中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖（LPS）抑制人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响，并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐（MTT）比色试验和透射电子显微镜技术（TEM）。结果LPS浓度为100μg／ml时明显抑制细胞活性，同时加入LPS和黄芩苷后，细胞活性明显增强（P〈0．05）。100μg／ml LPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤，特别是线粒体损伤严重，同时加入LPS扣黄芩苷（10μg／ml）后，与LPS组比较，超微结构损伤减轻，细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖，对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用，其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。     

脂多糖对人牙周膜细胞COX-2蛋白表达的影响

目的：观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响,探讨牙周病发生发展过程中脂多糖（LPS）与COX-2的关系。方法：使用不同浓度LPS刺激体外培养人牙周膜成纤维细胞,免疫组织化学法检测细胞COX-2蛋白表达,灰度分析并进行统计学处理。结果：LPS组COX-2蛋白表达明显高于对照组,并且LPS浓度越高,COX-2表达越强。结论：LPS能够诱导人牙周膜成纤维细胞COX-2表达上调,随着LPS刺激浓度增高,COX-2表达逐渐增强,这一机制很可能在牙周炎发生发展过程中扮演重要角色。     

缺氧环境对牙周膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究缺氧环境对牙周膜成纤维细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用氯化钴模拟法构建人牙周膜成纤维细胞缺氧模型。观察缺氧条件下牙周膜成纤维细胞形态变化,采用CCK-8检测细胞增殖情况,并用Western Blot方法检测凋亡相关因子p53、Bcl-2及caspase-7的表达变化。结果随着时间延长,缺氧组细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞浆浓缩,细胞存活率降低。 Western Blot 结果显示缺氧组 p53、Bcl-2及caspase-7蛋白表达量随着缺氧时间延长逐渐升高。缺氧组p53蛋白、caspase-7表达高于常氧组,Bcl-2表达低于常氧组。结论缺氧环境可影响牙周膜成纤维细胞形态、增殖活性及凋亡相关蛋白的表达。     

羧甲基壳聚糖对LPS干预人牙周膜成纤维细胞表达PGE2的影响

目的:观察脂多糖(LPS)干预下,不同浓度羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)表达前列腺素E2(PGE2)的影响. 方法:取冻存的人牙周膜成纤维细胞进行复苏培养,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的CMC进行干预,采用免疫组织化学方法检测PGE2在HPDLFs中的表达变化.结果:不同浓度CMC能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的PGE2,随CMC浓度的增加PGE2的表达量呈逐渐减弱趋势(P<0.05). 结论:CMC可能对LPS诱导的HPDLFs炎症损伤过程中表达PGE2有重要的抑制作用.     

低能量激光照射对脂多糖介导人牙周膜成纤维细胞炎性损伤的保护作用

研究低能量激光照射（LLLI）对脂多糖（LPS）介导人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）炎性损伤的影响及机制。     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

缺氧/复氧对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达环氧合酶-2、前列腺素E2的影响

目的 观察缺氧/复氧对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达环氧合酶-2、前列腺素E2的影响。 方法 用1 μg/mL脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞,在1%缺氧浓度下培养6、12、24、48 h,同时分别在缺氧刺激后复氧24 h,用Western Blotting 和ELISA检测环氧合酶-2和前列腺素E2的表达。 结果 缺氧组环氧合酶-2的表达高于对照组,并在24 h达到高峰,复氧组环氧合酶-2的表达较缺氧组和对照组均增加;前列腺素E2的表达在复氧组高于对照组与缺氧组,但在缺氧组和对照组之间无统计学差异。 结论 缺氧能影响脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞环氧合酶-2的表达,复氧能增强环氧合酶-2和前列腺素E2的表达。缺氧/复氧对环氧合酶-2和前列腺素E2表达的影响在牙周炎的发展中有重要影响。     

尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的实验研究

目的：了解在体外培养环境中,尼古丁对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响。方法：将尼古丁作用于培养至第6代的人牙周膜成纤维细胞后,通过四唑盐比色法、流式细胞仪研究尼古丁能否诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡。结果：四唑盐比色法证实当尼古丁浓度在0.05～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的抑制呈浓度依赖性,流式细胞仪分析提示,当尼古丁浓度在0.5～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的凋亡率呈浓度依赖性。结论：尼古丁对人牙周膜成纤维细胞有一定的毒性作用,通过抑制牙周膜成纤维细胞增殖和诱导凋亡加重对周膜的破坏。     

兔脂肪源干细胞与牙周膜成纤维细胞共培养的实验研究

目的:研究脂肪源干细胞能否与牙周膜成纤维细胞直接共培养,在共培养状态下,脂肪源干细胞能否促进牙周膜成纤维细胞胶原特异基因的表达。方法:分别从新西兰白兔皮下脂肪和牙周膜组织中分离出脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞,体外常规培养;将两种细胞等量混合共培养,利用光镜和F-actin染色标记细胞骨架的方法观察共培养细胞的形态变化,并与单纯培养的细胞比较;利用DAPI染色标示细胞核细胞计数法检测共培养细胞的增殖情况;利用定量PCR法检测特异基因I型胶原在单纯培养和共培养细胞中的表达。结果:脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞能直接共培养;共培养细胞形态近似牙周膜成纤维细胞;共培养对细胞增殖无明显影响;脂肪源干细胞可提高牙周膜成纤维细胞I型胶原基因的表达。结论:脂肪源干细胞可与牙周膜成纤维细胞共培养,并促进牙周膜成纤维细胞的胶原分泌。     

茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜成纤维细胞 MMP-1、MMP-2表达的影响

目的：观察茶多酚（TP）在脂多糖（LPS）介导下对人牙周膜成纤维细胞（HPDLCs）MMP-1、MMP-2表达的影响。方法：体外培养 HPDLCs,在培养液中添加 TP（200μg/ml）作用于脂多糖（100μg/ml）介导的 HPDLCs,培养24、48、72 h,ELISA法检测 HPDLCs 分泌 MMP-1和 MMP-2的量。荧光实时定量 PCR 法检测 HPDLCs 中 MMP-1和 MMP-2 mRNA 的表达。结果：在 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2分泌量和基因表达升高,TP 可抑制 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2表达。结论：TP 可抑制 LPS 介导的人牙周膜细胞的胶原降解。