Forskolin对1，25－二羟维生素D_3受体mRNA表达的调节及其生物学意义

目的：研究腺苷酸环化酶激活剂ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（Ｆ）对１，２５－二羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用及其可能的生物学意义。方法：以人原始巨核白血病细胞系（ＨＩＭｅｇ）为模型，ＶＤＲｍＲＮＡ的检测采用定量逆转录－聚合酶链反应；细胞增殖实验采用悬浮培养系统及甲基纤维素培养系统。结果：Ｆ对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ的表达具有向上调节作用，且有明显的时间依赖性特点；Ｆ本身虽然对ＨＩＭｅｇ细胞的增殖及分化过程无明显影响，但却可以显著地加强１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对该细胞系的作用，具体表现在：当Ｆ同时存在时，１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＨＩＭｅｇ细胞的增殖过程和克隆形成率的抑制作用更为明显，对ＨＩＭｅｇ细胞分化过程的诱导作用亦更为显著；同时，１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＨＩＭｅｇ细胞周期分布的影响也更加突出。结论：Ｆ对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ具有向上调节作用，并伴有１，２５（ＯＨ）２Ｄ３生物学效应的提高，说明下对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ的向上调节作用具有生物学意义。     

用定量RT－PCR法检测1，25－二羟维生素D_3受体mRNA的表达

用定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测１，２５－二羟维生素Ｄ_３受体ｍＲＮＡ的表达宋亮年关键１，２５－二羟维生素Ｄ_３；１，２５－二羟维生素Ｄ_３受体；ｍＲＮＡ；基因表达ＲＴ－ＰＣＲ１，２５－二羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］是维生素Ｄ３的激素形式，除了其重要...     

1,25-二羟维生素D_3抑制报导载体pGL_2荧光素酶表达的研究

通过磷酸钙沉淀法将载体DNA转染Caco－2细胞。Caeo－2细胞经不同浓度1,25一二羟维生素D3处理后,测定表达的荧光素酶活性。结果;当pSG5－VDR表达载体共转染时1,25一二羟维生素D3显著地抑制Caco－2细胞荧光素酶的表达;而未使用pSG5－VDR表达载体共转染时,则无抑制作用。说明1,25一二羟维生素D3能抑制报导载体pGL2荧光素酶的表达。类似于人类PTH基因中的潜在抑制性VDRE存在于报导载体pGL2。     

Forskolin对1,25—二羟维生素D2受体mRNA表达的调节及其生物…

目的；研究腺苷酸环化酶激活剂ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（Ｆ）对１，２５－二羟维生素Ｄ３「１，２５（ＯＨ）２Ｄ３」受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用人可能的生物学意义。方法；以人原始巨核白血病细胞系（Ｈ１Ｍｅｇ）为模型，ＶＤＲｍＲＮＡ的检测采用定量逆转录－聚合酶链反应；细胞增殖实验采用悬浮培养系统及甲基繁华等比例纱培养系统。结果；Ｆ对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ的表达具有向上调节作用。具有明显的时间依赖性     

1,25-二羟维生素D3下调Toll样受体7在树突状细胞中的表达

目的观察1,25-二羟维生素D3对树突状细胞(DC)的表型、功能以及对其Toll样受体7(TLR7)表达的影响,探讨TLR7在1,25-二羟维生素D3诱导耐受性DC可能的机制。方法体外扩增小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术和混合淋巴细胞反应检测1,25-二羟维生素D3对DC表型和功能的影响;利用RT-PCR半定量方法测定1,25-二羟维生素D3对DC的TLR7表达的影响。结果 1,25-二羟维生素D3处理后,DC表达CD86和MHC II的荧光强度均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);对T细胞的刺激能力较对照组明显减弱(P<0.05);与对照组比较,1,25-二羟维生素D3可以明显下调TLR7的表达(P<0.01)。结论 1,25-二羟维生素D3可能通过下调TLR7的表达抑制DC细胞的成熟,从而使得DC具有耐受性特征。     

1,25-二羟维生素D3处理树突状细胞在过敏性气道炎症中的作用

目的 研究1,25-二羟维生素D3对树突状细胞(dendritic cells,DC)表型和功能的影响及其处理后DC在过敏性气道炎症中的作用.方法 体外扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞,采用流式细胞术和ELISA检测1,25-二羟维生素D3对DC表型和分泌细胞因子IL-10和IL-12的影响;观察1,25-二羟维生素D3处理DC过继卵蛋白致敏小鼠肺组织病理特点和支气管肺泡灌洗液细胞类型.结果 经1,25-二羟维生素D3处理后,DC表达CD80和MHC Ⅱ均明显降低,而CD11c变化不明显;分泌IL-10显著增加,而分泌IL-12显著降低.过继小鼠肺组织未见典型的哮喘样病理改变,支气管肺泡灌洗液细胞类型与空白对照组无显著差异.结论 1,25-二羟维生素D3可抑制DC成熟,经其处理后DC过继致敏小鼠可诱导对抗原的免疫耐受,避免过敏性气道炎症的发生.     

血清1,25-二羟维生素D_3水平与糖尿病肾病的关系研究

目的探讨血清1,25-二羟维生素D3水平与2型糖尿病(T2DM)的关系及其在糖尿病肾病(DN)发生发展中的意义。方法选择64例2型糖尿病患者和20名正常对照者,根据尿清蛋白肌酐比值(ACR)及血肌酐值将糖尿病患者分为糖尿病正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组及肾功能不全组。采用ELISA法测定血清1,25-二羟维生素D3水平,同时常规测定血糖、血脂、糖化血红蛋白、肌酐、血钙、血磷、体质指数及胰岛素等指标。结果 (1)2型糖尿病组的血清1,25-二羟维生素D3水平明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组及肾功能不全组的血清1,25-二羟维生素D3水平逐渐降低,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)血清1,25-二羟维生素D3与体质指数、血肌酐、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈负相关(P<0.05)。结论血清1,25-二羟维生素D3水平可能与2型糖尿病及糖尿病肾病相关,可能是2型糖尿病和糖尿病肾病发生发展中的重要因素。     

1,25(OH)_2D_3类似物MC903对人原始巨核白血病细胞系生长分化的影响

作者观察了1,25-二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]的类似物MC903对人原始巨核白血病细胞系(HIMeg)生长分化的影响。结果显示,MC903可以明显地抑制HIMeg的生长并诱导其分化,MC903(10~(-10)～10~(-6)mol/L)几乎完全抑制了HIMeg细胞的克隆形成能力;经MC903作用4d后,细胞周期分布也发生明显改变,表现为G_0+G_1期细胞百分数明显增多,而S期及G_2+M期细胞百分数减少。MC903对HIMeg细胞生长分化的影响具有剂量和时间依赖性特点,且其作用效应强于1,25(OH)_2D_3。本文结果提示,MC903和1,25(OH)_2D_3对巨核细胞系的生长分化调节过程具有重要作用。     

1，25（OH）_2D_3及其类似物调节人原始巨核白血病细胞系增殖分化的机制

１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其两种新型类似物（ＭＣ９０３和ＥＢ１０８９）对人原始巨核白血病细胞系ＨＩＭｅｇ的增殖分化过程有重要调节作用。本研究利用分子杂交及逆转录－聚合酶链反应首次证明，ＨＩＭｅｇ细胞中有１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ的表达，强烈提示１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３对ＨＩＭｅｇ细胞的作用是由ＶＤＲ介导的。同时还发现，１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其类似物、维甲酸在调节ＨＩＭｅｇ细胞增殖分化过程中，Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平迅速降低，６ｈ时已基本达到最低水平，提示这些作用因子对ＨＩＭｅｇ细胞的抑制增殖和诱导分化作用是和Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达改变密切相关的。     

Molecular mechanism of the effects of 1，25－dihydroxyvitaminn D_3 and its novel analogues on proliferation and differentiation

Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ１，２５－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎｎＤ_３ａｎｄｉｔｓｎｏｖｅｌａｎａｌｏｇｕｅｓｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆａｈｕｍａｎｍｅｇａｋａｒ?..     

1,25-二羟维生素D3抑制大鼠角膜移植术后免疫排斥反应

目的研究1,25-二羟维生素D3对角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法以45只SD大鼠为受体,15只Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。受体SD大鼠随机分成实验组、实验对照组和对照组,每组15只。实验组及实验对照组行同种异体角膜移植,对照组行自体角膜移植。术后0～13d实验组腹腔注射1,25-二羟维生素D31.0μg&#183;kg-1&#183;d-1,对照组和实验对照组注射灭菌花生油2ml/d;术后观察植片存活情况,并于术后14、21、30d每组随机处死5只大鼠行植片病理学检查和ELISA检测外周血IL-1β、IL-2、IL-8、IL-10。结果对照组角膜植片存活时间为（21.7&#177;6.8）d,实验对照组为（11.2&#177;2.5）d,实验组为（19.3&#177;5.2）d,3组比较统计学差异非常显著（P〈0.01）;病理学检查示实验组淋巴细胞浸润和新生血管均较实验对照组少;实验组外周血中IL-1β、IL-2、IL-8含量与实验对照组相比下降,IL-10含量增高,统计学差异非常显著（P〈0.01）。结论1,25-二羟维生素D3能在角膜移植后有效的保护植片,抑制排斥反应,延长植片存活时间。     

DHCC受体的纯化

本文报告了正常雄性家兔小肠粘膜细胞核提取液,经 38％饱和废硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析、DNA-纤维素层析、羟基磷灰石层析、Sephadex G—200凝胶过滤,最终得到纯化5200倍的DHCC受体40μg,产率为9％。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4 CD25 Foxp3 T细胞)及气道炎症的影响。方法28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7)。治疗组1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组)。分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL-10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达。以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7)。结果哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异。与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加。各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异。结论哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平。提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用。     

鼠尾草酸联合1,25-二羟基维生素D3对NB4细胞的影响

目的 研究鼠尾草酸(carnosic acid,CA)与1,25-二羟基维生素D3[1,25( OH)2D3]联合应用对NB4细胞生长及凋亡、分化的诱导作用.方法 通过四氮唑蓝(MTT)法观察细胞的生长,光学显微镜观察细胞形态,应用流式细胞仪测定细胞周期、凋亡率及CD14的表达,观察联合应用鼠尾草酸与低浓度1,25(O...     

1, 25-二羟维生素D3对软脂酸诱导的胰岛素抵抗血管内皮细胞功能的影响

目的：探讨1, 25-二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]对软脂酸（PA）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs） 的胰岛素抵抗的影响及其可能作用机制。方法：用含0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mmol/LPA 的DMEM培养基培养HUVECs,建立胰岛素抵抗内皮细胞模型。分别用0、0.01、0.1、1.0、10、100nmol/ L1, 25(OH)2D3干预,硝酸盐/亚硝酸盐荧光试剂盒测定NO含量,Westernblot法测定pAkt及peNOS蛋白的 表达,qPCR法测定VDR、ET-1的表达。结果：0.6mmol/L的PA培养HUVECs18h后,培养液中的葡萄糖浓度 耗减显著低于对照组,细胞活力降低,胰岛素抵抗的内皮细胞模型建立。PA干预后NO含量较对照组HUVECs 减少（ P ＜0.05）,1nmol/L1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后NO含量增加,在1min时NO量达最 大值。1nmol/L浓度1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后peNOS及pAkt的蛋白表达量明显增加（ P ＜ 0.05）,ET-1的mRNA表达水平明显减少（ P ＜0.05）。结论：1, 25(OH)2D3增加PA诱导的胰岛素抵抗血管内皮细 胞peNOS、pAkt的表达,增加NO产生,降低ET-1的表达,可能对胰岛素抵抗的血管内皮细胞存在一定的保护作用。     

维生素D及其活性形式1,25-二羟维生素D_3与糖尿病的关系

糖尿病的发病机制正在研究中,近些年的研究发现,维生素D及其活性形式1,25-二羟维生素D3除传统的调节钙、磷代谢的作用外,还通过刺激胰岛素分泌和减少细胞因子介导的β细胞凋亡途径,在糖尿病的发生、发展中起着关键作用。