三种检测24小时尿游离皮质醇方法的比较

应用化学发光免疫测定法 (CLIA)和竞争性蛋白结合分析法 (CPBA)检测 2 4h尿游离皮质醇 (UFC)水平 ,比较方法的相关性、精密度及特异性。拟用CLIA替代CPBA检测UFC。采用CLIA提取法与CLIA未提取法和CPBA法检测 5 3名正常人 ,13例未经治疗的库欣综合征患者和 92例肥胖患者及 37例口服类固醇激素药患者的 2 4hUFC水平。对其结果进行相关性比较 ,并做重复性试验 ,同时进行了七种类固醇激素的交叉试验 ,以比较三种方法的精密度和特异性。CLIA提取法与CPBA法相比较 ,r =0 .814 ,P <0 .0 0 0 1;CLIA未提取法与CPBA法相比较 ,r =0 .70 6 ,P <0 .0 0 0 1;CLIA提取法和CLIA未提取法相比较 ,r =0 .90 1,P <0 .0 0 0 1。交叉试验显示 :除皮质醇外 ,强的松龙在CPBA法、CLIA提取法和CLIA未提取法中 ,均干扰UFC测定 ,其交叉百分率分别为 19.0 %、15 .4 %及 2 4 .9% ,高于其它五种类固醇激素 ,而后五种激素对UFC的测定干扰不大。两种CLIA法的批内和批间变异系数均小于CPBA法 ,而且均与CPBA法有很好的相关性。由于CLIA提取法的精密度和特异性均优于CPBA法和CLIA未提取法 ,本文建议用CLIA提取法代替CPBA法。     

基于我国WS/T促甲状腺激素受体抗体检测方法的性能验证

目的 基于我国卫生行业标准(WS/T)对迈瑞高敏磁微粒化学发光法(CLIA)检测TRAb进行性能验证。方法 参照最新WS/T文件,以Roche Cobase 601电化学发光法(ECLIA)作为已验证的检测方法,对迈瑞CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性、检出限、参考区间进行验证,评价迈瑞与Roche的诊断符合率。结果 迈瑞CLIA检测TRAb的批内CV为1.56%～4.60%,实验室内CV为1.65%～5.19%;与Roche ECLIA的实验室相对差值为-3.6%;在0.02～44.00IU/L范围内线性拟合方程Y=1.040X+0.636,线性系数R²=0.990;24个检出限临界值数据22个(91.7%)≤0.3IU/L;20个健康体检者血清TRAb检测结果仅1个超出参考区间≤1.9IU/L;与Roche ECLIA的诊断总符合率90%,阳性符合率75%,阴性符合率100%,Kappa检验值0.7826(P<0.001)。结论 迈瑞高敏磁微粒CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性范围、检出限均符合厂家声明,参考区间经验证可转移至我实验室...     

高灵敏均相酶免疫法测定血清皮质醇方法建立与性能评价

目的 建立高灵敏均相酶免疫法定量检测血清皮质醇.方法 对此方法的线性范围、准确度、精密度、抗干扰能力、临床可报告范围以及参考区间进行性能验证.结果 本研究建立的血清皮质醇均相酶免疫测定方法,线性范围为30.0～1200.0ng/mL,准确度相对偏差B≤10.0％,批内CV≤10.0％,批间差R≤10.0％,当样本中胆红素≤50mg/L、血红蛋白≤1000mg/L、白蛋白≤100g/L、抗坏血酸≤176mg/dL时,对测定结果无影响,临床可报告范围上限6500ng/mL,血清皮质醇参考区间为60～230ng/mL.结论 该均相酶免疫法能够满足临床血清皮质醇检测的需求,可以进一步推广至临床使用.     

电化学发光免疫分析法在AFP定量检测中的应用

为了解电化学发光免疫分析 (ECLIA)双抗体夹心法定量检测血清甲胎蛋白 (AFP)的临床应用及其优越性 ,参照NCCLS的评价方案对定量检测AFP含量的ECLIA法和放射免疫分析 (RIA)法进行精密度评价、线性评价和回收试验的比较 ,并采用两种方法平行检测 6 5例病人血清标本的AFP含量 ,对其进行相关性分析。结果表明 :两种方法都有较好的重复性 ,但ECLIA法明显优于RIA法 ;ECLIA法和RIA法具有良好的相关性 (r=0 .981 ,P <0 .0 5 ) ;回收率均在 95 %以上 ,ECLIA法明显高于RIA法 (t=4 .6 9,P <0 .0 5 ) ;ECLIA法的线性范围 (>5 0 0 μg/L)较RIA法 (<5 0 0 μg/L)要宽。ECLIA法定量检测AFP的准确性和精确度都明显优于RIA法 ,较RIA法更能满足临床需要     

尿游离甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素检测标本前处理的尿液酸化研究

目的 检测24小时尿游离甲氧基肾上腺素(MN)和甲氧基去甲肾上腺素(NMN)是诊断嗜铬细胞瘤的首选筛查方法之一,需寻求24小时尿液收集和游离NMN、MN获得这两个前处理过程中尿液酸化处理的安全可控方式.方法 随机尿标本用于本研究,观察在添加或不添加浓盐酸及在室温或较高温(34℃)存放24小时和在不同酸性条件下(pH值为2、3、4)进行酸水解对尿游离NMN/MN水平的影响.结果 首先发现尿液在室温或较高温条件下不添加盐酸进行酸化存放24小时游离NMN/MN并没有显著降解.之后统计发现不同患者24小时尿量存在较大变化,常规方法留尿过程加入固定剂量的酸会引起pH值的波动(pH值2～4).通过调节尿液pH值,发现在不同酸性条件进行酸水解尿游离NMN的检测,其水平存在显著差异,pH值大于等于4不能达到酸水解的目的.最后利用40份随机尿标本验证发现尿液不加酸存放24小时但水解时酸化至pH 2为更可控的尿液酸化方式.结论 24小时尿留取过程不必添加盐酸但水解前用盐酸调节pH值到2是尿游离NMN、MN检测更加安全可控的前处理方式.     

罗氏Cobas8000 e602检测促甲状腺激素的性能验证

目的 对Cobas8000 e602电化学发光免疫分析仪模块检测促甲状腺激素(TSH)的性能进行验证和评估.方法 参考美国临床和实验室标准协会(CLSI)的有关文件和相关文献,对Cobas8000免疫检测系统测定TSH的精密度、准确性、线性范围、参考区间及不同模块间检测结果的相关性进行验证分析.结果 TSH低值、高值批内精密度的结果分别为1.9%、1.3%,均≤1/4 CLIA′88 TEa,批间精密度为2.2%、1.5%,≤1/3 CLIA′88 TEa;能力验证实验成绩80%,准确度合格;线性范围为0.446~89.76μIU/mL,与试剂盒线性范围相符;参考区间符合实验室要求;模块间结果比对R2≥0.95符合要求.结论 Cobas8000检测系统的主要性能均达到相关标准的要求,能够满足临床需求.     

双抗体夹心ELISA检测SEB方法的建立及在不同基质中检测的应用

目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA,并检测在多种基质中SEB的敏感性。方法:制备、纯化抗SEBmAbB4和D6。D6mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体,B4mAb作为包被抗体。结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法,检测抗体稀释液和小牛血清中SEB,检测灵感度0.2μg/L,定量线性范围0.78～12.5μg/L,r2=0.992,批间变异系数(CV)<10%,回收率80%～110%。检测50g/L脱脂牛奶、尿液和自来水中的SEB,灵敏度0.39μg/L,定量线性范围0.78～25μg/L,r2=0.997。与SEA和SECl无交叉反应。结论:本方法测量准确,灵敏度高,特异性好,在食品工业和临床标本检测中有广阔的应用前景。     

UA-5800和AE-4020尿液分析仪尿蛋白试纸条结果的一致性及其与尿蛋白/肌酐比值的相关性研究

目的 比较迈瑞公司UA-5800和日本爱科来公司AE-4020尿液分析仪试纸条检测尿蛋白的一致性并验证其测定的灵敏度和特异性.方法 随机收集2016年10月某肿瘤专科医院门诊及住院尿液标本共721例,同时采用UA-5800和AE-4020尿液分析仪行尿蛋白定性检测,其后采用生化分析仪检测尿白蛋白含量和肌酐水平,计算尿白蛋白/肌酐比值(ACR).以ACR≥30 mg/g Cr作为尿蛋白阳性的诊断标准,以尿试纸条阴性组ACR<30 mg/g Cr的阴性率作为特异性,以尿试纸条结果微量、1+、2+和3+组ACR≥30 mg/g Cr的阳性率作为灵敏度.结果 UA-5800和AE-4020的尿蛋白定性结果具有一致性(κ=0.65),两者检测尿蛋白的特异性分别为85.19％和83.41％.UA-5800和AE-4020检出蛋白尿的灵敏度在尿蛋白微量组、1+组、2+组和3+组分别为35.53％和34.27％、86.79％和73.69％、100％和100％、100％和92.31％.结论 国产UA-5800和日本AE-4020尿分析仪尿蛋白干化学检测具有较高的一致性和良好的诊断蛋白尿的特异性和灵敏度.二者均具有良好的蛋白尿筛查性能.     

两种方法检测促甲状腺受体抗体的比对研究

目的 探讨不同免疫分析系统检测促甲状腺受体抗体(TRAb)结果的可比性,以评估国产新产业化学发光法检测TRAb能否满足临床需求.方法 分别用新产业化学发光免疫分析(CLIA)仪和罗氏电化学发光免疫分析(ECLIA)仪测定TRAb,依据美国国家临床实验室标准化协会(NCCLS)EP9-A2文件,将ECLIA法作为参比方法,以CLIA法为试验方法,进行方法学比对试验.并应用Bland-Altman分析法评估其一致性.结果 定性判断CLIA法检测假阳性率、假阴性率和总符合率分别为0、11.8%和95%,Kappa值为0.896;两种方法定量检测TRAb结果差异无统计学意义,P=0.55,并在0~30IU/L具有较好的线性相关性, 其相关系数r=0.98, Passing-Bablock回归方程为Y=-0.04+1.06 X,截距A的系统差异95% CI为-0.16~0.09 ,斜率B的比例差异95% CI为0.97~1.12,线性度无明显偏差 (P=0.38),且Bland-Altman差异图显示,配对数据差值的平均值为-0.3IU/L,95%一致性界限为-3.9IU/L、4.5IU/L,在临床上可以接受.结论 国产新产业化学发光免疫分析(CLIA)仪TRAb检测结果可以满足临床需求.     

第二代血清维生素B12实验室参考区间的建立

目的 建立第二代血清维生素B12检测试剂的实验室参考区间,为临床监测血清维生素B12水平提供依据.方法 验证分析了第二代血清维生素B12的精密度、线性范围和最大稀释倍数,并用电化学发光法检测了120例健康人第二代血清维生素B12水平.结果 (1)重复变异系数高值为1.55％、低值为1.63％,期间变异系数高值为1.60％、低值为1.56％.(2)线性分析,回归方程为Y=X-0.0016,r=0.9999.(3)维生素B12的最大稀释倍数为5倍.(4)参考区间为235.2～1000.0pg/mL,不同性别比较,差异无统计学意义(P＞0.05),不同年龄段比较,差异无统计学显著意义(P＞0.05).结论 建立了本实验室维生素B12参考区间,为维生素B12检测的临床应用和监测提供理论依据.     

电化学发光免疫分析法检测T3及T4的性能验证

目的 验证罗氏Cobas E601全自动电化学发光免疫分析系统检测T3及T4的分析性能,并探讨配套系统性能验证的简易方案.方法 通过室内质控数据分析,并参考美国临床和实验室标准研究院（CLSI）相关文件,对罗氏Cobas E601全自动电化学发光免疫分析仪检测T3及T4的精密度、正确度、可报告范围和生物参考区间进行试验分析,并与厂商声明的性能或公认的质量目标比较.结果T3及T4的批内精密度变异系数（CV）为1.29％ ～ 6.15％％,＜1/4TEa（CLIA＇ 88）,实验室内精密度CV为4.02％～ 5.65％,＜1/3TEa（CLIA＇ 88）;室间质控品的检测结果与靶值的相对偏倚在-（1.38％～4.18％）之间,＜ 1/2TEa（CLIA＇ 88）;可报告范围与厂家提供的范围相近;T3及T4的测量数值均在提供的参考区间内.结论 罗氏Cobas E601全自动电化学发光免疫分析仪T3、T4检测的主要分析性能符合质量目标要求,能满足临床需要,所采用的验证方案简便可行,且具有实用性.     

人血清透明质酸夹心化学发光免疫检测方法的建立

目的建立人血清透明质酸夹心化学发光免疫检测方法。方法用透明质酸结合蛋白分别进行固相载体包被和与辣根过氧物酶偶联,建立定量测定人血清透明质酸的夹心化学发光免疫检测法,并对该方法进行方法学和临床应用性评价。结果所建立血清透明质酸化学发光免疫检测法灵敏度为0.66μg/L,线性范围在1.8~1000μg/L,批内变异系数低于7.05%,批间变异系数低于8.0%,平均添加回收率为103.1%,稀释回收率为106.8%,与肝纤维化其他血清标志物IV型胶原、III型前胶原和层黏连蛋白的交叉反应率分别只有0.19%、0.16%和0.17%,样本中添加的抗凝剂及胆红素、胆固醇、甘油三酯等物质对检测结果没有影响。辽宁抚顺市传染病医院用该方法检测737份样本的临床总符合率为98.64%;检测197份样本透明质酸含量的结果与美国Corgenix试剂盒检测结果的相关性为y=0.855x+26.874(r=0.9877)。结论该方法灵敏度高、特性好、线性范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可用于临床样本的肝纤维化检测。     

Comparative evaluation of CLIA and EIA for Quantiferon-TB Gold Plus

The purpose of this study was to compare the Quantiferon-TB Gold Plus test analysed with chemiluminescence immunoassay (CLIA) to immunoassay (EIA). One hundred and twenty-five clinical specimens submitted to Karolinska University Hospital for Quantiferon-TB Gold Plus analysis were used to analyse agreement of the CLIA and EIA assays. The imprecision on CLIA was determined by analysis of pooled clinical samples of antigen tubes (TB1 and TB2), a reference material from National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC 82/587) and two controls of the test. Recovery on CLIA was determined by analysis of the TB1 and TB2 samples and NIBSC 82/587. Concordant results were obtained for 110 (88.0%) of 125 samples with cut-off including a borderline range. With no borderline range, 121 of 125 samples (96.8%) showed concordant results. Repeatability had a coefficient of variation (CV) of 14.9%. Reproducibility for pooled clinical samples TB1 and TB2 had a CV of 10.5% and 11.0%, respectively, and for the NIBSC 82/587 7.45%, and kit controls 31.0% respective 12.2%. Overall recovery had a mean of 94.1% (SD 12%). We concluded that Quantiferon-TB Gold Plus analysed with the CLIA assay shows good concordance with EIA and acceptable imprecision.     

制备醛固酮多克隆抗体建立检测血浆醛固酮的化学发光免疫分析法

目的：制备可用于免疫分析的醛固酮(ALD)多克隆抗体,并建立基于生物素-链霉亲和素放大系统的ALD化学发光免疫分析方法,用于测定人血液中的ALD含量。 方法：对ALD进行化学改造,制备醛固酮肟,再与BSA偶联制备免疫原,免疫兔,制备抗ALD多克隆抗体。以生物素-链霉亲和素放大系统采用竞争法建立ALD化学发光免疫分析方法。结果：经检测免疫的3号兔获得的抗ALD抗体灵敏度最高,50%抑制率（IC₅₀）ALD浓度是268 pg/ml。用该抗体建立的化学发光免疫分析法的检测范围为62.5~2 000 pg/ml,灵敏度为 23.7 pg/ml,批内变异系数为6.9%~9.5%,批间变异系数为8.5%~12.7%,回收率范围为93.1%~104.1%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.996,与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.932x+4.596,相关系数r=0.948（n=95）。结论：建立的检测ALD的化学发光免疫分析法符合临床应用的基本要求。     

Dosage du cortisol libre urinaire par chromatographie liquide

In our laboratory, a specific assay technique of urinary free cortisol was developed in liquid chromatography using methylprednisolone as the internal standard. Before the chromatography, sample were extracted with double extraction liquid-liquid followed by C18 solid-phase extraction. The compounds were separated on a Zorbax Eclipse^® XDB-C18 column with a mobile phase of water–acetonitrile. Linearity, precision, recovery and accuracy of the method were established. The limit of quantification was 5 ng/mL of cortisol, and the total coefficients of variation were <8%. The chromatography method was compared first with an automated immunoassay using chemiluminescent label (Advia-Centaur^®) then with a reference laboratory. The results obtained in immunology showed an over-estimate of the excretion of free cortisol compared to the chromatographic method. The evaluation compared to the reference was satisfactory. At the end of study, the chromatographic technique allowed us to reconsider the reference range of normal cortisol excretion from 3.9 to 58.5 μg/24 hours.     

CEA电化学发光免疫分析法的建立

目的建立人癌胚抗原（CEA）的电化学发光免疫分析法（ECLIA）。方法生物素标记的CEA McAb、钌复合物标记配对的CEA McAb、链霉亲和素包被的磁性微粒组成CEA ECLIA试剂,用ECLIA仪检测CEA并做方法学评价。用本法与进口的同类ECLIA试剂对119例结直肠癌、150例肺癌、45例胃癌、32例胰腺癌和34例肝细胞癌患者的血清CEA检测结果进行分析。调查218名志愿者血清CEA正常参考值。结果本法检测CEA的批内CV为1.6%～7.1%,批间CV为2.3%～11.7%,灵敏度为0.2 ng/mL。与CA19-9和AFP无交叉反应。自建ECLIA检测CEA浓度范围为0.2～1000.0ng/mL,正常参考值低于5.6ng/mL。结论自建CEA ECLIA与进口试剂比较（r=0.9641,P〈0.05）,正常参考范围接近进口同类方法。具备产业化的潜能。     

人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法的初步建立及应用

目的:建立人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法:使用CY-FRA21-1定量测定试剂盒（化学发光法）检测308例临床血清标本,并与CYFRA21-1电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果:灵敏度0.04μg/L,线性范围（1.5～100）μg/L,与NSE及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na₂对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90%～110%,分析内和分析间变异系数均<10.0%。该方法正常参考值为（0～3.4）μg/L（95%可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96.65%。结论:该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

高通量酶免系统定量检测甲胎蛋白的临床应用评估

目的 对高通量酶免系统定量检测血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)进行临床应用评估.方法 收集肝癌、肝炎、肝硬化患者血清共184份,健康查体者血清200份.验证高通量酶免系统测定AFP的重复性和正确度,与电化学发光法(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)结果进行比对,评价其临床应用价值.结果 高通量酶免系统测定4种浓度AFP的总变异系数(coefficient of variation,CV)分别为13.1％、13.7％、11.4％、10.3％,正确度能力比对试验(proficiency testing,PT)结果为100％,线性范围是(0.0 ～200.0)μg/L.高通量酶免系统和ECLIA检测结果呈直线相关(Y=1.14X+0.83,R2 =0.92),两方法检测标本的阳性率分别为67.39％和69.02％,差异无统计学意义(P =0.453).检测血清AFP诊断原发性肝癌的最佳临界值为195.7 μg/L.原发性肝癌与转移性肝癌患者的诊断界值为99.44μg/L,与肝炎肝硬化患者的诊断界值为379.15 μg/L.结论 高通量酶免系统测定血清AFP结果可靠、稳定,可用于筛查和诊断原发性肝癌.     

两种检测方法测定抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体结果的比较

目的 应用化学发光免疫分析法（CLIA）和放射免疫分析法（RIA）分别测定血清抗甲状腺球蛋白抗体（抗TgAb）和抗甲状腺过氧化物酶抗体（抗TPOAb）.方法 采用CLIA法和RIA法测定304例不同类型甲状腺疾病患者和38名健康对照者血清抗TgAb和抗TPOAb水平.结果 CLIA法测定血清抗TgAb和抗TPOAb水平与RIA法测定的结果具有良好的一致性.结论 CLIA法测定血清抗TgAb和抗TPOAb可以用来替代RIA法.