互隔交链孢霉提取物261-B_2-3诱发人羊膜细胞UDS的研究

应用自食管癌高发区林县粮食中分离的互隔交链孢霉提取物261-B_2-3诱发人羊膜FL细胞UDS。在不加S-9组分的情况下,提取物可诱发UDS。当提取物浓皮为10~(-6)-10~(-3)mg/ml四个数量级时,其UDS诱发率与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。且当浓度在2.0×10~(-6)8.0×10~(-6)mg/ml范阿时,UDS水平与浓度呈正相关且有直线回归关系(P<0.01)。在加S-9组分情况下,各浓度组UDS诱发率均明显低于不加S—9组,与对照相比差别无显著性(P>0.05)。结果表明,在不加S-9情况下,261-B_2-3具有较强的诱变性,其诱变性在一定范围内随浓度增大而升高。相反,在加S-9情况下,261-B_2-3无或仅有极弱的诱变性。提示该霉菌提取物中含有直接诱变性物质。粮食中互隔交链孢霉污染可能在林县食管癌的发生中起一定作用。     

互隔交链孢霉提取物261—B2—3在体外对DNA、RNA和蛋白质合成的影响

大多数化学致癌物均可影响DNA、RNA和蛋白质合成的过程。本文研究了从食管癌高发区林县粮食中分离出的互隔交链孢霉菌株261提取物261-B_2-3对这些大分子物质合成的影响。研究表明261-B_2-3对DNA和蛋白质的合成有明显的抑制,其作用强度呈明显的浓度相关性。但是它对RNA的合成无明显影响。三种大分子物质的合成对于261-B_2-3的敏感性顺序为:蛋白质>DNA>RNA。261-B_2-3对DNA和蛋白质抑制作用的类型和机理并不相同。在中止261-B_2-3的作用后,DNA的合成率持续下降,形成一谷值,属于模板损伤型,而蛋白质则呈递增型合成曲线,为干扰代谢型。261-B_2-3对大分子合成的干扰导致了细胞生物学和生化过程的紊乱,并有可能在诱变过程中起到一定作用。     

互隔交链孢霉提取物对细胞周期的影响

方法传代培养的人羊膜FL细胞进入对数生长期后,于无血清培养基中加入互隔交链孢霉提取物(简称261-B_2-3)处理,各组的终浓度分别为0、10~(-3)、10~(-2),10~(-1)mg/ml。在处理的第0、8、24和48小时各处理组各取一组细胞消化,制成单细胞悬液     

互隔交链孢霉提取物诱发V_(79)细胞突变和NIH/3T3细胞转化作用的研究

本文报告首次用从食管癌高发区林县粮食中分离的互隔交链孢霉提取物261-B_2-3诱发体外培养的V_(79)细胞6-巯基鸟嘌呤耐受(TG~r)突变和NIH/3T3细胞形态转化获得成功。在实验组每毫升培养基中加入互隔交链孢霉提取物4、8、16和33微克可诱发V_(79)细胞突变,这一作用在有、无肝微粒体酶制作物激活的情况下,均获阳性。当互隔交链孢霉提物物浓度为每毫升培养基32、64和128微克时,可诱发NIH/3T3细胞产生相当高的克隆转化率,分别为35.47%、36.60%和43.14%。与对照组比有非常显著差异(p<0.01)。结果表明,该霉菌提取物中含有直接诱变物,并有可能含有致癌物。林县粮食中互隔交链孢霉的较重污染可能在该地区食管癌的发生中起一定作用。     

半夏提取物调节Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达诱导白血病细胞凋亡

背景:温热中药半夏拥有可人工广泛种植、易提纯等优势,其提取物可抑制慢性髓系白血病、急性髓系白血病、急性T淋巴白血病细胞增殖,但是作用机制尚不明确。目的:探讨中药半夏提取物对3种白血病细胞凋亡的作用机制。方法:慢性髓系白血病细胞株(K562)、急性髓系白血病M3细胞株(HL-60)、急性T淋巴白血病细胞株(C8166)在半夏提取物5种浓度梯度中分别作用24,48,72 h,采用CCK-8法评估3种白血病细胞增殖情况并从中筛选出有明显抑制作用的中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度。然后进一步采用流式细胞术检测3种白血病细胞早期凋亡发生率,采用RT-PCR与Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果与结论:①5种质量浓度的半夏提取物作用3种白血病细胞具有细胞增殖抑制作用,中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度半夏提取物增殖抑制率较高,与低质量浓度组(100 mg/L)、对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);②中、高质量浓度半夏提取物可诱导3种白血病细胞早期凋亡;③中、高质量浓度半夏提取物可以下调3种白血病细胞的Bcl-2 mRNA表达,上调Bax及Caspase-3 mRNA表达(P<0.05;P<0.01);④中、高质量浓度半夏提取物作用72 h后,K562、C8166细胞的Bcl-2蛋白条带明显减弱,而HL-60细胞无减弱变化;Bax及Caspase-3蛋白条带明显增强;⑤结果表明,半夏提取物能有效抑制髓系白血病、T淋巴细胞白血病细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与其调节Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。     

银杏叶提取物对糖尿病患者外周血内皮祖细胞GPX及Caspase-3活性的影响

目的:观察银杏叶提取物(GBE)对2型糖尿病(T2DM)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)及特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:取T2DM患者(实验组)和正常人(对照组)外周血分离单个核细胞,在包被有纤维连接蛋白的培养板中加入含血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)等的M199培养基,诱导EPCs分化,48h后去除悬浮细胞,继续培养,于培养第6天加入不同浓度GBE(0mg/L、6.75mg/L、12.50mg/L、25.00mg/L、50.00mg/L)干预24h后,用紫外分光光度计检测培养上清液中GPX活性,用酶标仪检测培养细胞Caspase-3活性。结果:相同GBE浓度时,实验组GPX活性较对照组明显降低(P<0.05),Caspase-3活性较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:GBE对T2DM患者EPCs有保护作用,其机制可能与抗氧化和减少自由基生成有关。     

缺氧后处理中CYP2J3/EETs系统对心肌凋亡的影响

目的: 观察缺血后处理中心肌细胞内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统(CYP2J3/EETs)对心肌细胞凋亡的调节作用机制。方法: 取Wistar乳鼠(12-24 h)心脏做原代心肌细胞培养。实验分为7组:对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处理组、CYP2J3转染组、空质粒组、6-(2-炔丙基氧苯基)己酸(PPOH,一种CYP2J3抑制剂)组、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组。除对照组外,其它各组均进行缺氧/复氧处理。用MTT法检测心肌细胞活力,高压液相色谱法检测心肌细胞培养液中11,12-EET浓度,Western blotting检测心肌细胞中caspase-3蛋白的表达,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3蛋白的活性。结果: 缺氧后处理组心肌细胞活力和11,12-EET浓度明显高于缺氧/复氧组(P<0.01),CYP2J3转染组比后处理组明显增高(P<0.01),PPOH组比后处理组明显下降(P<0.01)。后处理组caspase-3蛋白的表达及活性低于缺氧/复氧组(P<0.01),CYP2J3转染组caspase-3 蛋白表达及活性低于后处理(P<0.01),而PPOH组caspase-3蛋白表达及活性高于缺氧后处理组(P<0.01)。结论: 在缺氧后处理中CYP2J3/EETs可能通过抑制caspase-3蛋白的表达及活性来影响细胞凋亡,从而对心肌起保护作用。     

L-carnosine对NIT-1胰岛细胞的影响及机制

目的: 研究肌肽(L-carnosine)对高糖培养的NIT-1细胞胰岛素分泌、增殖和凋亡的影响及机制。方法:(1)正常和高糖培养细胞72 h,放射免疫法测定葡萄糖刺激的胰岛素分泌,然后分别换不同浓度葡萄糖和L-carnosine培养,测定胰岛素分泌;(2)细胞分为C组(11.1 mmol/L glucose)、H组 (33.3 mmol/L glucose)、H+A组(33.3 mmol/L glucose +1 mmol/L L-carnosine)和H+B(33.3 mmol/L glucose+ 20 mmol/L L-carnosine)组培养72 h,BrdU检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡,RT-PCR测定bcl-2和caspase-3 mRNA的表达,荧光法检测caspase-3活性。结果:(1)高糖组细胞胰岛素分泌减少; 20 mmol/L L-carnosine显著增加正常和高糖组胰岛素分泌(P<0.01),且呈正相关(P<0.01);(2)高糖组细胞增殖和凋亡均增加(均P<0.01),但总体数目减少;1 mmol/L L-carnosine使增殖增加,凋亡减少(P<0.01);(3) 高糖组caspase-3 mRNA表达明显增加,bcl-2 mRNA明显减少(P<0.05);1 mmol/L L-carnosine使前者明显减少(P<0.05),后者明显增加(P<0.01);不同浓度L-carnosine均明显降低caspase-3活性。结论: 高浓度L-carnosine可单独刺激细胞分泌胰岛素,低浓度的L-carnosine可增加NIT-1细胞增殖并减少高浓度葡萄糖所导致的凋亡。Caspase-3和Bcl-2可能参与了L-carnosine保护NIT-1细胞的过程。     

阿托伐他汀通过抑制RhoA活性减少非小细胞肺癌的增殖

目的观察阿托伐他汀(ATV)对非小细胞肺癌(NSCLCs)细胞增殖的影响并探讨其机制。方法用改进MTT法检测不同浓度ATV、RhoA特异性抑制剂C3转移酶(C3 transferase)、RhoA siRNA处理后A549细胞、H358细胞、Calu3细胞的增殖情况。用RhoA活性测定法观察C3 transferase及不同浓度、不同时间ATV处理后NSCLCs细胞的RhoA活性变化。用Lipofectamine2000转染RhoA siRNA,Western blot检测RhoA的蛋白表达。结果 ATV浓度依赖性(0.1～25.0μmol/L)地抑制三株NSCLCs细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。ATV浓度依赖性(0.1～25.0μmol/L)和时间依赖性(12～96 h、48～96 h)地抑制不同NSCLCs细胞的RhoA活性(P<0.05或P<0.01)。C3 transferase能显著降低三株NSCLCs细胞的RhoA活性并抑制NSCLCs细胞增殖(P<0.01)。RhoA siRNA在有效沉默RhoA蛋白表达后,也明显抑制NSCLCs细胞增殖(P<0.01)。但ATV联合应用C3 transferase或RhoA siR-NA不能产生协同抑制效应,而与单用C3 transferase或RhoA siRNA的抑制增殖作用相似(P>0.05)。结论 ATV主要通过抑制RhoA活性从而抑制NSCLCs细胞增殖。     

雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响

目的: 探讨雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响。方法: 分别测定不同浓度雌激素作用下兔血管平滑肌细胞[³H]-TdR掺入量、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、血管平滑肌细胞(VSMC)移行的变化。结果: 低浓度(1 nmol/L)的雌激素组的培养细胞[³H]-TdR掺入量及VSMC平均光密度值、VSMC移行细胞数与对照组相比无明显差异(P>0.05), 较高浓度(10 nmol/L、100 nmol/L)的雌激素可以显著降低培养的[³H]TdR掺入量及培养VSMC平均光密度值, 并能显著减少VSMC移行细胞数目(P<0.01)。结论: 雌激素可抑制血管平滑肌细胞的增殖与移行, 从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

回阳生肌膏提取物对正常皮肤及慢性溃疡创缘成纤维细胞增殖的影响

目的：比较回阳生肌膏提取物对人正常皮肤成纤维细胞（nHFB）及慢性溃疡创缘成纤维细胞（uHFB）增殖的影响。方法:〖HTSS〗组织块法体外培养nHFB及uHFB；采用 Alarmar blue摄入法观察不同浓度回阳生肌膏水提取物、醇提取物对两种细胞增殖的影响；并采用流式细胞仪检测其水提取物、醇提取物对两种细胞细胞周期的影响。结果:回阳生肌膏水提取物、醇提取物分别作用上述两种细胞24 h后，细胞增殖速度均增加。回阳生肌膏醇提物分别在0.027-0.425 mg/L和0.027-0.213 mg/L范围对nHFB和uHFB的增殖有促进作用（P<0.05或P<0.01）；回阳生肌膏水提物分别在0.075-2.400 mg/L和0.150-1.200 mg/L范围对nHFB和uHFB增殖有明显促进（P<0.05或P<0.01）；流式细胞仪检测结果显示，对于nHFB，水提物作用24 h后 S期比例明显上升（Pμ<0.01），G2/M期比例无明显升高，细胞增殖指数（PrI）明显增加（P<0.01），醇提物作用24 h后S期、G2/M期比例均上升（P<0.05），细胞增殖指数（PrI）明显增加（P<0.01）；而对于uHFB，水提物作用24 h后 S期、G2/M比例上升均不显著，但PrI指数有增加（P<0.05），醇提物作用24 h后 S期比例明显上升（P<0.01），G2/M期比例无明显升高，PrI明显增加（P<0.01）。结论：回阳生肌膏无论水提取物、醇提取物皆可不同程度促进nHFB及uHFB的增殖，其醇提物作用更迅速；这种促增殖作用可能是通过调节细胞周期使更多细胞进入S期而实现的。     

小鼠Sim2真核表达载体的构建及其对PC12细胞周期的影响

目的：构建小鼠Sim2（mSim2）真核表达载 体，并观察其对PC12细胞周期的影响，以初步阐明Sim2基因在Down综合征发病机制中的作用 。方法：以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从新生小鼠大脑中扩增mS im2全长阅读开放框(ORF)，定向克隆入真核表达载体pcDNA3中。以脂质体法瞬时转染PC12细 胞；RT-PCR方法检测mSim2基因在PC12细胞的表达；流式细胞仪观察mSim2对细胞周期的影响 。结果：DNA测序结果表明，mSim2成功克隆入真核表达载体pcDNA3中。R T-PCR结果显示，瞬时转染的PC12细胞中有明显的mSim2表达。流式细胞仪检测发现，转染mS im2后，处于G0/G1期的PC12细胞百分比明显升高（P<0.01），而G2/M期百分比 明显低于对照组和空载体组（P<0.01）。结论：Sim2基因可能通过 抑制神经元前体细胞的增殖参与Down综合征的发生；Sim2真核表达载体的构建为进一步研究 该基因的功能奠定了良好的基础。     

Pathology of lymphoid organs in chickens fed a diet deficient in zinc.

An experiment was conducted, including flow cytometry, to study the pathology of the lymphoid organs and peripheral blood T lymphocytes in zinc (Zn)-deficient chickens. One hundred 1-day-old broiler chickens were randomly divided into two groups and fed on diets with 100 mg/kg Zn (controls) or Zn-deficient diets (Zn, 23.63 mg/kg) for 7 weeks. The weight and growth index of the bursa of Fabricius, thymus and spleen were significantly reduced (P<0.05 or P<0.01) in Zn-deficient birds when compared with those of control broilers. The G0/G1 phase of the cell cycle of the bursa, thymus and spleen was much higher (P<0.01), and the S, G2+M phases and proliferating index lower (P<0.05 or P<0.01) in Zn-deficient broilers than in the controls. The acid alpha-naphthyl acetate esterase-positive ratio of the peripheral blood T lymphocytes and the CD4 and CD8 numbers were markedly reduced (P<0.05 or P<0.01), and the CD4/CD8 ratio increased. Histopathologically, lymphocytes of lymphoid organs were depleted and the reticular cells of the thymus were also degenerate or necrotic in the Zn-deficient birds. The results demonstrate that Zn deficiency seriously inhibited the development of lymphoid organs, impaired the progression of lymphocytes from the G0/G1 phase to the S phase, and caused pathological injury in the lymphoid organs. The results also showed that the effect of Zn deficiency on the primary lymphoid organs occurred earlier than on the secondary lymphoid organs. The effect of Zn deficiency was greatest on the bursa of Fabricius, followed by the thymus, and then the spleen. Potential mechanisms underlying the observations are discussed.     

血卟啉衍生物对人胃癌不同周期时相细胞光敏损伤效应的电镜观察

应用细胞同步化和电镜技术,研究了人胃低分化粘液腺癌细胞(MGc80-3)经血卟啉衍生物加红光照射后,其光敏损伤部位与周期时相的关系。结果表明,细胞的超微结构损伤,呈现出明显的周期特异性,其中G_1期细胞的质膜损伤较显著,胞质也有一定损伤;S期和G_2期细胞,以线粒体和其他胞质细胞器损伤最为严重,M期细胞则以胞核损伤显著。本文对上述光敏损伤的机制进行了讨论。     

曲古柳菌素A对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:检测不同浓度的组蛋白去乙酰化酶抑制剂古曲柳菌素A(TSA)对A549细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨TSA抑制A549肺癌细胞的分子机制.方法:以流式细胞术分析,Annexin V/PI 法,免疫印迹研究 TSA 对A549 细胞的细胞周期、凋亡及Bax蛋白水平变化的影响.结果:TSA处理后,100nmol/L和400nmol/L引起细胞G0/G1及G2/M期阻滞.Annexin V/PI法显示TSA可诱导细胞凋亡.Bax蛋白的表达随着TSA浓度的增高而增强.结论:不同浓度的TSA对A549细胞周期阻滞影响不同,低浓度可诱导细胞凋亡.     

The activity of nucleolar organizer regions of human bone marrow cells studied with silver staining. I. Chronic myelocytic leukemia

The activity of nucleolar organizer regions (NORs) in chromosomes and interphase nuclei of bone marrow (BM) cells from 21 patients with chronic myelocytic leukemia (CML), including seven patients at the time of blastic crisis (BC), has been studied with silver nitrate staining. The average numbers of Ag-NOR per metaphase in PHA-stimulated peripheral blood lymphocytes from patients with CML and normal individuals were 7.1 +/- 0.3 and 7.4 +/- 0.1, respectively, indicating no statistical difference between them. Those in BM cells from patients with CML, as in the normal donors, were more heterogeneous compared to PHA-stimulated lymphocytes, and most of the metaphases (up to 67%) did not contain silver-stained NORs. The average number of Ag-positive NORs in BM mitoses from untreated patients in the chronic phases of CML and from those in the BC were similar (4.9 +/- 0.3 and 4.8 +/- 0.4, respectively). As for NORs of the Ph chromosome, they were Ag-positive in the majority of patients, including 9 of 14 in the chronic phase and 3 of 7 in the BC. This article contains some data in support of the authors' previous assumption regarding the correlation between BM Ag-NOR patterns and the degree of maturity of the cells tested in mitosis.     

NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响

目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化。结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0·82±0·14,而有转移的乳腺癌组织中为69·2%(9/13)和0·17±0·11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0·14±0·02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1·51±0·11)。NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期G0/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义。结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。     

A sensitive staining method for NORs

A sensitive staining method for nucleolar organizer regions (NORs) is described, using blue toning of AgNORs. NORs are loops of DNA which are transcribed into ribosomal RNA. NORs can be demonstrated by staining with silver nitrate, since NOR-associated proteins are argyrophilic, producing structures termed AgNORs. Normal blood lymphocytes were stained with both methods. The number and resolution of NORs increased 2–3 times by blue toning (30 mmol/l FeCl₃, 11 mmol/l potassium hexacyanoferrate(III), and 33 mmol/l oxalic acid) compared with silver staining. A significant difference in the number of NORs was noticed between silver-stained and blue-toned cells (P<0.001). The blue toning technique thus appears to be more sensitive in detecting NORs than the AgNOR method and may prove a useful alternative for applications in histopathology.     

血卟啉衍生物对人胃癌不同周期时相细胞线粒体及琥珀酸脱氢酶的光动力学作用

采用体外培养的人胃癌细胞,用高压N_2O方法及过量TdR的阻断与释放,制备出同步的G_1、s、G_2、M期细胞。各期细胞用血卟啉衍生物(HPD)加红光照射后,在0、24、36、60小时分别用罗丹明123显示活细胞线粒体,同时用细胞化学方法显示细胞内琥珀酸脱氢酶的动态变化。本研究结果表明,同步化各时相细胞在光照后立即观察,线粒体均模糊或消失,而琥珀酸脱氢酶反应并未完全消失,在光敏后24小时最弱,随着时间的推移,先是细胞内线粒体结构逐渐得到恢复,随后才是酶反应的恢复。4个时相细胞中,线粒体和琥珀酸脱氢酶恢复速度依次为s、G_2、G_1、M期,说明HPD对人胃癌细胞的作用有其周期特异性。本文还对HPD光动力学作用于不同周期时相细胞的线粒体损伤、琥珀酸脱氢酶的变化,及对细胞杀伤之间的关系进行了讨论。