自身免疫性肝病患者外周血细胞亚群表型分析

目的　分析自身免疫性肝病患者外周血细胞亚群表型变化情况。方法　用流式细胞仪检测 35例原发性胆汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis,PBC)、19例自身免疫性肝炎 (autoimmunehepatitis,AIH)、2 1例乙型肝炎患者以及 30例正常人外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)中的NK、CD3 、CD4 、CD8 、CD2 8 、CD8 /CD2 8 、Fas、FasL的水平并加以分析比较。结果　PBC组患者的CD4 亚群较正常组升高 ,而CD8 /CD2 8 细胞亚群较正常组、乙肝组和AIH组减低。AIH组患者的CD4 和CD8 /CD2 8 细胞均较正常组升高。PBC组和AIH组患者的Fas和FasL的表达均高于正常组。结论　自身免疫性肝病患者存在T细胞亚群异常 ,细胞凋亡活跃 ,提示T细胞介导的免疫紊乱在自身免疫性肝病的免疫损伤机制中起重要作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL基因表达水平初探

目的 建立检测人增殖诱导配体（APRIL）mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）APRIL基因的相对表达量,以Ct值比较法计算APRIL基因相对表达水平。结果 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA的△Ct值为9．3±2.0,与正常对照组比较．差异显著（P〈0．05）。采用2^-△△Ct法进行数据分析后,PBC组APRIL mRNA相对表达量比正常对照组高3．5倍。PBC患者中抗核抗体（ANA）阳性占80％,其中荧光模式为核膜型19例。其他型13例（着丝点型10例,混合型3例）,其APRIL基因相对表达量比正常对照组高6.5和1．7倍。结论 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平显著升高,且与ANA荧光模式相关。     

原发性胆汁肝硬化患者血清可溶性Fas和FasL的检测

目的分析原发性胆汁肝硬化患者血清可溶性Fas和可溶性FasL水平情况,探讨其在发病机制中的作用。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)法检测原发性胆汁性肝硬化患者20例,系统性红斑狼疮患者16例,HBsAg阳性患者26例,各项指标正常体检者24例。结果原发性胆汁性肝硬化(PBC)血清中的sFas明显高于HBsAg阳性患者和正常体检者(P<0.05),和系统性红斑狼疮患者无明显区别(P>0.05)。sFasL,PBC明显高于HBsAg 阳性患者(P<0.05)但与狼疮患者和正常体检者无明显区别(P>0.05)。结论对于原发性胆汁性肝硬化患者,sFas要比sFasL相对敏感。     

原发性胆汁性肝硬化免疫学及病理特征分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者的临床及肝组织病理学特征。方法分析37例原发性胆汁性肝硬化患者的一般资料、免疫学标志及肝组织病理学特点。结果免疫功能检查AMA-M2阳性率为56．75％，GP210阳性率占13．51％，抗肝／肾微粒体抗体（LKM1）占8．10％，AMA—M2、GP210均阳性为16．21％，ANA阳性率为5．4％。肝脏病理改变以小胆管改变最明显，周围有炎性细胞浸润，汇管区细胞浸润现象明显，各期改变可相互混杂。结论PBC患者多见于中年女性，血清AMA—M2抗体检测可作为临床诊断PBC的重要血清免疫学指标。肝组织病理检查对PBC诊断及病程分期有重要意义。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞IL-23p19表达增高及意义

目的 研究IL-23p19在原发性胆汁性肝硬化(PBC)外周血单个核细胞中的表达及意义。方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了60例PBC患者及60例疾病对照和60例健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中IL-23p19基因表达量,应用统计学软件分析PBC IL-23p19基因表达与疾病分期及肝功能指标间的相关性。结果 PBC患者外周血PBMC中IL-23p19基因表达较健康对照和疾病对照均明显增高,且在疾病的I/II期表达高于III/IV期; IL-23p19表达与谷氨酰转肽酶(GGT)正相关。结论 IL-23p19基因在PBC中表达升高,通过促炎反应参与PBC发病。     

APRIL／BlyS表达与原发性胆汁性肝硬化的关联性研究

目的 探讨APRIL/BlyS在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的mRNA表达水平以及与体液免疫水平的关联性.方法 设计特异性的引物和探针,以人基因GAPDH为内参照,用实时定量PCR的方法检测42例健康人和56例原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中APRIL,BlyS的mRNA表达水平,采用ELISA方法在全自动酶标仪上检测血清中IgG,IgA,IgM的浓度.结果 与健康人比较,原发性胆汁性肝硬化患者外周血中APRIL,BlyS mRNA的表达升高(P<0.01),患者血清中IgM显著增高(P<0.01),患者中BlyS mRNA表达与IgM成显著正相关(r=0.763,P<0.01),而APRIL mRNA的表达与IgM的水平无相关性.结论 ARPIL,BlyS系统及其受体可能参与原发性胆汁性肝硬化的疾病进程,为监控原发性胆汁性肝硬化的病情和有效治疗提供了新的依据.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体4基因的表达及临床意义研究

目的探讨Toll样受体4（TLR4）基因在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者、乙型肝炎肝硬化患者及健康对照外周血单个核细胞（PBMC）中的表达差异及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR方法检测30例PBC患者、20例乙型肝炎肝硬化患者及30例健康对照PBMC中TLR4 mRNA的表达水平;γ-谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）的检测,按临床生化常规上机进行。结果PBC患者及乙型肝炎肝硬化患者PBMC中TLR4 mRNA的表达水平均显著高于健康对照,且以乙型肝炎肝硬化患者升高更为明显。在PBC患者中,TLR4 mRNA的表达水平与血浆ALP及GGT均无显著相关性。结论TLR4 mRNA的表达水平在PBC患者明显上调,但并无疾病特异性。TLR4及其通路的异常可能参与PBC的发病但与疾病的进展程度无关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TNFSF9的表达及其疾病关联性

目的 研究原发性胆汁性肝硬化患者外用血单个核细胞TNFSF9的表达及其临床意义.方法 以40例健康人群作为对照,采用定量逆转录PCR检测40例原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞TNFSF9的表迭水平,血清中sTNFSF9的水平,并进一步分析其与Mayo评分的相关性.结果 原发挂胆汁挂肝硬化患者外周血TNFSF9的表达在蛋白水平(1 107.00±436.12)显著高于健康对照组(122.70±62.81);TNFSF9 mRNA水平(4.96±0.39)也较健康对照组(1.04±0.22)高,且均与Mayo评分呈负相关(rs=-0.327,P=0.041;rs=-0.400,P=0.013).结论 TNFSF9可能参与了原发性胆汁性肝硬化的发病机制,是潜在的治疗靶点之一.     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞膜表面Fas配体检测及意义

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）膜表面Fas配体（FasL）水平，并探讨其在慢性肝炎发病机制中的作用。方法用免疫组织化学法分别检测42例慢性乙型肝炎患者和20例健康人PBMC细胞膜表面FasL表达，并与其他实验室指标作相关性比较。结果慢性乙型肝炎患者外周血PBMC膜表面FasL阳性百分率为（64．0&#177;7．8）％，明显高于健康对照组（40．7&#177;8．6）％。结论PBMC膜表面FasL表达异常可能在慢性乙型肝炎发病过程中起重要作用。     

肝癌患者外周血单个核细胞膜表面Fas配体表达及意义

目的检测肝细胞癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)膜表面Fas配体(Fas ligand,FasL)水平,并探讨其在肝细胞癌发生机制中的作用及意义。方法用免疫组化法分别检测了31例肝细胞癌患者及20例正常人PBMC细胞膜表面FasL表达。结果肝细胞癌患者PBMC细胞膜表面FasL阳性细胞百分率为64.0±7.8%,明显高于正常对照组(40.7±8.6%)(t=4.634,p<0.01)。肝细胞癌患者FasL阳性细胞百分率与CD8+T淋巴细胞数量之间存在正相关关系(r=0.547,p<0.05),而与CD3+、CD4+T淋巴细胞之间无相关性。结论肝细胞癌患者PBMC膜表面FasL表达增强有利于肿瘤细胞的清除。     

Expression of Fas antigen and Fas ligand in acute liver injury induced by carbon tetrachloride in rat]

OBJECTIVE: To investigate the dynamics of expression of Fas antigen and Fas ligand (FasL) in a rat model of carbon tetrachloride-induced acute liver injury, and explore the role of apoptosis in liver injury. METHODS: Thirty-five healthy male Wistar rats were randomly divided into normal control group and experiment group, and the latter group was divided into six subgroups: 3, 9, 16, 24, 36 and 48 hours groups with 5 rats in each group. The liver injury was induced by carbon tetrachloride. Sections of liver tissue were stained with hematoxylin and eosin and observed under optical microscope. Fas antigen and FasL in rat liver were determined at different time points with immunohistochemical method. Hepatocytes apoptosis were observed with terminal deoxynucleotidyl-transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) method. Superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) concentration in the liver tissues were analyzed at the same time point. Serum aspartate aminotransferase (ALT) and alanine aminotransferase (AST) levels were also determined. RESULTS: Fas antigen and FasL were expressed in the liver tissues of control rats. Following carbon tetrachloride challenge, severe liver injury took place in rats as revealed under microscope and a large amount of hepatocytes apoptosis was found. Hepatic Fas and FasL expression were both increased markedly from 3 to 48 hours after carbon tetrachloride challenge in experiment group. Liver MDA concentration and serum ALT and AST were elevated significantly, while SOD activity decreased remarkably in the experiment group compared with control group (P<0.05 or P<0.01). CONCLUSION: Expression of Fas/FasL is remarkably induced in acute liver injury and accords with the changes of hepatocytes apoptosis, which suggests that apoptosis mediated by Fas/FasL may play an important role in the pathogenesis of acute liver injury.     

急性肝损伤大鼠肝脏Fas和FasL的表达及其意义

目的 研究急性肝损伤大鼠肝脏Fas和FasL的表达情况，探讨细胞凋亡在中毒性肝损伤发病中的地位及其意义。方法 健康雄性Wistar大鼠35只，随机分为正常对照组和实验组，实验组再分为3、9、16、24、36和48h6个亚组，每组5只。制备四氯化碳中毒性肝损伤动物模型，采用苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织损伤情况，采用免疫组化方法测定不同时间点肝组织Fas和FasL的表达，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）观察肝细胞凋亡情况。同时测定各时间点血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、肝组织丙二醛（MDA）含量变化。结果 Fas和FasL在正常大鼠肝细胞中未见表达，实验组3h后即开始有明显表达，并随时间延长表达相应增强；病理学和TUNEL检测结果均显示肝脏有严重损伤，大量肝细胞发生凋亡。大鼠染毒后血清ALT、AST活性和肝组织MDA含量明显升高，肝组织SOD活性显著降低，与正常对照组比较差异均十分显著（P〈O．05或P〈O．01）。结论 大鼠急性肝损伤时Fas和FasL表达显著增加，和肝细胞凋亡变化相一致，提示Fas／Fasl。系统及介导的细胞凋亡反应在中毒性肝损伤的发病机制中可能占有重要地位。     

大肠腺癌Fas-FasL表达及其浸润淋巴细胞FasL的表达和临床病理研究

目的:探讨大肠腺癌Fas-FasL表达及其浸润淋巴细胞FasL表达的临床病理意义。方法:采用免疫组织化学方法分别检测40例大肠正常粘膜上皮、20例良性增生息肉、44例腺瘤和50例腺癌(含各分期)的Fas-FasL的表达,结合流式细胞仪检测大肠腺癌组织细胞的凋亡率。结果:免疫组织化检测40例正常粘膜上皮、20例增生性息肉、44例腺瘤、25例高分化腺癌、15例中分化腺癌、10例低分化腺癌,Fas表达逐渐下调,FasL逐渐上调。大肠腺癌组织、腺瘤与正常粘膜上皮的Fas-FasL阳性率表达均有显著性差异(P<0·05),正常粘膜上皮与增生性息肉的Fas-FasL阳性率表达无显著性差异(P>0·05),不同分化程度的大肠腺癌组织中Fas-FasL的表达均无显著性差异(P>0·05)。流式细胞仪检测50例大肠腺癌组织细胞凋亡率显示,在Fas蛋白阳性组中,浸润淋巴细胞FasL表达量与癌细胞凋亡指数呈正相关(P<0·05)。Fas蛋白阴性组中大肠腺癌凋亡指数与浸润淋巴细胞FasL表达无相关性(P>0·05)。结论:①Fas和FasL从正常粘膜上皮到腺瘤至癌变均有上调或下调的表达,推测Fas-FasL系统在大肠粘膜上皮癌变过程中可能起重要作用。②大肠腺癌细胞免疫逃避的机制之一可能是不表达或是低表达Fas。     

急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL系统表达改变及其意义

目的：探讨细胞凋亡与急性肺损伤（ＡＬＩ）发生、发展的关系以及Ｆａｓ和／ＦａｓＬ系统表达改变的意义。方法：复制内毒素性大鼠ＡＬＩ模型;采用ＴＵＮＥＬ法、原位杂交、半定量逆转录聚合酶链反应（ＳｑＲＴ ＰＣＲ）及免疫组化等技术观察大鼠ＡＬＩ发生过程中,肺组织细胞凋亡变化以及Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统蛋白质和ｍ ＲＮＡ表达的改变。结果：内毒素性ＡＬＩ早期（＜ ２４ 小时）,大鼠肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡明显增加;肺组织Ｆａｓ／ＦａｓＬｍ ＲＮＡ和蛋白质表达明显上调,且与肺组织细胞凋亡的增加相一致。结论：肺组织细胞凋亡以及Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统表达明显上调可能参与大鼠ＡＬＩ的发病机制。     

肾癌组织与正常肾组织Fas及其配基表达

目的:探讨Fas及其配体基因在肾癌与正常肾组织中表达的意义。方法:42例肾癌组织和13例正常肾组织采用免疫组化法检测Fas/FasL基因在肾癌与正常肾组织的表达并进行分析。结果:Fas在肾癌组织阳性表达率52.4%,明显低于正常肾组织。FasL阳性表达率54.8%,显著高于正常肾组织(P<0.05);Fas/FasL在肾癌的病理分级中表达的差异无显著性(P>0.05)。结论:Fas/FasL系统在肾癌组织中的异常表达可能参与了恶性肿瘤的形成。     

HPV感染及Fas／FasL基因表达与阴茎鳞癌免疫逃逸关系的研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）感染对阴茎鳞癌组织Fas／FasL基因表达的影响。方法用原位杂交法及免疫组化法分别检测40例阴茎鳞癌和10例阴茎包皮组织中HPV及Fas、FasL蛋白的表达。结果在阴茎鳞癌和阴茎包皮组织中,HPV感染率分别为70．0％和25．0％（P〈0．05）,Fas表达阳性率分别为40．0％和85．0％（P〈0．05）,FasL分别为65．0％和25．0％（P〈0．05）。在阴茎鳞癌HPV感染组和未感染组,Fas表达阳性率分别为28．6％和66．7％（P〈0．05）;FasL分别为75．0％和41．7％（P〈0．05）。结论HPV感染可能会使阴茎鳞癌细胞Fas基因表达下调,FasL表达上调,使癌细胞发生免疫逃避,从而促进阴茎鳞癌的发生。     

食管鳞癌组织中Fas FasL蛋白的表达及意义

目的 观察食管鳞状细胞癌癌灶、癌旁组织、癌转移及非转移淋巴结中Fas、FasL蛋白的表达情况,探讨它们在食管鳞癌发生发展中的作用及其临床意义.方法收集食管鳞癌患者的癌及癌旁组织,转移及非转移淋巴结,应用免疫组化S-P染色技术测定以上组织Fas、FasL的表达情况.结果 Fas蛋白表达在癌组织中55.6%低于癌旁组织85.19%(P<0.05),高分化癌组织84.2%高于中分化44.4%和低分化25.0%(P<0.05),伴淋巴结转移癌组织38.1%低于无淋巴结转移者66.7%(P<0.05),转移组淋巴结33.3%低于非转移组66.7%(P<0.05);FasL蛋白表达在癌组织中81.5%高于癌旁组织48.2%(P<0.05),高分化57.9%低于中分化92.6%和低分化100%(P<0.05),T2期66.7%低于T3期96.0%和T4期100%(P<0.05),伴淋巴结转移癌组织100%高于无淋巴结转移者69.7%(P<0.05),转移组淋巴结71.4%高于非转移组的42.4%(P<0.05);比较临床TNM分期,Fas及FasL蛋白阳性表达率则未见差异(均P>0.05).结论 食管鳞癌组织中存在Fas表达下调,FasL表达上调,并在食管鳞癌的发生转移中发挥作用.     

自身免疫性肝炎患者可溶性肝抗原特异性T淋巴细胞反应特点及其临床意义

目的 分析评价AIH患者SLA特异性T淋巴细胞反应特点.方法 用化学法人工合成SLA序列多肽段作为刺激肽,刺激31例AIH患者(SLA/LP抗体阳性10例,SLA/LP抗体阴性21例)、30例PBC患者、29例病毒性肝炎患者和30名健康人中PBMC,使其分泌干扰素γ(IFN-γ),并采用ELISpot方法观察各组SLA肽特异性T淋巴细胞反应特点.结果 31例MH患者中18例患者PBMC对SLA肽库刺激可诱导分泌IFN-γ,其阳性率58.06%(18/31),PBC、病毒性肝炎患者、健康人阳性率分别为3.33%(1/30)、3.45%(1/29)、0.00%(0/30),AIH患者PBMC受SLA肽库刺激分泌INF-γ阳性率明显高于PBC、病毒性肝病患者及健康人(x2值分别为21.295、20.655、15.988,P均＜0.01).18例AIH患者反应单肽位于SLA中8个抗原簇,包括aa1～44、aa57～132、aa129～180、aa177～196、aa 193～244、aa241～268、aa281～308、aa321～428;平均识别SLA序列单肽宽度为6(2～17)条,显示多克隆性.18例呈阳性反应的AIH患者中14例患者在采集PBMC同时进行肝功能检测,该14例患者识别SLA序列单肽的反应宽度与谷草转氨酶(AST)对数值呈正相关(r=0.539,P＜0.05).结论 SLA肽库可诱导AIH患者外周血PBMC分泌IFN-γ,其反应呈多克隆性,反应宽度间接反映患者肝脏炎症活动程度.