长链非编码 RNA人类白细胞抗原复合体 18通过微 RNA-497-5p/细胞周期蛋白 E1轴调节弥漫性大 B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的探讨长链非编码 RNA人类白细胞抗原复合体 18(lncRNA HCG18)调控微 RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白 E1(CCNE1)轴对弥漫性大 B细胞淋巴瘤( DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测 2018年 5月至 2021年 5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院 DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常 B细胞永生化细胞 HMy2.CIR、DLBCL细胞系 SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中 HCG18、miR-497-5p表达及 CCNE1蛋白表达,将 OCI-LY8细胞分为 Ct组(正常培养的 OCI-LY8细胞)、 pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、 pcD? NA-HCG18组(细胞转染 HCG18过表达物)、 si-NC组(细胞转染小干扰 RNA阴性对照)、 si-HCG18组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA)、 si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA和抑制物阴性对照)、 si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA和 miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡, Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测 CCNE1、增殖细胞核抗原( PCNA)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证 HCG18与 miR-497-5p、miR-497-5p与 CCNE1的关系。结果在 DLBCL淋巴组织和细胞中, HCG18、CCNE1蛋白高表达, miR-497-5p低表达,且在 OCI-LY8细胞中 HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高, miR-497-5p表达下调最多( P<0.05)因此,以 OCI-LY8细胞进行后续研究,与 si-NC组比较, si-HCG18组 HCG18(0.26±0.03比 1.01±0.01)、 CCNE1蛋白( 0.45±0.03比,1.44±0.19)表达降低, miR-497-5p(1.95±0.14比 1.03±0.02)表达升高( P<0.05)与 pcDNA组比较, pcDNA-HCG18组 HCG18(1.96±0.23比 1.02±0.01)、 CCNE1蛋白( 2.33±0.21比 1.42±0.18)表达升高, miR-497-5,p(0.28±0.02比 1.02±0.02)表达降低( P<0.05),与 siHCG18组、 si-HCG18+inhibitor NC组比较, miR-497-5p表达降低( 1.21±0.09比 1.95±0.14、1.94±0.13)CCNE1蛋白( 0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调( P<0.05)沉默 HCG18可抑制 OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及 PCNAMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及 Bax蛋白表达,而上调 HCG18相反趋势,下调 miR-497-5p逆转了沉默 HCG18对 OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响, HCG18靶向调控 miR-497-5p/CCNE1。结论沉默 HCG18可能通过调控 miR-497-5p/CCNE1抑制 OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。     

白皮杉醇调控miR-106b-5p/RUNX3轴对宫颈癌细胞迁移及侵袭的影响

目的 探究白皮杉醇（PIC）调控微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/RUNT相关转录因子3(RUNX3)轴对宫颈癌（CC）细胞迁移及侵袭的影响。方法 使用不同浓度PIC(0、20、40、80和160μmol/L)培养液处理人CC Hela细胞,通过CCK-8法检测PIC对细胞增殖活力的影响,以确定PIC最佳使用浓度。将Hela细胞分为Control组、PIC组、PIC+NC mimics组、PIC+miR-106b-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor+siRNA组及miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组。实时荧光定量PCR检测各组Hela细胞miR-106b-5p表达水平;Transwell法检测各组Hela细胞迁移及侵袭能力;Western blot法检测各组Hela细胞中RUNX3、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-106b-5p与RUNX3靶向关系。结果 Hela细胞增殖活力随着PIC处...     

miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子1(SIRT1)基因的靶向关系。方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2细胞,将不同质粒转染到HepG2细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1)。MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1及FABP5表达水平。生物信息预测...     

微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微小 RNA-525-5p通过靶向 RECQ样蛋白 5调控乳腺癌放射敏感性

目的探讨微小 RNA-525-5p(miR-525-5p)对乳腺癌细胞辐射照射敏感性的影响及机制。方法该研究起止时间为 2019年 6月至 2020年 6月,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A均购自美国菌种保藏中心。运用 qRT-PCR法检测人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A中 miR-525-5p的 mRNA的表达;将 miR-525-5p模拟物( miR-525-5p mimics)阴性对照( miR-NC)组(转染 miR-NC)、 miR-525-5p组(转染 miR-525-5p mim. ics)、 RECQL5小干扰 RNA阴性对照( si-NC)组(转染 si-NC)、 RECQL5小干扰 RNA(si-RECQL5)组(转染 si-RECQL5)、 miR-525-5p+RECQL5过表达空载体( pcDNA)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA)、 miR-525-5p+RECQL5过表达载体( pcDNA-REC. QL5)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA-RECQL5),均用脂质体法转染至 MDA-MB-231细胞; Western blotting检测细胞中 RECQ样蛋白 5(RECQL5)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;克隆形成实验检测细胞的存活分数。结果与非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A相比,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474中 miR-525-5p表达［ 0.28±0.02,0.33±0.02,0.42±0.03比 1.01±0.08］显著降低, RECQL5 mRNA和蛋白表达［ 1.68±0.15,1.58±0.12,     

miR-10b-5p通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性★

目的 探讨miR-10b-5p在乳腺癌细胞放疗敏感性中的作用及相关机制。方法 采用qPCR和Western blotting检测正常乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231中miR-10b-5p mRNA、SUFU mRNA和蛋白的表达。在MDA-MB-231细胞中转染miR-10b-5p inhibitor对miR-10b-5p进行敲减，6 Gy ⁶⁰Co γ-射线照射2 h，分别采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡水平；双荧光素酶报告实验验证靶基因SUFU，回补实验验证miR-10b-5p是否通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性。结果 3种乳腺癌细胞系中miR-10b-5p的表达均显著高于正常乳腺细胞MCF-10A（P<0.05）。与miR-NC组相比，miR-10b-5p inhibitor组细胞增殖水平明显下降（P<0.05），凋亡水平显著上升（P<0.05）。敲减miR-10b-5p可增加野生型SUFU 3''UTR的荧光强度（P<0.05），而对突变型SUFU 3''UTR的荧光强度无明显影响（P>0.05）。此外，miR-10b-5p inhibitor组SUFU蛋白表达水平显著高于miR-NC组（P<0.05）。与miR-NC+si-NC组相比，miR-10b-5p inhibitor+si-NC组细胞增殖水平显著降低（P<0.05），miR-10b-5p inhibitor+si-SUFU#2组细胞增殖水平明显回升，且高于miR-10b-5p inhibitor+si-NC组（P<0.05）。结论 乳腺癌细胞中miR-10b-5p呈高表达，敲减miR-10b-5p可增强乳腺癌细胞对放疗的敏感性，其机制可能与靶向抑制SUFU相关。     

黄芪通过微小 RNA-133a抑制 Janus激酶 /信号转导和转录激活因子信号通路抑制膀胱癌的迁移和侵袭

目的探讨黄芪对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 2019年 8月至 2020年 2月,从美国模式培养物研究所( ATCC)购入膀胱癌 T24细胞,体外培养并分为对照( NC)组、黄芪组、 miR-133a模拟物( mimic)阴性对照( miR-NC)组、 miR-133a mimic(miR-133a)组、 miR-133a抑制剂( inhibitor)阴性对照( anti-miR-NC)组、 miR-133a inhibitor(anti-miR-133a)组、芪+anti-miR-NC组、黄芪 +anti-miR-133a组、黄芪 +anti-miR-133a+AG490组。蛋白质印迹法( western blotting)检测基质金属蛋白黄酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)磷酸化 Janus激酶 1(p-JAK1)、磷酸化信号转导和转录激活因子 6(p-STAT6)蛋白表达; Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光、定量 PCR(RT-qPCR)检测 miR-133a表达水平。结果与对照组相比,黄芪组 MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低,细胞迁移［(81.42±8.05)比( 175.43±16.02)］和侵袭［(71.23±8.01)比( 142.55±14.03)］数量降低, miR-133a表达水平［( 2.36±0.21)比( 1.00±0.11)］升高, p-JAK1［( 0.12±0.01)比( 0.55±0.04)］、 p-STAT6［( 0.08±0.01)比( 0.38±     

miR-671-5p调控TIPE2对肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-671-5p调控肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2(TIPE2)对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响。方法 将HPAEpiC细胞分为Ctrl组、SP组、inhibitor NC组、miR-671-5p inhibitor组、miR-671-5p inhibitor+si-NC组、miR-671-5p inhibitor+si-TIPE2组,Ctrl组为未经任何处理的HPAEpiC细胞,SP组为未转染只用SP处理24 h的HPAEpiC细胞,其他组均转染对应物48 h后,再加入SP处理24 h。qRT-PCR检测miR-671-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA试剂盒检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;western blot检测细胞中TIPE2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-671-5p与TIPE2的关系。结果 与Ctrl组比较...     

槲皮素通过调控GAS5/miR-18b-5p轴抑制神经内分泌肿瘤细胞活性的研究

目的 探讨槲皮素抑制胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NEN)的作用机制。方法 将人胰腺神经内分泌瘤细胞BON-1细胞随机分为对照组、槲皮素组(80μmol·L^-1槲皮素)、槲皮素+si-NC组(转染si-NC+80μmol·L^-1槲皮素)、槲皮素+si-生长抑制特异性基因5(GAS5)组(转染si-GAS5+80μmol·L^-1槲皮素)。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA相对表达水平,用荧光原位杂交(FISH)实验检测细胞中GAS5和miR-18b-5p的阳性表达情况。结果 双荧光素酶报告基因结果发现,GAS5与miR-18b-5p靶向结合。对照组、槲皮素组、槲皮素+si-NC组、槲皮素+si-GAS5组细胞的GAS5表达水平分别为1.00±0.13、1.72±0.19、1.78±0.14和1.16±0.11,miR-18b-5p表达水平分别为1.00±0.15、0.67±0.08、0.72±0.06和0.95±0.11,Bax m...     

芬太尼通过 ILF3-AS1/miR-132对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨芬太尼对卵巢癌细胞生长和转移的影响及分子机制。方法 2018年 8月至 2019年 10月,体外培养卵巢癌细胞 A2780,用浓度分别为 0、0.5、5、50、500 ng/mL的芬太尼处理,作为不同浓度芬太尼处理组。将过表达的白细胞介素增强结合因子 3反义 RNA1(ILF3-AS1)(pcDNA3.1-ILF3-AS1、对照 pcDNA3.1)、抑制微小 RNA(miRNA/miR)-132表达(抗 -miR-132、对照 anti-miR-NC)的载体分别转染 A2780细胞,并以 500 ng/mL芬太尼处理,记为芬太尼 500+pcDNA3.1-ILF3-AS1组、芬太尼 500+pcDNA3.1组、芬太尼 500+anti-miR-132组、芬太尼 500+anti-miR-NC组。将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-ILF3-AS1、si-NC、si-ILF3AS1转染至 A2780细胞中,记为 pcDNA3.1组、 pcDNA3.1-ILF3-AS1组、 si-NC组、 si-ILF3-AS1组。四甲基偶氮唑盐比色法( MTT)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数; Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 ILF3-AS1和 miR-132的表达水平;荧光素酶报告实验检测 ILF3-AS1和 miR-132的靶向关系。结果与 0 ng/mL芬太尼处理组相比, 5、50、500 ng/mL的芬太尼处理的 A2780中 miR-132表达水平显著升高［( 1.39±0.13)、(1.68±0.17)、(2.34±0.23)比( 1.00±     

lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制研究

目的：探讨lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制。方法：收集30例类风湿关节炎的滑膜组织；培养类风湿关节炎滑膜细胞MH7A，实验分为siNC组、si-HOTAIR组、miR-NC组、miR-206 mimic组、si-HOTAIR+NC inhibitor组、si-HOTAIR+miR-206 inhibitor组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOTAIR、miR-206表达水平。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测细胞CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测HOTAIR与miR-206靶向结合关系。结果：与健康对照组比较，类风湿关节炎患者HOTAIR表达水平明显上调，miR-206表达水平明显下调（P<0.05）。与si-NC组比较，si-HOTAIR组HOTAIR表达水平明显下调，细胞存活率明显下调，细胞凋亡率明显上调（P<0.05）。与miR-NC组比较，miR-206 mimic组miR-206表达水平明显上调，细胞存活率明显下...     

肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1(TPT1-AS1)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和作用机制。方法收集于 2017年1月至 2018年12月在信阳市中心医院心胸外科行手术治疗的 46例肺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测组织中 TPT1-AS1和微小 RNA-671-5p(miR-671-5p)表达, Pearson相关性分析肺癌组织中 TPT1-AS1和miR671-5p表达的相关性。同时,于2019年5月至 2020年4月期间,通过体外培养肺癌细胞 A549,双荧光素酶报告基因实验验证了细胞中 TPT1-AS1和 miR-671-5p调控关系。另将 A549细胞分为对照组、小干扰 RNA阴性序列(si-NC)组、 TPT1-AS1小干扰 RNA(si-TPT1AS1)组、 si-TPT1-AS1+抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)组和 si-TPT1-AS1+miR-671-5p抑制剂(anti-miR-671-5p)组,甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹实验检测细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)基质金属蛋白酶(MMP)-2和 MMP-9蛋白表达。结果肺癌组织中 TPT1-AS1表达量较癌旁组织显著升高［(1.88±0.12)(1.01±0.08)、P<0.05］,miR-671-5p表达量较癌旁组织显著降低［(0.45±0.04)(1.01±0.06)P<0.05］。Pearson相关性分析显示,肺癌组比织中TPT1-A,S1和 miR-671-5p呈负相(r= 0.63,P<0.05)。TPT1-AS1在A5比49细胞中负调,控 miR-671-5p表达。 si-TPT1-AS1组 A549细胞存活率、迁移数和侵袭数分别为(关53.24±2.81)%、(63.11±6.51)个和( 33.78±3.23)个,均低于 si-NC组［分别为( 98.78±2.57)%、(147.44±11.08)个和(101.67±9.95)个,均P<0.05］。CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白在 si-TPT1-AS1组的表达量分别为(0.43±0.05)(0.21±0.03)(0.43±0.04),较si-NC组均降低［分别为(0.86±0.04)(0.55±0.05)(0.48±0.07)均P<0.05］。si-TPT1-AS1+anti-miR-671-、5p组A549细、胞存活率、迁移数和侵袭数及 CyclinD1、MMP-2和M、MP-9蛋白表、达分别为(8,5.43±2.94)%、(125.78±10.59)个、(88.78±7.19)个、(0.75±0.03)、(0.48±0.03)、(0.43±0.04),较 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组均升高［分别为(54.36±2.95)%、(63.78±6.48)个、(33.56±3.54)个、(0.41±0.03)、(0.22±0.03)、(0.21±0.04),均P<0.05］。对照组与 si-NC组、 si-TPT1-AS1组与 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中 TPT1-AS1表达升高, miR-671-5p表达降低,且两者呈负相关。 TPT1-AS1可能通过靶向下调 miR-671-5p的表达促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

粗糠柴毒素上调微小 RNA-204-5p对脂多糖所致心肌损伤的保护机制研究

目的探讨粗糠柴毒素对脂多糖( LPS)所致心肌损伤的影响及其保护机制。方法该研究自 2018年 9月至 2019年 4月,用终浓度为 10 mg/L的 LPS刺激 HCM、AC16心肌细胞 6h,分别加入终浓度为 0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L、2.0 μmol/L粗糠柴毒素( Rottlerin)再处理 12 h后分别记为 LPS+0.5 μmol/L Rottlerin组、 LPS+1.0 μmol/L Rottlerin组、 LPS+1.5 μmol/L Rottler. in组、 LPS+2.0 μmol/L Rottlerin组,以单纯 10 mg/L LPS处理的为 LPS组,以未经粗糠柴毒素和 LPS处理的为对照组。将模拟物阴性对照( miR-NC)、微小 RNA-204-5p模拟物( miR-204-5p)、抑制剂阴性对照( anti-miR-NC)、 miR-204-5p抑制剂( anti-miR-204-5p)分别转染至未经任何处理的 HCM细胞中,记为 miR-NC组、 miR-204-5p组、 anti-miR-NC组、 anti-miR-204-5p组。将 miR-NC, miR-204-5p转染至单纯 10 mg/L LPS处理的 HCM细胞中,记为 LPS+miR-NC组, LPS+miR-204-5p组。将 anti-miR-NC、anti-miR-204-5p、过表达空载体( pcDNA3.1)、高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)过表达载体( pcDNA3.1-HMGB1)转染至 2.0 μmol/L粗糠柴毒素和 10 mg/L LPS处理 HCM细胞中,记为 LPS+Rottlerin+anti-miR-NC组、 LPS+Rottlerin+anti-miR-204-5p组、 LPS+Rottlerin+pcD. NA3.1组、 LPS+Rottlerin+pcDNA3.1-HMGB1组。 MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 miR-204-5p和 HMGB1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与对照组相比, LPS组心肌细胞 HCM、AC16抑制率显著升高, HCM细胞中 miR-204-5p(0.30±0.03比 1.99±0.08)和 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)表达显著下降, Bax、HMGB1(1.04±0.10比 0.26±0.02)表达和凋亡率［( 27.79±2.23)%比(5.61±0.05)%］显著升高;相较于 LPS组, LPS+0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L Rottlerin组 HCM、AC16细胞抑制率显著降低, HCM细胞中 miR-204-5p(0.46±0.04、0.54±0.05、0.76±0.04、0.88±0.07比 0.30±0.03)和 Bcl-2表达显著升高, Bax、HMGB1(0.93±0.09、0.80±0.08、0.62±0.06、0.53±0.05比 1.04±0.10)表达和凋亡率［( 22.61±2.14)%、(20.06±1.94)%、(11.71±1.01)%、(9.16±1.00)%比(27.79±2.23)%］显著降低,呈浓度依赖型。与 LPS+miR-NC组相比, LPS+miR-204-5p组 HCM细胞中 miR-204-5p(0.86±0.07比 0.42±0.03)和 Bcl-2表达升高, Bax表达及细胞抑制率和凋亡率［( 15.76±1.32)%比( 27.26±2.25)%］降低。 miR-204-5p可靶向调控 HMGB1;抑制 miR-204-5p表达、过表达 HMGB1均能逆转 Rottlerin对 LPS作用的心肌细胞 HCM的保护作用。结论粗糠柴毒素对 LPS所致的心肌细胞损伤有保护作用,其机制主要是通过上调 miR-204-5p表达,进而抑制 HMGB1的表达发挥作用。     

长链非编码 RNA脑源性神经营养因子反义 RNA靶向微小 RNA-495-3p调控脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)脑源性神经营养因子反义 RNA(BDNF-AS)对脂多糖( LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法该研究起止时间为 2018年 12月至 2019年 12月。用 1 mg/L的 LPS处理大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383细胞作为 LPS组;正常培养的细胞作为 Con组。将 BDNF-AS小分子干扰 RNA(si-BDNF-AS)及其阴性对照( si-NC)、微小 RNA(miR)-495-3p及其阴性对照( miR-NC)转染至 NR8383细胞中再用 1 mg/L的 LPS处理,记为 LPS+siBDNF-AS组、 LPS+si-NC组、 LPS+miR-495-3p组、 LPS+miR-NC组;将 si-BDNF-AS分别与 anti-miR-NC、anti-miR-495-3p共转染至 NR8383细胞中再用 1 mg/L的 LPS处理,记为 LPS+si-BDNF-AS+anti-miR-NC组、 LPS+si-BDNF-AS+anti-miR-495-3p组。实时荧光定量 PCR检测 lncRNA BDNF-AS和 miR-495-3p的表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素 -1β(IL-1β)肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)表、达;荧光素酶报告实验检测 BDNF-AS对 miR-495-3p的靶向关系。结果 LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞中 BDNF-AS高表达［( 1.00±0.06)比( 3.41±0.31)］,miR-495-3p低表达［( 1.02±0.07)比( 0.47±0.04)］IL-1β［( 22.14±2.25)ng/L比( 513.20±41.22)ng/ L］、 TNF-α［(184.33±18.65)ng/L比(1 125.65±110.36)ng/L］水平升高,细胞凋亡率［(,8.11±0.81)%比( 36.22±3.21)%］升高, Bax表达水平升高, Bcl-2表达水平降低( P<0.05)。抑制 BDNF-AS表达或过表达 miR-495-3p后, IL-1β［( 526.14±46.87)ng/L比     

微小 RNA-490-3p靶向 FK506相关蛋白 14表达抑制骨肉瘤 MG63细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨微小 RNA-490-3p(miR-490-3p)对骨肉瘤 MG63细胞侵袭、迁移的影响及其机制。方法 2019年 9月至 2020年 4月,从中科院上海细胞库购买人骨肉瘤细胞株 MG63进行体外培养,分为对照组(未转染)miR-NC组(转染 miR-NC)、 miR-490-3p组(转染 miR-490-3p mimics),miR-490-3p+pcDNA组(共转染 miR-490-3p mimics与空载体、)和 miR-490-3p+FKBP14组(共转染 miR-490-3p mimics与 FKBP14过表达载体),采用 RT-PCR检测 miR-490-3p表达, Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法检测钙黏蛋白 E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、上皮间质转化因子 Twist转录因子( Twist)和 FK506相关蛋白 14(FKBP14)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-490-3p和 FKBP14的靶向关系。结果与对照组比较, miR-490-3p组细胞中 miR-490-3p表达水平明显升高( 3.68±0.37比 1.02±0.10,P<0.05),而侵袭细胞数( 33.25±2.02比     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

调节性核糖核酸酶 1对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨调节性核糖核酸酶 1(Reg1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用及机制。方法 2018年 8月至 2020年 2月构建高糖诱导的 RGC-5视网膜神经节细胞损伤模型,实验分为四组: Con组(正常糖 +未转染的 RGC-5细胞)HG组(高糖 +未转染的 RGC-5细胞)、 pcDNA3-Reg1组(高糖 +转染 Reg1过表达质粒的 RGC-5细胞)、 pcDNA3-NC组(高糖 +转染对、照质粒的 RGC-5细胞)。实时荧光定量聚合酶链式反应检测 Reg1、白细胞介素( IL)-1β、IL-6、IL-12、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)的表达;蛋白质免疫印迹检测 Reg1、B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化的胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、磷酸化 p65(p-p65)、磷酸化核因子 κB抑制蛋白 α(p-IκBα)的表达;免疫荧光染色检测 Reg1、p-p65的表达; TUNEL染色检测凋亡水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中各炎性因子的含量。结果 Con组中 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 1.00±0.21、1.00±0.15、1.00±0.18,HG组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 2.49±0.36、3.86±0.42、3.17±0.39,pcDNA3-Reg1组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为6.77±0.72、8.18±0.67、6.30±0.51,pcDNA3-NC组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 2.75±0.40、3.59±0.38、2.85±0.34,HG组、 pcDNA3-NC组 Reg1相对荧光强度、 mRNA和蛋白质相对表达量高于 Con组,且低于 pcDNA3Reg1组( P<0.05)。 Con组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 1.73±0.22)%、1.00±0.28、1.00±0.20、1.00±0.17,HG组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 14.79±0.83)%、0.29±0.11、5.25±0.66、4.93±0.52,pcDNA3Reg1组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 3.77±0.34)%、0.58±0.43、2.51±0.45、2.58±0.33,pcDNA3-NC组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 14.55±0.90)%、0.21±0.14、5.14±0.59、4.77±0.46,Con组、 pcDNA3-Reg1组 TUNEL+细胞比例、 Bax、cleaved caspase-3蛋白质相对表达量低于 HG组、 pcDNA3-NC组,而 Bcl-2蛋白质相对表达量高于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。 Con组、 pcDNA3-Reg1组细胞 IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α mRNA相对表达量,及上清液蛋白质含量低于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。 Con组、 pcDNA3-Reg1组 p-p65相对荧光强度,及 p-p65、p-IκBα蛋白质相对表达量低于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。结论高糖状态下 RGC-5视网膜神经节细胞高表达 Reg1,上调 Reg1表达可以降低细胞凋亡及炎症,可能与抑制 NFκB信号通路活化有关。     

下调人类白细胞抗原复合体18靶向微小RNA-146b-5p对胶质瘤SHG44细胞迁移和侵袭的影响

目的研究下调长链非编码RNA (lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)对胶质瘤SHG44细胞迁移和侵袭的影响。方法以实时定量-PCR法检测胶质瘤SHG44、CHG-5和BT325细胞与正常胶质HEB细胞中HCG18基因表达,用SHG44细胞做后续实验。将SHG44细胞分成7组:空白对照组、第1转染组(转染shRNA control)、第2转染组(转染HCG18 shRNA)、第3转染组(共转染HCG18 shRNA、inhibitor control)、第4转染组(共转染HCG18 shRNA、miR-146b-5p inhibitor),第5转染组(转染mimics control)和第6转染组(转染miR-146b-5p mimics),均为100 pmol。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化。荧光素酶报告系统鉴定HCG18和miR-146b-5p靶向关系。结果 HCG18基因在胶质瘤SHG44、CHG-5、BT325细胞中表达水平分别为3.68±0.24,2.73±0.22和1.95±0.13,均高于正常胶质HEB细胞的1.00±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05),且胶质瘤SHG44细胞中HCG18表达水平最高。空白对照组、第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组细胞侵袭数目分别为156.32±12.58,155.80±13.97,99.76±8.52,100.20±9.63和146.16±10.58;迁移数目分别为196.74±15.52,199.86±16.39,148.13±13.28,150.89±10.76和181.72±12.39。第2转染组的上述指标与第1转染组相比,或第4转染组的上述指标与第3转染组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。经wt处理的第6转染组和第5转染组细胞荧光素活性分别为1.00±0.11和0.41±0.04,第6转染组与第5转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调长链非编码RNA HCG18靶向miR-146b-5p可抑制胶质瘤SHG44细胞侵袭和迁移。     

微 RNA-125、信号转导与转录活化因子 3对卵巢癌细胞的影响及靶向关系验证

目的检测微 RNA(miR)-125a、信号转导与转录活化因子 3(STAT3)在卵巢癌细胞中的表达水平，分析其对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，并验证两者的靶向关系。方法 2020年 1月至 2021年 12月，采用 qRT-PCR检测卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中 miR-125a、STAT3 mRNA水平。利用转染技术将 SKOV3细胞分为 miR-NC(miR-125a阴性对照组质粒)组、 miR-125a(miR-125a过表达质粒)组、 si-NC(沉默 STAT3阴性对照质粒)组、 si-STAT3(沉默 STAT3质粒)组、 miR-125a+si-NC和 miR-125a+si-STAT3组。 MTT实验、 Transwell实验和凋亡实验分别检测不同组间细胞的 OD值、穿膜细胞数和凋亡率。萤光素酶报告基因分析 SKOV3细胞中 miR-125a与 STAT3的靶向关系，蛋白质印迹法检测不同组间 STAT3蛋白表达情况。结果与 HOSEpiC细胞 miR-125a和 STAT3 mRNA水平( 1.00±0.15、0.54±0.08)相比， SKOV3、CAOV3和 PEO1细胞中 miR-125a水平(0.41±0.07、0.56±0.08、0.58±0.10)降低， STAT3 mRNA水平( 1.87±0.22、1.54±0.07、1.54±0.08)增加；选用 SKOV3细胞进行后续实验。与 miR-NC组相比， miR-125a组细胞增殖能力减弱、穿膜细胞数降低、凋亡率增加。与 si-NC组相比， si-STAT3组细胞增殖能力减弱、穿膜细胞数降低、凋亡率增加。与 miR-125a+si-NC组相比， miR-125a+si-STAT3组细胞增殖能力减弱、穿膜细胞数降低、凋亡率增加。 STAT3+miR-125a mimic组与 STAT3 WT组相比， STAT3蛋白表达较弱，且 miR-125a与 STAT存在靶向结合位点。结论卵巢癌细胞中 miR-125a的过表达可靶向 STAT3抑制 SKOV3细胞的增殖和侵袭并诱导细胞凋亡，发挥抗肿瘤活性。     

LncRNA TUG1通过调节miR-181b-5p/PDCD4轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调节miR-181b-5p/程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 采用高糖（25 mmol/L葡萄糖）在体外构建糖尿病心肌病（DCM）细胞模型。AC16细胞分为NG组、HG组、HG+sh-NC组、HG+sh-TUG1组、HG+miR-NC组、HG+miR-181b-5p组、HG+sh-TUG1+anti-miR-NC组、HG+sh-TUG1+anti-miR-181b-5p组、HG+miR-181b-5p+pcDNA组、HG+miR-181b-5p+pc-PDCD4组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力；乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒检测LDH释放总量；采用实时定量聚合酶链反应（q RT-PCR）检测TUG1、miR-181b-5p和PDCD4 mRNA表达；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测B细胞淋巴瘤2-相关X(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)和PDCD4蛋白表达；caspase-Glo3检测试剂盒评估casp...