抑制结缔组织生长因子表达对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的观察抑制结缔组织生长因子（CTGF）表达对肝星状细胞系HSC-T6细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法构建含有靶向CGTF小干扰RNA的重组慢病毒载体并感染HSC-T6细胞,应用MTT法检测细胞增殖情况;应用PI染色和流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果抑制CTGF基因表达可抑制HSC-T6细胞增殖,同时显著增加HSC-T6细胞凋亡,凋亡细胞的百分比为17.58±5.81%,明显高于空白对照组（5.12±1.21%）和阴性对照组（1.37±0.31%）;抑制CTGF基因表达可显著升高S期细胞百分比（53.24±4.47%）,空白对照组和阴性对照组分别为44.80±4.701%和42.10±1.40%,而处于G2~M期细胞百分比（0.04±0.07%）则较空白对照组（9.03±0.45%）和阴性对照组（12.19±5.62%）显著降低,但抑制CTGF对G0~G1期细胞百分比无影响。结论抑制CTGF可促进HSC-T6细胞凋亡,抑制其活化和增殖。抑制CTGF基因表达有可能作为抗肝纤维化的新靶点。     

灵芪蠲肝胶囊对大鼠肝星状细胞JAK/STAT信号通路的影响

目的 分析不同浓度的灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠肝星状细胞-T6 (HSC-T6)增殖和酪氨酸激酶2(JAK2)、磷酸化的信号传导与转录活化因子3(p-STAT3)蛋白量表达的影响及可能的调控机制. 方法 SD大鼠25只,随机分为5组:正常血清对照组(A组)、复方鳖甲软肝片(B组)、灵芪蠲肝胶囊小剂量组(C1组)、灵芪蠲肝胶囊中剂量组(C2组)、灵芪蠲肝胶囊大剂量组(C3组),药物灌胃7d,经腹主动脉采血,制备含药血清.将各组含药血清分别作用于10 ng/ml PDGF刺激的HSC-T6,24、48、72 h后用CCK-8法测定各组HSC-T6的吸光度值,免疫印迹法检测24 h时各组细胞中JAK2、p-STAT3蛋白量的表达.各组重复测量的数据采用重复测量的方差分析,各组间比较用单因素方差分析,多样本均数两两比较用SNK-q检验.结果 与A组比较,C2、C3组SD大鼠药物血清在24、48、72h均可明显抑制HSC-T6的增殖,根据重复测量的方差分析,F=36.292,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.C1组24 h吸光度值为1.522±0.128,与A组24h的吸光度值1.550±0.065比较,P＞0.05,差异无统计学意义;C1组48、72 h可抑制HSC-T6增殖,吸光度值分别为1.153±0.183、0.753±0.210,与A组48、72 h的吸光度值1.311±0.650和1.039±0.103比较,F=36.292,p值均＜0.05,差异均有统计学意义.与A组比较,24 h时C1、C2、C3各组HSC-T6中JAK2、p-STAT3蛋白表达量均明显减少.结论 灵芪蠲肝胶囊能抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,且作用呈剂量依赖性;同时能降低JAK2、p-STAT3在活化的HSC-T6中的表达,阻碍JAK/STAT信号通路的传导,发挥抗肝纤维化作用.     

选择性环氧合酶-2抑制剂对HSC-T6细胞增殖的抑制作用

目的 观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞系HSC-T6细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的机制. 方法采用不同浓度的NS-398作用于HSC-T6,四甲基偶氮唑盐法检测HSC-T6细胞增殖情况,乳酸脱氢酶法检测NS-398对HSC-T6细胞的毒性作用、流式细胞仪检测HSC-T6细胞周期的改变,以EliVisionTMplus细胞免疫化学法检测HSC-T6中COX-2、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化.多组数据间的比较采用单因素方差分析或独立样本T检验,计数资料采用χ2检验. 结果在20～160μamol/L浓度范围内,NS-398以剂量和时间依赖性地抑制HSC-T6增殖(P<0.01).90、120、150 μmol/L的NS-398作用HSC-T6 48 h后,细胞周期分析结果显示S期细胞稍增多,G2/M期细胞显著增加,各组之间细胞周期构成差异具有统计学意义(χ2=12.35,P<0.05).以120 μmol/L NS-398作用HSC-T6 48 h后,PCNA阳性细胞百分比为28.91%±0.11%,与对照组(85.99%±0.13%)比较,差异具有统计学意义(P<0.01);COX-2的阳性细胞百分比为13.80%±0.43%,与对照组(14.07%±0.59%)比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 NS-398可以显著抑制HSC-T6增殖,使其发生G2/M期阻滞,其作用具有剂量与时间依赖性,NS-398可能通过抑制HSC中PCNA的表达而抑制其增殖,但小影响COX-2的表达.     

PPARγ表达上调体外抑制肝星状细胞的增殖

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达上调对肝星状细胞增殖及凋亡的影响.方法:体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞,应用1,2,3μmo/L不同浓度的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24 h.同时以不加药物只加无血清培养基作为对照组,24 h后应用RT-PCR的方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγmRNA表达的变化,MTT检测HSC增殖.流式细胞仪分析HSC-T6细胞凋亡.结果:经1,2,3μmo/L 15d-PGJ2处理的HSC-6细胞中PPARγmRNA表达比例上调(0.513±0.031,0.697±0.018,0.674±0.03 2 vs 0.198±0.021).MTT结果显示不同浓度的15d-PGJ2对HSC-T6细胞的增殖均有抑制作用,以2μmol/L组最为显著(54.6%±11.1%).流式细胞仪结果显示15d-PGJ2处理组凋亡细胞数明显增多.结论:PPARγ表达上调能够抑制HSC-T6增殖并诱导其凋亡.     

紫七软肝方含药血清对巨噬细胞条件培养液诱导肝星状细胞活化后增殖的影响

目的：探讨以清化湿热瘀毒法组方的紫七软肝方含药血清对巨噬细胞条件培养液诱导大鼠肝星状细胞（HSC-T6）活化增殖的影响。方法：体外应用巨噬细胞条件培养液培养诱导HSC-T6活化,在2．2、1.1、0．55g·ml^-1质量浓度的紫七软肝方含药血清分别对其作用24h、48h和72h后,MTT法检测其对HSC—T6增殖的影响。结果：紫七软肝方含药血清对活化后HSC-T6具有显著的抑制作用（P〈0．01）,且优于黄芪一贯煎方组,高浓度紫七软肝方组的抑制作用优于秋水仙碱组,中、低浓度组不及秋水仙碱组。结论：肝纤维化病程中“湿热瘀毒”为疾病病理因素,根据“清化湿热瘀毒法”拟制的紫七软肝方对肝星状细胞的活化增殖有一定抑制作用,可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。。     

剔毒护肝颗粒含药血清对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药剔毒护肝颗粒剂(TDHGG)含药血清对人肝癌bel-7402细胞生长及凋亡的影响.方法:应用MTT比色法检测TDHGG对肝癌细胞的抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:肿瘤细胞抑制率与药物剂量呈直线相关;流式细胞仪检测结果显示含药血清大、中、小剂量处理组,肝癌细胞的凋亡率分别为23.9%、18.1%、5.8%,明显高于对照组(P＜0.05),其中G0/G1期细胞数增加,G2/M期细胞数明显减少,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论:TDHGG含药血清可抑制人肝癌bel-7402细胞的生长,并可干扰肝癌细胞增殖周期,诱导肝癌细胞凋亡.     

氧化苦参碱对肝星状细胞增殖抑制和促凋亡作用的影响

[目的]研究氧化苦参碱对体外乙醛造模后的肝星状细胞（HSC）增殖抑制及促凋亡作用的影响,探讨该药抗酒精性肝纤维化的作用机制。[方法]选取乙醛造模后HSC-T6为体外模型,以四甲基固氮唑盐（MTT）法分别检测800、400、200、100ug／ml浓度氧化苦参碱药物血清对HSC-T6作用48h后的抑制情况,找出最佳含药浓度;根据以上结果,以流式细胞仪检测HSC-T6的促凋亡作用。[结果]800ug/ml氧化苦参碱对HSC-T6细胞生长的抑制率最高,达到51．31％,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。碘化丙啶染色流式细胞分析：800ug／ml药物血清作用HSC-T6,其在G0／G1、apop期细胞比例较模型组明显上升,S期细胞明显下降。[结论]氧化苦参碱可明显抑制HSC-T6增殖和诱导其调亡。     

复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶组织抑制因子1 mRNA表达的影响

目的:观察复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRAN表达的影响.方法:不同剂量复方861灌胃大鼠制备的含药血清,作用于HSC-T6细胞48h,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞CoL-Ⅰ、TIMP1 mRNA表达的影响.结果:复方861 0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg、6.0g/kg等不同剂量的含药血清HSC-T6细胞Col-Ⅰ、TIMP1 mRAN表达水平分别为0.28±0.09、0.29±0.13、0.31±0.18、0.40±0.08,1.28±0.46、1.33±0.40、1.14±0.10、1.22±0.31,与空白对照组(0.58±0.04,2.29±0.67)比较,具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:复方861降低HSC-T6细胞CoL-Ⅰ、TIMP1mRAN表达水平,是其抗肝纤维化的作用机理之一.     

软肝抗纤方对肝贮脂细胞Ⅰ型胶原 mRNA表达的影响

[目的]观察软肝抗纤方对肝贮脂细胞(HSC-T6)Ⅰ型胶原(Col-I)mRNA表达的影响.[方法]以软肝抗纤方灌胃大鼠制备的不同浓度含药血清,作用于HSC-T6细胞48 h,应用逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞Col-I mRNA表达的影响.[结果]软肝抗纤方不同浓度的含药血清(5%、10%、20%)与氯化钠组(0.9%)比较,对HSC、T6细胞Col-1 mRNA表达,各组差异均有统计学意义,其中5%,10%组可抑制HSC-T6细胞Col-ⅠmRNA表达水平.[结论]软肝抗纤方可抑制HSC-T6细胞Col-I mRNA表达水平,具有抗肝纤维化作用.     

肝疒徵口服液含药血清对转化生长因子α诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的研究

目的:观察肝疒徵口服液含药血清对转化生长因子(TGFα)诱导人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,应用M TT比色法观察中药鼠血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.用流式细胞术检测中药血清对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:中药血清对TGFα诱导的肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抑制效应呈时间依赖性.中药血清能促进肝癌细胞凋亡,使细胞滞留于G0/1期,降低S期细胞百分比和增殖指数 .结论:肝疒徵口服液含药血清能够抑制TGFα诱导的人肝癌细胞增殖,促进其凋亡.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.