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1.
目的 测定我国分离的汉坦病毒A9株L片段的部分核苷酸序列。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增我国分离的汉坦病毒A9株部分L片段cDNA,测定PCR产物的核苷酸序列。结果 PCR扩增产物为L片段4006nt-44541nt(根据76-118株序列),和已发表的汉坦病毒L片段序列比较,A9株和汉滩病毒76-118株同源性最高,为85.2%,和其他不同型别汉坦病毒代表株HR80-39、 相似文献
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汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病… 总被引:1,自引:0,他引:1
采取反转录-聚合酶链反应,分3个片段扩增Ⅰ型汉坦病毒(野鼠型)中国毒株A9株M基因片段,分别克隆入PGEM-T载体中。选择个正向插入的TA9IB、TA9CD、TA9EA克隆,选用Cla Ⅰ、EcoR V进行酶切、连接,获得了1个在PGEM-T载体中插入3.6kb的A9株M基因片段cDNA克隆,酶切图谱分析证实插入片段正确。将A9M片段在痘苗病毒/T7噬菌体RNA聚合酶瞬时表达系统中进行表达,用抗汉 相似文献
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采用反转录-PCR方法,分节段扩增汉坦病毒A9株M基因片段cDNA,并克隆入pGEMT载体中,用双脱氧末端终止法直接测定序列。结果表明,A9株M片段cDNA由3618个碱基组成,编码1135个氨基酸, 核苷酸序列及由其推导的氨基酸序列同76/118株的同源性分别为94.33%和97.80%,说明汉坦病毒A9株与76/118株在糖蛋白的结构上高度保守。同76/118株比较,在3'末端非编码区变异极大,变异率为20%,且多了2个核苷酸。A9株M基因片段核苷酸序列的获得,为利用该cDNA进行基因工程疫苗的研制创造了条件。 相似文献
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采取反转录一聚合酶链反应(PCR),分3个片段扩增I型汉坦病毒(野鼠型)中国毒株A9株M基因片段,分别克隆入PGEM-T载体中。选择3个正向插入的TA9IB、TAgCD、TAgEA克隆,选用ClaI、EcoRV进行酶切、连接,获得了1个在PGEM-T载体中插入3.6kb的Ag株M基因片段cDNA克隆,酶切图谱分析证实播入片段正确。将A9M片段在痘苗病毒/T7噬菌体RNA聚合酶瞬时(Transient)表达系统中进行表达,用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测,观察到很强的特异性荧光,证明AgM基因cDNA能进行表达。 相似文献
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目的 为了获得浙江省汉坦病毒基因组更为详尽的资料,研究汉坦病毒的进化状况及变异程度,为疫苗病毒株的选择使用提供科学依据.方法 设计特异性引物,RT-PCR分段扩增ZT71株全长L、M和S片段,PCR产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定.然后进行遗传进化分析.结果 汉坦病毒ZT71株L、M及S基因分别由6530、3651和1753个核苷酸组成,分别编码2151、1133和429个氨基酸.基因比较分析表明,ZT71株与SEO型汉坦病毒比较其L片段核苷酸同源性为95.5%~99.7%,氨基酸同源性为99.0%~99.3%;M片段核苷酸同源性为84.1%~99.6%,氨基酸同源性为95.3%~99.2%;S片段核苷酸同源性为88.7%~99.5%,氨基酸同源性为96.5%~99.1%;而与其他汉坦病毒同源性则较低.结论 测定了ZT71株的全基因核苷酸序列,其L、M和S片段具有和其他汉坦病毒L、M、S片段相似的核苷酸一级结构,但与SEO型更为接近,属于SEO型病毒. 相似文献
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汉坦病毒Z37株基因组全序列分析 总被引:10,自引:0,他引:10
目的 测定Z37株的全基因组序列,了解我国汉坦病毒疫苗生产株分子基因,分析其遗传学和抗原性差异等。方法 设计出针对各片段的特异性引物,用PCR方法从Z37病毒感染的细胞提取细胞总RNA,逆转录扩增、产物克隆T载体,纯化后测序,测定的序列应用DNASTAR软件比较分析。结果 Z37株全基因组由L片段6530nt、M3651nt、S1754nt组成,分别编码2151、1133、429个氨基酸,与同型病毒间同源率高达95.2%-99.5%,绘出了3个片段的核苷酸和氨基酸的系统发生树。结论 测定得到了Z37株的全基因组序列,为研究疫苗毒株的生物学特性、致病机理等提供了分子基础。 相似文献
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目的测定汉坦病毒Q32株L、M片段的全长序列,了解其分子基础。方法设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增Q32株全长L、M片段,PCR产物纯化后直接测序,或用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,然后进行遗传进化分析。结果Q32株L片段的全基因序列共6533个核苷酸,GC含量为37·38%,AT含量为62·62%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),该读码框架从38到6493,由6456个核苷酸组成,编码2151个氨基酸,可以合成相对分子质量为2·46×105的蛋白。M片段全基因序列共3616个核苷酸,GC含量为39·44%,AT含量为60·56%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),其读码框架从41到3448,由3408个核苷酸组成,编码1135个氨基酸,可以合成相对分子质量为1·26×105的蛋白。Q32编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域。结论汉坦病毒Q32株M和L片段具有和其他汉坦病毒糖蛋白和RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构,核苷酸序列虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高。 相似文献
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人白细胞介素13cDNA的克隆及序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术从中国人外周血淋巴细胞中克隆了IL-13cDNA,序列测定表明克隆的IL-13cDNA含成熟的IL-13蛋白全部编码,且存在编码第98位Gln的密码子CAG,这为进一步表达IL-13并深入探究功能奠定了基础。 相似文献
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天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因片段克隆和序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 了解天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒,命名为TJJ106,提取TJJ16感染Vero-E6细胞的总RNA,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR扩增S基因片段,纯化后兜隆于pMD-18T载体,测定核苷酸序列并进行分析。结果天津地区首次从社鼠中分离出汉坦病毒TJJ16,其S基因片段全序列长为1701nt。只有1个编码N蛋白的开放读码框架(ORF),起始密码子为第37nt,终止于1326nt,推导其编码的蛋白长为429个氨基酸。经核苷酸系统发生树分析,TJJ16株应归属为汉坦病毒的汉滩型(HTN型)毒株,与HTN型新亚型A16株同属一个亚型。结论TJJ16病毒株的分离与S基因片段序列分析,证实在天津市鼠间存在HTN型汉坦病毒感染,对临床和流行病学的研究具有重要意义。 相似文献
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汉坦病毒Z10株全基因序列的测定及分析 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 测定我国肾综合征出血热疫苗株Z10的全基因序列,了解其分子结构特征,并分析Z10与基他汉坦病毒株的遗传差异,为疫苗生产提供依据。方法 从Z10病毒感染的细胞提取总RNA,将逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增的产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定,应用BNAS-TAR软件分析比较。结果 序列测定表明,Z10株L,M,S片段的全基因序列分别由6553,3615,1701个核苷酸组成,单一读码框架分别编码2151,1135,429个氨基酸。基因比较分析表明,Z10株与HTN型外其他汉坦病毒同源性较低,与HTN型病毒接近,但与HTN型病毒核苷酸序列的同源性亦仅为83.6%-87.4%,而其氨基酸序列的同源性高达94.2%-96%,据此绘出了三个片段的核苷酸和氨基酸的种系发生树。结论 测定了Z10株的全基因组序列,首次发现Z10株为已报道的HTN型中的另一亚型。 相似文献
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汉坦病毒Z10株M片段全基因序列分析 总被引:10,自引:1,他引:9
目的 测定我国疫苗株Z10的M片段全基因序列,了解其分子基础,并分析其它其它汉坦病毒株的遗传学差异。方法 从Z10株病毒感染的细胞提取总RNA,将逆转录PCR扩增的产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定,应用DNASTAR软件分析比较。结果Z10株M片段的全基因序列共3615个核苷酸,四种核苷酸的比例分别为A30.15%,T29.41%,G21.72%,C18.73%。以第二种读码方式推导出其最大 相似文献
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应用巢氏PCR法从陕西西安地区间接免疫荧光抗原初检为阳性的黑线姬鼠标本中扩增汉坦病毒的L和S片段部分序列。序列分析显示:不同标本来源的汉坦病毒均为汉滩型病毒,彼此之间L和S部分片段序列同源性较高,与贵州地区优势汉滩型病毒S2/L4群毒株同源性最高,分别为95.0%~97.0%和97.7%~99.3%,但与该地区已报道的汉坦病毒同源性较低。系统发育树显示:所有来自西安的病毒株处在同一个进化分支上,但可分成两个较小的分支。证实目前检测到的西安地区流行的汉坦病毒株与贵州地区汉滩型病毒株亲缘关系最近,而与当地既往流行毒株的差异较大,究竟是西安地区汉坦病毒流行株发生了变化还是当地同时流行多种毒株还有待于进一步研究证实。 相似文献
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Lutz B. Giebel Karl Raab Lothar Zöller Ekkehard K. F. Bautz Gholamreza Darai 《Virus genes》1991,5(2):111-120
The genetic characterization of a serologically Hantaan-like virus but of unknown origin (termedDX) was carried out by molecular cloning and nucleotide sequencing of the corresponding cDNA of the viral S RNA segment. The S RNA was found to be 1765 nucleotides long with 3 and 5 termini being complementary for 24 bases. The virus messenger-sense RNA contains one major open reading frame (ORF) encoding 428 amino acids or a 50 kD polypeptide. A comparison of the DX S RNA segment to those of Sapporo rat, Hantaan, Puumala/Hällnäs B1, and Prospect Hill viruses reveals 95.4, 71.3, 55.3, and 60.9% homology at the nucleotide sequence level, and 94.7, 80.1, 58.4, and 59.8% at the deduced amino acid sequence level. Thus Hantavirus strain DX is very closely related to Sapporo rat virus. We also analyzed the S RNA segments of these Hantaviruses for the presence of a second ORF encoding a potential nonstructural NSs protein. All potential second ORFs detected in the different S RNA segments differ substantially in length and position among the viruses, despite the high conservation of the nucleotide sequences and the overall structure of the nucleocapsid proteins. This suggests that the nucleocapsid protein is the only polypeptide encoded by Hanta-virus S RNA segments, setting them apart from the other members of the Bunyaviridae family. 相似文献