黄芪总苷通过介导mTOR信号通路抑制H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞自噬和凋亡

目的:探讨黄芪总苷(astragalosides)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠心肌细胞H9c2自噬和凋亡作用的影响及作用机制。方法:建立大鼠心肌细胞H_2O_2氧化应激损伤模型,并用20 mg/L的黄芪总苷和0.1 mg/L的雷帕霉素分别处理对应组细胞。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率;采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况;采用Western blot检测p-mTOR蛋白、P70S6K蛋白、自噬蛋白(LC3)和凋亡蛋白(cleaved caspase-3和caspase-3)的表达。结果:与模型组和雷帕霉素组比较,黄芪总苷组的细胞凋亡率显著降低(P0.05);黄芪总苷组的大鼠心肌H9c2细胞形态完整,细胞核染色为黄绿色荧光,染色质分布均匀,细胞形状规则;细胞中p-mTOR蛋白和P70S6K蛋白的表达显著升高(P0.05),LC3-II/LC-3-I和cleaved caspase-3相对表达量显著降低(P0.05)。结论:黄芪总苷可通过mTOR信号通路提高心肌细胞成活率,抑制细胞凋亡和自噬,减轻H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤。     

AZD8055对胆管癌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双重抑制剂AZD8055对人胆管癌HuCCT1细胞自噬和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的AZD8055对HuCCT1细胞活力的抑制作用;吖啶橙染色检测AZD8055处理胆管癌细胞后,细胞自噬小体形成情况;Western blot法观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3以及自噬相关标志蛋白beclin 1、LC3和p62的表达;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果:AZD8055显著抑制胆管癌细胞的活力(P0.05)。吖啶橙染色后,AZD8055用药组橙红色颗粒增多。Western blot实验显示,AZD8055处理后,与对照组相比自噬标志蛋白beclin 1表达上调,LC3-II/LC3-I比例上调,p62表达下调;cleaved caspase-3表达降低,促凋亡蛋白Bax表达降低,抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P0.05)。流式细胞术显示,AZD8055可抑制细胞凋亡。结论:AZD8055可抑制胆管癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞自噬相关。     

松香酸通过诱导自噬减轻AGEs诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激反应

目的:本文旨在探索松香酸(abietic acid,AA)对晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激的影响及其相关机制。方法:H9c2细胞分为5组:对照组加入生理盐水处理24 h;AGEs处理组加入AGEs(100 mg/L)处理24 h;AGEs+AA(10、25和50μmol/L)组同时加入AGEs(100 mg/L)和AA(10、25和50μmol/L)处理24 h。MTT法检测H9c2细胞活力。Western blot分析肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、cleaved caspase-12、GADD34、Bi P、LC3、P62和beclin 1的蛋白水平。ELISA检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性。流式细胞术分析细胞凋亡。结果:低浓度(低于50μmol/L)的松香酸对H9c2细胞活力无明显影响,高浓度(高于50μmol/L)的松香酸会降低H9c2细胞活力。AGEs组Mb、CK-MB和c Tn I蛋白表达及LDH的水平明显高于对照组(P0.05);与AGEs组相比,AGEs+AA(10、25和50μmol/L)组Mb、CK-MB和c Tn I的蛋白表达及LDH的表达水平明显降低(P0.05)。松香酸(10、25和50μmol/L)可抑制AGEs诱导的心肌细胞凋亡、CHOP和cleaved caspase-12蛋白水平的升高及GADD34和Bi P表达的降低(P0.05)。而且,松香酸(10、25和50μmol/L)可抑制AGEs诱导的心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和beclin 1表达的降低及P62表达的升高(P0.05)。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤可逆转松香酸对心肌细胞LC3、Mb、cleaved caspase-12和Bi P蛋白水平的影响(P0.05)。结论:松香酸通过诱导自噬减轻AGEs诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激反应。     

自噬降低激活β1-AA诱导的心肌细胞内质网应激相关凋亡途径

目的β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)诱导的心肌细胞自噬降低是否参与内质网应激(ERS)相关凋亡途径的激活。方法β1-肾上腺素受体细胞外第二环(β1-AR-ECII)抗原肽段主动免疫大鼠;亲和层析法纯化血清中的β1-AA; SDS-PAGE检测抗体纯度; Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3和p62的表达; Western blot及免疫组化法检测内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡途径相关蛋白GRP78、CHOP和caspase-12的表达。结果与对照组相比,β1-AA处理H9c2心肌细胞12和24 h后,Beclin1和LC3蛋白表达明显降低,p62蛋白表达明显增加;β1-AA作用12和24 h后,GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达均显著增加; 3MA抑制心肌细胞自噬后β1-AA诱导的ERS相关凋亡途径进一步激活; Rapa上调心肌细胞自噬水平后可明显逆转β1-AA诱导的ERS相关凋亡途径的激活。结论 1)β1-AA可以引起心肌细胞自噬降低,并诱导ERS相关凋亡途径激活; 2)自噬降低参与β1-AA诱导的心肌细胞ERS相关凋亡途径的激活。     

安罗替尼联合氯喹促进人非小细胞肺癌细胞系H1299凋亡

目的探讨安罗替尼和氯喹(CQ)单用及联用对人非小细胞肺癌系H1299存活率、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法安罗替尼与CQ单用及两药联合处理H1299细胞,MTT法检测细胞的存活率;划痕愈合和Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力; Hoechst 33342染色检测细胞凋亡; Western blot检测自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和自噬底物p62蛋白表达。结果安罗替尼联合CQ组对H1299细胞存活率、侵袭及迁移抑制效应优于安罗替尼组(P0.05);安罗替尼单用时较对照组的细胞凋亡增加,当安罗替尼联合CQ作用时细胞凋亡增加更显著。安罗替尼随浓度增加明显上调自噬标志物蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和下调自噬底物蛋白p62; CQ可显著上调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62表达水平;与单用CQ组相比,20μmol/L安罗替尼联合CQ组更加显著上调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和下调p62。结论安罗替尼联合氯喹可显著抑制H1299细胞的存活率、迁移和侵袭,促使细胞凋亡;其机制可能通过自噬发挥抗肿瘤作用。     

尼古丁促进高糖/高脂培养的大鼠心肌细胞系H9C2凋亡

目的研究在不同浓度尼古丁(Nic)条件下高糖/高脂(HGHL)对大鼠心肌细胞系H9C2凋亡的影响。方法体外培养H9C2细胞,给予不同浓度Nic(6×10^-8、6×10^-7、6×10^-6mol/L)2 h后,HGHL(33 mmol/L葡萄糖和500μmol/L棕榈酸酯)培养24 h,CCK8法检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞活力;Western blot检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3及caspase3的表达及ERK1/2、JNK和p38MAPK磷酸化水平;流式细胞计量术测定细胞凋亡和上清液ROS水平。结果与对照组相比,HGHL和尼古丁联合HGHL均显著抑制细胞活力,增加上清液中LDH水平(P<0.001);HGHL及Nic+HGHL细胞凋亡率显著增加(P<0.001)及cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(P<0.01);Bcl-2/Bax蛋白表达显著下降(P<0.01);在Nic+HGHL组,ROS水平表达最显著(P<0.001);HGHL能激活MAPK磷酸化,Nic+HGHL组ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.01);ROS清除剂(NAC)能显著减少caspase3蛋白表达水平(P<0.001)。结论尼古丁、HGHL能导致H9C2细胞损伤并增加其凋亡,其发生与ROS及MAPK信号通路密切相关。     

醉茄素A通过调节自噬缓解心肌细胞缺血/再灌注（缺氧/复氧）损伤

目的:探讨醉茄素A(WFA)通过对自噬的调节在心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤中的作用,为寻找有效药物缓解MI/R治疗后引起的心肌损伤提供依据。方法:(1)离体培养大鼠心肌H9C2细胞通过缺氧/复氧处理模拟在体缺血/再灌注(SI/R)模型,Western blot法分别检测对照组、SI/R组、WFA治疗(WFA+SI/R)组和氯喹(CQ)预处理(CQ+WFA+SI/R)组自噬相关蛋白的变化,CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测cleaved caspase-3蛋白水平,试剂盒检测caspase-3活性。C57BL/6小鼠吸入麻醉下,施心脏冠状动脉左前降支结扎术,30 min后打开结扎线恢复血液灌注3或12 h。(2)将小鼠随机分成假手术(sham)组、MI/R组、WFA+MI/R组和CQ+WFA+MI/R组。将再灌注3 h的小鼠分离心脏组织用于TUNEL染色,再灌注12 h的小鼠用于超声成像以检测左心室功能。结果:(1)与SI/R组相比,WFA+SI/R组LC3-II/LC3-I、beclin-1和p62水平显著降低,溶酶体相关膜蛋白2(Lamp-2)表达水平显著升高。与WFA+SI/R组相比,CQ+WFA+SI/R组LC3-II/LC3-I、beclin-1、p62、Lamp-2和cleaved caspase-3水平显著升高,心肌细胞活力显著降低,caspase-3活性显著升高。(2)在体研究显示,与WFA+MI/R组相比,CQ+WFA+MI/R组小鼠左心室功能显著降低,心肌细胞凋亡率显著升高。结论:醉茄素A通过降低过高的自噬水平,维持自噬平衡,从而改善缺血/再灌注损伤后的心功能。     

冬凌草甲素减轻自噬对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探究冬凌草甲素对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法将细胞随机分为H9C2组、Adriamycin组、Oridonin(5μM)组、Oridonin(10μM)组和Oridonin(20μM)组,除H9C2组外,其余组用阿霉素处理,Oridonin(5,10,20μM)组同时给予相应浓度的冬凌草甲素,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)浓度,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、P62和LC3的表达,免疫荧光检测LC3表达。结果与H9C2组比较,Adriamycin组SOD浓度明显降低,MDA浓度明显升高;与Adriamycin组比较,Oridonin(5,10,20μM)组SOD浓度明显升高,MDA浓度明显降低;同时,Adriamycin组细胞增殖速度明显低于H9C2组,细胞凋亡率明显增高; Oridonin(5,10,20μM)组细胞增殖速度与Adriamycin组比较明显升高,细胞凋亡率明显降低;此外,阿霉素能显著升高Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,抑制P62表达;冬凌草甲素(5,10,20μM)能显著减弱阿霉素对Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62表达的调控作用。结论冬凌草甲素能通过抑制自噬减轻阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。     

黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌的保护作用及其机制

目的:探讨黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心脏的保护作用及其机制。方法:将造模成功的2型糖尿病KKAy小鼠随机分为模型组和治疗组(黄芪注射液联合葛根素注射液腹腔注射),同周龄雄性KKAy小鼠作为正常对照组,并于21、24和28周龄时分别处死小鼠。HE染色观察心肌组织形态变化;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡;real-time PCR检测小鼠心脏组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和p53上调凋亡调控因子(PUMA) mRNA的表达;Western blot检测小鼠心脏组织中GRP78、CHOP、PUMA、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、cleaved caspase-9、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和cleaved PARP蛋白的表达。结果:模型组小鼠心肌细胞发生肥大,可见到部分细胞出现肌浆溶解和坏死,治疗组小鼠病变减轻;与对照组比较,模型组小鼠心肌细胞凋亡数显著增加(P0.01),治疗组小鼠心肌细胞凋亡数较模型组显著降低(P0.05);模型组小鼠21、24和28周龄心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平,以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平与正常对照组比较显著增加(P0.01);治疗组小鼠心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平均显著低于模型组(P0.01)。结论:黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激和caspase通路的活化,从而抑制细胞凋亡有关。     

miR-30a抑制Ang2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2自噬

目的探索miR-30a对血管紧张素2(Ang2)诱导的大鼠心肌细胞自噬的影响。方法 1)将H9c2细胞分为对照组(control)、Ang2处理组(Ang2 2×10~(-6) mol/L)、去甲肾上腺素阳性对照组(NE 5×10~(-6) mol/L)。处理细胞48 h, RT-qPCR检测miR-30a表达;Western blot检测LC3、Beclin-1自噬蛋白表达。2)将miR-30a mimics、miR-30a inhibitor、miR-30a NC通过Lipofectamine 2000转染至H9c2细胞中培养24 h,荧光显微镜检测转染率;转染成功后在Ang2刺激基础上设立Ang2+miR-30a mimics组、Ang2+miR-30a inhibitor组、Ang2+miR-NC组。检测miR-30a干预对Ang2诱导H9c2心肌细胞自噬的影响。结果 1)与对照组相比,Ang2处理组、NE阳性对照组miR-30a mRNA表达显著下调(P0.05);而LC3、Beclin-1蛋白表达显著升高(P0.001);2)与Ang2处理组相比,Ang2+miR-30a mimics组LC3、Beclin1蛋白表达显著降低(P0.001)。结论 Ang2能下调miR-30a表达,诱导H9c2心肌细胞自噬;miR-30a mimics能够抑制Ang2诱导的H9c2心肌细胞自噬。     

AT1-AA通过氧化应激诱导心肌H9c2细胞自噬及凋亡

目的:本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)对心肌H9c2细胞氧化应激、自噬及凋亡的影响,并分析其可能机制。方法:体外常规培养大鼠心肌H9c2细胞,CCK-8法检测不同浓度和不同时间作用条件下AT1-AA对细胞存活率的影响,从而确定其最佳作用浓度(10-5 mol/L)和作用时间(24 h);在最佳浓度和时间下,Western blot检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达,氧化应激试剂盒检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化。结果:AT1-AA可浓度及时间依赖性地降低细胞活力,促进细胞凋亡,同时上调细胞自噬和氧化应激的水平(P<0.05);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤预处理细胞后,AT1-AA诱导的心肌H9c2细胞凋亡减少(P<0.05);氧化应激抑制剂α-硫辛酸预处理细胞后,AT1-AA诱导的H9c2细胞自噬和凋亡水平降低(P<0.05);血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1-R)抑制剂替米沙坦预处理细胞后,AT1-AA对心肌H9c2细胞氧化应激的激活作用被抑制,自噬和凋亡水平均明显降低(P<0.05)。结论:AT1-AA通过氧化应激诱导心肌H9c2细胞的自噬及凋亡。     

miR-323通过FGF9调控缺氧诱导的心肌H9C2细胞凋亡

目的:探讨微小RNA-323(miR-323)对缺氧诱导大鼠心肌H9C2细胞凋亡的影响及其机制。方法:建立缺氧损伤的H9C2细胞模型,在H9C2细胞转染anti-miR-323、pcDNA-FGF9和si-FGF9,并缺氧处理48 h。采用qPCR检测miR-323的表达,Western blot检测成纤维细胞生长因子9(FGF9)、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p-JNK的蛋白水平,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。生物学信息预测miR-323的靶基因并用双萤光素酶报告基因进一步验证。结果:缺氧明显降低H9C2细胞12 h、24 h和48 h的细胞活力(P<0.05),显著提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),效应均呈时间依赖性。缺氧处理的H9C2细胞中miR-323和p-JNK水平上调,FGF9蛋白表达下调(P<0.05)。下调miR-323表达或过表达FGF9显著提高缺氧处理的H9C2细胞活力,降低细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白的水平(P<0.05)。FGF9是miR-323的靶基因。下调FGF9表达逆转下调miR-323表达对缺氧诱导H9C2细胞损伤的抑制作用。miR-323调控FGF9影响p-JNK水平。结论:miR-323通过靶向FGF9调节JNK信号通路,从而影响缺氧处理心肌H9C2细胞的活力和凋亡。     

ECE1过表达通过eNOS/NO通路促进AngⅡ诱导的体外培养大鼠心肌细胞肥大和凋亡

目的:探讨过表达内皮素转换酶1(ECE1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的体外培养大鼠H9C2心肌细胞肥大和凋亡的影响.方法:采用AngⅡ作用于体外培养的H9C2心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型.将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+质粒空载体(AngⅡ+NC)组和AngⅡ+ECE1过表达组.CCK-8法检测细胞活...     

MicroRNA-30a调控Beclin-1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护效应

目的: 观察microRNA-30a(miR-30a)在原代心肌细胞缺氧复氧中的作用,探讨miR-30a保护缺血再灌注心肌的分子机制。方法: 重组构建慢病毒miR-30a表达载体(LV-GFP-miR-30a)感染原代乳鼠心肌细胞,构建缺氧复氧损伤模型。实验分为正常培养组、单纯缺氧复氧组、LV-GFP加缺氧复氧组、LV-miR-30a-GFP加缺氧复氧组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)加缺氧复氧组。Real-time PCR检测缺氧复氧和慢病毒感染对miR-30a的表达影响,Western blotting检测LC3和Beclin-1蛋白表达变化,TUNEL和PI染色检测缺氧复氧后心肌细胞死亡情况。结果: (1)缺氧复氧后心肌miR-30a表达水平下调(P<0.05);(2)慢病毒miR-30a表达载体高效感染后心肌细胞miR-30a表达水平上调(P<0.05),心肌过表达miR-30a下调Beclin-1蛋白表达(P<0.05);(3)心肌过表达miR-30a抑制缺氧复氧后Beclin-1表达(P<0.05);3-MA处理减少缺氧复氧后心肌Beclin-1表达,减少缺氧复氧后LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ(P<0.05);(4)过表达miR-30a和3-MA处理减少缺氧复氧后心肌细胞凋亡(P<0.05)。结论: 心肌细胞过表达miR-30a显著下调Beclin-1;抑制自噬可以减少缺氧复氧后心肌细胞死亡。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响

目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组。用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h。采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡。结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高。凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关。结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用。其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用。     

敲除Dock180抑制大鼠H9C2心肌细胞系增殖和促凋亡

目的探讨敲除细胞质移动蛋白1(Dock180)对大鼠H9C2心肌细胞系增殖和凋亡的影响及其机制。方法用CRISPR/Cas9系统构建single guide RNA(sgRNA)Dock180质粒,并将其包装成敲除Dock180重组慢病毒再进行筛选,建立敲除Dock180的H9C2心肌细胞稳定株。实验分为A:阴性慢病毒组(Cas9)、B:敲除Dock180组、C:阴性慢病毒低氧组、D:敲除Dock180低氧组。RT-PCR检测各组细胞Dock180 mRNA表达水平,Western blot检测相关蛋白的表达水平,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 B组和D组Dock180 mRNA和蛋白无表达;分别较A组和C组,B组和D组p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低(P0.01),Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P0.05,P0.01);较A组,C组Dock180 mRNA和蛋白表达降低,p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P0.05,P0.01);较B组、D组p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P0.05,P0.01)。结论敲除Dock180可抑制H9C2心肌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用可能通过p-ERK1/2、Bax和Bcl-2分子介导。     

Transient receptor potential vanilloid 1 activation induces autophagy in thymocytes through ROS-regulated AMPK and Atg4C pathways

Autophagy is a highly conserved process involved in lymphocyte development and differentiation. Herein, we demonstrated for the first time that triggering of TRPV1 by the specific agonist CPS induces autophagy in mouse thymocytes. TRPV1-dependent autophagy required [Ca(2+)](i) and ROS generation, resulting in AMPK activation. CPS specifically increased Atg4C mRNA expression and induced oxidation of Atg4C protein by ROS generation. TRPV1-triggered autophagy was Atg6/Beclin-1-dependent, as demonstrated by the use of Beclin-1(+/-) transgenic mice, and involved ROS- and AMPK-mediated up-regulation of Beclin-1 expression. Autophagy is activated as a prosurvival process, as its inhibition triggered apoptosis of thymocytes: this effect was accompanied by down-regulation of Atg4C, Bcl-X(L), and Irgm1 mRNA expression, decreased Bcl-X(L) and Beclin-1 protein levels, and caspase-3 activation, suggesting the existence of a molecular interplay between autophagic and apoptotic programs. TRPV1 activation by CPS altered the expression of CD4 and CD8α antigens, inducing the development of DP(dull). Interestingly, we found that CPS induces autophagy of DP(dull) cells, and inhibition of CPS-induced autophagy by the 3-MA autophagic inhibitor induces apoptosis of DP(dull) cells, suggesting the presence of an interplay between autophagic survival and apoptotic cell death. Overall, our findings suggest that DP(dull) cells constitute a distinct thymocyte subpopulation involved in the homeostatic control of cellularity and in the responses to chemical stress signals during thymocyte maturation, via regulating autophagy and apoptosis in a TRPV1-dependent manner.     

自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(sham)、CA/CPR模型组(model)、雷帕霉素(Rapa)组(CA/CPR+Rapa)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CA/CPR+3-MA)。采用呼气末夹闭气管窒息法复制大鼠CA/CPR动物模型,分别给予自噬激动剂Rapa 0.2 mg/kg及自噬抑制剂3-MA 10 mg/kg进行干预。采用神经功能缺陷评分(NDS)评价CA/CPR大鼠神经功能;用TUNEL染色法检测大鼠海马神经元的凋亡变化;用RT-PCR和Western blotting法检测大鼠海马内微管蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,CA/CPR模型组大鼠NDS评分明显降低;海马神经元TUNEL染色阳性细胞数明显增多,凋亡率显著升高;海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CA/CPR+Rapa大鼠NDS评分明显降低,而海马神经元凋亡率明显有所增加,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显上调,而Bcl-2表达则明显有所下降;CA/CPR+3-MA大鼠NDS评分明显升高,而海马神经元凋亡率下降,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显下调,而Bcl-2表达则有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论 CA/CPR后自噬水平升高促进海马神经元凋亡,自噬水平降低抑制海马神经凋亡,两者相互作用共同参与CA/CPR的病理过程。