实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的应用

目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)对不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子及尿液进行解脲脲原体(UU)检测,并评价其敏感性和特异度。方法对452例不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子标本,采用SAT检测法、培养法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)进行UU检测,同时再对同一患者的尿液标本进行SAT检测,根据实验结果评估SAT在拭子及尿液标本UU检测中的灵敏度和特异度;同时UU培养阳性的标本经过临床UU规范治疗后,仍采用上述方法对患者进行UU复查,根据实验结果评估SAT在UU检测中的判断预后效果。结果初检时与UU培养结果作比较,UU-SAT拭子标本的检测灵敏度为97.1%(170/175),特异度为97.8%(271/277),差异无统计学意义(χ2=0.010 2,P=0.919 7);UU-SAT尿液标本的检测灵敏度为96.0%(168/175),特异度为98.9%(274/277),差异无统计学意义(χ2=0.163 5,P=0.686 0)。结论 SAT检测泌尿生殖道患者拭子及尿液UU检测具有很高的灵敏度和特异性,同时又有很好的判愈效果,为UU的临床实验室诊断提供了新的检测手段。     

实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法在不孕不育人群解脲脲原体检测中的应用比较

目的比较实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法在解脲脲原体(UU)检测中的诊断价值,以选择更为准确、快速、实用的临床检测方法。方法采集本院就诊的不孕不育对象200例的分泌物2份拭子样本,分别用于液体培养法和SAT法检测。结果液体培养法阳性率为60%,SAT法阳性率为47%,培养法阳性率高于SAT法,女性UU阳性率显著高于男性,26例结果不一致中有11例培养阴性SAT阳性,15例培养阳性而SAT阴性,SAT法的敏感性(100%)和特异性(93.5%)均高于培养法。结论解脲脲原体在不孕不育人群中感染率较高,加强就诊对象UU的筛查、诊治和预防,确保优生优育。SAT技术简便、快速、精准,具有较高的临床实用性,是适合实验室诊断的检测方法 。     

泌尿生殖道解脲脲原体检测方法比较及抗菌药物耐药性分析

目的比较液体培养法和荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)两种不同的解脲脲原体检测方法,了解本地区泌尿生殖道感染患者解脲脲原体的检出率和耐药情况。方法研究对象为2009年8月至2010年7月在宣武医院皮肤性病科就诊的、拟诊为非淋球菌性尿道炎的患者,所有患者泌尿生殖道感染症状和体征较轻。采集受试者尿道或宫颈拭子进行解脲脲原体的液体培养及药物敏感试验,其中部分标本同时应用荧光PCR法检测解脲脲原体。结果液体培养法336例标本解脲脲原体检出率为40.18%。从336例标本中随机抽取110例应用荧光PCR法检测解脲脲原体,检出率为37.27%,药敏试验显示解脲脲原体在体外对美满霉素、强力霉素及交沙霉素敏感。结论液体培养法与荧光PCR法检测解脲脲原体检出率没有明显差异。本地区解脲脲原体耐药情况严重,治疗解脲脲原体感染可以首选美满霉素、强力霉素及交沙霉素。     

三种方法筛查解脲脲原体的效果比较

目的比较三种方法检测疑似非淋菌性尿道炎患者分泌物中解脲脲原体的临床效果。方法对商丘医学高等专科学校附属医院皮肤性病科、妇科298例门诊患者尿道或宫颈分泌物标本用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法、液体培养法、液体培养联合免疫斑点试验(IDT)三种方法检测解脲脲原体,并对结果进行分析。结果三种方法检测结果比较,差异有统计学意义(P0.05)。液体培养法简便、快速但有一定假阳性率,液体培养联合IDT检测与RT-PCR法比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论液体培养联合IDT法简便实用,适合基层医院实验室推广使用。     

初培养结合PCR检测精液解脲脲原体感染的临床应用

目的探讨初培养产物结合PCR方法检测精液解脲脲原体感染应用价值。方法选取120例不育症患者的精液,分别用PCR、培养加药敏试剂盒、初培养产物结合PCR的方法检测解脲脲原体,并与分离培养结果相比较。结果120例精液分离培养出62例解脲脲原体,使用PCR法检测出30例阳性、用培养加药敏试剂盒检测出65例阳性、用初培养产物结合PCR技术检测出62例阳性,以上三种方法与分离培养结果的总符合率分别为73.3%、97.5%和100%。结论初培养产物结合PCR是一种检测精液解脲脲原体的可行性方法。     

快速免疫法在检测泌尿生殖道解脲脲原体中的应用

目的 应用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术这一快速免疫法检测解脲脲原体，用于非淋茵性尿道炎的诊断和治疗。方法 用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术对163例男性非淋茵性尿道炎患者的尿道分泌物进行了解脲脲原体检测，以拭子培养法为金标准判断该方法的检测效果。结果 聚合酶链反应结合反向杂交技术的敏感度为100％，特异度为97．44％，与培养法相比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 聚合酶链反应结合反向杂交技术是一种具高敏感性和特异性的男性泌尿生殖道解脲脲原体的检测方法，值得临床推广使用。     

两种方法对解脲脲原体与人型支原体进行联合检测的意义

目的对在人型支原体与解脲脲原体检测中联合应用液体药敏检测法与固体培养法的临床意义进行探讨。方法把临床收集的样本在固体培养基上(支原体的分离培养)与药敏检测培养基上(液体稀释法)直接接种后,再做抗菌药物的敏感性检测。结果 200例样本中,共检出解脲脲原体64例(32%),人型支原体26例(13%),两种支原体被同时检出16例(8%);对固体培养基进行肉眼观察,能够见到细菌菌落发生生长,其液体培养基能够见到变红的有4例(2%)。将9种药物进行药敏检测,其中解脲脲原体对环丙沙星的耐药率为79.1%,氧氟沙星为65.2%,阿奇霉素为4.0%,红霉素为4.0%,交沙霉素为0.0%,克拉霉素为2.7%,磷霉素为0.0%,强力霉素为1.4%,四环素为5.4%;而人型支原体对红霉素的耐药率为100.0%,环丙沙星为83.1%,氧氟沙星为83.6%,克拉霉素为67.9%,阿奇霉素为49.0%,交沙霉素为18.1%,磷霉素为18.1%,强力霉素为0.0%,四环素为13.6%。结论联合应用液体药敏检测法与固体培养法,能够准确鉴定与培养人型支原体与解脲脲原体,同时能够排除由于细菌污染所导致单纯的液体培养中产生的假阳性反应。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的临床应用价值

目的初步探讨利用实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测解脲脲原体(UU)RNA的临床应用价值。方法对200例捐精体检者采集尿道拭子,分别采用SAT检测UU RNA和实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测UU DNA,并采用培养法检测UU病原体;对UU阳性者进行抗菌药物治疗后,再次采用qRT-PCR和SAT进行病原体检测,并对结果进行比较分析。结果培养法、qRT-PCR和SAT检测UU的阳性率分别为20.0%(40/200)、23.0%(46/200)和22.5%(45/200);三者间一致性比较显示,Kappa值0.75。对于首次筛查UU DNA阳性者进行抗菌药物治疗,15 d后qRT-PCR和SAT的阳性率分别为39.1%(18/46)和32.6%(15/46),2种方法阳性率差异尽管不具有统计学意义,但有用药后SAT检测UU的阳性率低于qRT-PCR的趋势。结论 UU培养法、SAT和qRT-PCR均可以用于UU的筛查,但用SAT检测UU RNA在判断治疗是否有效上具有更高的临床应用价值。     

ＰＣＲ 荧光探针法检测 ４ 种生殖道病原体的结果分析

目的 探讨PCR荧光探针法、培养法、胶体金法和酶联法检测淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体及单纯性疱疹病毒-2型的阳性检出率，评价不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值。方法 收集北京佑安医院性病门诊就诊者生殖道分泌物1 738例、血液标本227例，采用PCR荧光探针法进行解脲脲原体、淋球菌、沙眼衣原体、单纯性疱疹病毒-2型检测，并同时采用培养法检测解脲脲原体、淋球菌；胶体金法检测沙眼衣原体；ELISA法检测单纯性疱疹病毒-2抗体，对PCR荧光探针法及其他3种方法检测结果进行分析。结果 478例PCR荧光探针法和培养法同时检测解脲脲原体中，PCR荧光探针法检测阳性率[38.7%(185/478)]略低于培养法检测阳性率[39.96%(191/478)],差异无统计学意义(P>0.05);654例PCR荧光探针法和胶体金法同时检测沙眼衣原体中，PCR荧光探针法检测阳性率[7.34%(48/654)]高于胶体金法检测阳性率[3.21%(21/654)],差异有统计学意义(P<0.001);379例PCR荧光探针法和培养法同时检测淋球菌中，PCR荧光探针法检测阳性率...     

荧光定量聚合酶链反应和液体培养法检测解脲支原体感染的临床意义

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应和液体培养法检测解脲支原体感染的临床意义。方法:用荧光定量聚合酶链反应和液体培养法检测生殖道感染患者216例,无临床症状体检者84例解脲支原体,及确诊解脲支原体感染患者治疗后解脲支原体,比较2种方法检测阳性率。结果:治疗前、后荧光定量聚合酶链反应阳性检出率均高于液体培养法(P<0.01),但治疗后拷贝数明显下降。结论:临床应根据荧光定量聚合酶链反应及液体培养结果,结合临床综合判断,避免液体培养法的低灵敏度造成漏诊,延误治疗或荧光定量聚合酶链反应的高灵敏度造成误诊。     

解脲脲原体和沙眼衣原体感染与不孕不育的关系

为了探讨沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)感染与不孕不育的关系,我们对来我院就诊的不孕不育患者及正常对照者进行了CT、UU检测。一、材料和方法1.临床资料2004至2006年来我院就诊的不孕不育患者356例,其中男152例,女204例,年龄22~45岁。另选46例年龄相当有分娩史的妇女及39例其妻子有过分娩史的男性为对照,并对实验组进行治疗前与治疗后对照。2.标本采集用棉拭子取女性宫颈分泌物,男性取尿道分泌物或精液、前列腺液,置无菌试管中备用。3.仪器和试剂采用美国AB I公司的Gene Amp5700自动荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪,试剂为广州达安生…     

实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中淋球菌的分析

目的 评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测淋球菌(NG)的特异性和敏感性.方法 对218例疑似患者生殖道拭子行SAT,PCR和NG培养检测,同时对对应的218份尿液标本行SAT检测.结果 SAT平行检测同一来源的拭子标本和尿液标本,检测结果 完全一致.与NG培养法相比,SAT对尿液/拭子标本的检测灵敏度为100.00%,特异性为99.27%;与PCR法相比,SAT对尿液/拭子标本的检测灵敏度为100.00%,特异性为97.08%.SAT法对拭子标本和尿液标本检测结果 的符合率为100.00%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=0,P>0.05).结论 SAT技术检测拭子及尿液中的NG具有很高的灵敏度和特异性,与NG培养相比耗时短,与PCR相比其可用于判愈,防止过度治疗.为NG的实验室诊断提供新的检测方法.     

FQ-PCR法与培养鉴定法检测解脲支原体结果比对分析

目的 了解FQ-PCR法与培养鉴定法检测解脲支原体(UU)检出率的差异性,并探讨导致差异的原因.方法 用PCR法和培养鉴定法分别检测不孕不育患者和泌尿疾病患者的UU,并回顾性分析两种方法的检测结果.结果 不孕不育标本中PCR法和培养鉴定法比较,两者阳性率差异无统计学意义(χ2=1.56,P＞0.05);进一步研究发现在男性泌尿疾病患者即用棉拭子取样所检测的结果显示,两种方法的阳性率差异有统计学意义(χ2=28.5,P＜0.05),女性泌尿疾病患者则差异无统计学意义(P>0.05).结论 用培养鉴定法检测男性泌尿疾病患者的UU时,男性患者宜以前列腺液代替尿道口棉拭子取样,以确保检测结果的可靠性.     

实时荧光定量聚合酶链反应技术检测解脲脲原体生物群的研究

目的建立解脲脲原体生物群Taqman荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法根据解脲脲原体生物群MBA基因差异,分别设计并合成引物和探针。优化引物和探针浓度及试验条件,并进行试验的灵敏度、特异性和重复性评价。结果生物1群最适缓冲体系:25μL反应体系中包含2.5U Taq酶,Mg2+2.5mmol/L,上、下游引物0.1pmol/L,TaqMan探针0.2pmol/L,模板DNA 2μL。生物2群最适缓冲体系:25μL反应体系中包含2.5UTaq酶,Mg2+2.5mmol/L,上、下游引物0.2pmol/L,TaqMan探针0.3pmol/L,模板DNA2μL。PCR反应条件:95℃2min;95℃10s;55℃(检测荧光信号)20s,循环40次。该方法线性范围在1.0×102～8 copy/mL之间,检测限达到100～200copy/mL,特异性达到100%,CV值为2.5%。结论 本研究建立的TaqMan荧光PCR检测解脲脲原体生物群线性范围宽、灵敏度高、特异性及重复性好,能够快速进行解脲脲原体生物群检测。     

荆州地区女性生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染情况分析

目的探讨荆州地区女性生殖道分泌物沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)感染与不孕不育及妇科炎症之间的相关性情况分析。方法采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)对1962例不孕不育症患者、1553例妇科炎症患者、858例健康体检者的生殖道分泌物进行检测。结果不孕不育组的生殖道分泌物感染UU阳性率为26.7%,CT阳性率为5.5%,CT+UU阳性率3.1%,明显高于同期健康体检组的UU阳性率11%,与CT阳性率0.9%,CT+UU阳性率0.2%,差异具有显著统计学意义(P0.01)。妇科炎症组的生殖道分泌物感染UU阳性率为58.1%,CT阳性率为12%,CT+UU阳性率11.1%远高于不孕不育组和健康体检组,与健康体检组相对比差异具有显著统计学意义(P0.01)。结论生殖道CT、UU感染是导致女性不孕不育和妇科炎症的重要因素,把CT、UU列入女性常规检测中非常必要。     

荧光定量PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体

随着社会的发展,不孕不育症患者不断增多,使之不仅是一个医学问题,同时也成为一个社会问题。研究表明,衣原体、支原体的泌尿生殖系感染是造成男女不孕不育的因素之一。为了解我国不孕不育患者泌尿生殖道解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)的感染情况,我们采用荧光定量PCR(FQ—PCR)     

FQ-PCR检测女性泌尿生殖道炎性反应患者解脲脲原体合并感染情况分析

目的 分析女性泌尿生殖道炎性反应患者解脲脲原体(Uu)合并感染淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)的情况,用以指导临床进行正确的诊断和治疗.方法 采用TaqMan探针荧光定量PCR技术,对205例女性泌尿生殖道炎性反应患者进行Uu、NG和CT检测.结果 在205例女性泌尿生殖道炎性反应患者中检测出Uu感染率为52.68%(108/205),NG和CT感染率均为1.46%(3/205),并且女、男单项和混合感染率比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 在女性泌尿生殖道炎性反应患者中Uu有较高的感染率,但对拟诊为Uu的患者应同时进行NG、CT检测,以免由于漏检而延误患者治疗.     

实时荧光定量PCR检测解脲脲原体1270例分析

解脲脲原体（UU）是正常人生殖道可以分离出的一种支原体。由于它与原因不明的不孕、流产以及死胎等有一定的关系，还可导致非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、前列腺炎、输卵管炎等疾病的发生。人一但被解脲脲原体感染后常缺乏特异性症状，极易形成隐匿性感染，使临床诊断相当困难。我室采用实时荧光定量PCR技术（聚合酶链反应）检测UU—DNA（解脲脲原体脱氧核糖核酸）计1270例，现报告如下。     

解脲脲原体和沙眼衣原体感染与不孕不育的关系

为了探讨沙眼衣原体（CT）、解脲脲原体（UU）感染与不孕不育的关系，我们对来我院就诊的不孕不育患者及正常对照者进行了CT、UU检测。     

解脲脲原体液体培养基改良后的效果评价

目的对现有解脲脲原体(Uu)液体培养基进行改良,改善液体培养法较高的假阳性和(或)假阴性率,探寻一个简便、可靠的临床检测Uu的方法。方法向商品化Uu液体培养基中增添头孢匹罗并下调p H值至6.0后作为改良培养基。以固体培养法为金标准,用原液体培养基(包括未过滤组、过滤组)和改良培养基平行检测76例临床标本,通过敏感性、特异性、Kappa值及预测值等指标对不同液体培养基的培养效果进行评价。结果固体培养法的阳性检出率为76.3%(58/76)。以固体培养结果为金标准,传统液体培养法未过滤时的敏感性(98.3%)高,特异性(55.6%)低,假阳性率(44.4%)高;过滤后其假阳性率(11.8%)降低,假阴性率(25.9%)升高;而改良培养基的敏感性(94.8%)、特异性(83.3%)、阳性预测值(94.8%)及阴性预测(83.3%)均较高。结论改良后的液体培养基抑制杂菌效果较好,其检测结果与固体培养结果一致性较高,且改良步骤简单,具有一定的临床应用推广潜质。