内皮抑素通过Notch1/血小板源生长因子信号通路对小鼠肺纤维化的抑制作用

目的研究内皮抑素通过Notch1/血小板源生长因子（Notch1/PDGF）信号通路对小鼠肺纤维化的抑制作用。 方法将30只小鼠分为对照组、模型组和内皮抑素组,每组各10只。模型组和内皮抑素组小鼠给予气管内注射博莱霉素（5 mg/kg）以建立肺纤维化模型,对照组小鼠仅注射等量等渗NaCl溶液;内皮抑素组小鼠每天腹腔注射内皮抑素（2.3 mg/kg）,对照组和模型组小鼠每天腹腔注射等量等渗NaCl溶液,所有小鼠均持续注射21 d。21 d后处死所有小鼠,取左肺组织行病理学染色;取右肺组织,应用Western-blotting法检测Collagen I,Notch1/PDGF信号通路相关蛋白转化生长因子β1（TGF-β1）、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGF受体β（PDGFR-β）及周细胞相关蛋白Desmin、神经元-胶质细胞抗原2（NG2）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。 结果光镜下,可见对照组小鼠肺泡结构完整,未见异常胶原蛋白;模型组小鼠肺泡结构被破坏,有大量胶原蛋白沉积;内皮抑素组小鼠可见肺组织结构相对完整,而胶原蛋白明显减少。3组小鼠间Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β、Desmin、NG2及α-SMA蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 12.068、30.603、29.757、35.451、16.059、16.420、24.512、19.084、28.102,P均<0.001）。进一步两两比较发现,内皮抑素组小鼠的Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β及α-SMA蛋白表达水平均显著低于模型组小鼠,Desmin及NG2蛋白表达水平均显著高于模型组小鼠（P均<0.05）;而内皮抑素组与对照组小鼠间Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β、Desmin、NG2及α-SMA蛋白表达水平的比较,差异均无统计学意义（P均>0.05）。 结论内皮抑素可通过Notch1/PDGF信号通路抑制周细胞向肌成纤维细胞转化,从而影响小鼠肺纤维化。     

大鼠正畸干预时牙移动对牙周组织中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响及其意义

目的探讨大鼠行正畸治疗中牙移动对牙周组织中Wnt3a、β-catenin mRNA蛋白的表达影响。方法选取7周龄健康雄性SD大鼠48只,根据观察时间分为A组(加力1天)、B组(加力3天)、C组(加力5天)、D组(加力7天)、E组(加力10天)和F组(加力14天),每组各8只,移动各组大鼠左侧上颌第一磨牙、右侧上颌第一磨牙不加力作为自身对照,采用免疫组化染色、逆转录-PCR技术观察各组大鼠牙周组织中Wnt3a、β-catenin mRNA蛋白的表达水平。结果不同时间组别压力区、张力区大鼠牙周组织的Wnt3a、β-catenin蛋白表达差异有统计学意义(P0.05),均随时间的推移呈现先升高后降低趋势,压力区和张力区β-catenin蛋白表达分别于加力后第5天和第7天达高峰,而Wnt3a蛋白表达均于加力后第5天达高峰。A、B、C、D、E、F组张力区的Wnt3a、β-catenin蛋白表达均显著高于对照区和压力区(P0.05);C、D、E、F组压力区的Wnt3a、β-catenin蛋白表达均显著高于对照区(P0.05)。不同时间组别压力区、张力区大鼠牙周组织的Wnt3a、β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P0.05),均随时间的推移呈现先升高后降低趋势,压力区和张力区β-catenin mRNA表达均于加力后第7天达高峰,而Wnt3amRNA表达均于加力后第5天达高峰。A、B、C、D、E、F组张力区的Wnt3a、β-catenin mRNA表达均显著高于对照区和压力区(P0.05);C、D、E、F组压力区的Wnt3a、β-catenin mRNA表达均显著高于对照区(P0.05)。结论大鼠行正畸治疗时牙移动中Wnt3a、β-catenin mRNA蛋白表达上调,参与牙周组织重建,并且分别于第5天、第7天达到高峰。     

DDK1阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制百草枯诱导的肺成纤维细胞转分化北大核心CSCD

目的探讨抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯(paraquat,PQ)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)转分化的影响及相关分子机制。方法将MRC-5细胞分为三组,对照组(Control组):不加药物处理;PQ组:以50μmol/L的PQ刺激MRC-5细胞72 h诱导建立转分化模型;PQ+DKK1组:以50μmol/L的PQ和10 ng/mL的DKK1同时处理细胞72 h。收集细胞,采用细胞免疫荧光和Western Blot分别检测三组细胞转分化标记物α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达水平;同时,应用Western Blot、细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测转分化过程中Wnt通路相关信号分子β-catenin、Cyclin D1和WISP1的表达变化情况;进一步采用Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf-1(DKK1)阻断该信号途径,Western Blot检测β-catenin、Cyclin D1和WISP1表达变化情况,以验证干预效果并分析干扰Wnt/β-catenin信号传递对转分化标记分子α-SMA、Vimentin和Collagen I表达的影响。结果处理72 h后,与对照组细胞相比,PQ组MRC-5细胞α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达水平均显著增加(P<0.05);同时,在PQ诱导MRC-5转分化过程中β-catenin、Cyclin D1和WISP1表达水平显著上调(P<0.05);采用DKK1干扰Wnt/β-catenin信号通路能够抑制PQ诱导MRC-5细胞转分化过程中α-SMA、Vimentin和Collagen I的高表达(P<0.05)。结论DKK1能够通过干扰Wnt/β-catenin信号的激活抑制PQ诱导的成纤维细胞转分化,有望进一步抑制PQ中毒引起的肺纤维化的发生。     

2-吲哚啉酮衍生物对BLM诱导肺纤维化小鼠模型的治疗作用及机制研究

【目的】探讨2-吲哚啉酮衍生物(PMID)对博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化小鼠模型的治疗作用及机制。【方法】40只SPF级、3周龄SD雄性小鼠随机分为对照组、模型组及PMID低剂量组、PMID高剂量组,每组10只。模型组及PMID低、高剂量组小鼠采用BLM成功诱导建立肺纤维化模型后,PMID低、高剂量组小鼠给予5 mg/kg、20 mg/kg PMID溶液灌胃处理(2次/d,间隔6~8 h),连续28 d;对照组、模型组小鼠于同时间给予等量生理盐水灌胃处理。干预结束后,采用苏木精-伊红(HE)染色、胶原纤维(Masson)染色观察各组小鼠组织病理学变化及肺纤维化情况,并比较各组小鼠肺纤维化评分;采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠肺组织中Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)mRNA水平;免疫印迹法检测各组肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白水平。【结果】与对照组比较,模型组及PMID低、高剂量组小鼠肺纤维化评分、CollagenⅢmRNA水平及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、HIF-1α蛋白水平均升高(均P<0.05),且PMID低、高剂量组小鼠肺纤维化评分、CollagenⅢmRNA水平及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、HIF-1α蛋白水平低于模型组,且高剂量组上述指标水平低于低剂量组(均P<0.05)。【结论】PMID可改善BLM诱导的小鼠肺纤维化,可能与抑制PI3K/AKT/HIF-1α通路活化和胶原沉积有关。     

β-catenin和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨β连环素（β-catenin）和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测39例肺癌组织及8例正常对照肺组织中β-catenin和MMP-2的表达,并结合临床和病理资料进行分析。结果1．β-catenin和MMP-2在非小细胞肺癌组织中的胞质表达明显高于对照组,差异具有显著性（P〈0．005）;2．肺鳞癌组织中争catenin的胞质表达低于肺腺癌,胞膜表达高于肺腺癌,差异具有显著性（P=0．02,P=0．041）;3．N1—2肺癌组MMP-2的表达明显高于NO肺癌组,差异具有显著性（P=0．019）;4．非小细胞肺癌细胞β-catenin胞质表达和胞膜表达与MMP-2表达之间不具有相关性（P=0．123）。结论非小细胞肺癌细胞胞质中β-catenin和MMP-2表达明显高于正常人,肺鳞癌组织中β-catenin的胞质表达低于肺腺癌,N1—2肺癌组MMP-2的高表达可能与肺癌转移有关,非小细胞肺癌细胞β-catenin胞质表达和胞膜表达与MMP-2表达之间无相关关系。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠肺纤维化模型中TGF—β1表达影响的研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N—acetylcysteine,NAc）对博莱霉素（bleomycin,BLM）诱导的大鼠肺纤维化模型的肺组织转化生长因子岛（TGF-β1）的蛋白和基因表达的影响及其意义。方法取健康、雌性Wistar大鼠30只,随机分为BLM组（B组）,NAC治疗组（N组）及正常对照组（C组）,每组10只。B组及N组通过气管内注入BLM法制备肺纤维化模型。C组在同样条件下向气管内注射等量的生理盐水,N组于BLM处理前一周及此后每日经强饲法口服NAC（3mmol·kg·day^-1）。三组动物分别于气管灌注后第7天、第14天随机处死5只,取大鼠的肺组织进行病理检测、免疫组化测定肺组织中TGF-β1的蛋白表达;通过RT-PCR检测肺组织TGV-β1 mRNA的表达变化。结果病理学观察发现B组大鼠肺纤维化程度最重,N组的肺泡炎和肺纤维化程度均比B组减轻（P〈0．05）,C组无明显肺泡炎和肺纤维化。B组与C组比较各时间点肺组织的TGF-β1的蛋白含量均增高（P〈0．05）,mRNA的表达升高,相比有显著性差异（P〈0．05）;N组与B组相比较,NAC能够显著降低大鼠的TGF-β1的蛋白水平,其mRNA的表达下降,相比有显著性差异（P〈0．05）。结论NAC可以使肺泡炎及纤维化病变减轻,能降低肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1的蛋白水平,下凋TGF-β1 mRNA的表达,对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化具有显著的抑制作用。     

沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

持续 Wnt 信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖简

背景：如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。目的：以外源性Wnt3a作为诱导剂,激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路,观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。方法：用外源性wnt3a（100μg/L）持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d,通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量,QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活,然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化,流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34＋/Sca-1＋,同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。结果与结论：ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a（100μg/L）连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累;Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加,可见经典 Wnt/β-catenin 信号通路有被激活;单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34＋/Sca-1＋细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%,而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加,而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路,并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。     

TLR4在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型肺组织中的表达

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型肺组织中的表达。方法将60只小鼠随机分为两组:对照组(气管内注入生理盐水)和纤维化组(气管内注入博来霉素5 mg/kg)。处理后用实时定量PCR和免疫蛋白印迹法分别在7、14、21 d观察肺组织中TLR4m RNA和蛋白质的表达。此外,通过HE染色判断肺纤维化的程度。所有数据均用均数±标准差(sx±)表示,两组之间比较采用t检验,多组之间比较采用方差分析。结果 14、21 d纤维化组TLR4 m RNA表达明显高于对照组(P<0.05),且在第21天达到高峰。与对照组相比,纤维化组TLR4蛋白表达增加,21 d达高峰。结论在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中,TLR4的表达与炎症和肺纤维化均密切相关。     

黄芪甲苷对肺纤维化大鼠的治疗作用及对肺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1表达的影响

【目的】研究黄芪甲苷对肺纤维化（PF ）大鼠的治疗作用及对肺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1（SGK1）表达的影响。【方法】36只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和黄芪甲苷干预组。模型组和干预组气管内注射博来霉素（BLM ,5 mg／kg）诱导PF ,对照组在相同条件下给予生理盐水。干预组大鼠d2开始每天经胃管灌服0．1 g／L黄芪甲苷2 m L ,其余两组相同条件下给予生理盐水。治疗的d7和d28处死动物取出肺组织,进行病理学观察;用免疫组化和RT‐PCR检测各组鼠肺组织SGK1蛋白及mRNA表达的水平。【结果】病理学观察显示：与模型组比较,干预组肺泡炎和纤维化程度均减轻,SGK1蛋白及mRNA表达显著降低;与对照组比较,干预组存在一定程度肺泡炎和纤维化,SGK1蛋白及mRNA表达明显高于对照组。【结论】黄芪甲苷可能通过抑制SGK1的过度表达,对实验性大鼠PF具有良好的治疗作用。     

Blockade of the Wnt/β-catenin pathway attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a progressive fibrotic lung disease and characterized by abnormal growth of fibroblasts and lung scarring. While the pathogenesis of IPF is not clearly understood, activation of transforming growth factor-β (TGF-β) and disruption of alveolar basement membrane seem to play important roles in leading to excess disruption of the matrix, which is associated with activated matrix metalloproteinase (MMP) and aberrant proliferation of myofibroblasts. The Wnt/β-catenin pathway is an important regulator of cellular proliferation and differentiation and abnormal activation of Wnt/β-catenin signal was observed in IPF. We examined whether inhibition of the Wnt/β-catenin pathway could attenuate pulmonary fibrosis in a bleomycin-induced murine model of pulmonary fibrosis. Pulmonary fibrosis was induced in C57BL/6N mice by intratracheal instillation of bleomycin. To inhibit the Wnt/β-catenin pathway, small interfering RNA (siRNA) for β-catenin was administered into trachea 2 h before bleomycin instillation and every 48 h afterward until sacrifice on day 14. The level of β-catenin expression was increased in the epithelial cells of bleomycin-administered mice. Intratracheal treatment with β-catenin siRNA significantly reduced β-catenin expression, pulmonary fibrosis and collagen synthesis in bleomycin-administered mice compared with controls, with no significant effect on the inflammatory response. The β-catenin-targeted siRNA also significantly decreased the levels of MMP-2 (P<0.01) and TGF-β (P<0.01) expression in the lung tissue. Blockade of the Wnt/β-catenin pathway by β-catenin siRNA decreased bleomycin-induced pulmonary fibrosis in the murine model. These findings suggest that targeting Wnt/β-catenin signaling may be an effective therapeutic approach in the treatment of IPF.     

Treatment of bleomycin-induced pulmonary fibrosis by transfer of urokinase-type plasminogen activator genes.

During acute and chronic inflammatory lung diseases, the normal fibrinolytic activity in the alveolar space is inhibited by increased levels of plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1). Transgenic mice having increased fibrinolytic activity due to genetic deficiency of PAI-1 develop less fibrosis after bleomycin-induced lung inflammation. These observations led us to hypothesize that pulmonary fibrosis could be limited through enhancement of alveolar fibrinolytic activity by adenovirus-mediated transfer of the urokinase-type plasminogen activator (uPA) gene to the lung. To investigate this hypothesis, 0.075 U of bleomycin was introduced intratracheally into mice. Twenty-one days later, the mice were treated intratracheally with phosphate-buffered saline (PBS), a control adenovirus, or adenoviruses containing murine or human uPA cDNAs. On day 28, the mice were sacrificed, and lung fibrosis was quantitated by measuring hydroxyproline content. As expected, bleomycin caused a doubling in lung hydroxyproline to 345.6+/-28.2 microg/lung (SEM) compared with mice receiving PBS (170.2+/-4.0 microg/lung). Treatment of the bleomycin-injured mice with the control adenovirus on day 21 had no impact on lung fibrosis (338.4+/-17.2 microg/lung). Importantly, the human uPA adenovirus significantly reduced (p<0.05) lung hydroxyproline (281.2+/-22.8 microg/lung), thus attenuating by 38% the bleomycin-induced increase in lung collagen. The improvement in bleomycin-induced lung fibrosis resulting from treatment with the human uPA adenovirus further supports the importance of the fibrinolytic system during inflammatory lung injury and repair.     

Alterations in pulmonary mRNA encoding procollagens, fibronectin and transforming growth factor-beta precede bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice

Female C57Bl/6 mice treated by constant s.c. infusion for 1 week with 100 mg of bleomycin per kg of body weight develop a more pronounced pulmonary fibrosis than BALB/c mice. Within 4 weeks after bleomycin treatment, the pulmonary content of mRNAs encoding fibronectin, alpha 2I procollagen and alpha 1III procollagen was increased. The increases were greater and occurred earlier in C57Bl/6 mice compared to BALB/c mice. Fibronectin mRNA increased 12-fold in C57Bl/6 mice and only 3-fold in BALB/c mice, whereas alpha 1III procollagen mRNA increased 4-fold in C57Bl/6 mice and 2-fold in BALB/c mice. alpha 2I procollagen mRNA was increased only in C57Bl/6 mice (2-fold). The increases were sequential in C57Bl/6 mice: fibronectin mRNA was elevated first, followed by alpha 2I procollagen, then alpha 1III procollagen mRNA. The temporal relationship between these mRNA elevations and extracellular matrix accumulation, and the exaggerated responses in C57Bl/6 mice, suggest that matrix accumulation is a function of the mRNA levels. Transforming growth factor-beta mRNA relative to total polyadenylated RNA was elevated 5-fold in C57Bl/6 mice and depressed 80% in BALB/c mice 1 week after treatment. Early alterations in transforming growth factor-beta mRNA may contribute to murine strain variation in bleomycin-induced pulmonary fibrosis and suggest the involvement of transforming growth factor-beta in this disease.     

博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的动态演变及其发生机制

目的 了解小鼠肺纤维化模型的动态演变，探讨博莱霉素致肺纤维化的作用机制。方法 36只雄性ICR小鼠，按随机数字表法分为阴性对照组（NC组）和肺纤维化模型组（FMA、FMB、FMC、FMD、FME组），每组6只。除NC组外，其余各组经鼻滴入博莱霉素建立肺纤维化模型。分别于6、14、21、28和35d处死各组小鼠，取外周血经流式细胞仪测定T细胞亚群Th1／Th2和Tc1／Tc2，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中总细胞数和细胞分类，右肺行苏木素-伊红（HE）及Masson染色，测定左肺组织中羟脯氨酸（HYP）的含量；并提取左肺组织总RNA，采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）了解肺组织中多种细胞因子的表达。测定35d处死小鼠的潮气量（Vt）、0．1秒用力呼气容积／用力肺活量（FEV0．1／FVC）和静态肺顺应性（Cst）。结果 ①肺纤维化各组小鼠BALF中细胞总数与NC组比较均显著增高（P均〈O．01），且其肺组织中HYP含量除FMA组外均显著升高（P均〈0．01）。②FME组VT和Cst均较NC组明显降低（P均〈0．01），FEV0．1／FVC则显著升高（P〈O．05）。③在肺纤维化模型炎症期（FMA组），T细胞Th1／Th2和Tc1／Tc2之间的平衡呈Th1、Tc1优势表达为主；在纤维化形成期（FMB、FMC组），则以Th2、Tc2优势表达；在肺纤维化形成后，Th1、Tc1再度呈优势表达的状态。④肺纤维化模型组中转化生长因子-β1（TGF—β1）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）均较NC组显著升高（P均〈0．01）。结论 博莱霉素致肺纤维化小鼠肺功能为限制性通气功能障碍，Th2、Tc2及促纤维化生成因子在肺纤维化形成过程中发挥重要作用。     

葛根素干预激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号途径

背景：国内外学者研究证明,激素性股骨头缺血性坏死的发病机制与体内脂质代谢紊乱,尤其是大剂量激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。目前葛根素抑制激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号转导途径还未经证实。〈br〉 目的：观察葛根素干预激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化过程中 Wnt 信号途径相关基因及关键蛋白β-catenin表达的变化。〈br〉 方法：第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞随机分为空白组、激素组、葛根素低、中、高剂量组,5组干预6 d后RT-PCR法检测Wnt/β-catenin信号通路主要成员Wnt10b mRNA、GSK3β mRNA、β-catenin mRNA的表达,Western blot法对β-catenin蛋白的表达进行检测分析。〈br〉 结果与结论：与激素组比较,葛根素各干预组Wnt10b mRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达水平均显著升高;GSK3βmRNA的表达水平显著降低。提示葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用可能是通过调节信号通路的Wnt10b mRNA、GSK3βmRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达来实现的。葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机制不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。     

Tumor necrosis factor/cachectin plays a key role in bleomycin-induced pneumopathy and fibrosis

The role of TNF-alpha/cachectin in the pneumopathy elicited by bleomycin has been investigated. After a single intratracheal bleomycin instillation, an increase of the lung TNF-alpha mRNA level was evident, from days 5 to 15, as shown by Northern gel analysis of whole lung RNA. In contrast, lung IL-1-alpha and GM-CSF mRNA were not detectable. In mice passively immunized with rabbit anti-mouse TNF-alpha IgG, the bleomycin-induced collagen deposition, evaluated by the total lung hydroxyproline assay on day 15, was prevented. Depletion of the CD4 and CD8 T lymphocytes by an in vivo treatment with mAb prevented the bleomycin-induced increase of TNF mRNA level and fibrosis. After an administration of bleomycin in continuous intraperitoneal perfusion, the diffuse alveolar damage observed by light and electron microscopy was almost completely prevented by anti-TNF antibody. These results indicate that in response to bleomycin, the T lymphocytes induce, by an undefined mechanism, an increase of the pulmonary TNF production, which leads to alveolar damage, growth of fibroblast, and collagen deposition.     

转化生长因子β1/Smads通路在百草枯中毒所致上皮-间充质转变和肺纤维化中的作用研究

目的本研究通过观察百草枯诱导大鼠肺纤维化中转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads信号通路的上皮-间充质转变（EMT）现象及相关蛋白的表达。 方法将60只雄性大鼠分为对照组及百草枯组,每组各30只。百草枯组腹腔注射80 mg/kg百草枯建立中毒模型,对照组注射3 mL等渗NaCl溶液。分别在建模后1、3、7、14、21、28 d分批处死大鼠,比较两组大鼠肺组织湿干比重及羟脯氨酸水平,取左肺下叶予苏木素-伊红（HE）染色及Masson染色。评估肺组织病理学和肺纤维化程度,采用Western-blotting检测百草枯中毒后1、3、7、14、21、28 d肺组织中EMT相关指标和TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达。 结果两组各时间点肺湿干比重及羟脯氨酸水平的比较,差异有统计学意义（F=9.772、22.541,P均< 0.001）,且百草枯组湿干比重的比值在3、7、14、21、28 d均显著高于对照组（P均<0.05）,而羟脯氨酸表达水平仅在14、21、28 d明显高于对照组（P均<0.05）。病理结果显示百草枯组大鼠中毒后1~7 d,炎症细胞浸润,肺泡间质增厚水肿,中毒后21 d和28 d可见肺泡壁明显增厚及胶原纤维明显增生,而对照组大鼠肺组织无明显改变。对照组与百草枯组各时间点TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、p-Smad4、Smad7、p-Smad7、E-cad、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Vimentin和成纤维细胞特异性蛋白1（FSP-1）表达水平的比较,差异均有统计学意义（F=10.685、7.381、7.878、10.743、14.575、17.791、33.200、14.453、10.849、25.415、26.263,P均< 0.001）,且百草枯组TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、p-Smad4、α-SMA、Vimentin及FSP-1表达水平逐渐升高,中毒后21 d达高峰（P均<0.05）。而Smad7、p-Smad7及E-cad表达水平逐渐降低,Smad7、p-Smad7水平在中毒后7 d达到谷底;E-cad表达水平在中毒后21 d达到谷底（P均<0.05）。 结论TGF-β1/Smads信号通路可能通过调节EMT过程影响百草枯诱导的肺纤维化发生。