miR-147a靶向ATF2抑制非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移北大核心CSCD

目的:探究miR-147a靶向激活转录因子2(ATF2)对非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a和ATF2 mRNA表达,Western blot检测ATF2蛋白表达。采用miR-NC、pc-NC、miR-147a mimic、pc-ATF2质粒分别或联合转染H1703细胞,双荧光素酶报告验证其靶向关系,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、间质钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和ATF2蛋白表达。裸鼠分为4组:control组、miR-147a mimic组、pc-ATF2组、miR-147a+pc-ATF2组。裸鼠左腋下皮下注射转染后的非小细胞肺癌H1703细胞,第30天颈椎脱位法处死,完整取出皮下肿瘤,免疫组化检测N-cadherin阳性表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果:与正常肺组织和细胞相比,非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a表达显著下调,ATF2 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01)。miR-147a靶向下调ATF2表达。与对照组相比,miR-147a mimic组H1703细胞ATF2表达显著下调,侵袭数显著减少,划痕闭合率显著降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703细胞的作用。与对照组相比,miR-147a mimic组移植瘤中N-cadherin阳性细胞百分比降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703移植瘤的作用。结论:miR-147a靶向ATF2可抑制非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

微小RNA-27a在子宫颈癌中的表达变化及作用机制

目的 探讨微小RNA（miR)-27a靶向调控F框/WD-40域蛋白7（FBXW7）对子宫颈癌细胞的增殖、凋亡及侵袭的影响。 方法 30例宫颈癌组织和癌旁组织、30例正常宫颈组织新鲜标本用于实验。Real-time PCR检测宫颈癌、癌旁组织、正常宫颈组织以及宫颈癌细胞（SiHa、Caski、HeLa、HCC94）、子宫颈鳞状上皮永生化细胞H8中miR-27a的表达。应用脂质体转染法将miR-27a抑制剂（inhibitor）及其阴性对照转染至SiHa细胞,CCK-8法、流式细胞术、Transwell法分别检测miR-27a对SiHa细胞增殖活性、细胞周期、凋亡率和侵袭能力的影响。生物学信息法预测miR-27a的靶向基因,双荧光素酶报告基因实验结合Western bloting验证miR-27a对FBXW7的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织和正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中miR-27a高表达（P<0.05）;与子宫颈鳞状上皮永生化细胞H8相比,宫颈癌细胞SiHa、Caski、HeLa、HCC94中miR-27a高表达（P<0.05）。抑制SiHa细胞中miR-27a的表达,能够明显降低细胞的增殖活性（P<0.05）,提高G0/G1期细胞比例（P<0.05）,降低S期和G2/M期细胞比例（P<0.05）, 提高细胞凋亡率（P<0.05）,抑制细胞的侵袭能力（P<0.05）。生物学信息法预测FBXW7可能是miR-27a的靶向调控基因;双荧光素酶报告基因实验显示,miR-27a可以与FBXW7基因的3’UTR区特异性结合（P<0.05）, 并负调控FBXW7蛋白的表达（P<0.05）。 结论 MiR-27a在宫颈癌的发生发展中起着癌基因的作用,抑制miR-27a表达能够明显抑制宫颈癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向调控FBXW7的表达有关。     

miR-143-3p靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖,凋亡和侵袭的调节作用

目的研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。方法qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的m RNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。结果 miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。结论 miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。     

miR-363下调HepG2细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其凋亡

目的:探讨微小RNA-363(microRNA-363,miR-363)的作用靶点及其对Hep G2细胞的抑制作用。方法:通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受microRNA调控。实时荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Hep G2、Huh7、PLC的miR-363和Mcl-1的表达水平。将miR-363转染人Hep G2细胞,检测miR-363对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测Hep G2细胞在转染miR-363后的相对细胞活力,Annexin V/PI染色法检测miR-363转染对Hep G2细胞凋亡的影响。结果:Mcl-1 mRNA 3’-非翻译区(3’-UTR)存在miR-363的假定结合位点,在肝癌细胞中转染miR-363后Mcl-1的表达下降。转染miR-363可抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论:miR-363过表达可显著抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡,其机制可能与miR-363能下调Hep G2细胞Mcl-1蛋白的表达有关。     

miR-23a通过靶向GLS1调控H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞增殖、迁移

目的 探究氧化应激条件下miR-23a对视网膜色素上皮细胞增殖、迁移的影响及其机制.方法 以不同浓度的H202诱导ARPE-19细胞氧化应激,qPCR检测诱导后ARPE-19细胞miR-23a的表达水平以及增殖和迁移能力的变化;ARPE-19细胞转染miR-23a mimic、NC(negative control)mimic后,采用MTT 和Transwell分别检测各组细胞的增殖和迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-23a和GLS1的靶向关系;检测GLS1表达对氧化应激下ARPE-19细胞增殖和迁移能力的影响;检测转染miR-23a mimic及调节GLS1表达后ARPE-19细胞谷氨酰胺摄取能力,Western blot检测转染miR-23a mimic及调节GLS1表达后ARPE-19细胞p42/p44 MAPK、JNK磷酸化水平.结果 H2O2诱导后ARPE-19细胞miR-23a表达水平显著上调,细胞增殖和迁移能力显著下降;转染miR-23a mimic后ARPE-19细胞增殖和迁移能力显著抑制.荧光素酶报告实验显示GLS1为miR-23a的靶基因,下调GLS1表达后,显著抑制H2O2诱导的ARPE-19细胞增殖和迁移能力;上调miR-23a及下调GLS1的表达则抑制H2O2诱导ARPE-19细胞的谷氨酰胺的摄取及p42/p44MAPK、JNK磷酸化水平.结论 氧化应激通过上调视网膜色素上皮细胞miR-23a而抑制GLS1的表达进而抑制MAPK信号通路影响细胞的增殖和迁移.     

miR-141的过表达抑制MHCC-97H肝癌细胞的增殖和侵袭迁移

目的观察肝细胞癌组织中miR-141的表达水平,通过上调MHCC-97H肝癌细胞中miR-141的水平观察对MHCC-97H细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量PCR检测miR-141在肝癌及癌旁组织中的表达水平,并分析miR-141表达水平与临床病理指标的关系及生存率。利用人工合成的miR-141模拟物,瞬时转染MHCC-97H细胞。MTT法检测MHCC-97H细胞的增殖,TranswellTM实验检测MHCC-97H细胞的侵袭及迁移,Westernblot法及免疫组织化学检测miR-141下游潜在靶点肝细胞产生的促红素受体A2(EphA2)的表达。结果miR-141在肝癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织;肝癌组织中miR-141低表达与TNM分期、门静脉侵犯及Edmondson分级显著相关;低表达miR-141患者3年生存率明显低于高表达组;miR-141模拟物转染可上调MHCC-97H细胞miR-141水平,上调miR-141可显著抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移,并下调EphA2的蛋白水平;miR-141低表达组EphA2蛋白水平明显高于miR-141高表达组,相关性分析显示肝癌组织中miR-141与EphA2蛋白表达呈显著负相关。结论miR-141在肝癌组织中表达下调且与EphA2表达呈显著负相关,其低表达与肝癌恶性临床病理特征有关,上调miR-141表达可抑制EphA2的表达抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。     

曲古霉素A抑制肝癌细胞的糖酵解

目的研究表观遗传药物组蛋白去乙酰化抑制剂曲古霉素A(TSA)对miR-34家族(miR-34a/b/c)在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制。方法在肝癌细胞系中分别转染miR-34模拟物或相应阴性对照,用real-time PCR法检测miR-34a/b/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中分别转染miR-34b模拟物、相应阴性对照,或用TSA、DMSO处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34b及TSA对肝癌细胞Hep G2、PLC/PRF/5糖酵解途径的影响;设计拯救实验在Hep G2细胞中研究TSA、miR-34b与肝癌细胞糖酵解调控的关系。结果 TSA可以诱导Hep G2、PLC/PRF/5肝癌细胞内源性miR-34b的表达上调(P0.01);过表达miR-34b可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P0.05);miR-34 b可以抑制含有LDH-A 3'非翻译区的报告基因活性;敲低miR-34 b的表达可以降低TSA对肝癌细胞Hep G2糖酵解途径的抑制作用。结论 TSA通过诱导miR-34 b表达上调发挥抑制肝癌细胞的代谢转换。     

MiR-610通过下调双微体基因2的表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移

目的：探讨miR-610 对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制。方法：通过RT-PCR 检测卵巢癌组织及细 胞、正常组织及细胞中miR-610 与鼠双微体基因2（MDM2）mRNA的表达;通过Lipofectamine 2000 将miR-NC、 miR-610 mimic、miR-6101 inhibitor、pc-MDM2质粒分别或联合转染进入HO8910细胞;划痕实验检测细胞迁移 能力,Transwell 法检测细胞侵袭能力,免疫印迹检测E- 钙黏着蛋白（E-cadherin）、N- 钙黏着蛋白（N-cadherin） 和MDM2蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测miR-610 与MDM2靶向关系。 结果：与正常卵巢组织和上皮 细胞系HOSEpiC相比,人宫颈癌组织和细胞系中miR-610 表达明显下调,选择下调效果较明显的HO8910细胞系 进行后续实验。与Control 组相比,miR-610 mimic 组卵巢癌HO8910细胞划痕闭合率明显降低、侵袭细胞数目明 显减少、E-cadherin 明显上调、N-cadherin 表达明显下调,miR-610 inhibitor 组卵巢癌HO8910细胞划痕闭合率明显 升高、侵袭细胞数目明显增多、E-cadherin 明显下调、N-cadherin 表达明显上调。MiR-610 与MDM2 3'UTR 区存在 结合位点,且miR-610 靶向下调MDM2 表达。共转染pc-MDM2逆转了miR-610 mimic 对卵巢癌HO8910细胞迁移 和侵袭能力抑制作用。 结论：MiR-610 通过靶向下调MDM2抑制卵巢癌HO8910细胞迁移和侵袭能力。     

miR-433-3p靶向HP1BP3抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

目的：探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法：将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照（NC）mimic组、miR-433-3p mimic组、NC siRNA (si-NC)组和HP1BP3 siRNA (si-HP1BP3)组，分别转染NC mimic、miR-433-3p mimic、si-NC和si-HP1BP3。RT-qPCR检测miR-433-3p在HGC-27和AGS细胞中的表达；CCK-8法和细胞集落形成实验检测细胞增殖；划痕愈合实验检测细胞迁移；Traswell实验检测细胞侵袭；Western blot检测HP1BP3蛋白表达。结果：与NC mimic组相比，miR-433-3p mimic组HGC-27和AGS细胞中miR-433-3p表达升高。过表达miR-433-3p抑制HGC-27和AGS细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制HP1BP3蛋白表达；敲减HP1BP3抑制HGC-27和AGS细胞的增殖和迁移。结论：miR-433...     

DADS通过miR-222抑制人胃癌细胞系的增殖与侵袭

目的通过miRNA途径研究二烯丙基二硫(DADS)的抑瘤机制,以进一步阐明DADS抑制胃癌细胞增殖与转移的分子机制。方法将胃癌细胞系MGC-803细胞分为DADS处理组、miR-222模拟物组、miR-222抑制物组和阴性对照组;分别采用0、25、50、100、200和400μmol/L DADS处理MGC-803细胞;分别将miR-222模拟物、miR-222抑制物和scramble转染MGC-803细胞。qRT-PCR检测MGC-803细胞中miR-222表达;MTT法和Transwell侵袭实验检测MGC-803细胞增殖与侵袭能力;蛋白质印迹试验检测MGC-803细胞中TIMP3蛋白表达。结果 DADS可呈剂量依赖性下调MGC-803细胞中miR-222表达(P0.05);DADS能抑制MGC-803细胞的增殖与侵袭,外源高表达miR-222能促进MGC-803细胞的增殖与侵袭,而miR-222抑制物与DADS共同处理,MGC-803细胞的增殖与侵袭抑制作用最为显著(P0.05);DADS可下调MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达,外源高表达miR-222能上调MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达,而miR-222抑制物与DADS共同处理,MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达下调最为显著(P0.05)。结论 DADS通过下调miR-222的表达,靶向TIMP3抑制胃癌细胞的增殖与侵袭。     

miRNA-132通过Hedgehog信号通路对肝癌细胞凋亡的作用机制

目的：探究miRNA-132（miR-132）通过Hedgehog 信号通路对肝细胞癌细胞凋亡的机制。方法：用miR- 132 类似物转染人肝癌HepG2 细胞,将样本分为空白组（ 无转染HepG2）、NC组（HepG2 转染miR-132-NC）、 YJ 组（HepG2 转染miR-132 mimic）。通过qRT-PCR 检测miR-132 在HepG2 细胞中的表达量,采用CCK-8 法、流 式细胞仪、Transwell 小室、免疫印迹检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及Shh 蛋白表达。结果：PCR检测结果显示, 3 组对比,YJ 组HepG2 细胞中miR-132 表达量最高,说明转染成功;CCK-8 检测结果显示,YJ 组HepG2 细胞增 殖数量最低,空白组HepG2 细胞的增殖与NC组相似,皆高于YJ 组;流式细胞检测结果显示,与NC组及空白组 比较,YJ 组HepG2 细胞凋亡数量最多 ;Transwell 小室检测结果显示, YJ 组细胞侵袭数量与空白组和NC组相比 明显降低,空白组细胞侵袭数量与NC组相比数据接近;免疫印迹检测结果显示,YJ 组Shh 蛋白相对表达量与空 白组和NC组比明显降低。结论：过表达miR-132 降低Hedgehog 信号通路,可促进人肝癌HepG2 细胞凋亡作用。     

miR-26a mimics转染人肝癌细胞株HepG2的表达蛋白质组分析

目的: 通过分析microRNA-26a(miR-26a)mimics转染对人肝癌细胞株HepG2 表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性。方法: 常规培养人肝癌细胞株HepG2,经miR-26a mimics转染48 h后进行细胞周期分析,并裂解转染72 h的HepG2细胞提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定。结果: HepG2细胞经miR-26a mimics转染后细胞增殖受到抑制;其蛋白2-DE图谱与对照组比较,差异表达超过2倍的蛋白斑点有11个。其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有8个蛋白斑点为表达下调。质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C 氧化酶5a、细胞周期蛋白E2、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白。 结论: miR-26a可能通过影响上述蛋白分子的表达,直接或间接地调控HepG2肝癌细胞的增殖、分化和死亡,以发挥其抗癌作用。     

血红素加氧酶-1对肝癌细胞细胞周期调控因子的影响

目的 观察血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响.方法 构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3.1(+)-wtHO-1和pcDNA3.1(+)-mHO-1G143H.利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染肝癌细胞系HepG2,以空载体转染作为对照组.通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的HepG2肝癌细胞系.经半定量RT-PCR、Western印迹检测转染细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平.在HO-1表达改变的稳转细胞系中,利用Western 印迹检测转染细胞系中P21、P27蛋白表达水平.结果 成功实现了野生型和突变型HO-1在HepG2细胞中的过表达;野生型和突变型HO-1过表达均能诱导抑癌基因p21和p27的表达.结论 HO-1过表达诱导抑癌基因p21和p27的表达与血红素分解产物无关.HO-1可能通过其它机制调节p21和p27的表达.     

过表达miR-130a-3p对心肌细胞肥大的缓解作用研究

本研究旨在探索miR-130a-3p对心肌细胞肥大的作用及其可能机制。通过胸主动脉缩窄法(TAC)构建压力超负荷所致心肌肥厚小鼠模型。使用去甲肾上腺素(NE)刺激SD乳鼠原代心肌细胞(NRCMs)及H9c2大鼠心肌细胞系,诱导这两种心肌细胞发生肥大表型转变。检测miR-130a-3p的表达变化,并进一步探索其对心肌细胞肥大是否有调控作用。结果表明,miR-130a-3p在肥厚心肌组织、肥大NRCMs及H9c2细胞中的表达均明显降低。给予miR-130a-3p mimics使其过表达后,H9c2细胞中肥大标志基因心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和肌球蛋白重链β(β-MHC)的表达较对照组(mimics N.C.+NE组)明显下调,且细胞面积明显减小。而给予miR-130a-3p inhibitor抑制其表达后,肥大心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC的表达进一步上升,且细胞面积进一步增加。Western blot检测发现,过表达miR-130a-3p后心肌细胞中磷酸化Akt和磷酸化mTOR的表达水平下调。以上结果提示,miR-130a-3p mimics可缓解心肌细胞肥大的程度;其inhibitor则可使心肌细胞肥大进一步加剧。过表达miR-130a-3p可能通过影响Akt通路来缓解H9c2心肌细胞肥大的程度。     

p21活化激酶6削弱非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的分子机制

 目的：探讨调控p21活化激酶6(PAK6)的微小RNA（miRNA）与非小细胞肺癌侵袭及迁移的关系,并了解PAK6下游分子信号机制。方法：通过生物信息学数据库预测靶向PAK6的miRNA,转染miRNA模拟物及抑制剂,Western blotting及实时定量荧光PCR（real-time PCR）检测A549细胞中PAK6的表达量,萤光素报告酶实验检测预测miRNA对PAK6的调控,并行体外迁移及侵袭实验,检测转染miRNA对PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。转染目标miRNA及siPAK6,Western blotting检测A549细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达量。结果：生物信息学预测miR-23a可能是调控PAK6的靶向miRNA。Western blotting检测转染miR-23a组PAK6表达量下降69％,而转染miR-23a抑制剂组PAK6表达量上升52％,差异均有统计学意义。萤光素报告酶实验结果显示,转染miR-23a后野生型PAK6组萤光素酶活性下降52％,而突变组差异无统计学意义（P＞0.05）。Real-time PCR检测3组PAK6 mRNA的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。体外迁移及侵袭实验示,转染miR-23a组迁移细胞数减少73％,侵袭的细胞数减少59％。Western blotting检测发现,转染siPAK6组MMP-9的表达下降85％（P＜0.01）,转染miR-23a组MMP-9的表达下降76％（P＜0.01）。结论：miR-23a通过PAK6-MMP-9信号途径引起非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的下降。     

MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭

目的 探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/AKT）通路的作用。 方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物（mimics）组和negative-mimics组（miR-NC）以及antago miR-145组（抑制剂组）和antago miR control 组（antago-NC）,采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响;Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3K/AKT通路的影响。此外,采用细胞外调节蛋白激酶（ERK）及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变。 结果 miR-145 mimics组穿过细胞数（90.67±10.33）明显少于miR-NC组（175.33±23.67）,miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数（153.33±22.33）少于miR-NC组 (77.33±13.67）,P<0.05;antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组（P<0.05）,结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力;miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90%、78%以及73%的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115%、125%以及129%,而当抑制MAPK通路及PI3K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降。 结论 miR-145通过MAPK和PI3K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭。     

MicroRNA-155 通过调节CXCR4 / PI3K / AKT 途径影响滋养细胞的侵袭与迁移

目的:以人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3 细胞为研究对象,结合该细胞侵袭和迁移能力的变化情况,研究转染miR-155 mimics 和miR-155 inhibitor 之后CXCR4 的表达变化及其对下游PI3K/ AKT 信号通路的影响作用,从而探讨miR-155参与子痫前期发生发展的分子机制。方法:设计miR-155mimics 和miR-155 inhibitor,对JEG-3 进行转染,通过Transwell 侵袭实验、划痕实验,观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化;利用Real-time PCR 检测CXCR4 mRNA 的表达;利用Western blot检测CXCR4 及下游p鄄AKT 蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR 结果显示,miR-155 mimics 转染组CXCR4 mRNA 相对表达量(0.589依0.096)明显低于空白对照组(1.503依0.090)和阴性对照组(1.146依0.153),差异有统计学意义(P<0.05);miR-155 inhibitor 转染组CXCR4 mRNA 相对表达量(1.739依0.083)与两组对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。Western blot 结果显示miR-155 mimics 转染组CXCR4 蛋白和下游p-AKT 蛋白表达水平均明显降低,而miR-155 inhibitor 转染组CXCR4 和p-AKT 蛋白水平则升高,与空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell 侵袭实验结果显示,与空白对照组(63郾46依2郾37)和阴性对照组(49.29依5.81)侵袭细胞数相比,miR-155 mimics 转染组侵袭细胞数(22.89依9.42)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,miR-155 inhibitor 转染组侵袭细胞数(81.50依11.25)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,转染miR-155 mimics 后,JEG-3 细胞相对迁移距离(0.159依0.058)低于空白对照组(1.080依0.045)和阴性对照组(0.823依0.201),差异有统计学意义(P<0.05);而miR-155 inhibitor 转染组,JEG-3 细胞相对迁移距离(1.640依0.078)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155 可能通过抑制CXCR4 的表达进而抑制其下游PI3K/AKT 信号通路的活化,从而影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,最终导致子痫前期的发生发展。     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

miRNA-451在膀胱癌细胞中的表达及对其生物学功能的影响

目的：检测微小RNA(microRNA,miRNA)在膀胱癌细胞中的表达及探讨其对膀胱癌细胞迁移、侵袭、黏附及增殖能力的影响。方法：采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)检测miR-451在不同转移潜能膀胱癌细胞株T24、5637、J82中的表达;使用Lipo-2000脂质体将miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染入5637细胞,qPCR验证其转染效率,采用划痕愈伤实验、Transwell实验、细胞黏附及MTT增殖实验分别检测细胞二维迁移、侵袭、黏附及增殖能力的变化。结果：miR-451在T24、5637及J82中的相对表达量分别为0.06±0.001、0.13±0.024、1(将J82细胞中其表达量标准化为1),差异显著,具有统计学意义(P<0.01);miR-451过表达后,5637细胞的迁移、侵袭、黏附能力及增殖率显著降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-451在不同膀胱癌细胞中差异表达,其表达异常可影响癌细胞生物学功能,这为膀胱癌靶向分子治疗提供了新的切入点。