孕妇HBV-DNA载量与胎儿宫内感染的关系

目的探讨孕妇血清中乙型肝炎病毒血清学标志物(HBVM)和DNA(HBVDNA)与胎儿宫内乙型肝炎病毒感染的关系。方法通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对60例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇的母血及产后新生儿外周血的乙型肝炎血清标志物和DNA进行检测。结果 60例HBsAg阳性孕妇血清中HBeAg和HBV DNA的检出率分别为25%(15/60),35%(21/60)。所生新生儿外周血中HBsAg,HBeAg和HBV DNA的检出率为13.3%、18.3%、3.3%。其中HBeAg和HBV-DNA阳性孕妇所生新生儿外周血HBsAg分别为40%和38%,显著高于HBeAg和HBV-DNA阴性者的4.4%和0(P0.01)。新生儿外周血中HBsAg阳性率随孕妇HBV DNA含量增加而增加。结论孕妇血清中HBeAg和HBV DNA阳性是胎儿宫内感染HBV的高危因素,胎儿宫内感染率随母血中HBV DNA含量增加而增加。     

母亲不同HBV感染状态所生新生儿树突状细胞亚群及功能研究

目的 探讨新生儿mDC、pDC频数及表面分子表达,以及母亲不同HBV感染状态对新生儿树突状细胞生物学特性的影响.方法 采集HBsAg阳性/HBeAg阳性HBV感染母亲、HBsAg阳性/HBeAg阴性HBV感染母亲以及HBV感染标志物阴性母亲所生新生儿脐带血、健康成人外周血,采用流式细胞仪检测mDC的频数及其CD86的表达、pDC的频数及其CD80、CD83、CD86表达、并采用FlowJo软件进行分析,比较各组间上述指标的差异.结果 分别采集HBsAg阳性/HBeAg阳性、HBsAg阳性/HBeAg阴性和HBV感染标志物阴性母亲所生新生儿脐带血14、12和13例,健康成人外周血7例.新生儿mDC频数(0.29±0.16)及其CD86阳性率(10.72±10.01)显著低于成年人(分别是0.81±0.17和32.13±7.46),(t=-7.86,P=0.00和t=-5.36,P=0.00)；新生儿pDC频数(0.15±0.07)以及pDC表面CD86/CD83阳性率(31.61±12.81,42.66±20.83)显著低于成年人(0.30±0.07;74.96±9.78;82.00±6.94),(t=-5.43,P =0.00;t=-8.49,P=0.00;t=-4.90,P=0.00).结论 新生儿脐带血mDC、pDC频数以及表面功能分子表达低于成人外周血,HBeAg可能降低生新生儿mDC表面CD86的表达.     

HBsAg阳性产妇所生新生儿的HBV血清标志物及HBVDNA的检测结果分析

目的 观察HBsAg阳性产妇所生新生儿血清乙型肝炎标志物及HBV DNA的表达.方法 对282例HBsAg阳性产妇所生283例（一例双胞胎）新生儿进行乙型肝炎病毒血清免疫标志物（五项）和血清HBV DNA检测.结果 283例新生儿乙型肝炎血清标志物表现为12种模式,以HBeAg、抗HBc阳性组合最多占48.41％（137/283）,其次为抗HBe、抗HBc阳性组合占22.26％（62/283）,HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性组合占12.37％（35/283）,含HBsAg阳性的有5种组合占16.61％（47/283）,未见五项全阴和单抗- HBs阳性者.血清HBV DNA≥1×103IU/mL者5例占1.77％.结论 HBsAg阳性产妇所生新生儿血清乙型肝炎标志物表现复杂,以HBeAg、抗HBc阳性组合为主.血清HBV DNA≥1×103IU/mL不多见.     

免疫干预后母婴传播乙肝病毒标记物分析

目的：分析免疫干预后乙肝阳性产妇与新生儿脐带血标本乙肝标志物,评价其临床价值。方法：对我院228例经免疫预防乙肝阳性产妇所生新生儿脐带血资料进行回顾性分析,比较产妇与其新生儿乙肝标志物模式。结果：新生儿脐带血HBsAg和（或）HBeAg阳性23例,宫内感染率10.1%;其中双阳组产妇61例,所娩新生儿脐带血HBsAg和（或）HBeAg阳性21例,宫内感染率34.4%;单阳组167例,所娩新生儿脐带血HBsAg阳性2例,宫内感染率1.2%,两组宫内感染发生率有显著性差异（P〈0.05）。结论：产妇和新生儿HBeAg阳性是宫内感染和HBV感染慢性化的危险因素;对产前孕妇、出身后新生儿进行免疫干预是阻断HBV母婴传播的有效手段。     

新生儿不同时期静脉血HBsAg含量对HBV母婴传播阻断失败的预测研究

目的探讨HBV慢性感染孕妇新生儿出生后不同时期静脉血HBsAg含量变化对ItBV母婴传播阻断失败的预测价值。方法以HBsAg、HBeAg双阳性、血清HBVDNA含量≥10^5拷贝／ml慢性HBV感染孕妇所娩新生儿150例为研究对象,出生后立即注射乙肝免疫球蛋白200Iu,并按0、1和6个月程序接种乙肝疫苗10～20μg。分别于新生儿出生时、生后1个月、生后7个月采取静脉血检测HBV血清学指标,分析新生儿不同时期静脉血HBsAg含量对HBV母婴传播阻断失败的预测。结果共有11例新生儿发生HBV母婴阻断失败。新生儿出生时、生后1个月、生后7个月HBsAg阳性率分别为41．26％、10．49％、7．69％,HBeAg阳性率分别为97．90％、65．75％、13．29％。以出生时I-IBsAg≥O．05和HBsAg≥1IU／ml预测HBV母婴传播阻断失败,阳性预测价值分别为18．64％和70％;生后1个月HBsAg〉~O．05和HBsAg≥1IU／ml的阳性预测价值分别为73．33％和100％。结论出生时静脉血HBsAg含量≥1IU／ml时应高度怀疑HBV母婴传播的失败。生后1个月HBsAg≥1IU／ml对母婴传播阻断失败有高度的预测价值,如何提高出生时和生后1个月静脉血HBsAg阳性新生儿的HBV感染阻断率是以后研究的重点。     

慢性乙型肝炎HBsAg，HBeAg和DNA变化的相关性研究

目的探讨HBeAg阳性慢性乙型肝炎IFN-a治疗中HBsAg、HBeAg和HBV—DNA含量变化的相关性。方法对HBeAg阳性慢性乙型患者,在人组后进行IFN-a3MU-5MU隔日皮下注射一次的抗病毒治疗,于治疗前和治疗中的每间隔3个月收集血清,用实时荧光定量PCR进行HBV-DNA含量检测,血清HBsAg、HBeAg含量采用美国Abbott微粒化学发光法检测试剂,ARCHITECHi2000检测。HBV-DNA含量的检测下线为5×10^2拷贝／ml。分析IFN治疗过程中血清HBV—DNA、HBeAg和HBsAg含量变化的相关性。结果人组患者228例,男性162例,女性66例,年龄14～60岁,平均30．94岁;治疗过程中HBV—DNA、HBeAg和HBsAg的含量均逐渐下降干扰素治疗前以及治疗期间HBsAg与HBeAg、HBsAg与HBV—DNA含量变化间无相关性（P〉0．05）;而血清HBeAg与HBV—DNA含量变化相关性有统计学意义（P〈0．05）;随着干扰素治疗时间的延长,HBeAg与HBV—DNA含量逐渐下降,二者变化趋势一致。结论干扰素治疗前及治疗期间,HBeAg与HBV—DNA含量变化密切相关,而HBsAg含量变化与HBeAg和HBV—DNA含量变化无相关性,干扰素治疗期间需对三指标同时检测。     

产妇脐带血、静脉血微量元素的含量分析

目的了解产妇脐带血、静脉血中的铜、锌、钙、镁、铁、铅、镉的含量情况以及两者之间的相关性.方法BH5100火焰原子吸收分光光度仪、BH2100钨舟(电热)原子化分光光度仪,用肝素抗凝的脐血、静脉血1ml取40μl加入专用稀释液进行检测.结果134例脐带血静脉血微量元素的含量分析呈偏态分布,直线相关分析:锌呈负相关(r=-0.091 P=0.296)无相关性.铁无显著性相关(r=0.078 P=0.371),铜(r=0.394 P=0.000),钙(r=0.301 P=0.000),镁(r=0.727 P=0.000),铅(r=0.455P=0.000),镉(r=0.458 P=0.000)均有相关性.结论134例脐带血中铜、锌、钙、铅、镉的含量低于静脉血,镁和铁的含量而高于静脉血,均有显著性差异(P＜0.05).     

替比夫定联合乙肝免疫球蛋白阻断HBV母婴传播疗效研究

目的 探讨替比夫定阻断HBV母婴垂直传播的疗效.方法 收集2007年11月至2009年6月在杭州市第六人民医院就诊的64例孕妇,将其分为对照组（36例）和治疗组（28例）,2组孕妇在妊娠第28、32和36周均肌注HBIG 200IU各1次,治疗组孕妇在孕28周时同时口服替比夫定,600 mg/d,观察2组新生儿HBV DNA载量和HB8Ag水平.结果 对照组所生新生儿HBsAg阳性率为30.56%（11/36）,治疗组所生新生儿HBsAg阳性率为7.14%（2/28）,2组相比差异有统计学意义（χ^2=3.985,P=0.046）,对照组所生新生儿HBV DNA阳性率为16.67%（6/36）,治疗组所生新生儿HBV DNA阳性率为0,2组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）.所有孕妇及新生儿在治疗期间未出现不良反应.结论 替比夫定在一定程度上可以降低HBV母婴垂直传播的风险.     

不同剂量乙肝疫苗与HBIG联合免疫阻断HBV母婴传播的效果对比

目的 探讨10 μg和20 μg乙肝疫苗与HBIG联合免疫阻断HBV母婴传播的效果.方法 124例HBsAg阳性孕妇所生的婴儿随机分为两组,即10 μg乙肝疫苗组和20 μg乙肝疫苗组.婴儿于出生6h内及30 d分别注射200 IU HBIG,同时分别于出生24 h内、1个月及6个月注射3次10 μg或20 μg重组酵母乙肝疫苗.检测婴儿出生时以及1岁时血清HBV标志物.结果 两组新生儿血清HBsAg、HBeAg及抗-HBe阳性率与滴度之间差别均无统计学意义（P＞0.05）.所有新生儿血清HBV DNA水平均小于检测下限（500 U/ml）.出生12个月时,所有124例婴儿血清HBsAg和HBeAg检测结果均为阴性;血清HBV DNA水平均在检测下限以下;10 μg和20 μg乙肝疫苗组血清抗-HBs阳性率分别为90.3％和96.8％,差异无统计学意义（P＞0.05）;抗-HBs水平分别为325.5±342.2 mIU/ml和463.7±353.3 mIU/ml,后者显著高于前者（P=0.01）.而且,20 μg乙肝疫苗组产生高应答抗-HBs（＞ 100 mIU/ml）的比例显著高于10μg乙肝疫苗组（P =0.035）.结论 20 μg乙肝疫苗联合HBIG方案阻断HBV母婴传播的效果优于10 μg乙肝疫苗联合HBIG方案.     

乙型肝炎病毒宫内感染的临床研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的发生率及其高危因素。方法选择我院分娩的HBsAg阳性的孕妇及其新生儿230对,分别用ELISA法及荧光定量PCR法检测其外周血HBV血清标志物和HBV-DNA含量,分析HBV宫内感染的发生率及其高危因素。结果①230例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,有22例发生宫内感染,其中HBsAg阳性7例(3.0%),HBV-DNA阳性18例(7.8%),HBsAg和HBV-DNA均阳性的3例,总的HBV宫内感染率为9.6%(22/230)。②HBsAg单阳性孕妇138例,其HBV宫内感染率为5.1%(7/138);HBsAg、HBeAg双阳性孕妇92例,其HBV宫内感染率为16.3%(15/92)。两者相比差异有显著性(χ2=8.1,P<0.05)。③HBV DNA阳性孕妇119例,其宫内感染率为15.1%(18/119),HBV DNA阴性孕妇111例,其宫内感染率为3.6%(4/111),两者相比差异有显著性(χ2=8.8,P<0.05)。结论HBV宫内感染率为9.6%,HBeAg阳性和HBV DNA阳性是HBV宫内感染的高危因素。     

树突状细胞疫苗对慢性乙型肝炎的治疗作用

目的：探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞（DC）对慢性乙型肝炎（CHB）免疫治疗的作用。 方法： 取患者外周血20 mL分离单个核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rGM-CSF）和白细胞介素4（IL-4）进行DC体外扩增，于培养第5 d加入50 mg/L乙型肝炎疫苗，7 d收获细胞。34例慢性乙肝患者根据年龄和发病时间分为治疗1、2、3组，皮内回输DC。对照组患者注射等量生理盐水，均每周1次，连续8次。于回输DC后2周检测患者血清乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）含量。 结果： 培养可得到形态及功能典型的DC，治疗1、2、3组患者回输DC后血清HBV-DNA拷贝数均显著低于对照组（P<0.01），总应答率58.8%（20/34），对照组输注前后没有明显差异（P<0.05）；治疗1组与3组相比HBV-DNA定量拷贝数降低幅度有显著差异（P<0.01），治疗1组与2组、2组与3组相比无显著差异（P＞0.05）。 结论： 经乙型肝炎疫苗致敏的DC回输患者后，其血清HBV-DNA含量明显降低，且降低幅度与感染病毒时间和/或患者年龄有一定关系。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能状态与HBV载量的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞功能状态与HBV载量的关系。方法：采集23例CHB患者和8例健康人的抗凝外周静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），在重组人白细胞介素4和重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的作用下培养使DCs增殖、成熟，以间接免疫荧光流式细胞技术分别检测DCs表面CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达；以ELISA法检测DCs培养上清液中IL-12的水平；将培养成熟的DCs与HBsAg共同孵育，用丝裂霉素C处理后再与自体PBMCs共同培养，在培养结束前12小时加入^3H-TDR，收集细胞，以β液闪计数仪测定cpm值；同期用定量聚合酶链反应技术测定CHB患者外周血HBV载量。结果：患者DCs表面CD86、HLA-DR和ICAM-1的表达水平，DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平均显著低于健康对照组；CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0．01、P〈0．01、P〈0．001和P〈0．001）；DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平也与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0．001和P〈0．01）。结论：CHB患者外周血DCs的成熟和功能存在障碍，DCs的功能状态与血液中HBV的载量密切相关，并可能对HBV的清除产生重要的影响。     

慢乙肝患者外周血中Th17细胞趋化因子受体的表达水平

目的 检测慢性乙型病毒性肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者外周血中Th17细胞表面趋化因子受体CCR4、CCR6、CXCR3的表达,分析CCR4、CCR6、CXCR3与丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBil）及HBV DNA载量的相关性.方法 流式细胞仪检测30例CHB患者（CHB组）及15名健康人（对照组）外周血中Th17细胞CCR4、CCR6、CXCR3的表达,与ALT、TBil、HBV DNA载量进行相关性分析.结果 CHB组CD4＋ Th17细胞CCR4、CCR6、CXCR3的表达水平高于对照组,其差异有统计学意义（P＜0.05）.CHB组CD8＋ Th17细胞CCR4、CCR6的表达水平高于对照组,其差异有统计学意义（P＜0.05）.CCR4、CCR6表达水平与ALT、HBV DNA载量呈正相关（P＜0.05）,与TBil水平无相关性（P＞0.05）.结论 CHB患者外周血中Th17细胞表面CCR4、CCR6表达增高,与炎症程度相关,可能涉及Th17细胞引起的肝损伤.     

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞CD40、CD80表达和免疫活性的体外研究

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者DC表面协同刺激分子CD4 0和CD80表达与其抗原呈递功能的关系 ,为进一步研究慢性乙型肝炎的发病机制及治疗提供新的思路。方法 :分离培养慢性乙型肝炎患者和健康人外周血DC ,流式细胞仪测定DC表面CD4 0和CD80的表达 ,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能。结果 :慢性乙型肝炎患者DC表面CD4 0和CD80的表达较健康人低 ,刺激同种异种T细胞增殖反应也较健康人低。结论 :乙肝病毒感染可通过抑制患者DC表面CD4 0、CD80等协同刺激分子的表达 ,从而使其抗原呈递功能降低     

重型乙型肝炎前期患者外周血免疫活性细胞的特点

目的 分析重型乙型肝炎前期(以下简称重肝前期)患者外周血免疫活性细胞的特点.方法 选取重肝前期患者48例,慢性乙型肝炎患者35例,健康志愿者20例,采用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CD3+、CD3+/CD4+、CD3 +/CD8+、CD4 +/CD25 +/CD45+等亚群表达百分比,计算各淋巴细胞亚群绝对值,并进行统计学分析.结果 与慢性乙肝组及健康对照组相比,重肝前期组CD3+T细胞、CD8+T细胞、CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)的绝对值均明显下降(P＜0.01或P＜0.05);重肝前期组CD4+T细胞绝对值与慢性乙肝组差异无统计学意义(P＞0.05),但CD4+T细胞百分率明显高于慢性乙肝组(P＜0.05).此外,CD4 +/CD8+比值各组间存在显著差异,重肝前期组显著高于慢性乙肝组和健康对照组(P＜0.01或P＜0.05).结论 重型乙型肝炎前期存在一定程度的细胞免疫功能紊乱,其特征为CD4+T细胞占优势,CD8+T细胞和CD4+ CD25+ Tregs绝对值下降.     

慢性乙型肝炎外周血单个核细胞内HBV-DNA与血清HBV-DNA及HBeAg表达关系的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内HBV-DNA和血清中HBV-DNA表达量、e抗原表达的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测208例慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清中HBV DNA含量,应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测乙肝血清标志物。结果208例慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA阳性106例、阴性102例。HBV-DNA(PBMC)阳性组、阴性组血清HBV-DNA定量≥1.0E5患者比例分别为91.5%(97例)、45.1%(46例)(χ2=52.12,P<0.01);HBeAg阳性率分别为76.4%(81例)、50.9%(52例)(χ2=21.55,P<0.01)。结论PBMC内HBV-DNA的检测与血清中HBV-DNA定量检测及HBeAg阳性率存在明显的正相关。提示血清HBV-DNA高载量的HBeAg阳性患者外周血单个核细胞感染HBV-DNA明显增加。     

HBsAg和HBsAb双阳性乙肝患者血清中HBsAb确认方法的建立

目的 建立一种基于酶联免疫吸附实验（ ELISA）的HBsAb确认方法,验证HBsAg和HBsAb双阳性的乙肝患者血清中HBsAb阳性的真实性,剔除假阳性结果,避免错误诊断.方法收集60例电化学发光免疫分析法（ ECLIA）检测的HBsAg浓度在1000 COI以上的混合血清作为确认血清,将不同稀释度的确认血清与收集的HBsAb阳性混合血清中和,筛选并确定确认血清中HBsAg的最佳试验浓度.收集40例HBsAg和HBsAb双阳性的血清,与确认血清中和后采用ELISA检测COI的下降率,验证HBsAg和HBsAb双阳性标本中HBsAb阳性的真实性.结果 确认血清HBsAg浓度为2000 COI时对HBsAb的中和效果最好,ELISA确认法对40例HBsAg和HBsAb双阳性标本确认结果为37例真阳性和3例假阳性,与ECLIA法完全一致.结论 成功建立了HBsAg和HBsAb双阳性血清HBsAb的确认方法,该方法简单、准确且成本较低.     

Long term stability of HBsAg,anti-HBc and anti-HCV in dried blood spot samples and eluates

BackgroundDried blood spots (DBS) are a useful specimen collection tool in situations where venous access is problematic, however, detection of biomarkers from this specimen type is subject to variation depending on storage conditions and storage time.ObjectivesThe objective of this study is to assess the detection of HBsAg, anti-HBc and anti-HCV from DBS after storage.Study designDBS specimens were stored at −70 °C, −20 °C, 4 °C, 22 to 28 °C and 37 °C either with or without desiccant. Eluates were also prepared from DBS specimens and stored at −20 °C and −70 °C. DBS cards and eluates were tested for HBsAg, anti-HBc and anti-HCV at baseline on day 0 and thereafter at intervals of 14, 70 and 200 days.ResultsLoss of detection of both HBsAg and anti-HBc was evident by the first time point (14 days) in all storage conditions except for the samples (DBS and eluates) stored at −20 °C or −70 °C. Both HBsAg and anti-HBc stored under these conditions showed minimal variation up to the final time point (200 days) of storage. The detection of anti-HCV did not differ between the 22 to 28 °C, 4 °C, −20 °C and −70 °C DBS nor the −20 °C or the −70 °C stored eluates over the 200 day time period.ConclusionWe suggest that extended storage of DBS intended for downstream testing is best carried out by freezing either the DBS, or eluate, at −20 °C or −70 °C as soon as possible following collection for optimal detection of HBsAg, anti-HBc and anti-HCV.     

山东省枣庄市乙型病毒性肝炎流行病学调查

目的　了解枣庄市人群中乙型肝炎的流行特征。方法　于 2 0 0 0年采用随机分层抽样 ,调查 312户家庭的 96 3人 ,以RIA法检测HBsAg、抗 HBs和抗 HBc。结果　HBsAg、抗 HBs、抗 HBc和HBV标化流行率分别为 7.0 8%、37.5 6 %、4 1.35 %和 4 4 .37%。HBsAg流行率男性高于女性 (P <0 .0 5 ) ,城区高于农村 (P <0 .0 1) ,在不同年龄及职业人群中差异无显著性 (P >0 .0 5 )。抗 HBs、抗 HBc和HBV感染率有随年龄增长而递增的趋势 (P <0 .0 1)。HBV总感染率男性高于女性 (P <0 .0 5 ) ,农村高于城市 (P <0 .0 5 )。结论　枣庄市人群HBV感染率较高 ,应积极采取预防和控制措施 ,减少发病。