miR-302c在胃癌中表达及对胃癌细胞侵袭和迁移影响的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-302c对人胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。［方法］ 实时荧光定量PCR法检测miR-302c在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达情况。在SGC7901和AGS细胞中分别转染miR-302c mimic和inhibitor后,Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)的变化情况。［结果］与永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-302c在胃癌细胞系SGC7901、MKN28、N87、MKN45和AGS中表达降低。转染 mimic和inhibitor后,miR-302c在SGC7901和AGS中表达分别明显上调和下调(P＜0.001)。Transwell实验发现,上调miR-302c后,SGC7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低,而下调miR-302c后,AGS细胞的侵袭和迁移能力明显增强。进一步研究发现,miR-302c可抑制CREB1的表达。功能挽救实验证明CREB1可部分恢复miR-302c上调对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用。［结论］ miR-302c抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能是通过直接靶向CREB1。     

miR-200a通过β-catenin/TCF-4信号通路抑制胃癌细胞系生长侵袭能力的体外研究

  目的  研究miR-200a通过β-catenin/TCF-4信号通路对SGC7901胃癌细胞增殖活性及侵袭迁移能力的影响。  方法  化学合成miR-200a mimics, 采用脂质体Lipofectamine 2000转染胃腺癌细胞SGC7901, qRT-PCR检测转染效果, 细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达, TOP/FOP荧光素酶检测β-catenin/TCF-4活性, Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力、MTT法检测细胞的增殖活性, 流式细胞术检测细胞周期分布的改变。  结果  脂质体介导的miR-200amimics转染SGC7901后, β-catenin/TCF-4蛋白的表达均降低, β-catenin的表达出现了细胞核向胞浆的转移。TOP荧光素酶活性下降2.27倍, 而FOP荧光素酶活性基本不变。转染miR-200amimics组细胞的增殖活性、迁移、侵袭能力比空白组和阴性对照组明显下降, 细胞周期出现G₀/G₁期阻滞。  结论  提高miR-200a表达可以降低β-catenin/TCF-4信号通路的活性, 抑制SGC7901的生长侵袭迁移能力。      

MiR-124对食管癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

摘 要：［目的］检测miR-124及其靶基因CREB1在食管癌组织中的表达情况，探讨miR-124/CREB1在人食管鳞癌细胞KYSE-150体外增殖和侵袭中的作用及机制。［方法］ 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测32例食管鳞状细胞癌(ESCC)组织及周围正常组织的miR-124和CREB1表达。Targetscan分析miR-124与CREB1的结合位点，荧光素酶基因报告实验验证miR-124 与CREB1是否结合；过表达或抑制miR-124后，采用Western blot检测KYSE-150细胞中CREB1的表达；在KYSE-150细胞中转染miR-124 mimic为miR-124 mimic或转染miR-124抑制剂为anti-mi-R124，转染后24h、48h、72h收集细胞计数，检测细胞增殖情况；转染24h后通过体外侵袭实验检测过表达或抑制miR-124对KYSE-150细胞侵袭的影响。在KYSE-150细胞中转染CREB1 siRNA后24h、48h、72h收集细胞计数，检测细胞增殖情况；转染CREB1 siRNA 24h后检测KYSE-150细胞侵袭能力的变化；在KYSE-150细胞中共同转染anti-miR-124和siCREB1，检测细胞增殖和侵袭能力变化情况。［结果］ MiR-124在食管癌组织表达降低(P<0.001)，而CREB1在食管癌组织中表达升高(P<0.001)；CREB1是miR-124下游分子，过表达miR-124抑制KYSE-150细胞中CREB1的表达(P=0.016)，抑制miR-124促进KYSE-150细胞中CREB1的表达(P<0.001)。在食管癌细胞中，过表达miR-124抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)，抑制miR-124促进KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)；敲低CREB1抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)。敲低CREB1可抑制anti-miR-124对KYSE-150细胞增殖和侵袭的促进作用(P均<0.05)。［结论］过表达miR-124通过靶向CREB1抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。     

DKK1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力影响的研究

  目的  探讨Dikkopf 1（DKK1）对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。  方法  采用免疫组织化学方法检测DKK1在乳腺癌组织中的表达,并通过免疫荧光对DKK1在细胞中的定位进行分析;DKK1过表达的真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA231,应用Western blot检测转染后乳腺癌细胞MDA231中DKK1蛋白表达水平。划痕实验检测转染后MDA231细胞的迁移能力,Transwell实验检测MDA231细胞侵袭能力的改变。  结果  免疫组织化学检测到乳腺癌组织原发病灶及转移病灶DKK1表达明显高于对应的癌旁组织（P < 0.05）。DKK1表达的阳性率在有淋巴结转移组织中明显比无淋巴结转移组织中低。免疫荧光结果显示DKK1主要呈细颗粒状散在分布于细胞质中。Western blot检测表明DKK1过表达明显。过表达DKK1的MDA231细胞迁移和侵袭能力明显比阴性对照组和空白组低。  结论  DKK1的表达与乳腺癌细胞迁移和侵袭能力呈负相关。      

MiR-218通过抑制Robo1的表达影响肺癌细胞迁移侵袭

背景与目的 本研究旨在探讨肺癌中miR-218的表达,研究miR-218在肺癌细胞中的功能及其可能的分子机制.方法 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测15例肺癌组织和15例癌旁组织中miR-218的表达.在肺癌细胞A549中转染miR-218的抑制物(Anti-miR-218),在肺癌细胞HCC4006中转染miR-218的模拟物后,用Transwell实验检测细胞的迁移侵袭能力的变化.用Targetscan和MiRanda软件预测miR-218的可能靶点,转染miR-218的抑制物及模拟物后用qRT-PCR和Western blot检测Robo1的mRNA和蛋白表达水平.用双荧光素酶报告基因方法鉴定miR-218和Robo1的调控关系.用Anti-miR-218、miR-218模拟物或阴性对照与Si-Robo1或Si-NC同时转染细胞,应用Transwell实验检测转染后细胞的侵袭迁移能力的变化.结果 与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-218在肺癌组织中表达水平显著降低(P<0.01).在A549细胞中转染miR-218的抑制物,能够显著降低miR-218的表达,促进了细胞的迁移侵袭.在HCC4006中转染miR-218的模拟物能够显著提高miR-218的表达,同时抑制了细胞的迁移侵袭能力.利用生物信息学预测出在Robo1的3′UTR区有miR-218的结合位点,双荧光素酶报告基因实验进一步证实miR-218能够调控Robo1的转录活性.抑制miR-218能够提高Robo1的表达;过表达miR-218显著降低Robo1的表达,且miR-218能够通过调控Robo1影响细胞的迁移侵袭.结论 MiR-218在肺癌组织中呈现低表达状态,miR-218可能是通过抑制Robo1的表达抑制肺癌细胞侵袭迁移.     

miR-520c-3p靶向Rab22a抑制肺腺癌细胞迁移和侵袭的研究

  目的  探讨miR-520c-3p对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。  方法  选取2010年2月至2015年1月天津医科大学肿瘤医院肿瘤生物样本库118例肺腺癌患者标本。RT-qPCR检测miR-520c-3p及靶基因Rab22a mRNA的表达。Transwell检测肺腺癌细胞侵袭能力的变化。通过生物信息预测miR-520c-3p的靶基因。采用双荧光素酶报告基因检测,并结合Western blot及挽救实验验证miR-520c-3p和Rab22a的调控关系。  结果  肺腺癌组织中miR-520c-3p的表达量低于癌旁组织,且高表达提示预后更好。miR-520c-3p可抑制肺腺癌细胞的迁移及侵袭的能力。通过生物信息分析、双荧光素酶报告基因检测及挽救实验表明,miR-520c-3p靶向负调控Rab22a的表达。  结论  miR-520c-3p在肺腺癌中低表达,并通过靶向负调控Rab22a抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力。      

miR-146b-5p对胶质瘤TJ905细胞生长的抑制作用及其机制探讨

  目的  在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中观察miR-146b-5p对MMP16的调控作用及其对细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响。  方法  分别用无义序列表达质粒(对照组)和miR-146b-5p表达质粒(P-miR-146b-5p组)转染TJ905细胞, 用qRT-PCR和Western blot检测两组细胞miR-146b-5p的表达水平及MMP16 mRNA和蛋白的表达水平, 用体外迁移侵袭实验及流式细胞术检测转染细胞迁移、侵袭、细胞周期分布和凋亡水平, 并分析这些变化的相互关系。  结果  与对照组相比, p-miR-146b-5p组MMP16 mRNA和蛋白表达量明显降低, 二者间呈正相关且均与miR-146b-5p表达量呈负相关。p-miR-146b-5p组侵袭和迁移细胞数均明显低于对照组, 并均与同组MMP16蛋白表达量呈正相关; 而凋亡水平明显高于对照组, 并与同组miR-146b-5p表达量呈正相关, 但两组细胞周期时相分布无显著性差异。  结论  miR-146b-5p是胶质瘤的抑瘤miRNA; 补充外源性miR-146b-5p可促进胶质瘤细胞凋亡, 并通过抑制靶基因MMP16表达阻止其侵袭迁移; 提示miR-146b-5p在恶性胶质瘤基因治疗方面具有重要的潜在应用价值。      

miR-1290通过抑制干扰素调节因子-2调控非小细胞肺癌的增殖

  目的  探讨微小RNA-1290（miR-1290）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及其相关调控机制。  方法  采用实时荧光定量PCR检测成都市双流区第一人民医院2014年6月至2017年6月41例NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及NSCLC细胞株A549、H460及正常支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-1290表达;qPCR、Western blot检测癌组织、癌旁组织IRF2 mRNA和蛋白表达;将A549和H460细胞分为miR-1290 mimic组（转染miR-1290 mimic）、miR-1290 inhibit组（转染miR-1290 inhibit）和miR- 1290 NC组（不转染）。分别于转染24、48、72、96 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell小室检测细胞侵袭数,双荧光素酶报告基因实验检测miR-1290与干扰素调节因子-2（interferon regulatory factor,IRF2）3′-UTR结合情况,qPCR检测不同miR-1290表达水平的A549和H460细胞IRF2 mRNA表达。  结果  癌组织miR-1290相对表达量明显高于癌旁组织,IRF2 mRNA和蛋白相对表达量明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义（P < 0.05）;NSCLC组织miR-1290表达与IRF2 mRNA、蛋白表达呈显著负相关（P < 0.05）。NSCLC患者中,淋巴结转移者miR-1290表达明显高于无淋巴结转移者,Ⅲ/Ⅳ期患者miR-1290表达明显高于Ⅰ/Ⅱ期,差异具有统计学意义（P < 0.05）。转染72、96 h后,A549和H460细胞miR-1290 mimic组增殖能力明显高于miR- 1290 NC组,miR-1290 inhibit组增殖能力明显低于miR-1290 NC组,差异具有统计学意义（P < 0.05）。A549和H460细胞中miR-1290 mimic组细胞克隆数和侵袭细胞数明显高于miR-1290 NC组,miR-1290 inhibit组克隆数和侵袭细胞数明显低于miR-1290 NC组,差异具有统计学意义（P < 0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示miR-1290能与IRF2 3′-UTR结合,明显降低荧光值（P < 0.05）。A549和H460细胞中,miR-1290 mimic组IRF2相对表达量明显低于miR-1290 NC组,miR-1290 inhibit组IRF2相对表达量明显高于miR-1290 NC组,差异具有统计学意义（P < 0.05）。  结论  miR-1290在NSCLC组织和细胞中高表达,miR-1290可能通过与IRF2结合,促进肿瘤细胞的增殖和侵袭。      

miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

 目的 探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein4, AP4）mRNA的表达。A549细胞转染miR-145 mimic或者AP4 siRNA后，划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力，qRT-PCR法与免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中AP4 mRNA与蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因法检测AP4 mRNA与miR-145的关系。结果 与癌旁正常组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低（P<0.05），而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P<0.05）；与对照组相比，转染miR-145 mimic后，A549细胞中miR-145表达明显升高（P<0.05），AP4 mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）；A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降（均P<0.05）；双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后，A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降（均P<0.05）。结论 上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力，可能与其抑制靶基因AP4表达有关。     

miRNA海绵在胃癌细胞EMT过程中调控作用的体外研究

  目的   探讨“miRNA海绵”在胃癌细胞系SGC7901上皮-间质转化（EMT）过程中的作用及机制。   方法   将人工合成的ZEB2 3'UTR质粒及siZEB2采用脂质体Lipofectamine 2000转染SGC7901细胞。qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c的表达;Transwell侵袭实验、划痕实验和克隆形成实验检测细胞侵袭迁移增殖能力;Western Blot检测目的蛋白的表达。   结果   与对照组相比,ZEB2 3'UTR转染组miR-200a/b/c的表达均下调,迁移、侵袭、增殖活性均增强;而转染siZEB2后miR-200a/b/c表达均升高,迁移、侵袭、增殖能力则下降。Western Blot显示ZEB2 3'UTR转染导致ZEB2表达升高,E-cadherin表达下降,而Vimentin表达上调;而转染siZEB2后,各项指标则表现出相反的表达趋势。   结论   ZEB2 3'UTR可以通过调控miR-200a/b/c的表达调控胃癌细胞EMT过程,调节肿瘤的侵袭与转移。      

长链非编码RNA FAM201A靶向miR-488-3p对胃癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

  目的  探讨长链非编码RNA（lncRNA）序列相似性家族201-成员A（family with sequence similarity 201-member A，FAM201A）靶向miR-488-3p对胃癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响。  方法  选取2014年1月至2017年1月间于莱阳中心医院确诊并进行胃癌根治性切除手术（术前均未经过放疗和化疗治疗）的胃癌患者的肿瘤组织标本和配对的非癌性黏膜标本63例，采用qRT-PCR检测63例胃癌组织和与其对应的癌旁组织中FAM201A及miR-488-3p的表达水平。构建抑制FAM201A表达的MGC803胃癌细胞株。四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用不同辐射强度（0、2、4、6和8 Gy）射线照射抑制FAM201A表达的MGC803细胞，克隆形成实验检测细胞存活分数，绘制单击多靶模型拟合曲线。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证FAM201A和miR-488-3p的靶向关系。  结果  与癌旁组织相比，胃癌组织中FAM201A的表达水平显著升高，miR-488-3p的表达水平显著降低。抑制FAM201A可显著抑制MGC803细胞增殖、迁移和侵袭，促进其凋亡，增加MGC803细胞的放射敏感性。FAM201A可靶向负性调控miR-488-3p表达。抑制miR-488-3p能够逆转抑制FAM201A对细胞MGC803增殖、凋亡、迁移侵袭和放射敏感性的影响。  结论  抑制lncRNA FAM201A通过靶向miR-488-3p可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进胃癌细胞凋亡，并增加其放射敏感性。FAM201A有望成为胃癌的新型分子靶点。      

miR-149通过靶向FOXM1基因抑制前列腺癌细胞的生长和侵袭

  目的  探讨miR-149对前列腺癌细胞生长和侵袭的影响,并研究miR-149的靶基因及其功能。  方法  利用实时荧光定量PCR检测前列腺癌和癌旁组织miR-149和FOXM1 mRNA表达水平。在人前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞中瞬时转染miR-149模拟物和阴性对照miRNA,运用平板克隆形成和Transwell侵袭实验检测细胞生长和侵袭。在细胞中分别转染miR-149靶基因FOXM1的siRNA和siRNA阴性对照,利用Western blot检测FOXM1蛋白表达情况,并检测细胞的克隆形成和侵袭能力。  结果  在前列腺癌中miR-149低表达（P < 0.01）,FOXM1 mRNA高表达（P < 0.01）。与对照组细胞相比,转染miR-149模拟物的PC3和DU145细胞克隆数目减少（P < 0.01）,发生侵袭的细胞减少（P < 0.01）;FOXM1蛋白水平在转染miR-149模拟物的PC3（P < 0.01）和DU145细胞（P < 0.05）中较对照组细胞降低。转染FOXM1 siRNA的PC3和DU145细胞中FOXM1蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低（P < 0.01）。  结论  miR-149通过靶向FOXM1抑制前列腺癌细胞生长和侵袭,发挥着抑癌基因的作用,可作为前列腺癌分子治疗的有效靶点。      

CTHRC1增强结直肠癌细胞侵袭能力促进结直肠癌转移的机制研究

  目的  探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1（collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1）对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。  方法  采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与基因CTHRC1的3'UTR区之间是否相互结合。采用Western blot法检测6株不同结直肠癌细胞系及临床结直肠癌配对标本中基因CTHRC1的蛋白表达水平。构建稳定转染基因CTHRC1的结直肠癌细胞系;CCK-8、Transwell等方法检测稳定转染目的基因后结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力的变化。  结果  在配对结直肠癌患者组织中发现,正常组织中miR-520d-5P的表达高于癌组织（P < 0.001）,基因CTHRC1的表达趋势相反（P < 0.001）,且两者的表达呈负相关。通过miR-520d-5P模拟类似物mimics及抑制物inhibitor的瞬时转染实验发现其对基因CTHRC1的蛋白表达有负向调节作用。双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与CTHRC1的3'UTR之间存在相互结合。稳定转染基因CTHRC1后,细胞的增殖能力下降,但侵袭能力提高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。在配对结直肠癌标本中,原发癌组织中基因CTHRC1的蛋白表达水平高于正常组织（P=0.003）。  结论  miR-520d-5P对基因CTHRC1蛋白表达具有负调控作用。基因CTHRC1可以增强结直肠癌细胞的侵袭能力,抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且与miR-520d-5P具有临床相关性。      

miR-30通过调节CD90表达抑制肝细胞肝癌

  目的  miRNA能通过转录后调节靶基因的表达量,并在致癌过程中发挥抑癌或促癌作用。研究发现miR-30家族在人类肿瘤中起着重要作用,并参与维持干细胞特性的上皮细胞间质化过程,本研究主要识别miR-30家族与肝细胞肝癌的关系。  方法  应用qRT-PCR实验方法检测93例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁正常组织中miR-30c,miR-30b和miR-30e表达水平,另对121例肝细胞肝癌患者癌组织进行miR-30家族的表达及CD90免疫组织化学表达检测,分析miR-30家族与CD90在肝细胞肝癌中的相关性。  结果  本研究发现miR-30c(P < 0.001)、miR-30b(P=0.004)和miR-30e(P < 0.001)与癌旁正常组织相比,癌组织中表达显著下调。CD90蛋白在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.007)。MiR-30c(P=0.032)和miR-30e(P=0.015)在CD90阴性表达的患者中表达水平显著高于CD90阳性表达的患者。  结论  miR-30家族在肝细胞肝癌中可作为抑癌miRNA,并通过调节CD90蛋白来发挥这一作用。      

MicroRNA-124靶向调控caveolin-1介导肝癌细胞恶性行为的研究

目的:检测miR-124、caveolin-1在肝癌组织及细胞系中的表达,探讨miR-124靶向调控caveolin-1对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:回顾性分析2012年8月至2014年7月32例于大连医科大学附属第一医院收治的行肝癌切除术患者的临床资料和标本,通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌、癌旁组织以及肝癌细胞系中miR-124、caveolin-1的表达;通过靶基因预测及双荧光素酶报告分析miR-124与caveolin-1的靶向关系;通过qRT-PCR、Western blot检测miR-124对caveolin-1表达的调控;分别用CCK8、平板克隆及Transwell检测细胞增殖和侵袭能力;通过绘制生存曲线,分析miR-124及caveolin-1表达与临床肝癌患者预后的相关性。结果:miR-124在肝癌组织中的表达低于癌旁组织,在高转移肝癌细胞MHCC97H中的表达低于低转移肝癌细胞MHCC97L,而caveolin-1呈现相反的趋势;caveolin-1为miR-124的靶基因,调控miR-124可影响caveolin-1水平;MHCC97H中导入miR-124 mimic可抑制该细胞增殖及侵袭能力,而上调caveolin-1促进该细胞增殖及侵袭能力;敲低低转移肝癌细胞MHCC97L中miR-124水平可增强该细胞的增殖及侵袭能力,下调caveolin-1抑制该细胞的增殖及侵袭能力;肝癌组织miR-124高水平、caveolin-1低水平的患者5年生存时间显著长于相应的miR-124低水平组、caveolin-1高水平组。结论:miR-124通过靶向调控caveolin-1介导肝癌的增殖与侵袭。     

miR-182-5p在膀胱癌中的表达及其机制

  目的  探究miR-182-5p及FOXO3在膀胱癌中的表达意义及其参与膀胱癌可能的机制。  方法  收集2017年6月至2019年6月64例于郑州人民医院行手术切除膀胱癌患者的组织标本和临床资料,采用RT-qPCR检测膀胱癌组织及膀胱癌细胞中的miR-182-5p和FOXO3表达,按照其表达水平分为miR-182-5p高表达组和miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组和FOXO3低表达组,采用Western blot实验检测FOXO3蛋白的表达。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-182-5p和FOXO3与膀胱癌患者预后的相关性。采用双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与FOXO3的靶向关系,并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot检测转染miR-182-5p抑制剂对FOXO3表达的影响;分别采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术检测转染miR-182-5p抑制剂对T24细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。  结果  miR-182-5p在膀胱癌组织中的表达量为2.27±0.66,显著高于癌旁组织的1.04±0.36,两者比较差异具有统计学意义（P<0.001）,与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05）;FOXO3在膀胱癌组织中低表达,与肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（P<0.05）;miR-182-5p高表达组、FOXO3低表达组的患者的生存率显著低于miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组（P=0.038,P=0.004）。T24细胞中miR-182-5p高表达（P<0.05）。抑制miR-182-5p上调FOXO3表达,抑制miR-182-5p表达能抑制T24细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡（P<0.05）。  结论  miR-182-5p在膀胱癌组织中高表达,而FOXO3低表达。miR-182-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,抑制其凋亡,可能与负调控FOXO3有关。      

敲低EZH2表达抑制人舌鳞状细胞癌侵袭迁移能力的研究

  目的  探究Zeste同源增强子（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）能否调控miR-200b/a/429的表达,进而影响人舌鳞状细胞癌的侵袭和转移。  方法  利用小干扰RNA（siRNAs）敲低舌鳞状细胞癌SCC15和UM-1细胞系中EZH2的表达。Western blot法检测EZH2和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平。q-PCR检测敲低EZH2后miR-200b/a/429的表达水平。Transwell实验和划痕实验检测舌鳞癌细胞的侵袭和迁移能力。最后通过免疫荧光实验观测细胞骨架的改变。免疫组织化学法和q-PCR检测人舌鳞状细胞癌标本中EZH2的表达。  结果  siRNAs能够显著地敲低EZH2表达,进而使miR-200b/a/429表达水平升高;E-cadherin表达水平升高,而N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平下降;si-EZH2组肿瘤细胞的侵袭和迁移能力明显降低。淋巴结转移阳性的人舌鳞状细胞癌标本中EZH2表达水平高于淋巴结转移阴性（P < 0.01）。  结论  EZH2通过抑制miR-200b/a/429的表达水平,进而促进了人舌鳞状细胞癌的侵袭和迁移。