超氧化物歧化酶在分泌性中耳炎中的作用

超氧化物自由基由激活的中性粒细胞和单核细胞释放．可破坏宿主细胞膜的蛋白质、不饱和脂类和核酸，并增强内毒素、免疫复合物或花生四烯酸代谢产物对细胞膜的损害。超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕ－ｔａｓｅ．ＳＯＤ）由炎症细胞或其他体细胞如粘膜上皮细胞产生，对超氧化物阴离子的生物学活性起灭活作用。炎症反应的严重程度受超氧化物阴离子与ＳＯＤ之间相互作用的影响，这种相互作用可能与分泌性中耳炎（ＯＭＥ）的预后有关。该文通过电子自旋共振（ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ，ＥＳＲ）方法检测ＯＭ…     

初始音强度差对听力正常青年人畸变产物耳声发射的影响

目的 探讨初始音强度差对听务正常青年人畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）幅值的影响,为临床应用ＤＰＯＡＥ提供最佳的刺激强度组合。方法 用ＩＨＳ Ｖｅｒｓｉｏｎ ３．２型耳声发射仪对听务正常青年人３９耳进行了ＤＰＯＡＥ测试,分别记录Ｌ１为７５,６５,５５ｄＢ ＳＰＬ,强度差Ｌ１－Ｌ２为０,５,１０,１５,ｄＢ ＳＰＬ时,不同Ｌ１－Ｌ２值对ＤＰＯＡＥ幅值的影响。     

EB病毒感染P53及P16表达与鼻腔咽淋巴环非霍奇金淋巴瘤 …

目的 观察ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ,ＥＢＶ）、抑癌基因Ｐ５３、Ｐ１６在鼻、鼻咽和扁桃体非霍奇金淋巴瘤（ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ,ＮＨＬ）中的表达,并分析其相互间关系。方法 用原位分子杂交检测３６例病变组织的ＥＢＶ－ＤＮＡ、Ｐ１６ｍＲＮＡ,用免疫组化技术检测ＬＭＰ１、Ｐ５３及Ｐ１６蛋白,５例原位杂交检测为ＥＢＶ阴性的病例用原位ＰＣＲ检测ＥＢＶ－ＤＮＡ。结果 ①     

分泌性中耳炎中耳积液的Epstein-Barr病毒测定

目的：探讨在分泌性中耳炎（ＳＯＭ）中的发病过程中是否有Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）参与。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对３４例ＳＯＭ患者（ＳＯＭ组）的血清、口腔含濑液和中耳积液（ＭＥＥ）进行ＥＢＶ检测,并与２０例正常人进行比较。结果：ＳＯＭ组血清和口腔含漱液标本中ＥＢＶ的检出率明显高于对照组,ＳＯＭ组ＭＥＥ中的ＥＢＶ检出率高于其血液标本。结论：在ＳＯＭ的发病过程中有ＥＢＶ的参与。     

Epstein-Barr病毒早期抗原IgG抗体在鼻咽癌筛查中的应用

利用血清学方法对鼻咽癌高发区和高危家系的人群进行监测 ,是提高癌的早诊率和疗效的有效途径 ,所用的血清学方法通常以检测血清Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒ(ＥＢ)病毒相关的ＩｇＡ抗体滴度为主 ,我们将检测血清抗病毒早期抗原 (ｅａｒｌｙａｎｔｉｇｅｎ ,ＥＡ)ＩｇＧ抗体的酶联免疫吸附测定 (ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏ ａｂｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ,ＥＬＩＳＡ)方法与检测血清抗ＥＢ病毒壳抗原 (ｖｉｒａｌｃａｐａｓｉｄａｎｔｉｇｅｎ ,ＶＣＡ)ＩｇＡ抗体(ＩｇＡ/ＶＣＡ)滴度的间接免疫酶染色法(ｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏ…     

MDM 2基因在鼻咽癌中的表达及其与p53蛋白表达、EB病毒潜伏感染的关系

目的：探讨ＭＤＭ２基因在鼻咽癌（ＮＰＣ）中的表达情况及其与ｐ５３蛋白表达、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）潜伏感染的关系。方法：运用非同位素原位杂交、免疫组化和多聚酶链反应技术对４６例ＮＰＣ、１２例慢性鼻咽炎症粘膜（ＣＩＮＥ）分别进行ＭＤＭ２ｍＲＮＡ、ＭＤＭ２蛋白、ｐ５３蛋白及ＥＢＶ－ＤＮＡ的检测。结果：４６例ＮＰＣ中,１４例ｍＲＮＡ及ＭＤＭ２蛋白高表达,３８例为ｐ５３蛋白阳性,４３例为ＥＢＶ－ＤＮＡ阳性,１２     

对听力正常人几种耳声发射基本特性的研究

本文利用耳动态分析仪ＩＬＯ－９２对３５名听力正常人进行了ＤＰＯＡＥ、ＴＥＯＡＥ和ＳＯＡＥ检查,结果发现ＤＰＯＡＥ反应在２ｆ１－ｆ２处最大,其幅值随两个初始刺激音强度的增加而升高,检测阈值在２０～４０ｄＢＳＰＬ之间,而反应潜伏期则随刺激频率升高而缩短；平均ＤＰＯＡＥ图中有两个反应峰分别位于１．４ｋＨｚ和５．６ｋＨｚ附近。由８０±１ｄＢＳＰＬ短声诱发的ＴＥＯＡＥ检出率为１００％,平均幅值为１０．１０±３．９３ｄＢＳＰＬ（±ＳＤ）；另外,约有４９％的受试者具有ＳＯＡＥ反应,频率范围在０．５～６ｋＨｚ之间,幅值范围为—２８～６ｄＢＳＰＬ；对上述有关参量进行统计学分析,发现三种ＯＡＥｓ之间存在一定的相关性。     

EB病毒感染与鼻腔鼻窦非霍奇金淋巴瘤关系的研究

目的探讨ＥＢ病毒与鼻腔鼻窦非霍奇金淋巴瘤的关系。方法采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测２２例原发性鼻腔、鼻窦非霍奇金淋巴瘤（其中Ｔ细胞型１３例，Ｂ细胞型９例）瘤组织及２０例炎症性鼻腔鼻窦粘膜组织中ＥＢ病毒ＤＮＡ酶基因。结果发现实验组中１４例ＥＢＶＤＮＡ酶基因阳性，Ｔ细胞型１３例中９例阳性，Ｂ细胞型９例中５例阳性，总阳性率为６３．６％；对照组２０例中４例ＥＢＶＤＮＡ酶基因阳性，阳性率为２０％，实验组与对照组比较阳性率差异有显著性（χ２检验，Ｐ＜０．００５）。结论ＥＢＶ感染不仅存在于Ｂ细胞型非霍奇金淋巴瘤，也存在于Ｔ细胞型的非霍奇金淋巴瘤中。     

自身免疫性内耳病动物模型的抗内耳特异性抗体谱系分析

目的 为明确哪几种膜迷路蛋白成分参与了实验性自身免疫性内耳病（ａｕｔｏｍｍｕｎｅｉｎｎｅｒ－ｅａｒ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＩＥＤ）的形成。方法 以同种内耳组织抗原免疫豚鼠，建立自身免疫性内耳病动物模型。用免疫转印迹技术（Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ）检测动物血液中抗膜迷路蛋白抗体。结果 豚鼠膜迷路蛋白成分复杂，ＳＤＳ－ＡＰＧＥ电泳至少可分出５种，但免疫后大多数动物（１５／２０）体内仅产生了抗６８ｋＤ和１     

EB病毒感染与鼻腔鼻窦非霍奇金淋巴瘤关系的研究

目的 探讨ＥＢ病毒与鼻腔鼻窦非霍奇金淋巴瘤的关系。方法 采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２２例原发性鼻窦、鼻窦非霍奇金淋巴瘤（其中Ｔ细胞型１３例，Ｂ细胞型９例）瘤组织及２０例炎症性鼻腔鼻窦粘膜组织中ＥＢ病毒ＤＮＡ酶基因。结果 发现实验组中１４例ＥＢＶ－ＤＮＡ酶基因阳性，Ｔ细胞型１３例中９例阳性，Ｂ细胞型９例中５例阳性，总阳性率为６３．６％；对照组２０例中４例ＥＢＶ－ＤＮＡ酶基因阳性，阳性率为２０     

Some chemical properties of tissue plasminogen activator purified from paranasal mucous membrane

Plasminogen activator (PA) was purified from an acetone powder preparation of paranasal mucous membrane with chronic sinusitis, and some chemical properties of the purified PA were investigated in this paper. Zn-imminodiacetate affinity chromatography, lysine sepharose affinity chromatography and ultrafiltration for concentrating a PA fraction were consecutively performed to purify the PA from the acetone powder preparation. Finally, gel filtration was performed using Sephacryl S-200 in order to estimate the molecular weight of the purified PA. The purified PA in this experiment showed a stronger affinity to fibrin than urokinase did. The molecular weight of the purified PA was estimated to be 65,000 to 70,000 daltons as determined by Sephacryl S-200 gel filtration. The Km of the purified PA was 0.11 mM. From these results, it is apparent that the PA purified from an acetone powder preparation of paranasal mucous membrane belongs to the class of tissue type plasminogen activators (t-PA).     

Fibrin binding,fibrinolytic and fibrinogenolytic activity of plasminogen activator derived from the paranasal mucous membrane of humans

It is known that large amounts of plasminogen activator (PA) are contained in tissue extracts of the human paranasal mucous membrane (PMM) with chronic sinusitis. The present study was undertaken to isolate and purify the PA in tissue extracts of PMM. Furthermore, the purified PA was identified as to whether it was of the tissue type or urokinase (UK) type, and some of its fibrinolytic characteristics were determined in comparison with those of urokinase. As starting material, extracts of acetone powder of PMM with chronic sinusitis were used, and Zn-imminodiacetate affinity chromatography, lysine-Sepharose affinity chromatography, and ultrafiltration were carried out to separate and purify the PA from the PMM. The PA was purified to a 107-fold increase in specific activity. The molecular weight of the PA was estimated to be 65, 000 to 70, 000 d by gel filtration using Sephacryl S-200. The purified PA was stable in the range of pH 8.0. to 9.0. Using S-2288, a synthetic substrate, the Michaelis constant (Km) of the purified PA was estimated to be 0.11 mmol. The binding of the purified PA to fibrin was stronger than that of UK, while the fibrinogenolytic activity of the purified PA was not stronger than that of UK. Based on these results, the purified PA was identified as a tissue-type plasminogen activator (t-PA). From the kinetic data, it was identified as being of the two-chain variety. It is considered that, as a thrombolytic agent, t-PA derived from the PMM could be more useful than UK.     

含人神经营养素-3的重组腺病毒的高效制备

目的采用改良的细菌内同源重组法快速高效构建含人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)的重组腺病毒,为其用于神经性聋的在体研究做准备。方法将人全长NT-3基因亚克隆至带绿色荧光蛋白(greenflu-orescent protein,GFP)的穿梭质粒pshuttle-IRES-hrGFP-1上,用电穿孔法使线性化的重组穿梭质粒与预转入腺病毒骨架pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183-AD-1同源重组,脂质体法转染AD293细胞并大量扩增、柱层析纯化得到重组腺病毒pAdeasy-NT-3,GFP测定病毒滴度。结果PCR检测证明人NT-3已整合入腺病毒基因组并表达;Western blot证实在感染重组腺病毒pAdeasy-NT-3的Hela细胞中有相应NT-3蛋白表达;病毒滴度分别为pAdeasy-NT-3109U/ml、pAdeasy-hrGFP1010U/ml。结论利用新型的腺病毒载体Adeasy XL系统可以快速构建同时表达GFP和NT-3的重组复制缺陷型腺病毒pAdeasy-NT-3,柱层析纯化法能制备高纯度的病毒。     

免疫治疗对变应性鼻炎患者鼻分泌物中螨变应原特异性IgG1和IgG4抗体水平的影响

目的检测变应性鼻炎患者和健康人群鼻分泌物中螨变应原特异性IgG1和IgG4抗体水平，以了解变应原特异性IgG亚型抗体在人群鼻分泌物中的分布和免疫治疗对抗体浓度的影响。方法利用负压吸引法收集健康人群、变应性鼻炎未治疗组和免疫治疗组患者的鼻分泌物，采用间接非竞争生物素一链亲和素酶联免疫法检测鼻分泌物中粗制螨变应原、螨纯化变应原Der f Ⅰ和Der f Ⅱ各变应原特异性IgG1和IgG4亚型抗体浓度。结果变应性鼻炎患者鼻分泌物中螨粗制变应原特异性IgG1和IgG4抗体浓度均高于健康人(Z=-3．623、-3．061，P均＜0．01)；免疫治疗组患者IgG1和IgG4抗体浓度均高于非治疗组(Z=-2．453、-3．408，P均＜0．01)。免疫治疗组变应性鼻炎患者鼻分泌物中螨纯化变应原DerfI特异性Igc,4抗体水平较健康人群增高(Z=-3．518，P＜0．01)；而免疫治疗组DerfⅡ特异性IgG1和IgG4抗体水平均高于健康人(Z=-2．366、-2．936，P均＜0．01)和未治疗组(Z：-2．366、-2．937，P均＜0．01)。IgG1和IgG4亚群抗体中，螨粗制抗原、Der f Ⅰ和Der f Ⅱ特异性抗体水平相互间具有相关性；三类变应原特异性IgG1和IgG4抗体间存在相关性；免疫治疗组患者鼻分泌物中螨粗制变应原IgG1和IgC4抗体与血清中特异性IgE抗体间具有相关性。结论健康人群和变应性鼻炎患者均具有对其环境变应原产生特异性IgG1和IgG4抗体的能力，而变应性鼻炎患者具有更高的反应性，能产生高于健康人的特异性IgG亚型抗体，而变应原特异性免疫治疗能显著增加鼻分泌物中IgG1和IgC4抗体的水平。鼻分泌物中IgG1和IgG4抗体的增加可能是免疫治疗有效的机制之一。     

螺旋神经节细胞无血清培养方法的研究

目的：通过对比不同培养条件下螺旋神经节细胞（SGCs）的生长特性，从而确定一种可以获得足够数量和纯度的SGCs体外培养的最佳方法。方法：采用出生3d内的SD大鼠，取螺旋神经节组织，观察有血清培养基及无血清培养基，加或不加阿糖胞苷（Ara—c）对体外培养SGCs纯度及活性的影响。免疫组织化学鉴定培养的螺旋神经节细胞。结果：使用DMEM／F12培养基及B27添加剂，联合5μmol／L Ara-c作用48h，能有效抑制非神经细胞增殖，得到比较纯的SGCs。通过hochest33258及PI双标，发现Ara-C对SGCs毒性较小。得到的细胞经免疫组织化学抗神经丝蛋白抗体证实为SGCs。结论：本实验建立的方法，所获得的SGCs纯度较高，细胞活性保持良好，为体外研究外周听觉系统疾病提供了重要方法。     

人促黄体激素释放素-血管生成素重组毒素的构建表达及其复性的实验研究

目的 研究在大肠杆菌中高效表达人促黄体激素释放素-血管生成素(luteinizing hormone releasing hormone-angiogenin,LHRH-Ang)重组毒素及其复性的方法.方法 利用分子生物学技术构建pET28a/LHRH-Ang表达载体,序列测定验证融合基因的正确性.将测序正确的质粒转化在大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导观察重组毒素的表达.采用梯度透析法对以包涵体形式表达的重组毒素进行复性研究.结果 利用基因工程技术,成功构建了表达LHRH-PⅡ-Ang重组毒素的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组毒素以包涵体的形式获得了表达,其表达量占菌体蛋白总量的18.43%.通过细胞裂解、8 mol/L尿素的变性溶解和二氨基乙基琼脂凝胶(diethyl-aminoethyl DEAE)纯化过程,获得纯度达85%的目的蛋白.用梯度透析法对变性蛋白进行复性,复性重组毒素的质量浓度为1.27 mg/ml.结论 应用墓因工程技术能够成功构建LHRH-Ang重组毒素,并在大肠杆菌中获得高效表达,以包涵体形式存在的重组毒素经梯度透析可以获得有效的复性.     

Isolation of an aminoglycoside receptor from guinea pig inner ear tissues and kidney.

Affinity chromatography was used to isolate aminoglycoside receptors from inner ear tissues and kidney. Neomycin was immobilized on glass beads and served as the stationary phase in column chromatography. Fractionation of an organic tissue extract on this matrix demonstrated two components with high affinity for neomycin: phohphatidyl inositol phosphate and phosphatidyl inositol diphosphate. The toxicity of aminoglycosides is explained on the basis of a drug-interaction with these lipids.     

纯化内耳P0蛋白诱发实验性自身免疫性内耳病动物模型

目的：用从内耳组织中纯化的P0蛋白免疫豚鼠,建立P0蛋白诱发的自身免疫性内耳病动物模型,研究其在自身免疫性内耳病中的作用。方法：采用制备性SDS-PAGE从内耳组织中分离、纯化P0蛋白。以纯化的豚鼠内耳P0蛋白作为抗原免疫豚鼠,观察其听性脑干反应阈,血清中抗体水平和内耳形态学的改变,并用免疫组织化学法确定P0蛋白在耳蜗的分布情况。结果：SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白质只在分子量为30 000的位置上出现单一的蛋白染色带,Western blot结果示该蛋白即为P0蛋白。免疫后有22%豚鼠的听性脑干反应阈升高,对照组动物无变化。实验组血清IgG显著升高（F=6.48,P〈0.01）,反应阈提高豚鼠的螺旋神经节细胞均有不同程度的数目减少,蜗轴小血管周围有炎性细胞浸润。P0蛋白在耳蜗仅分布于螺旋神经节、蜗轴神经纤维的髓鞘上。结论：用制备性SDS-PAGE能够成功地从内耳纯化P0蛋白,用于自身免疫性内耳病的研究。P0蛋白在部分豚鼠能够诱发自身免疫性内耳病,可能是自身免疫性内耳病的自身抗原之一。     

纯化内耳P0蛋白诱发听神经脱髓鞘的实验研究

目的用从豚鼠内耳组织中纯化的P0蛋白免疫大鼠,观察实验动物听神经髓鞘变化,推测P0蛋白在听神经病的发生发展中的作用。方法采用SDS PAGE从内耳组织中分离、纯化P0蛋白,用Western Blot法鉴定纯化的P0蛋白。用纯化的P0蛋白作为抗原免疫大鼠,观察其听性脑干反应阈、耳声发射的变化、动物血清IgG水平以及听神经的髓鞘在光镜电镜下的形态学变化,免疫组织化学技术观察P0蛋白在听神经上的分布。结果免疫后实验组大鼠听力学显示听神经病的特征：耳声发射正常,而听性脑干反应严重异常;实验组血清IgG水平显著升高。电镜下可见听神经的脱髓鞘病变,免疫组织化学技术显示P0分布在蜗神经纤维的髓鞘上。结论P0蛋白作为抗原能诱发蜗神经的脱髓鞘病变,可能是听神经病的重要发病机制之一。     

Isolation of an aminoglycoside receptor from guinea pig inner ear tissues and kidney

Summary Affinity chromatography was used to isolate aminoglycoside receptors from inner ear tissues and kidney. Neomycin was immobilized on glass beads and served as the stationary phase in column chromatography. Fractionation of an organic tissue extract on this matrix demonstrated two components with high affinity for neomycin: phosphatidyl inositol phosphate and phosphatidyl inositol diphosphate. The toxicity of aminoglycosides is explained on the basis of a drug-interaction with these lipids.This research was supported by Research Grant NS-13792 and Program Project Grant NS-05785 from the National Institutes of Health