Wnt-β链接素通道阻断在肿瘤治疗中的意义

Wnt是由Wnt基因编码的糖蛋白，通过与细胞膜上卷曲蛋白(frizzled)受体相互作用，并与下游一系列如β链接素(β-catenin)等蛋白的磷酸化与去磷酸化过程来完成Wnt信号的转导。由于β链接素是Wnt通道中一种关键转导子，因此，Wnt—β链接素通道的功能正常与否，在肿瘤等多种疾病的发生与治疗中起着非常重要的作用。现综述该领域的研究现状。     

经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤细胞株中作用的初步研究

目的:通过检测经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)细胞株中是否存在异常激活,以探讨其与NHL发病的相关性.方法:选取人NHL细胞株SUDHL-4、Raji和Namalwa(以正常人淋巴细胞作为对照),采用蛋白质印迹法检测各细胞株中β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)及其失活形式Ser9被磷酸化的GSK-3β [phospho-glycogen synthase kinase-3β (Ser9),p-GSK-3β (Set9)]蛋白的表达情况;应用实时荧光定量-PCR技术检测β-catenin编码基因CTNNB1、经典Wnt通路上游相关调控因子低密度脂蛋白受体相关蛋白5(low density lipoprotein receptor related protein 5,LRP5)基因及靶基因c-Myc的转录表达水平.结果:与正常对照组淋巴细胞相比较,3株NHL细胞中总蛋白及细胞核内β-catenin蛋白的表达水平明显上调;p-GSK-3β (Ser9)蛋白较正常对照也存在不同水平表达上调的现象,而GSK-3β蛋白的表达在各组间差异无统计学意义.NHL细胞中CTNNB1、LRP5及c-Myc mRNA表达水平与正常对照相比,均有明显提高.结论:β-catenin作为经典Wnt信号通路重要的激活标志,其在NHL中的高表达及经典Wnt通路其他相关分子异常,说明经典Wnt信号通路可能是导致NHL的分子作用机制之一.     

上皮型钙黏素β-链接素在鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中的表达差异

目的　研究鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素 (E- cadherin)和β-链接素 (β- catenin)蛋白水平和 m RNA水平表达的差异性 ,探讨鼻咽癌癌细胞侵袭转移的机制。方法　采用蛋白印迹法、免疫组化法和反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测 2 1例鼻咽原发癌和 2 1例淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素和β-链接素蛋白和m RNA的表达水平。结果　 (1) 2 1例淋巴结转移癌组织中 ,癌细胞的上皮型钙黏素蛋白表达率 (5 0 % )和蛋白印迹相对强度 (6 5 .0± 15 .9)均明显低于 2 1例原发癌组织中的表达水平 (80 %和 2 0 6 .7± 32 .7) ,且淋巴结转移癌组织中的上皮型钙黏素 m RNA表达水平也低于原发癌组织 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;(2 )β-链接素在鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中均有较高的蛋白表达量 ,其 m RNA表达水平在不同组织中的表达也相似 ,均未显示有差异性 (P>0 .0 5 ) ;(3)鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中癌细胞表达上皮型钙黏素和β-链接素未显示相关性 (P>0 .0 5 )。结论　 (1)在鼻咽癌组织中 ,导致癌细胞侵袭转移的一个重要因素可能是上皮型钙黏素的表达下调。 (2 )因突变失活而积聚于细胞内的β-链接素蛋白可能也在协同促进鼻咽癌细胞侵袭转移过程中起作用     

上皮型钙粘素与β-链接素在鼻咽原发癌及其淋巴结转移中的表达差异

目的 研究鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素(E-cadhetjn)和β-链接素(β-catenin)蛋白水平和mRNA水平表达的差异性,探讨鼻咽癌癌细胞侵袭转移的机制。方法 采用蛋白印迹法、免疫组化法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测21例鼻咽原发癌和21例淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素和β-链接素蛋白和mRNA的表达水平。结果 (1)21例淋巴结转移癌组织中,癌细胞的上皮型钙黏素蛋白表达率(50％)和蛋白印迹相对强度(65±15.9)均明显低于21例原发癌组织中的表达水平(80％和206.7±32.7),且淋巴结转移癌组织中的上皮型钙黏素mRNA表达水平也低于原发癌组织,其间具有显著性差异(P<0.05);(2)β-链接素在鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中均有较高的蛋白表达量,其mRNA表达水平在不同组织中的表达也相似,均未显示有差异性(P>0.05);(3)鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中癌细胞表达上皮型钙粘素和β-链接素未显示相关性(P>0.05)。结论 在鼻咽癌组织中,癌细胞上皮型钙粘素的表达下调可能是导致癌细胞侵袭转移的一个重要因素。     

上皮型钙粘素与β-链接素在鼻咽原发癌及其淋巴结转移中的表达差异(英文)

目的研究鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素(E-cadherin)和β-链接素(β-catenin)蛋白水平和 mRNA 水平表达的差异性,探讨鼻咽癌癌细胞侵袭转移的机制。方法采用蛋白印迹法、免疫组化法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测21例鼻咽原发癌和21例淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素和β-链接素蛋白和 mRNA 的表达水平。结果 (1)21例淋巴结转移癌组织中,癌细胞的上皮型钙黏素蛋白表达率(50%)和蛋白印迹相对强度(65±15.9)均明显低于21例原发癌组织中的表达水平(80%和206.7±32.7),且淋巴结转移癌组织中的上皮型钙黏素 mRNA 表达水平也低于原发癌组织,其间具有显著性差异(P<0.05);(2)β-链接素在鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中均有较高的蛋白表达量,其 mRNA 表达水平在不同组织中的表达也相似,均未显示有差异性(P>0.05);(3)鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中癌细胞表达上皮型钙粘素和β-链接素未显示相关性(P>0.05)。结论在鼻咽癌组织中,癌细胞上皮型钙粘素的表达下调可能是导致癌细胞侵袭转移的一个重要因素。     

β-catenin及c-myc在食管癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨Wnt信号通路组件蛋白β-链接素(β-catenin)及c-myc在食管癌中的表达及临床病理意义.方法 收集手术切除食管鳞癌标本60例,取癌旁正常黏膜组织60例作为对照.采用免疫组织化学二步法检测食管癌及癌旁组织中β-catenin及c-myc的表达.结果 β-catenin在食管癌组织中主要表达在胞质,出现有胞核阳性异常表达.c-myc在食管癌组织中主要在胞质中表达,β-catenin和c-myc在食管癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(x2=32.144、24.470,均P=0.000).c-myc蛋白的表达在食管癌的淋巴结转移方面差异具有统计学意义(P＜0.05).β-catenin蛋白的表达在肿瘤分化程度和淋巴结转移方面差异具有统计学意义(均P＜0.05).3-catenin与c-myc的表达呈正相关(r=0.512,P=0.000).c-myc阳性表达者5年生存率较阴性表达者低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 作为Wnt通路的相关基因,β-catenin和c-myc可能与食管癌的发生、发展及转移有关.c-myc的高表达提示患者的预后不良,可能成为食管癌的预后指标之一.     

环指蛋白43基因及其在消化系统肿瘤中的功能

环指蛋白43(RNF43)是一种重要的泛素链接酶.作为Wnt信号通路中的拮抗蛋白,RNF43具有重要的抗肿瘤作用.RNF43突变后会引起Wnt信号通路的异常激活,进而促进细胞的侵袭、转移与增殖.除此之外,在临床抗肿瘤的研究中发现,RNF43与Wnt通路相互作用的位点有望作为肿瘤治疗的分子靶标.近年来,随着相关研究的逐渐深入,RNF43的分子结构及其与Wnt通路中相关蛋白的作用机制已经逐渐明确.而在临床研究中,RNF43蛋白的类似物及相关疫苗也显示出RNF43在肿瘤治疗中的重要地位.     

乙型肝炎病毒X蛋白对肝细胞L02增殖及GSK3β表达的影响

目的:通过研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对人肝细胞株L02细胞增殖、细胞周期以及细胞中糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)表达的影响,探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关性原发性肝细胞癌(hepatoccellular carcinoma,HCC)的发生机制。方法:用HBx腺病毒(Ad-HBx)感染人肝细胞株L02细胞后,RT-PCR法检测L02细胞中HBx和GSK3β mRNA表达情况;MTT法检测L02细胞的增殖率变化;FCM法检测细胞周期中各时相所占比例;蛋白质印迹法检测HBx、总GSK3β(total-GSK3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(phospho-GSK3β,p-GSK3β)、β-连环素(β-catenin)以及细胞用期蛋白(cyclinD1)等蛋白的表达水平。结果:Ad-HBx感染L02细胞后,HBx的mRNA和蛋白均出现表达,细胞增殖率随着时间的延长而增加;G1期细胞所占比例较对照组减少,S期和G2期细胞比例较对照组增加(P<0.05)。感染Ad-HBx后,t-GSK3β在mRNA和蛋白水平上均无明显变化,而p-GSK3β、β-catenin以及cyclinD1蛋白的表达量增加(P<0.05)。结论:HBx可能通过促进人肝细胞株L02细胞中GSK3β的磷酸化,激活Wnt/β-catenin下游信号通路,从而促进细胞的增殖。     

β-Catenin、β-Trcp 及CRD-BP与结直肠癌

Wnt/β-catenin通路在结直肠癌的发生发展过程中起重要作用,其致癌的关键是β-catenin蛋白降解障碍使其在胞内积聚及核易位,并激活下游肿瘤相关性靶基因的转录,不稳定编码区结合蛋白(CRD-BP)是其靶基因之一.在正常细胞中β-catenin降解依赖于β-转导重复相容蛋白(β-Trcp),而在异常细胞中CRD-BP的表达可调控β-Trcp的稳定性.Wnt/β-catenin通路的激活、β-catenin及CRD-BP的高表达、CRD-BP上调β-Trcp与结直肠癌发生、发展及侵袭转移密切相关.     

HBx对肝细胞中β-catenin表达的影响

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡.在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用.Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用.本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制.方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系.通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达.RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化.结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05).结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路.促进原发性肝癌的发生.Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catellin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关.可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生.这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关.     

Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌细胞VEGF表达的调控作用

背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.7倍(P<0.01);同时,激活Wnt/β-catenin信号通路能够上调人肠癌HCT-116细胞VEGF表达水平,并在24 h时差异最显著,是对照组的1.85倍(P<0.01);而抑制Wnt/β-catenin信号通路能够显著下调VEGF表达,是对照组的0.68倍(P<0.01)。结论:Wnt/β-catenin信号通路能够调控人肠癌细胞VEGF表达。     

Wnt/β-catenin信号通路与胰腺癌相关性的研究进展

Wnt信号通路是调节细胞增殖、分化及移型的经典通路之一.Wnt蛋白可与多种不同Wnt蛋白受体结合,激活细胞内不同的信号通路,研究证实Wnt/β-catenin信号通路与胰腺癌的发生发展密切相关.对Wnt/β-catenin信号通路在细胞周期、细胞凋亡、肿瘤干细胞及血管生成方面对胰腺癌发生发展的影响进行综述.     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

Plakoglobin在肿瘤发生中的作用

Plakoglobin(盘状球蛋白,Pg,γ-cat)是脊椎动物中一种多功能的蛋白,与β-catenin(β-cat)具有相似的结构和功能。两者与果蝇的armadillo(Arm)蛋白不仅在细胞粘附系统中发挥作用,而且是Wnt信号传导通路的组成成员,在机体的生长发育和肿瘤发生过程中起着重要的作用。1Plakoglobin     

β-catenin在肝细胞癌及乏氧微环境中的研究进展

Wnt/β-catenin信号转导通路与人类多种肿瘤发生密切相关。β-连环素(β-catenin)是Wnt/β-catenin信号转导通路的关键调控因子, 近年来它在肝细胞癌发病机制的研究中备受关注。本文就β-catenin的生物学功能与肝细胞癌的增殖、侵袭、转移的关系, 特别是在乏氧微环境中的研究进展进行简要综述, 为肝细胞癌发病机制的深入研究和靶向治疗提供理论依据。     

结直肠癌组织中突变型Axin2对Wnt信号转导系统的调控及其机制

背景与目的:Axin2是近期发现的Wnt信号转导系统的新基因,其在结直肠癌中最主要的突变形式为羧基端缺失突变(mutant-type Axin2,mtAxin2).本研究的目的在于探索mtAxin2对Wnt信号转导系统的调控作用及其相关机制.方法:采用免疫组化的方法检测大肠癌组织中β-catenin的表达;构建pCMV-Flag-wtAxin2 和pCMV-Flag-mtAxin2质粒转染293细胞,采用免疫沉淀(co-immunoprecipitation,IP)和Western印迹杂交研究mtAxin2与Wnt信号转导系统中其它关键蛋白的作用;应用TNT T3/T7体外转录翻译系统体外合成mtAxin2 蛋白,用于mtAxin2的体外聚合实验:使用Dual-Luciferase 报告检测系统检测Firefly和Renilla荧光酶活性;构建视网膜受体(retinoid receptor,RR)与蜕皮素受体(ecdysone receptor,ECR)质粒,用于恢复mtAxin2的DIX功能区对mtAxin2功能影响的研究.结果:免疫组化检测显示在有Axin突变的结直肠癌标本中β-catenin蛋白在核内积聚,而无Axin突变者在胞浆内.Westem印迹杂交显示mtAxin2仍具有与GSK-3β、APC、β-catenin、DVL-1和PP2A形成复合体的功能.将Flag-wtAxin2和Flag-mtAxin2共转染293细胞后,mtAxin2与wtAxin2可竞争性地与β-catenin结合.在TNT T3/T7体外转录翻译实验中.wtAxin2与Flag-wtAxin2结合,而与Flag-mtAxin2不结合,mtAxin2不能形成二聚体或多聚体.pCMV-Flag-mtAxin2-RXR质粒转染293细胞后可降低T细胞转录因子报告基因(T-cell factor,TCF)活性,pCMV-Flag-mtAxin2-ECR质粒转染后TCF活性升高;pCMV-Flag-mtAxin2-RXR和pCMV-Flag-mtAxin2-ECR共转染,TCF活性也下降,显示mtAxin2与RXR融合后,融合蛋白可形成二聚体,恢复了Axin2的功能.致TCF报告基因的活性下降.结论:因为缺失DIX区,mtAxin2不能形成二聚体,干扰了β-catenin的降解,引起β-catenin在核内的积聚进而激活Wnt信号转导系统.     

TGF-β信号转导与肿瘤

转化生长因子β(transforming growth factors-β,TGF-β)是一类多功能的多肽类生长因子,主要包括TGF-βs、激活素(activin)/抑制素(inhibins)、骨形态形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)等三大类40多个成员,其中研究较多的是TGF-βs,包括TGF-βl至TGF-β5.近年来,大量文献报道TGF-β信号传导通路的异常与肿瘤的发生、发展、转移等密切相关,现就TGF-β信号传导通路中主要成分与肿瘤的关系做如下综述.     

Pygopus蛋白及其与肿瘤相关研究进展

Pygopus蛋白是2002年在Wnt信号通路β-环连蛋白(β-catenin)下游发现的新功能蛋白.目前发现其具有调控组织发育、转录共激活及染色质重塑作用,并且与多种恶性肿瘤有密切关系.了解Pygopus蛋白在生长发育中的作用及肿瘤调控中的机制对认识肿瘤发生和演进、临床诊断及治疗有十分重要的意义.     

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤顺铂耐药研究中的作用

β-连环素(β-catenin,β-cat)作为一种重要的黏附分子,参与细胞间的黏附及Wnt信号通路的传导。Wnt通路中各成分的改变可导致β-catenin的变化,β-catenin稳定入核启动下游原癌基因的表达,在多种恶性肿瘤的发生、发展和预后中都发挥重要作用。对Wnt/β-catenin信号通路的研究有助于进一步揭示肿瘤顺铂耐药机制,有望为治疗恶性肿瘤提供一个新的靶点。现对Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤顺铂耐药研究中的作用作一综述。     

上皮型钙黏素基因启动子甲基化和β-链接素基因突变对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响

目的　检测鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素基因启动子的甲基化和 β 链接素基因第 3外显子的突变 ,探讨鼻咽癌癌细胞早期发生组织侵袭和淋巴结转移的机制。方法采用DNA甲基化特异性聚合酶链反应、DNA直接测序法和免疫组化法 ,检测 2 1例鼻咽原发癌组织和 2 1例淋巴结转移癌组织中上皮型钙黏素基因启动子的甲基化程度、β 链接素基因第 3外显子的点突变以及 β 链接素蛋白的表达差异性。结果　 (1) 2 1例鼻咽原发癌组织中 ,2 3.8% (5 2 1)的病例可以检测到上皮型钙黏素基因启动子的甲基化 ,而在 2 1例淋巴结转移癌组织中则有 6 1.9% (13 2 1) ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1)。 (2 ) 4 2例癌组织中 ,仅有 3例 (7.1% )检测到 β-链接素第 3外显子的 3处点突变 ,分别为密码子 37(TCT→GCT)、密码子 4 1(ACC→GCC)和密码子 4 7(AGT→ACT) ,但与癌细胞的侵袭转移无相关性 (P >0 .0 5 )。 (3) β 链接素蛋白在鼻咽原发癌和淋巴结转移癌组织中均有较高的表达量 ,其表达部位均为胞膜 ,未见到胞核表达者 (P >0 .0 5 )。结论　 (1)鼻咽癌组织中 ,上皮型钙黏素基因启动子的甲基化是导致上皮型钙黏素表达下调的主要原因 ,也可能是最终造成癌细胞分离移动的决定因素。 (2 ) β 链接素基因第 3外显子的突