巨噬细胞移动抑制因子介导MPP+/MPTP诱导的小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）/κb（NF-κB）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）/1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶（MPTP）激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的影响和机制，进而对神经元的影响。方法慢病毒MIF-shRNA感染Bv-2细胞，敲低MIF表达。Western blot检测MPP+干预的Bv-2 NLRP3和MIF表达水平、转染病毒后细胞NLRP3、p65、caspase-1表达水平及细胞核、浆蛋白p65表达水平。ELISA检测细胞培养上清液IL-1β、IL-18表达水平。将细胞培养上清液作为条件培养基培养MN9D细胞，Western blot检测TH蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型，向中脑黑质致密部立体定位注射腺相关病毒MIF-shRNA（AAV-MIF-shRNA）敲低MIF表达。对小鼠进行旷场实验、爬杆实验、悬挂实验行为学评估，组织免疫组化检测小鼠多巴胺能神经元细胞数目和小胶质细胞活化情况，Western blot检测小鼠黑质MIF、NLRP3及TH表达情况。结果感染病毒的细胞MIF mRNA（P < 0.001）和MIF蛋白（P=0.014）明显降低。Western blot显示，0.2 mmol MPP+使Bv-2细胞NLRP3（P=0.012）和MIF（P=0.019）表达增高。与MPP组比较，MIF-shRNA组NLRP3（P=0.042）和caspase-1（P=0.003）表达减少，细胞总蛋白中p65表达没有差异（P=0.978）。ELISA检测细胞上清液发现MIF-shRNA组较MPP组IL-1β（P < 0.001）、IL-18（P=0.002）水平降低。与MPP组比较，MIF-shRNA组核蛋白p65表达降低（P=0.016），浆蛋白p65表达升高（P < 0.001）。相较于MPP+的条件培养基，MN9D细胞在MIF-shRNA条件培养基中TH（P=0.01）表达增加。与MPTP组比较，注射MIF-shRNA的小鼠爬杆实验（P=0.024）和旷场实验（P=0.026）评分显著降低，悬挂实验评分显著升高（P=0.001）。组织免疫组化结果显示，相较于MPTP组，AAV-MIF-shRNA组小鼠TH阳性神经元细胞数量增多（P=0.004），小胶质细胞数量减少（P=0.049）。MIF（P=0.033）、NLRP3表达减少（P=0.045），TH蛋白明显增多（P=0.043）。结论抑制MIF表达可以减少MPP+/MPTP干预所引起的小胶质细胞NLRP3炎症小体表达和炎症因子释放，减轻小胶质细胞激活，减轻炎症反应，改善MPTP引起的黑质多巴胺能神经元损伤，在帕金森病神经炎症方面具有保护作用。     

人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响

目的分析人参皂苷Rh2（G-Rh2）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法SPF级，雄性，SD大鼠30只，随机分为对照组（Control组）、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型，Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后，G-Rh2药物干预组给予G-Rh2（20 mg·kg^-1·d^-1）连续灌胃12周，Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态，Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度，TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况；Western blot检测大鼠肾组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平；免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果与Control组相比，DN组肾组织纤维化程度加重，细胞凋亡指数升高（P < 0.01），CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调（P < 0.01），Bcl-2表达下调（P < 0.01）；与DN组相比，G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度，细胞凋亡指数，CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleavedcaspase-3、DDR1表达均显著降低（P < 0.05或P < 0.01），Bcl-2表达显著升高（P < 0.05）。结论G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用，分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基；高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基；高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ；高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950；高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后，CCK-8法测定细胞活性；CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化；免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平；Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和CleavedGSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果与CON组相比，HG组细胞活性明显下降（P < 0.01），心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P < 0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P < 0.01）以及焦亡相关因子NLRP3，GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P < 0.01）均明显升高，铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P < 0.01）。与HG组相比，HG+ MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P < 0.01），细胞和线粒体内ROS荧光强度（P < 0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P < 0.01）以及NLRP3、GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达明显降低（P < 0.05），GPX4蛋白表达增高（P < 0.01）。与HG组相比，HG+ MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）；但与HG+MCC950组相比，HG+MCC950+ ROT组细胞活性明显降低（P < 0.01），ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高，GPX4蛋白表达降低（P < 0.05）。结论MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成，减少焦亡和铁死亡的发生；抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生；线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

目的利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和磷酸酶并和张力蛋白同源物（PTEN）基因，论证它们在神经元体外氧糖剥夺（OGD）损伤后的功能调控作用。方法构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体；提取并将原代神经元分为4组：（1）NC组，仅加空载病毒；（2）NC+OGD组，加空载病毒后缺氧；（3）Si-hif-1α+OGD组，加Si-hif-1α病毒后缺氧；（4）Si-pten+OGD组，加Si-pten病毒后缺氧，均在培养第3天感染病毒，第7天OGD损伤模拟细胞缺氧。缺氧后24 h行荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测干扰效率，行乳酸脱氢酶（LDH）检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化，Western blot检测相应蛋白表达变化。结果慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达；HIF-1α沉默后，缺氧细胞的损伤及凋亡加重，PTEN蛋白的表达升高，p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低（P < 0.05）；PTEN沉默后，缺氧细胞的损伤及凋亡有所减轻，p-PTEN、p-AKT表达升高（P < 0.05），HIF-1α、NR2A及VEGFa的表达无显著变化（P>0.05）。结论慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达，逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制，参与神经元损伤调控。     

右美托咪定预处理通过抑制NLRP3炎性小体激活减轻大鼠肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的探讨右美托咪定（Dex）对大鼠肠缺血再灌注（II/R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用以及核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法将32只健康雄性SD大鼠，随机分为4组（8只/组）。假手术组（Sham组）仅暴露肠系膜上动脉（SMA），肠缺血再灌注组（II/R组）阻断SMA 1 h后再灌注2 h，II/R+右美托咪定处理组（Dex+II/R组）右美托咪定干预后行再灌注，Dex假手术组（Dex组）右美托咪定预处理假手术组。Sham组和II/R组腹腔注射等量生理盐水。采取夹闭SMA 1 h再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。测定各组大鼠肺部组织湿/干质量比值（W/D）、髓过氧化物酶（MPO）活性，HE染色评估肺组织病理学变化以及行肺损伤评分；ELISA检测肺部组织中炎性因子TNF-α、IL-18、IL-1β水平；Western blot检测肺部组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白的表达水平。结果相较于Sham组，II/R组肺组织病理损伤明显，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达显著升高（P < 0.05），肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（P < 0.05），p-AMPK蛋白表达减少（P < 0.05）；相较于II/R组，Dex+II/R组肺组织病理损伤轻微，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达明显下降（P < 0.05），肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降（P < 0.05），p-AMPK蛋白表达明显增加（P < 0.05）。结论右托美咪定通过对NLRP3炎性小体激活的抑制，减轻炎性反应，进而改善大鼠II/R所致的ALI。     

神经调节蛋白2高表达于不同级别胶质瘤组织并通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达

目的探讨神经调节蛋白2（NRG2）在胶质瘤中的表达及其在胶质瘤发生发展中的作用。方法通过GEPIA数据库比较分析与人正常对照组相比，低级别胶质瘤（LGG，n=518）和胶质母细胞瘤（GBM，n=163）样本中NRG2和GFAP基因表达水平变化，并分析LGG和GBM样本中两个分子与患者生存率的关系，以及两个分子表达相关性。获取人胶质瘤组织芯片样本，包含癌旁正常组织10个、LGG组织48个、GBM组织20个；使用免疫组织化学染色观察不同级别人胶质瘤组织芯片样本中NRG2表达水平变化情况，并使用免疫荧光双标法观察NRG2与GFAP的共定位情况。采用Western blot检测Akt抑制剂Perifosine对NRG2调控GFAP表达的影响。结果 NRG2在LGG和GBM样本中均存在高表达，以LGG较为显著（P < 0.01）。GBM样本中，低NRG2水平患者的总体生存率在30月之后略高于高NRG2水平患者。在LGG样本中，NRG2与GFAP基因表达水平呈负相关（P < 0.01），而在GBM样本中则呈正相关（P < 0.01）。免疫荧光染色显示LGG样本中NRG2与GFAP多共定位于同一肿瘤细胞，而在GBM样本中则多表达于不同肿瘤细胞。NRG2促进U-87 MG胶质母细胞瘤细胞中GFAP表达，该作用可被Akt抑制剂Perifosine显著抑制（P < 0.01）。结论 NRG2可高表达于不同级别胶质瘤组织中，可能部分通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达，影响患者生存率。     

抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞“归巢”并改善哮喘

目的观察间充质干细胞（BMSCs）归巢调节哮喘Th1/Th“ 2漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组：正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、BMSCs移植组（BMSCs）、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型，尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学，酶联免疫吸附法检测肺组织白介素（IL）-5、IL-13、IFN-γ，RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达，免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达，免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果与NC组比较，MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低，IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高，Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高（P＜0.05或P＜0.01）。与MC组比较，BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高，BMSCs组Notch1、Jagged1蛋白表达降低，BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低（P＜0.05或P＜0.01）。与BMSCs组比较，BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高，IL-13、Notch1mRNA表达降低（P＜0.05）。结论BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2 “漂移”产生调节作用，Notch1/ Jagged1通路可能参与其过程。     

葛根素通过Fetuin B-AMPK/ACC信号通路减轻2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗

目的探讨葛根素通过Fetuin B-AMPK/ACC信号通路对高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗的调控机制。方法C57BL/6J小鼠随机选取10只正常饮食作为正常对照组，其余40只通过高脂饲料喂养联合腹腔注射100 mg/kg链脲佐菌素建立2型糖尿病小鼠模型，造模成功后采用随机数字表法将小鼠分为模型对照组、葛根素低剂量组（Pue- 50 mg/kg）、葛根素中剂量组（Pue-100 mg/kg）和葛根素高剂量组（Pue-200 mg/kg），干预8周。末次给药后，尾静脉取血检测各组小鼠空腹血糖（FBG），取血和肝组织；ELISA法检测各组小鼠血清空腹胰岛素（FINS），肝脏甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸水平；HE染色法观察小鼠肝脏病理变化；免疫组化法检测小鼠肝脏Fetuin B含量；实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肝脏Fetuin B、AMPK、ACC mRNA表达；Western blot法检测小鼠肝脏Fetuin B、AMPKα1、ACC、P-AMPKαT183/T172、P-ACCS79蛋白表达。结果末次给药后，Pue-100 mg/kg、Pue-200 mg/kg剂量组甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸及FBG低于模型对照组（P < 0.01）；葛根素不同剂量给药组较正常对照组，FINS和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)降低（P < 0.01）。与正常对照组比较，模型对照组小鼠肝脏Fetuin B、ACC mRNA表达明显上升，AMPK mRNA表达降低（P < 0.01）；Fetuin B、ACC蛋白表达升高，AMPKα1、PAMPKαT183/T172、P-ACC S79蛋白表达降低（P < 0.01）；病理学观察到肝脏脂肪变性明显，肝脏Fetuin B表达含量增加。与模型对照组比较，葛根素呈剂量依赖性抑制肝脏Fetuin B、ACC mRNA表达和Fetuin B、ACC蛋白表达，上调AMPK mRNA表达和AMPKα1、P-AMPK αT183/T172、P-ACC S79蛋白表达（P < 0.01）。Pue-50 mg/kg给药组上调AMPK mRNA表达，下调ACC mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论葛根素可能通过调节肝脏Fetuin B-AMPK/ACC信号通路减轻2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗，进一步改善糖脂代谢。     

长链非编码RNA Linc00638对类风湿关节炎患者炎症和氧化应激的影响

目的探究类风湿关节炎（RA）患者长链非编码RNA（lncRNA）Linc00638的表达，及其对RA滑膜成纤维细胞（FLS）炎症、氧化应激的影响。方法收集20例正常人（健康对照组）、35例RA患者（RA组）外周血单个核细胞（PBMCs），RT-qPCR法检测Linc00638表达，并研究其与临床指标的相关性；构建Linc00638过表达质粒和小干扰RNA，转染至RA-FLS中；CCK8检测细胞活力；RT-qPCR法检测Linc00638的过表达和干扰效率。ELISA法检测细胞上清液中白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）的表达。结果与健康对照组相比，RA患者血沉（ESR）、C反应蛋白、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）、IgA、C4显著升高（P < 0.05），Linc00638表达显著降低（P < 0.01）；ROC曲线下面积AUC为91.86%，Linc00638的最佳截断值为0.74。Spearman相关性分析表明Linc00638与年龄、病程、DAS28、ESR、C反应蛋白、RF、anti-CCP呈负相关，与IL-4，SOD呈正相关（P < 0.05）。关联规则分析表明Linc00638的下降与年龄（>60岁）、病程（>10年）、ESR、RF、anti-CCP的升高，与IL-4、SOD的降低具有强关联。过表达Linc00638能够抑制细胞活力，干扰Linc00638能够提升细胞活力。过表达Linc00638组能够显著升高Linc00638、IL-4、SOD水平（P < 0.05），降低IL-6、ROS表达（P < 0.05）；si-Linc00638组能显著降低Linc00638、IL-4、SOD表达（P < 0.05），升高IL-6、ROS表达（P < 0.05）。结论Linc00638在RA患者中低表达，可能通过调控炎症和氧化应激参与疾病进展。     

獐牙菜苦苷可减轻糖尿病大鼠的周围神经痛：基于抑制NOXS/ROS/NLRP3通路实验

目的基于NOXS/ROS/NLRP3信号通路探讨獐牙菜苦苷对糖尿病周围神经痛（DPN）大鼠的治疗作用及分子机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)法构建大鼠模型，造模成功后第1、7、14天分别按大鼠体质量腹腔注射干预制剂。将32只SD大鼠随机分为4组：空白对照组、DPN模型组、獐牙菜苦苷治疗组、NOXS抑制剂治疗组。空白对照组：给予10 mL/kg生理盐水；DPN模型组：给予10 mL/kg生理盐水；獐牙菜苦苷治疗组：给予5 mg/kg獐牙菜苦苷；NOXS抑制剂治疗组：给予10 mL/kg二苯基氯化碘盐。在给药完毕30 min后，对各组大鼠进行触觉过敏试验，采用ELISA检测NOXS/ROS/NLRP3以及炎性因子表达水平，采用Western blot方法检测各组大鼠脊髓组织的NOXS/ROS/NLRP3表达水平。结果与空白对照组比较，DPN模型组大鼠在造模后出现痛觉过敏（P < 0.001），促炎因子TNF-α以及IL-6表达升高（P < 0.001），抑炎因子TGF-β表达下降（P < 0.001），NOXS/ROS/NLRP3通路各因子表达升高（P < 0.001）。獐牙菜苦苷干预后有效减轻触觉过敏（P < 0.001），且抑制促炎因子TNF-α（P=0.03）以及IL-6（P=0.002）的表达，促进抑炎因子TGF-β的表达（P=0.04）；并且下调NOXS（P < 0.001）、ROS（P < 0.001）以及NLRP3（P= 0.002）通路各因子的表达水平。獐牙菜苦苷对炎性因子及NOXS/ROS/NLRP3通路各因子的表达影响与NOXS抑制剂治疗组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论獐牙菜苦苷有效缓解触觉过敏，治疗DPN，通过抑制NOXs/ROS/NLRP3信号通路表达，纠正DPN炎性因子失衡是其分子机制之一。     

ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

目的探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法利用逆转录病毒载体系统，构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4，以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector各组细胞的生长情况。采用0.1 μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后，检测细胞凋亡相关指标，采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9，caspase-8和PARP切割带的表达水平；采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector细胞中Akt磷酸化水平。结果免疫印迹法检测结果显示，BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BONVector（P=0.013），稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快（P < 0.05）。相比较于载体对照组BON-Vector，BON-ELF4细胞在0.1 μmol/L表阿霉素处理24 h后caspase-8，caspase-9的蛋白前体降低，而caspase-8，caspase-9切割成熟体升高（P < 0.05）；同时，相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低（P < 0.05）；流式细胞术检测结果显示，22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果，6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高（P < 0.05），而Akt总蛋白的水平基本未受影响（P>0.05）。结论ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤细胞增殖和抗凋亡。     

从心论治方改善ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化及上调ACE2蛋白表达

目的探讨从心论治方（CXLZF）对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化（AS）损伤的作用机制。方法采用高脂饮食喂养ApoE^-/-小鼠12周建立AS模型，随机分为模型组，CXLZF低（4.5 g·kg^-1·d^-1）、中（9 g·kg^-1·d^-1）、高（18 g·kg^-1·d^-1）剂量组，辛伐他汀（5 mg·kg^-1·d^-1）组，同时以普通饮食喂养C57BL/6小鼠作为对照组，6只/组。各组小鼠给予相应药物灌胃，对照组、模型组灌胃等体积生理盐水，干预12周。分别采用油红O、Masson、HE染色法观察斑块及肝脏病变情况，检测血脂、血糖及肝功指标；Western blotting法检测血管紧张素转换酶2（ACE2）、E-选择素（E-selectin）蛋白表达，免疫荧光法对ACE2蛋白表达进行定位。在体外，以CXLZF灌胃SD大鼠制作含药血清、生理盐水灌胃大鼠制作对照血清后，采用100 μg/m L ox-LDL干预人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立细胞损伤模型，CXLZF含药血清（5%、10%、20%）干预人脐静脉内皮细胞，对照组、模型组细胞给予10%对照血清。检测细胞ACE2表达。结果CXLZF低、中、高剂量干预均有效缩小AS小鼠主动脉斑块面积，增加斑块稳定性；同时，CXLZF干预显著降低AS小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平（P < 0.05），高剂量组降脂效果最佳；CXLZF干预还可降低AS小鼠血清天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶含量（P < 0.05）、改善肝脏脂肪变性。CXLZF干预显著上调AS小鼠主动脉ACE2、下调E-selectin表达（P < 0.05）。细胞实验中，CXLZF含药血清（5%、10%、20%）显著上调氧化低密度脂蛋白干预人脐静脉内皮细胞的ACE2表达（P < 0.05）。结论CXLZF可有效减轻小鼠AS损伤，可能与调控ACE2蛋白有关。     

抑制转化生长因子β表达可以减少纤连蛋白的形成并促进小鼠脊髓损伤的修复

目的探讨抑制转化生长因子β（TGF-β）表达对小鼠脊髓损伤的修复作用。方法将12只小鼠分为3组: 治疗组、对照组和阴性对照组，4只/组，重复实验2次。治疗组通过对脊髓损伤半切模型小鼠进行腹腔注射TGF-β中和抗体（1D11）来抑制TGF-β的表达量；对照组小鼠注射载体抗体（13C4）作为对照，损伤后3次/周，每次25 μL/只；阴性对照组未做半切损伤，4周后心脏灌注取材，选取损伤部位上下1~2 cm脊髓进行包埋，损伤区域的免疫荧光染色通过FSP1观察成纤维细胞募集，通过Fibronectin来观察纤连蛋白沉积以及通过PGP9.5来观察神经学恢复情况。最后选择脊髓损伤钳夹模型来进一步验证，使用免疫荧光染色通过5-HT来观察轴突存活情况以及通过GFAP来观察星形胶质细胞分布情况。结果在脊髓损伤半切模型中，与对照组相比，治疗组损伤区域中成纤维细胞募集减少（P < 0.05），纤连蛋白沉积减少（P < 0.05），神经学功能PGP9.5染色有所恢复（P < 0.05）。在脊髓损伤钳夹模型中，1D11组与13C4组相比，5-HT阳性的轴突存活增加且下行距离延伸，GFAP阳性星形胶质细胞在损伤区域内分布数量增加（P < 0.05）。结论抑制脊髓损伤后TGF-β的表达量可以减少成纤维细胞的募集和纤连蛋白的沉淀，从而促进脊髓损伤后神经学功能恢复来修复脊髓损伤。     

表达高亲和PD-1突变体和嵌合抗原受体的双效CBNK细胞的构建及其生物学特性评价

目的开发一种共表达PD-L1高亲和受体PD-1（HAPD1）和嵌合抗原受体（CAR）的新型双效CBNK（HAPD1-CARCBNK）细胞，进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效。 方法首先构建可同时表达高亲和PD-1（HAPD1）的靶向CD19的CAR的双效慢病毒载体，并包装慢病毒感染从脐血中分离扩增的单个核细胞获得双效脐血CAR-NK细胞。检测分析感染效率、细胞扩增能力、表面标志物表达率; 然后通过体外共培养检测细胞在不同效靶比条件下对靶细胞杀伤效率以及不同扩增时期细胞的杀伤效率。最后在免疫缺陷小鼠（24只）体内验证双效CBNK细胞在体内对靶细胞的杀伤能力。 结果HAPD1和CAR基因利用慢病毒载体可高效转导至CBNK细胞（[18.63±1.88）%]，病毒感染对细胞扩增倍数有一定影响（10.97±2.77 vs 24.84±3.17，P < 0.05），但对细胞表面标志物表达没有显著影响（P>0.05）; 双效NK细胞在效靶比为5:1和10:1时的靶细胞杀伤效力高于普通CARCBNK细胞（[68.38±8.08)%, （79.11±7.42）% vs（49.65±13.60）%，（59.78±9.32）%，P < 0.05）。病毒感染后第9~12天双效NK细胞具有最强靶细胞杀伤能力。体内实验进一步证实，双效NK细胞移植28 d后动物白细胞中肿瘤细胞比例低于普通CAR-CBNK细胞移植组（[19.21±3.07）% vs（29.08±3.15）%，P < 0.05]。 结论本研究成功构建了一种共表达HAPD1和CAR双效CBNK细胞，并在体外和体内实验证实其高效的靶细胞杀伤能力，为肿瘤免疫细胞治疗提供了一个新的有效方案。     

甲状旁腺激素相关蛋白加重蛋氨酸胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病进展

目的研究甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）对蛋氨酸胆碱缺乏饲料（MCD）诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的影响。方法构建小鼠NAFLD模型并分为空白对照组（普通饲料喂养4周）、AAV-Vehicle组（注射空载腺相关病毒AAVVehicle）和AAV-PTHrP组（注射PTHrP过表达腺相关病毒）。实验期间监测小鼠体质量。收集小鼠肝脏组织进行HE染色、油红染色和天狼星红染色评估肝脏组织病理学改变；检测肝脏及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、甘油三酯和游离脂肪酸浓度评估小鼠肝脏损伤及脂肪代谢水平。250 μmol/LFFAs诱导小鼠正常肝细胞和人正常肝细胞24 h构建NAFLD细胞。根据有无PTHrP处理分为PTHrP组、对照组。油红及尼罗红染色检测细胞内脂质沉积程度；CCK8试剂盒检测PTHrP对脂肪变性肝细胞的毒性作用。结果动物实验：对比AAV-Vehicle组，AAV-PTHrP组小鼠体重下降更为快速；AAV-PTHrP组小鼠肝脏谷草转氨酶（P＜0.05）、谷丙转氨酶（P＜0.05）、甘油三酯（P＜0.01）、游离脂肪酸（P＜0.05）水平，NAS评分以及SAF评分均显著升高（P＜0.01，P＜0.05），肝脏脂滴堆积更为明显。细胞实验：同时加入PTHrP，小鼠及人NAFLD细胞模型的脂质沉积更为明显（P＜0.01），且细胞活性下降（P＜0.05）。结论PTHrP可能通过促进肝细胞脂滴沉积，加重MCD诱导的小鼠NAFLD。     

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的探讨原花青素B2（PCB2）是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯（CYP）导致的神经元氧化损伤。方法原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元，将细胞随机分成5组：正常对照组；PCB2处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h）；CYP暴露组（将50 μmol/L的CYP与细胞共培养24 h）；PCB2预处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞预处理30 min后加入CYP 50 μmol/L共培养24 h）；LY294002处理组（先将20 μmol/L的LY294002与细胞预处理30 min，然后加入PCB2预处理30 min，后与CYP共培养24 h）。采用CCK-8分析各组细胞活性，采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平，通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化，采用JC-1检测线粒体膜电位异常，利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果CYP暴露降低细胞活性（P < 0.001），引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征，导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率（P=0.006），改善细胞核形态异常，逆转CYP导致的线粒体膜电位下降，减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位，Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调（P < 0.001）。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用（P < 0.05）。结论PCB2通过激活P13K/Akt信号通路，调控Nrf2/ARE通路，减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。     

TRIM59靶向调控PPM1B对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

目的探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达；Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况；RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量；建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系，实验设未转染组（Control）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、TRIM59模拟物组（mimic-TRIM59）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及TRIM59抑制剂组（si-TRIM59）。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系；Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果TCGA数据库结果表明，TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P=0.006）；TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加（P=0.01）且PPM1B表达下降（P=0.03）；与HNEpC细胞相比，TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加（P=0.04），PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降（P=0.02）；PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关（P=0.01）；Transwell结果显示，上调TRIM59表达，HNE1细胞侵袭和迁移能力增强（P=0.01，P=0.02），下调TRIM59表达，HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制（P=0.01）；同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后，HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制（P=0.02，P=0.01）。结论TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。     

Z-Score成像系统辅助脑血流灌注SPECT对早期阿尔茨海默病患者的诊断有较高价值

目的利用简易Z-Score成像系统（eZIS）对脑血流灌注SPECT图像进行分析，探讨其在早期阿尔茨海默病（AD）诊断中的价值。方法回顾性分析2018年9月~2020年9月至南方医院核医学科行脑血流灌注SPECT检查的71例受检者的临床资料，根据2011版NIA-AA标准诊断为阿尔茨海默病源性轻度认知障碍（MCI）12例，阿尔茨海默病痴呆阶段（AD）11例，无认知障碍的的健康中老年人（NC）8例。所有受检者均已行脑血流灌注SPECT显像，并应用eZIS辅助分析，获得指标值——严重程度、范围和比率。应用SPSS23.0软件比较3组间严重程度、范围、比率的差异，并分析3个指标值单项及联合分析在早期AD中诊断效能。结果（1）3组受检者间性别（P=0.58）、年龄（P=0.21）、受教育程度（P=0.88）的差异无统计学意义；AD组（P=0.00）、MCI组（P=0.04）简易精神状态检查量表（MMSE）分数低于NC组，AD组（P=0.02）MMSE分数明显低于MCI组，差异均有统计学意义；（2）AD组的严重程度（P=0.00）、范围（P=0.00）高于MCI组，AD组、MCI组的严重程度（P=0.00、0.00）、范围（P=0.00、0.00）、比率（P=0.00、0.00）均高于NC组，且差异均有统计学意义，AD组、MCI组的比率（P=0.09）差异无统计学意义；（3）单项分析时严重程度的诊断性能（AUC=0.911）和灵敏度（87.0%）最高，联合分析时诊断性能及灵敏度均高于单项分析，其中范围、比率联合分析的诊断性能（AUC=0.948）和灵敏度（87.0%）较高。结论eZIS辅助脑血流灌注SPECT分析在早期阿尔茨海默病诊断中有较高的应用价值。     

1-脱氧野尻霉素减轻2型糖尿病小鼠的肝纤维化

目的探讨1-脱氧野霉素（DNJ）对糖尿病所致的肝纤维化的改善作用及其内在机制。方法建立2型糖尿病小鼠（T2D）模型，随机分为3组，5只/组：（1）对照组：腹膜内注射柠檬酸盐缓冲液（50 mg/kg）；（2）糖尿病组（DM）：采用高脂饮食饲养8周，静脉注射STZ（50 mg/kg），持续3 d，空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L；（3）DNJ组：给予高脂饮食和10%DNJ（200 mg·kg^-1·d^-1）饮水，持续8周。测定体质量（BW）、血糖、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）。制作肝组织切片行苏木精伊红染色（H&E）和天狼星红染色。此外，检测肝组织中胶原蛋白的溶解度。应用实时定量PCR法检测MCP-1、TNF-α、IL-1β、TGF-β 1mRNA相对表达水平。Western-blot法测定α-SMA和Collagen2（ColA2）蛋白水平。将L929小鼠成纤维细胞用DNJ（10 μg/mL）或PBS预处理30 min，然后在含高浓度葡萄糖的MEM培养基培养24 h。使用二氢乙锭（DHE）染色测定ROS的产生。结果DNJ可显著降低糖尿病小鼠血清中的血糖、TC、TG和SOD水平（P < 0.05），并显著减轻肝组织胶原交联程度，尤其以酶溶型胶原（PSC）以及总胶原含量的减低为主要表现（P < 0.05）。同时，DNJ显著降低由糖尿病引起的促炎因子以及纤维化相关细胞因子的高表达（P < 0.05）。用DNJ预处理后培养的L929细胞在DHE染色中显示出较低的红色荧光强度（P < 0.05）。结论DNJ作为一种潜在的天然功能性营养物质，可以通过降血糖，抗炎以及抗氧化作用减轻T2D诱导的肝纤维化。     

敲低EEFSEC可体外抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨硒代半胱氨酸tRNA特异性真核延伸因子（EEFSEC）对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测人正常前列腺细胞系RWPE1和人前列腺癌细胞系22Rv1、LNcap、Vcap、PC-3细胞中EEFSEC mRNA的表达；收集前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织，采用Western blot法检测前列腺癌组织中EEFSEC的蛋白表达情况。慢病毒感染22Rv1细胞，Western blot检测敲低效率；XTT实验检测各组细胞的增殖能力；划痕实验和Transwell实验用来检测细胞迁移能力；Transwell试验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞周期；qRT-PCR检测敲低EEFSEC后周期相关基因的mRNA水平的变化。结果与对照组相比，EEFSEC在前列腺癌中高表达（P < 0.05）；且EEFSEC高表达导致前列腺癌患者不良预后；感染敲低EEFSEC的慢病毒后，可明显降低22Rv1细胞中EEFSEC的蛋白表达水平；与对照组相比，敲低EEFSEC可显著抑制22Rv1细胞的增殖（P < 0.001），迁移（P < 0.001）和侵袭能力（P < 0.001）；敲低EEFSEC细胞周期主要阻滞在G₀/G₁期，qRT-PCR实验显示敲低EEFSEC可明显下调C-myc和CCNB1的表达，上调p15的表达。结论敲低EEFSEC可能通过降低C-myc表达来抑制前列腺癌细胞22Rv1的增殖、迁移和侵袭能力。