: 选择2015年1月—2018年10月儋州市人民医院收治的OSCC患者86例及正常对照组50例,采用实时荧光定量PCR技术检测2组患者血浆miR-136-5p表达水平。通过ROC曲线确定血浆miR-136-5p表达水平的最佳截断值,并以此为标准,将OSCC患者分为高miR-136-5p组(n=36)和低miR-136-5p组(n=50),对2组临床病理特征进行比较。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用SPSS 20.0软件包中的单因素及多因素Cox回归模型,分析影响OSCC患者预后不良的危险因素。结果: OSCC组患者血浆miR-136-5p表达水平(1.27±0.51)显著低于对照组(4.38±1.26,P<0.01);血浆miR-136-5p低表达与OSCC患者的临床分期、分化程度、肿瘤直径及颈淋巴结转移有关(P<0.05)。生存分析显示,低miR-136-5p组患者总生存率(48.0%)显著低于高miR-136-5p组(68.4%,P<0.01),低miR-136-5p组患者无进展生存率(28.6%)显著低于高miR-136-5p组患者(57.8%,P<0.01)。多因素Cox回归模型分析显示,临床分期[HR(95%CI)=2.462(1.805~4.193)]、颈淋巴结转移[HR(95%CI)=2.913(2.142~5.827)]及血浆miR-136-5p表达水平<2.82[HR(95%CI)=3.856(3.114~8.205)]是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论: 血浆miR-136-5p低表达与OSCC患者生存期短有关,有望作为预测OSCC预后不良的生物标志物。     

miR-17-5p在口腔鳞状细胞癌中的表达特点及其临床意义

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者肿瘤组织和血浆中miR-17-5p的表达特点及临床意义.方法:选取2009年6月-2013年6月经手术切除的OSCC组织标本和外周血标本各42例,使用qRT-PCR测定miR-17-5p的表达;采用Mann-Whitney U检验分析miR-17表达及预后的相关性. 结果:OSCC组织和血浆中miR-17-5p表达显著上调(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤分化程度无明显相关(P>0.05),但与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05);术前血浆中miR-17-5p高表达者术后1年的复发率高于低表达者(P <0.05);治愈患者术后血浆中miR-17-5p表达明显低于术前血浆中miR-17-5p含量(P<0.05),而OSCC术后复发患者无明显变化. 结论:miR-17-5p可以作为临床评估OSCC侵袭、转移和术后复发进行评价的重要指标.     

miR-206-3p调控RAW264.7细胞向破骨细胞分化的体外研究

目的:探究miR-206-3p对破骨细胞生成的影响.方法:RAW264.7细胞体外诱导破骨分化,过表达或抑制其miR-206-3p,实时定量RT-PCR检测miR-206-3p表达水平.通过纤维状肌动蛋白染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成,实时定量RT-PCR及Western Blot检测破骨细胞分化相关基因——活化T细胞核因子1(NFATc1)的表达.结果:过表达miR-206-3p后,破骨细胞生成受到抑制,NFATc1表达水平降低,而敲减miR-206-3p后可促进破骨细胞的生成,NFATc1表达显著上调(P<0.05).结论:miR-206-3p通过影响NFATc1的表达,调控RAW264.7细胞向破骨细胞分化.     

miR-30e-5p调控口腔鳞癌细胞增殖和迁移的实验研究

目的:研究miR-30e-5p对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR检测miR-30e-5p在人口腔鳞癌组织、癌旁组织、正常口腔黏膜上皮细胞和HN6细胞系中的表达水平。应用miR-30e-5p mimics、miR-30e-5p inhibitor、mimics NC、inhibitor NC分别转染HN6细胞,实时荧光定量PCR检测转染后miR-30e-5p的表达变化;采用细胞增殖实验、平板克隆形成实验、划痕实验分别检测miR-30e-5p对HN6细胞生长和迁移的影响。结果:相对于癌旁正常组织,miR-30e-5p在口腔鳞癌组织中的表达显著下调(P<0.05)。相对于正常口腔黏膜上皮细胞,miR-30e-5p在口腔鳞癌细胞中的表达显著下调(P<0.05)。转染miR-30e-5p mimics后,HN6细胞的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力显著降低,而转染miR-30e-5p inhibitor后,HN6细胞的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力则明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-30e-5p在口腔鳞癌组织中低表达,与口腔鳞癌细胞的生长和迁移密切相关,提示miR-30e-5p在口腔鳞癌的发生、发展过程中可能起抑癌基因的作用。     

miR-127-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及Zwint-1基因表达的影响

目的 探讨miR-127-3p调控Zeste white 10(ZW10)相互作用着丝粒蛋白1(Zwint-1)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 体外培养OSCC细胞系PE/CA-PJ15、CAL27,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(NC组)、过表达miR-127-3p组(m...     

miR-330-3p在颞下颌关节骨关节炎软骨退变中的作用机制研究

目的: 探讨miR-330-3p在颞下颌关节骨关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis, TMJOA）软骨退变中的作用机制。方法: 对SW1353软骨细胞系进行炎症及加压刺激,建立大鼠单侧前牙反（unilateral anterior crossbite, UAC）TMJOA模型,通过RT-qPCR检测体外及体内软骨OA情况下miR-330-3p的表达变化。miR-330-3p过表达或抑制后,利用EDU荧光染色以及蛋白免疫印迹(WB)检测SW1353软骨细胞的增殖及合成分解代谢变化。生物信息学分析预测并筛选miR-330-3p的下游靶点,并在炎症及加压刺激下通过RT-qPCR和WB明确miR-330-3p对其调控作用。在miR-330-3p大鼠UAC TMJOA模型的关节腔内注射后,采用免疫组织化学方法检测靶分子的表达及软骨代谢的变化,明确miR-330-3p对TMJOA的治疗作用。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 在体外炎症和加压刺激下,以及大鼠UAC的TMJOA模型中,miR-330-3p在软骨中的表达均下降。抑制miR-330-3p可导致软骨细胞增殖能力下降,SOX9合成降低,MMP13表达增加,而过表达的结果则相反。生物信息学分析发现CTNNB1为可能的下游靶点之一,其在体外炎症和加压刺激后表达升高。过表达CTNNB1后,软骨细胞SOX9蛋白表达下降,MMP13蛋白表达升高,抑制CTNNB1的结果则相反。miR-330-3p与CTNNB1在mRNA及蛋白表达水平上存在负相关关系。大鼠UAC TMJOA模型关节腔内注射miR-330-3p模拟物后,CTNNB1的表达减少,软骨退变减轻。结论: miR-330-3p通过抑制CTNNB1的表达,减轻TMJOA的软骨退变。     

miR-204-5p靶向溴结构域蛋白4对舌鳞状细胞癌细胞SCC25增殖和迁移侵袭的影响研究

目的 探讨miR-204-5p对溴结构域蛋白（BRD）4的靶向作用机制以及对舌鳞状细胞癌SCC25细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测舌鳞状细胞癌组织以及不同细胞株系间的miR-204-5p和BRD4 mRNA的表达水平;miR-204-5p转染SCC25细胞后,细胞计数试剂盒（CCK）8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测miR-204-5p对SCC25迁移和侵袭的影响;使用TargetScan和荧光素酶实验分析并验证miR-204-5p与BRD4的靶向调控关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-204-5p模拟物和抑制剂对BRD4表达水平的影响;Transwell小室法和CCK8法检测miR-204-5p调控BRD4对SCC25增殖和迁移侵袭的影响。结果 miR-204-5p在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达下调,BRD4在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达上调;提高miR-204-5p表达量抑制SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭;TargetScan和荧光素酶实验证实miR-204-5p与BRD4具有靶向负调控关系;miR-204-5p模拟物抑制BRD4表达,miR-204-5p抑制剂促进BRD4表达上调;当在SCC25细胞中同时过表达miR-204-5p和BRD4时,BRD4能够回补miR-204-5p对SCC25细胞的抑制作用。结论 miR-204-5p能够通过靶向负调控BRD4抑制舌鳞状细胞癌SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭。     

口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p通过靶向SFRP1驱动口腔癌细胞的恶性表型

目的:探讨口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p对口腔癌细胞的恶性表型的影响及作用机制。方法:收集口腔患者血清和细胞上清外泌体,透射电镜和纳米颗粒示踪分析观察和鉴定外泌体。RT-qPCR检测microRNA-582-3p(miR-582-3p)及分泌卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)的mRNA的表达。CCK-8、EdU实验、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞活性、增殖、迁移和侵袭情况。双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-582-3p与SFRP1的相关性。Western blot检测外泌体相关标志物(HSP70、CD81、CD9、CD63、TSG101和Alix)及SFRP1蛋白表达。异种移植瘤实验验证口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p在口腔癌中的促进作用。结果:口腔癌患者组织、血清及血清和细胞外泌体中miR-193b-3p表达明显升高。口腔癌细胞外泌体miR-582-3p促进口腔癌细胞增殖、迁移和侵袭。miR-582-3p可直接靶向SFRP1。过表达SFRP1减弱miR-582-3p对口...     

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、mi...     

miR-497-5p在前成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化中的作用及机制探讨

目的：研究微小RNA(miR)-497-5p在前成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化中的作用，并探讨其相关机制。方法：取第3代MC3T3-E1细胞，分别转染miR-497-5p过表达质粒miR-497-5p mimics、低表达质粒miR-497-5p inhibitor和阴性对照质粒miR-497-5p NC，设为miR-497-5p mimics组、miR-497-5p inhibitor组和miR-497-5p NC组。取不做处理的细胞作为空白组。成骨诱导后14天，检测碱性磷酸酶（ALP）活性；免疫印迹法检测成骨分化相关蛋白骨钙素（OCN）、I型胶原（COL-I）蛋白表达量；茜素红染色法观察矿化情况；免疫印迹法检测Smad泛素化调节因子2(Smurf2)蛋白表达量；双荧光素酶实验验证miR-497-5p与Smurf2的靶向关系。采用SPSS 25.0软件包进行统计学分析。结果：与空白组、miR-497-5p NC组相比，miR-497-5p mimics组ALP活性显著增强，OCN、COL-I蛋白表达量及矿化结节面积构成比显著升高，Smurf2蛋白表达量显著降低（P<0.05...     

姜黄素调控唾液腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的: 探讨姜黄素靶向miR-155-5p/TP53INP1轴诱导氧化应激调控唾液腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制。方法: A253细胞加入姜黄素及转染miR-155-5p mimic和（或）pcDNA3.1-TP53INP1,共同培养。采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-155-5p与TP53INP1之间的靶向关系;qRT-PCR检测细胞miR-155-5p、TP53INP1mRNA的表达;Western印迹法检测细胞TP53INP1、Caspase8、Caspase3、Bcl-2、Bax蛋白表达;ELISA法检测细胞SOD、Gpx、MDA含量。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 双荧光素酶报告实验证实,TP53INP1是miR-155-5p的下游靶向调控分子;与DMSO组相比,姜黄素组细胞凋亡、Caspase8、Caspase3、Bax蛋白表达及TP53INP1表达显著增加,Bcl-2蛋白表达、miR-155-5p mRNA及划痕迁移细胞数显著降低（P<0.05）;与姜黄素+miR-155-5p mimic组相比,姜黄素+pcDNA3.1-TP53INP1组、姜黄素+miR-155-5p mimic+pcDNA3.1-TP53INP1组细胞凋亡、Caspase8、Caspase3、Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达显著升高（P<0.05）,姜黄素+pcDNA3.1-TP53INP1组SOD、GSH-PX活性及划痕迁移细胞数显著降低,MDA含量显著升高（P<0.05）。结论: 姜黄素抑制A253细胞增殖,促进A253细胞凋亡,其机制可能与靶向miR-155-5p/TP53INP1轴诱导氧化应激调控有关。     

miR-199b-5p在头颈癌细胞中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的： 明确miR-199b-5p差异表达在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）发生、发展中的作用并探讨其生物学功能。方法： 检测128例HNSCC组织中miR-199b-5p的表达,通过Kaplan-Meier生存分析,分析临床病理参数与miR-199b-5p表达水平之间的关系。通过miRNA异常表达对HNSCC细胞生长、侵袭和迁移能力以及克隆形成的影响,检测HNSCC细胞中miRNA的功能。采用SPSSl9.0软件包对数据进行t检验。结果： 在79例淋巴结转移的HNSCC组织中,miR-199b-5p的表达水平为1.68±0.21;在49例非淋巴结转移的HNSCC组织中,其表达水平为2.64±0.24,差异显著（P=0.001）。在HNSCC患者中,高表达miR-199b-5p的患者总体存活率显著增高（P=0.01）,且高表达水平的miR-199b-5p可以显著抑制头颈鳞癌细胞的侵袭和转移。结论： 作为抑癌基因,miR-199b-5p在HNSCC的发生、发展中起着关键作用。     

MSH homeobox 1 polymorphisms and the risk of non‐syndromic orofacial clefts: a meta‐analysis

MSH homebox 1 (MSX1) is a susceptibility gene for non‐syndromic orofacial clefts (NSOCs). Here, a meta‐analysis was conducted to assess their associations. A systematic search of PubMed to 1 September 2017, was performed to retrieve all eligible studies. Odds ratios (ORs) were used to calculate the associations. The stability of the results was evaluated by sensitivity analysis. Publication bias was assessed using Begg's funnel plots and the Egger test. In silico Msx1 expression during early mouse craniofacial development was evaluated by the Gene Expression Omnibus. In the overall analysis, MSX1 rs12532 (G>A) contributed to a decreased risk of NSOC. In an analysis stratified according to disease type, rs12532 was associated with the risk of cleft palate only (CPO) but not with the risk of cleft lip with or without cleft palate (CL/P). The association of rs12532 with the occurrence of NSOC in Asian and Caucasian populations but not South American populations was observed in an analysis stratified according to ethnicity. However, no significant associations were detected between any of the other MSX1 SNPs and the risk of NSOC in either the overall or subgroup analysis. The Msx1 gene was widely expressed in mouse craniofacial structures from embryonic day (E)8.5‐E10.5. Taken together, the study indicates that MSX1 rs12532 is associated with the risk of NSOC.