人白细胞介素3基因克隆、表达及产物的功能研究

人白细胞介素3(IL-3)作用于早期造血并具有广谱效应。为了制备足量高纯度的IL-3,本研究利用分子遗传学技术构建了三株重组IL-3表达菌株,其中一株表达水平为16％。菌体裂解物对人粒-巨噬系祖细胞有刺激增生的作用;对小鼠早期与晚期红系祖细胞亦有刺激作用,对晚期的作用强;但是对小鼠粒-巨噬系祖细胞无刺激作用,提示人IL-3的造血刺激作用可能具有种属特异性。     

骨髓基质细胞对粒系祖细胞增殖的影响

本文研究了培养不同时间的骨髓基质细胞对粒系祖细胞体外培养生长的影响,并分析其细胞成分及培养上清液的作用。结果表明:在含上清的基质细胞贴壁层上种植骨髓细胞,除第14天外,均可见对CFU-GM的形成有刺激作用。而单纯无上清贴壁细胞层,或单纯基质贴壁细胞培养上清液,均无此刺激作用。说明基质细胞对粒系造血祖细胞生长的调控必须在一个结构功能完整的体系中才能发挥作用。在无外源性CSF作用的情况下,基质细胞仍能使少量CFU-GM生长,也说明基质细胞有刺激粒细胞生长的作用。14天以前,无琼脂间隔层的粒系祖细胞数较高,而21天后,有琼脂间隔层的粒系祖细胞数较高。说明造血基质细胞对粒系细胞生长的调控受着多方面因素的影响,体外培养时间不同有不同表现。基质细胞一方面通过与粒系造血祖细胞相互作用,近距离调节,另方面通过分泌粒系刺激因子和抑制因子,从正、负两方面调节粒系造血,以维持粒系造血的动态平衡。     

重组人粒细胞集落刺激因子治疗骨髓抑制

重组人粒细胞集落刺激因子 (ｒｈＧ -ＣＳＦ)是调节骨髓中粒系造血的主要细胞因子之一 ,可选择性作用于粒系造血祖细胞 ,具有刺激造血干细胞向粒细胞分化 ,促使发育为成熟的粒细胞 ,并增强成熟粒细胞的功能[1 ] ,故对肿瘤患者放射及化学治疗所致的骨髓抑制有治疗作用[2 ] ,是肿瘤化疗的有力辅助药物[3] 。 1 999年 1 0月～ 2 0 0 0年 9月作者应用山东济南齐鲁制药厂生产的ｒｈＧ -ＣＳＦ( 1 0 0 μｇ/支 ,批号Ｓ1 9990 0 5 0号 ,商品名瑞白 )治疗放射及化学治疗所致的骨髓抑制 5 0例 ,现将结果报告如下。1　资料和方法本组 5 0例骨髓抑制患…     

粒-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的刺激作用

粒巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的刺激作用王绮如汪保和夏晖骨髓内皮细胞是组成造血微环境的基质细胞之一，对造血过程有重要调控作用［１］。我们报道粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）对骨髓内皮细胞生长的影响。材料和方法１材料小鼠骨髓内皮...     

肿瘤坏死因子α、γ干扰素和红细胞生成素与类风湿性关节炎贫血相关性研究

目的探讨类风湿性关节炎(RA)伴慢性病性贫血(ACD)的特征,及肿瘤坏死因子α(TNFα)、γ干扰素(IFN-γ)和红细胞生成素(Epo)在其发病中的作用.方法采用ELISA法检测RA患者血清TNFα、IFN-γ水平及RA伴ACD患者的血清Epo变化.测定RA患者的铁代谢指标.观察TNFα、IFN-γ对钴盐(CoCl2)诱导人肝癌细胞株(HepG2) Epo产生的影响及TNFα、IFN-γ和Epo对正常骨髓CFU-E和BFU-E的影响;以及RA自身血清、Epo对RA骨髓CFU-E的影响.结果与正常对照组比较,RA及伴ACD者血清中TNFα、IFN-γ均显著增高.TNFα、IFN-γ与血清铁、血红蛋白浓度呈负相关.RA伴ACD者的Epo水平高于正常对照组,但低于同等贫血程度的单纯缺铁性贫血组,提示RA伴ACD者体内Epo相对不足.TNFα、IFN-γ均能抑制钴盐(CoCl2)诱导的HepG2的Epo生成,且这种抑制作用是特异性的而非毒性所致.TNFα、IFN-γ抑制正常骨髓CFU-E和BFU-E集落形成,并呈剂量依赖性.RA自身血清能抑制其CFU-E形成,而在胎牛血清培养基中RA自身的CFU-E集落数与正常对照组相似.rhEpo能纠正TNFα、IFN-γ和RA自身血清对红系祖细胞的抑制.结论 RA患者血清中存在造血干细胞抑制物.TNFα、IFN-γ可能介导RA的ACD发病.rhEpo能有效治疗RA贫血.     

当归多糖对小鼠粒单系细胞发生的影响

采用造血祖细胞体外培养等实验血液学技术,研究当归多糖对小鼠粒单系统细胞发生的影响及其机理。结果表明,当归多糖对正常或骨髓抑制、溶血性贫血小鼠的CFU-GM增殖均显示刺激作用;对骨髓粒单系造血有明显促进;并能增高外周血白细胞。当归多糖可能通过直接和/或间接途径作用于造血诱导微环境等,从而促进多能造血于细胞和粗单系祖细胞增殖和分化而发挥“补血”功效。     

小鼠胎肝基质细胞高活性造血刺激因子的纯化及性能研究

对我室克隆的小鼠胎肝基质细胞林(MFLSC株)的无血清培养上清中的造血活性物质进行了初步纯化。通过离子交换层析和凝胶过滤层析两步分离,从中得到一高活性的造血刺激因子,称为基质细胞造血刺激因子-1(SHF-1)。经凝胶过滤及电泳结果估测,此因子是分子量约为70kD的单体蛋白,耐碱,较耐热。在体外它对小鼠骨髓粒系、红系祖细胞、多向祖细胞及多能造血干细胞均有刺激作用。     

rhTpo／GM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定

本研究的目的是找出一个治疗由于放化疗等原因造成的造血组织损伤导致的贫血、感染和出血的有效方法。通过RT-PCR的方法从人胎肝中克隆了重组人血小板生成素(rhTpo)的基因,利用基因工程的手段将其与重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的基因相融合,并在原核细胞中表达。研究结果表明,大肠杆菌JM101表达的融合蛋白rhTpo/GM-CSF在体外小鼠骨髓造血祖细胞的培养中保留了Tpo对巨核细胞系和红细胞系的刺激作用,并增加了GM-CSF对粒细胞系的刺激活性。结论提示,原核细胞表达的融合蛋白rhTpo/GM-CSF具有刺激骨髓红细胞系、粒细胞系及巨核细胞系造血的活性。     

黄芪注射液影响贫血小鼠粒单系、红系造血及作用机制的探讨

目的：研究黄芪注射液对贫血小鼠粒单系和红系血发生的影响,并探讨其作用机制。方法：制备贫血小鼠模型,随机分为给药组和对照组,采用造血祖细胞体外培养等实验血液学技术。结果：一定浓度的黄芪注射液体内作用可使贫血小鼠血清集落刺激因子（CSF）水平明显升高,刺激贫血小鼠粒单系、红系造血祖细胞增殖和分化以及骨髓基质细胞增殖,使降低的骨髓有核细胞（BMC）数以及外周血象明显回升,黄芪注射液和造血细胞直接一起孵育对粒单系祖细胞（CFU－GM）和红系祖细胞（CFU－E、BFU－E）的产率无明显影响。结论：一定浓度的黄芪注射液体内作用可促进贫血小鼠粒单系和红系造血功能恢复。     

以红细胞生成素为基础的新型红系造血促进剂研究进展

红系造血的主要调节因子是红细胞生成素 (Erythropoi etin ,Epo) ,它可通过与红系造血祖细胞表面的特异性受体结合 ,促进红系祖细胞的存活、增殖、分化和成熟 ,维持和增加循环中的红细胞数量[1] 。慢性肾功能衰竭、肿瘤放化疗、艾滋病和胃肠道炎症所导致贫血需要使用Epo来治疗。基因重组的人Epo体内半衰期短 ,大约为 6h ,需要反复多次给药。因此 ,人们希望发现更稳定、高效、方便的人Epo产品或其类似物 ,这方面的进展主要有高度糖基化Epo Darbepoetin或新的红系造血刺激蛋白 (NESP)、Epo二聚体、GM CSF/Epo、IL 3/Epo、Epo/Tpo(C)…     

烧伤大鼠血清对骨髓红系粒系造血的影响

目的:观察烧伤血清对骨髓红系粒系造血的影响,探讨促进造血细胞增殖的物质。方法:用5kW溴钨灯致大鼠背部30%体表面积Ⅲ度烧伤,伤后无菌抽取大鼠血清。按10mg/L蛋白加入到骨髓红系或粒系体系中培养。结果:烧伤后3,12,24,48,72和96h,骨髓红系(CFU-E,BFU-E)和粒分(CFU-GM)集落数均显著高于正常对照组;伤后24h达337.7,179.7,240.5个/1×105骨髓有核细胞(bonemarrowcell,BMC);对照组仅98.5,68.7,105.2个/1×105BMC;差异非常显著(t=8.31,9.65,7.84,P<0.01)。结论:烧伤血清对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用。     

有关骨髓脂肪细胞的研究现状

骨髓脂肪细胞来源于血窦的外被细胞或纤维母细胞样细胞。其功能有:1.充填骨髓腔为造血细胞的增殖与生长提供造血的微环境。2.调节进入血液的血细胞数目。3.储存及提供造血所需的能量。无论人与动物,脂肪细胞对造血的支持作用多局限于前脂肪细胞阶段,主要通过基质细胞间相互作用,产生各种集落刺激因子刺激造血,成熟脂肪细胞则失去此功能。     

单克隆抗体HIP2对人CFU—GM及CFU—AML体外作用的研究

刺激型抗人血小板单克隆抗体－ＨＩＰ２在体外有刺激人造血祖细胞集落形成的作用，本研究结果显示：ＨＩＰ２对正常人和急性髓系白血病初诊及缓解患的粒单系造血祖细胞集落产率有明显刺激作用，而对ＡＭＬ祖细胞集落产率无明显刺激作用，为临床ＡＭＬ患在化疗抑制期及骨髓移植造血抑制期用该抗体加速造血恢复提供了实验依据。     

体内外克隆刺激因子

克隆刺激因子(CSFs)的分类是根据骨髓在半固体培养基上受到刺激所形成克隆的不同类型而划分的。4种典型的CSFs为:(1)白细胞介素3(IL-3),刺激红、粒及巨噬细胞克隆形成;(2)GM-CSF,刺激粒和巨噬细胞克隆形成;(3)GM-CSF,刺激粒细胞克隆形成;(4)M-CSF,刺激巨噬细胞克隆形成。白细胞介素、CSF活性表现在体内外直接作用于造血组织并刺激相应类型细胞生长。它们的作用和受体分布有相对特异性。IL-1能协同GM-CSF和M-CSF作用于高纯度干细胞克隆形成。IL-4除了促进T细胞和肥大细胞生长,增加MHCⅡ类抗原表达,促进B细胞产生IgG_1及IgE外,最近又发现它能诱导纤维母细胞产生G和M-CSF,并在人骨髓克隆实验中与G-CSF有协同作用,但它本身无克隆形成活性。IL-5能刺激人骨髓嗜酸性克隆并能使小鼠酸性克隆分化。IL-6除有B细胞分化等活性     

三七总皂甘及其单体对人骨髓造血祖细胞增殖作用的研究

目的 :了解三七总皂苷 (PNS)及其单体 (Rg1、Rb1、Re+R1 )对造血祖细胞的增殖作用 ,以筛选出促进造血的有效单体及其浓度效应点。方法 :采用骨髓粒系、红系祖细胞 (CFU GM和 CFU E)半固体培养集落形成法 ,观察不同浓度的 PNS及其单体 (Rg1、Rb1、Re+R1 )对人造血祖细胞的刺激增殖作用。结果 :1 PNS对造血祖细胞有增殖作用 ,浓度为 8、4 0和 1 0 0 mg/ L时 ,CFU GM集落产率均明显高于对照组 (P均 <0 .0 1 ) ,提高率分别为 (32 .5± 6 .8) %、(5 9.3± 8.7) %和 (37.0± 1 .6 ) % ;CFU E集落增高在 PNS浓度为4 0 m g/ L时最为明显 ,提高率为 (33.3± 7.3) % (P<0 .0 1 )。 2 PNS单体对造血祖细胞有增殖作用 ,Rg1浓度为8和 4 0 mg/ L 时 ,CFU GM集落产率明显高于对照组 (P均 <0 .0 1 ) ,提高率分别为 (33.5± 3.8) %和 (5 9.7±4 .7) % ;Rb1浓度 4 0 m g/ L 时 ,CFU E集落产率明显高于对照组 (P<0 .0 1 ) ,提高率为 (4 7.3± 6 .3) % ;单体Re+R1对 CFU GM和 CFU E均无明显作用。结论 :1 PNS能够促进人骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖 ;2三七 Rg1和 Rb1是促进造血的有效单体     

三七皂苷对人骨髓CD34+造血干/祖细胞的增殖分化作用

为了探讨三七皂苷 (PNS)对人骨髓CD34+ 造血干 /祖细胞的刺激增殖和诱导分化的作用 ,用DynalM 4 5 0CD34+ 免疫磁珠阳性选择法获取高纯度的人骨髓CD34+ 细胞 ,采用多向祖细胞 (CFU Mix)体外集落培养和流式细胞术检测细胞增殖与分化。结果显示 :经免疫磁珠阳性选择 ,从骨髓细胞收获的CD34+ 细胞获得率为 (1.0 3±0 .74 ) % ,流式细胞术分析纯度达到 86 % - 93%。PNS 10mg/L和 2 5mg/L能刺激CD34+ 细胞增殖 ,使CFU Mix集落生成增加 ,2 5mg/L的PNS对CFU Mix产率提高 (34.7± 16 .0 ) % (P <0 .0 1) ,是促进造血的最适浓度 ;PNS2 5 ,5 0和 10 0mg/L时 ,能诱导CD34+ 细胞向粒系细胞分化 ,粒系表面标记CD33+ 和CD15 + 的细胞百分比均明显高于无PNS的对照组 ,而红系细胞表面标记CD71+ 和G A+ 细胞百分比则无明显变化。结论 :PNS对CD34+ 造血干 /祖细胞不但具有显著的刺激增殖作用 ,而且能够诱导其向粒系细胞定向分化的效应     

粒细胞集落刺激因子的作用机理

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)特异地作用于粒细胞系造血祖细胞,诱导其分化成熟,同时刺激成熟中性粒细胞发挥更大效应。因此对骨髓移植以及肿瘤化、放疗后粒细胞减少的恢复,具有明显的促进作用。G-CSF 作用的靶细胞包括:多能造血干细胞、粒系造血祖细胞(CFU-GM)及幼稚和成熟的粒细胞、单核细胞、胎盘滋养层细胞     

三七总皂苷及其单体对人骨髓造血祖细胞增殖作用的研究

目的:了解三七总皂苷(PNS)及其单体(Rg1、Rb1、Re+R1)对造血祖细胞的增殖作用,以筛选出促进造血的有效单体及其浓度效应点.方法:采用骨髓粒系、红系祖细胞(CFU-GM和CFU-E)半固体培养集落形成法,观察不同浓度的PNS及其单体(Rg1、Rb1、Re+R1)对人造血祖细胞的刺激增殖作用.结果:①PNS对造血祖细胞有增殖作用,浓度为8、40和100 mg/L时,CFUGM集落产率均明显高于对照组(P均<0.01),提高率分别为(32.5±6.8)%、(59.3±8.7)%和(37.0±1.6)%; CFU-E集落增高在PNS浓度为40 mg/L时最为明显,提高率为(33.3±7.3)%(P<0.01).②PNS单体对造血祖细胞有增殖作用,Rg1浓度为8和40 mg/L时,CFU-GM集落产率明显高于对照组(P均<0.01),提高率分别为(33.5±3.8)%和(59.7±4.7)%;Rb1浓度40 mg/L时,CFU-E集落产率明显高于对照组(P<0.01),提高率为(47.3±6.3)%;单体Re+R1对CFU-GM和CFU-E均无明显作用.结论:①PNS能够促进人骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖;②三七Rg1和Rb1是促进造血的有效单体.     

促红细胞生成素与红细胞生成的调控

促红细胞生成素 (Epo)是特异性作用于红系祖细胞的糖蛋白激素。近年来 ,重组人Epo已研究成功并应用于临床 ,加速了对Epo的基础及应用研究。本文综述了Epo的基因、蛋白质结构及生物学特性、Epo的产生部位与生成的可能调节机制 ;Epo受体的分子结构及Epo与受体结合后的信号传递途径     

前列腺素对造血的调节

作者通过体外培养证实了粒系造血和巨噬细胞的产生是由正反馈机理包括灶刺激因子(CSF)所调控,而这种正反馈又被负反馈(抑素)作用平衡,甚至提出在粒系造血暂时调节过程中负反馈更为重要。本文主要探讨了在造血的调节机理中,前列腺素(PGE)的作用。实验用年龄2～3月的C57BI/6小鼠,用稍加改进的体外琼脂培养技术(1份3%琼脂,9份含15%小牛血清改进的McCoy′S 5A培养基。加入鼠粒-单核细胞型白血病细胞系(WEHI-3)培养的CSF),观察骨髓定向粒-巨噬祖细胞(CFU-C)、脾B-淋巴