应用体外实验对与人肺癌转移相关基因的研究

目的：应用体外实验研究RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌转移相关，进一步确认该基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用以期待此研究能对肺癌转移的预防进而减少对肺癌患者造成的肺功能损害及为有效选择有利患者生活质量的治疗手段提供理论基础。方法：采用体外重建基底膜侵袭实验和肿瘤细胞黏附能力的测定，分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83-a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果：RAB5A正义表达载体PcDNA3．1-RAB5A转染的AGZY83q重建基底膜侵袭能力明显增强，t检验P&;lt;0.005，差异有显著性意义；对基底膜成分的黏附能力增大；f检验P&;lt;0.05。PcDNA3-AntiRABSA反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降，P&;lt;0.001；对基底膜成分黏附能力降低。结论：RAB5A在侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。反义RNA可阻断RAB5A基因的翻译过程，相关体外试验研究结果为有效治疗肿瘤转移奠定了基础。     

尿激酶受体基因反义RNA转移体系的建立及其在白血病研究中的应用

尿激酶受体 (uPAR)表达与肿瘤 /白血病细胞的侵袭与转移能力明显相关。为探讨逆转录病毒载体介导的uPAR基因反义RNA转移体系在抑制白血病细胞表达uPAR中的价值 ,构建了表达反义uPAR基因的逆转录病毒载体LaCD87SN ,用脂质体转染 交互感染策略建立uPAR基因反义RNA转移体系 ,并以双嗜型aCD87病毒转导U937白血病细胞 ;用PCR分析反义uPAR基因的整合和表达 ;用流式细胞术和明胶酶谱分别检测白血病细胞CD87表达和基质金属蛋白酶 (MMP)活性。结果显示 :通过转染 交互感染获得上清中病毒滴度为 6 .3× 10 5cfu/ml的双嗜型病毒产生细胞Am12 /aCD87;aCD87病毒感染的U937/aCD87细胞内存在aCD87原病毒的整合 ,并高水平表达uPAR基因反义RNA。此外 ,与载体对照的U937/NeoR细胞相比 ,U937/aCD87细胞表面CD87分子表达并无明显降低 ,但其分泌MMP 9的能力显著下降。结论 :逆转录病毒载体介导的反义RNA转移不能有效地下调白血病细胞表面uPAR表达 ,但可能干扰CD87分子与MMP的相互作用。     

超声破裂载基因微泡增强心肌细胞受磷蛋白反义RNA转染

目的 探讨超声破裂载基因微泡增强心肌细胞反义RNA转染与表达的效应.方法 构建受磷蛋白(phospholamban,PLB)反义RNA真核表达质粒PcDNA 4.1-asPLB,采用磷酸钙共沉淀、超声辐照及超声破裂载基因微泡等方法介导反义RNA转染.采用RT-PCR及Western blot检测心肌细胞PLB、肌浆网钙ATP酶(sarcoplasmic retculum Ca2+ATPase,SERCA2a)mRNA和蛋白表达水平,观察不同方法介导PLB反义RNA转染对心肌细胞PLB及SERCA2a表达的影响.结果 与空载体PcDNA4.1比较,PcDNA4.1-asPLB能特异地抑制心肌细胞PLB表达(P＜0.05).超声破裂载基因微泡明显增强反义RNA转染与表达,与其他转染组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).PcDNA4.1-asPLB对SERCA2a表达无明显影响,但降低PLB/SERCA2a比值.结论 超声破裂载基因微泡是一种高效的反义RNA转染方法,其介导PcDNA4.1-asPLB转染能明显抑制心肌细胞PLB表达.     

β3GnT8基因对HL60细胞体外侵袭能力的影响

目的：初步探讨β3GnT8/GalT7基因对HL60细胞体外侵袭的作用。方法通过脂质体介导将实验室构建好的β3GnT8真核正义表达载体pEGFP-C1-T8-Sense和反义表达载体pEGFP-C1-T8-AntiSense转染入HL60细胞;RT-PCR和Western blot检测浸润转移相关的功能基因TGFβ1、MMP2、MMP14在mRNA水平和蛋白质水平的表达变化;Transwell侵袭实验检测β3GnT8对HL60细胞侵袭转移能力的影响。结果随着β3GnT8表达上调,细胞侵袭能力高于对照组（P＜0.05）,MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达上调,而TGFβ1表达下调;随着β3GnT8表达下调,细胞侵袭能力下降,MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达下调,而TGFβ1表达上调。结论β3GnT8可在体外增强HL60细胞的侵袭能力,而该作用可能源于它能够诱导肿瘤侵袭相关蛋白的表达变化。     

RAB5A基因与结肠癌发生、转移的相关因素研究

目的:研究RAB5A基因表达与结肠癌发生、转移的关系。方法:应用免疫组化技术检测42例结肠癌标本RAB5A基因的表达。结果:结肠癌中RAB5A的表达与组织学分型、分化、淋巴结转移均有明显关系(χ2=3.96～6.73,P<0.05)。结论:RAB5A是一个可能与结肠癌发生、转移相关的基因,并且还可能与它们的分化程度有关。     

乳腺癌发生转移及预后与RAB5A基因表达的相关性

目的:研究RAB5A基因的高表达在乳腺癌发生发展及转移与预后中的作用。方法:对牡丹江市肿瘤医院2003-01/1246例乳腺癌术后标本,应用免疫组化技术检测RAB5A基因的表达。结果:RAB5A的表达在正常组织中不表达,而在乳腺癌组织中有不同程度的表达(P<0.01)。结论:RAB5A是一个可能与乳腺癌发生、转移相关的基因,并且还可能与它们的分化程度有关。     

基因治疗成骨肉瘤的探索:人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区克隆和反义RNA表达质粒构建

目的:构建CD147反义RNA表达质粒载体,探索治疗骨肉瘤侵袭和转移的新方法。方法:实验于2004-05在第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究所实施,以人成骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用反转录聚合酶链反应方法得到人CD147的编码区cDNA,用DNA重组技术将人CD147编码区基因反向克隆到真核表达质粒PcDNA3.1(+)中,构建成CD147反义RNA表达质粒PcDNAasCD147。用阳离子脂质体介导转染人成骨肉瘤细胞系MG63,经G418筛选后获得的克隆进行鉴定。结果:CD147反义RNA表达质粒载体PcDNAasCD147经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。免疫组化SP法染色证实:转染细胞MG63/PcDNAasCD147,与亲本细胞相比,CD147的表达明显下降。结论:成功地从人成骨肉瘤细胞中克隆出CD147编码区基因,构建了CD147反义RNA表达质粒载体PcDNAasCD147,此实验结果为进一步研究CD147蛋白分子的生物学功能以及为成骨肉瘤的基因治疗研究奠定了基础。     

基因治疗成骨肉瘤的探索：人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区克隆和反义RNA表达质粒构建

目的:构建CD147反义RNA表达质粒载体,探索治疗骨肉瘤侵袭和转移的新方法.方法:实验于2004-05在第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究所实施,以人成骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用反转录聚合酶链反应方法得到人CD147的编码区cDNA,用DNA重组技术将人CD147编码区基因反向克隆到真核表达质粒PcDNA3.1( )中,构建成CD147反义RNA表达质粒PcDNAasCD147.用阳离子脂质体介导转染人成骨肉瘤细胞系MG63,经G418筛选后获得的克隆进行鉴定. 结果:CD147反义RNA表达质粒载体PcDNAasCD147经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确.免疫组化SP法染色证实:转染细胞MG63/PcDNAasCD147,与亲本细胞相比,CD147的表达明显下降.结论:成功地从人成骨肉瘤细胞中克隆出CD147编码区基因,构建了CD147反义RNA表达质粒载体PcDNAas CD147,此实验结果为进一步研究CD147蛋白分子的生物学功能以及为成骨肉瘤的基因治疗研究奠定了基础.     

增殖诱导配体shRNA对结直肠癌细胞增殖与转移的影响

目的 探讨增殖诱导配体(APRIL)shRNA对结直肠癌细胞的增殖与转移的影响.方法 用RNA干扰技术敲低结直肠癌细胞株SW480中APRIL基因的表达,以免疫印迹技术、细胞黏附、损伤修复及侵袭力检测等体外实验对比APRIL基因敲低前后细胞株SW480的增殖、黏附、侵袭及转移能力的变化.结果 转染组细胞APRIL蛋白表达的灰度值为0,显著低于阴性对照组的1.0±0.3和未转染组的1.1±0.4,差异有统计学意义(F=42.15,P=0.00);转染组、阴性对照组及未转染组最大增殖细胞数分别为(6.1±4.7)×104个、(36.4±14.4)×104个和(41.3±19.2)×104个,转染组细胞增殖能力明显受到抑制(F=24.76,P<0.05);转染组细胞黏附的平均吸光度(A)值为0.343,低于阴性对照组的0.409及未转染组的0.412,细胞黏附率相对于未转染组降低39%;转染组、阴性对照组及未转染组迁移至损伤区细胞数分别为(47.89±13.16)个、(98.78±23.26)个和(108.01±39.11)个,与阴性对照组、未转染组比较,细胞迁移能力的差异有统计学意义(F=65.53,P<0.01);细胞侵袭力(A值0.58±0.10)相对于阴性对照组(A值0.94±0.23)与未转染组(A值1.11±0.21)差异亦有统计学意义(F=5.771,P<0.05).结论 APRIL有促细胞增殖作用,很可能参与结直肠癌细胞的侵袭和转移,并具增强结直肠癌侵袭和转移潜能.     

CD26/DPP Ⅳ基因表达对卵巢癌移植瘤生物行为的影响

目的 探讨CD26/DPP Ⅳ基因过表达在体内、体外对卵巢癌细胞株恶性表型的影响.方法 将重组的PcDAN3.1(+)-CD26/DPP Ⅳ基因和空载体PcDAN3.1(+)采用阳离子脂质体转染HO-8910PM母系细胞,通过G418筛选获得稳定表达CD26/DPP Ⅳ基凶的HODPP Ⅳ细胞株和转染空载体的HOPcDNA细胞株,经RT-PCR和Western blot鉴定CD26/DPP Ⅳ基因表达.利用增殖曲线、黏附、侵袭和移动试验在体外进行三种细胞恶性行为比较;同时将包括母系HO-8910PM细胞在内的三种细胞株注射于裸鼠皮下研究它们在体内皮下成瘤性和远处转移能力的差异.结果 建立了稳定表达CD26/DPP Ⅳ基因的细胞株HODPP Ⅳ.HODPP Ⅳ细胞株在体外的增殖速度、侵袭能力、迁移能力、黏附能力、皮下移植瘤体积和淋巴结转移率低于HO-8910PM和HOPcDNA细胞株(P均<0.05).结论 CD26/DPP Ⅳ基因过表达抑制卵巢癌细胞体内、体外生长和远处转移,有望成为治疗卵巢癌的一种新手段.     

2006年湖南省霍乱监测结果分析

目的 监测人群中霍乱病例和被霍乱弧菌污染的水体及食物,以便尽早采取预防控制措施,防止疫情扩散.方法 全省范围开展腹泻患者及外环境、食品监测,选择重点地区开展甲鱼霍乱弧菌污染状况专项监测.结果 2006年湖南省共登记腹泻患者111 526例,检测霍乱弧菌89 661例,检测率为80.39%,检出阳性4例,均为0139群霍乱弧菌感染;检测环境和食品样44 533份,其中水体35 113份,全部为阴性,水产品5377份,阳性16份,阳性率为0.30%,阳性标本为甲鱼和牛蛙,其他食品4043份,均为阴性;甲鱼专项监测2323份,检出阳性33份,阳性率为1.42%;霍乱毒素基因检测34株菌,20株为产毒株,占58.80%;药敏试验28株菌,均对诺氟沙星、环丙沙星、丁胺卡那霉素100%敏感,对强力霉素、复方新诺明的敏感率为92.86%.结论 甲鱼、牛蛙等水产品是湖南省发生霍乱的主要因素,应加强水产品的监测和卫生管理.     

新生儿抚触技术在产科中的应用体会

目的探讨新生儿抚触促进新生儿生长发育、融洽护患关系、提高产妇满意度的临床价值。方法选择2008年1月至2008年8月在我科住院正常分娩和剖宫产的健康儿200例,随机分为对照组100例,抚触组100例,观察新生几吃奶量、睡眠时间、排便时间和产妇满意度。结果抚触组新生儿吃奶量、睡眠时间、排便时间及产妇满意度均优于对照组。结论新生儿抚触既能促进新生儿生长发育,又能融洽护患关系,提高产妇满意度。是一种值得推广的简单易行效果好的新型护理技术。     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.