纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对胶质瘤U251细胞放疗增敏作用的实验研究

目的 探讨纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对脑胶质瘤U251细胞的放射增敏作用。方法 细胞免疫组化法检测脑胶质瘤U251细胞CD133的表达情况;流式细胞分选获得U251-CD133+细胞;MTT法观察纳米Fe3O4／CD133Ab复合物和CD133Ab分别对脑胶质瘤细胞U251及U251-CD133+的细胞毒作用;克隆形成抑制实验检测纳米Fe3O4／CD133Ab复合物和CD133Ab对脑胶质瘤U251细胞放射增敏的影响。结果 脑胶质瘤U251细胞中有CD133分子阳性表达并可以分选出CD133阳性表达细胞;在0.0488～25μg／ml范围内,纳米Fe3O4／CD133Ab复合物作用于脑胶质瘤U251及U251-CD133+细胞24h的细胞毒性呈明显剂量依赖性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P＞0.05）。纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对脑胶质瘤U251和U251-CD133+细胞的增殖抑制率最高值分别为59.46％和56.66％,IC50分别为11.84μg／ml和12.06μg／ml。纳米Fe3O4／CD133Ab复合物+照射组与CD133Ab+照射组比较,细胞存活分数差异有统计学意义（P＜0.05）,在照射4Gy以上时,随X射线剂量增加而放射敏感性增强。结论 纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对脑胶质瘤细胞U251和U251-CD133+有细胞毒作用,并且对U251细胞有放射增敏作用。     

过表达程序性细胞死亡基因5 提高脑神经胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

[摘要] 目的：探讨抑癌基因程序性细胞死亡基因5（programmed cell death 5 gene, PDCD5）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺（temozolomide，TMZ）化疗敏感性的影响。方法：收集吉林大学第一临床医院神经外科2009 年1 月至2014 年12 月间收治的脑神经胶质瘤患者116 例。分别利用qPCR、WB及免疫组化方法检测神经胶质瘤细胞系U87、U251、稳定克隆U87-PDCD5 细胞、转染si-PDCD5 后的脑胶质瘤细胞以及原发性神经胶质瘤组织中PDCD5 mRNA及蛋白质的表达情况。MTT法检测过表达或敲降PDCD5 对胶质瘤细胞生长及TMZ化疗敏感性的影响。建立脑胶质瘤细胞系U87 裸鼠皮下荷瘤模型，随机分为对照组、TMZ组、PDCD5 组和TMZ+外源性PDCD5 重组表达载体联合组，治疗20 d 后断颈处死动物，切取瘤组织，测量瘤体积并称瘤质量。采用qPCR、WB 法检测移植瘤组织中PDCD5 的表达水平，分析PDCD5 联合TMZ 治疗对脑神经胶质瘤生长的影响。结果：PDCD5 mRNA和蛋白在U87 细胞中的相对表达量明显低于在U251 细胞中的相对表达量（均P<0.05）；在高级别脑神经胶质瘤组织中，PDCD5 mRNA和蛋白的表达明显低于低级别组织（均P<0.05）；U87-PDCD5 和U251 细胞对TMZ的敏感性均高于U87 细胞（均P<0.05），U87-PDCD5-siRNA、U251-siRNA 组细胞对TMZ的敏感性均明显低于对照组（均P<0.05）。比较裸鼠移植瘤的瘤体积和质量，对照组>TMZ组>PDCD5 组>联合组（均P<0.05）；各组移植瘤组织内PDCD5 mRNA及蛋白的表达水平趋势与之相反（均P<0.05）。结论：PDCD5 过表达可增强脑神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性，而沉默PDCD5 表达作用则相反，PDCD5 与TMZ联合应用可更好地抑制脑神经胶质瘤裸鼠移植瘤的生长。     

腺病毒介导PTEN过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长

目的:研究含第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homologue deleted on chromo-some 10,PTEN)基因的重组腺病毒(Ad-PTEN-GFP)对人胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:于裸鼠背部注射人脑胶质瘤U251细胞,建立胶质瘤裸鼠移植瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为3组进行治疗:Ad-PTEN-GFP组,Ad-GFP组(空载体组)及PBS组(空白组),观察3组裸鼠移植瘤的生长,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,并观察荷瘤裸鼠的生存时间。采用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡的情况,采用免疫组化法检测移植瘤组织中PTEN及P65蛋白的表达。结果:与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组移植瘤的生长受到抑制,肿瘤体积抑制率显著升高[(82.5±12.7)%vs(7.2±1.3)%,P<0.05],荷瘤裸鼠生存时间延长[(103±10)vs(58±8)d,P<0.01];TUNEL结果表明,Ad-PTEN-GFP组与Ad-GFP组相比,移植瘤细胞凋亡率明显增加[(46.4±8.3)%vs(4.6±1.0)%,P<0.01];免疫组化结果显示,Ad-PTEN-GFP组与Ad-GFP组相比,移植瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达率增高(83.3%vs 0,P<0.01),P65蛋白阳性表达率下降(16.7%vs 66.7%,P<0.01)。结论:感染Ad-PTEN-GFP后人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制,其机制可能与P65蛋白表达的下调有关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞体内外抗胶质瘤实验研究

目的：研究正常人细胞因子激活的杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK）对人脑胶质瘤细胞系U251的体外细胞毒活性，以及对脑胶质瘤裸鼠移植模型的体内抗肿瘤作用。方法：取正常人外周血单个核细胞（pefipheral blood mononuclear cell，PBMC），通过多种细胞因子体外诱导成CIK细胞，用流式细胞仪对细胞作动态表型分析。用LDH法测定CIK细胞体外对U251的杀伤率，利用无胸腺裸小鼠U251细胞皮下移植瘤模型观察CIK细胞体内抑瘤作用。结果：CIK细胞在培养2周左右获得大量增殖，CD3^＋／CD56^＋双阳性细胞大量增殖〉1000倍。体外实验证明，CIK细胞对U251有明显的细胞毒活性；体内实验表明，CIK细胞能够显著抑制Balb／c裸鼠皮下移植瘤的生长，其抑瘤率可达50％。结论：CIK细胞是一种新型和高效的免疫活性细胞，具有较强的体内外抑制胶质瘤生长的作用，有可能用于临床上脑胶质瘤的过继性免疫治疗。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA在体内对U251细胞移植瘤的影响

Surivin基因属于凋死蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis,IAP）家族，具有抗细胞凋亡、促细胞增殖和促血管形成等多种生物学活性，其在脑胶质瘤发生和发展过程中的作用尚不完全明确，本研究结盟在观察稳定转染靶向Survivin基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法：将U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWHI-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWHI的U251-P细胞，分别接种于裸鼠背部皮下，建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型，定期观察肿瘤生长情况，测定肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线，观察45天后处死动物、称瘤重，采用免疫组化SABC法检测Survivin、增殖细胞核抗原（proliferating cell muclear antigen，PCNA）以及八因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达，采用TUNEL法检测凋亡细胞，分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（proliferative index,PI），凋亡指数（apoptotie index,AI）以及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：与U251、U251-SR组肿瘤标本，U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟，肿瘤生长缓慢，肿瘤体积及瘤重均明显减小（P〈0.01）；U251-P组裸鼠相丝，U251-SR组肿瘤标本Survivin蛋白表达明显下调：PI和MVD明显减少，AI明显升高（P〈0.001）。结论：靶向Survivin基因的sbRNA能够在体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成，Survivn基因可作为脑胶质瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference,RNAi）技术可为脑胶瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference，RNAi）技术可为脑胶质瘤的基因治疗提供新的重点手段。     

过表达 CD133 对脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响

目的： 构建稳定表达人 CD133 基因的脑胶质瘤U251细胞株,并探讨 CD133 对U251细胞生物学行为的影响。 方法： 将人 CD133 全长cDNA构建入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term ,包装成逆转录病毒pEGZ-Term-CD133,进而感染脑胶质瘤U251细胞株。流式细胞术及Real-time PCR检测感染后U251细胞CD133分子的表达。细胞计数法、神经球形成实验观察CD133过表达对U251细胞体外的增殖和神经球形成的影响。裸鼠皮下成瘤法检测感染后U251细胞的体内致瘤性。 结果： 成功构建pEGZ-Term-CD133逆转录病毒表达载体,并获得稳定表达 CD133 的U251细胞。相比U251-mock、U251细胞,U251-CD133细胞高表达 CD133 mRNA \[（7 400.2±5 003.4) vs (2.0±1.1)、(1.0±2.2),均P=0.0007）和蛋白。感染pEGZ-Term-CD133对U251细胞的体外增殖并无影响（P＞0.05）;但在无血清神经干细胞培养条件下,U251-CD133细胞所形成的神经球数量显著高于U251-mock和U251细胞\[（34.0±7.5） vs（14.6±2.3）、（11.5±1.3）个,均P<0.01\]。接种量为1×105 个细胞时,U251-CD133细胞在裸鼠体内的成瘤时间（32 d）少于U251-mock细胞（38 d）、成瘤率更高（100% vs 30%）,在第41天时,肿瘤体积显著增大\[（180.3±146.8） vs （4.0±0.0）mm3,P=0.003\]。 结论： CD133分子不影响脑胶质瘤U251细胞的体外增殖,但可促进U251细胞神经球的形成和致瘤性。     

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌 SGC7901／VCR祼鼠移植瘤耐药作用的研究

目的：探讨 PPARγ激动剂罗格列酮（ ROS ）逆转人胃癌 SGC7901／VCR 细胞裸鼠移植瘤对丝裂霉素（ MMC）的耐药作用及其可能机制。方法建立人胃癌SGC7901／VCR细胞裸鼠移植瘤模型,将48只裸鼠随机分为6组：空白对照组（生理盐水0．2 ml）、MMC组（ MMC 2．5 mg／kg）、ROS组（ ROS 100 mg／kg）、MMC＋ROS中剂量组（ MMC 2．5 mg／kg＋ROS 50 mg／kg）、MMC＋ROS高剂量组（MMC 2．5 mg／kg＋ROS 100 mg／kg）、MMC＋CSA组（MMC 2．5 mg／kg＋CSA 50 mg／kg）。每组8只裸鼠;用药40天后,观察各组裸鼠体重和移植瘤体积变化,计算抑瘤率,绘制移植瘤的生长曲线;Western-blot法检测P-gp和MGr1-Ag蛋白的表达。结果空白对照组、MMC组移植瘤瘤体积和抑瘤率差异无显著性,ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS高剂量组组、MMC＋CSA组与空白对照组、MMC组比较,移植瘤瘤体积和抑瘤率差异有显著性。空白对照组、MMC组中P-gp、MGr1-Ag蛋白表达最强,ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS大剂量组、MMC＋CSA组与空白对照组和MMC组P-gp、MGr1-Ag蛋白表达比较有统计学意义（ P＜0．05）,MMC＋ROS大剂量组、MMC＋CSA组中其表达最弱,组间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论罗格列酮可抑制人胃癌SGC7901／VCR细胞祼鼠移植瘤瘤体生长,罗格列酮可下调人胃癌SGC7901／VCR细胞裸鼠移植瘤组织中P-gp和MGr1-Ag蛋白的表达。罗格列酮可部分逆转人胃癌SGC7901／VCR细胞祼鼠移植瘤对丝裂霉素的耐药性。     

lncRNA POU3F3 通过调节MGMT的表达影响高级别脑胶质瘤细胞对替莫唑胺耐药

[摘要] 目的：探讨lncRNA POU3F3 通过调节MGMT的表达影响高级别脑胶质瘤细胞对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药及其作用机制。方法：选取2016 年1 月至2018 年1 月北京大学国际医院神经外科收治的60 例患者组织标本,其中,脑外伤患者12 例（正常组）、初发高级别脑胶质瘤患者30 例（初发组）、复发高级别脑胶质瘤患者[复发组,已经接受了手术治疗+TMZ综合治疗再次复发的人群]18 例。采用1、2、4 及8 μg/ml TMZ诱导U251 细胞并维持正常生长1 周以构建抵抗U251 TMZ耐药细胞系（U251 TMZ-resistance,U251-TR）;正常组采用相同体积的0.9%生理盐水处理U251 细胞。采用qPCR和Wb检测正常脑组织及神经胶质瘤细胞中POU3F3 和甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（methylguanine DNA methyltransferase,MGMT）mRNA和蛋白的表达水平。慢病毒转染构建稳定干扰POU3F3 的U251-TR细胞系（U251-TR stable interference POU3F3,U251-TR siPOU3F3）,MTT法验证U251-TR 细胞并检测细胞TMZ IC50值,Wb检测细胞中MGMT蛋白的表达水平。结果：与正常组及初发组比较,复发组POU3F3 表达显著增高（P<0.01）,U251-TR细胞TMZ IC50值显著高于U251 细胞（P<0.01）,U251-TR siPOU3F3 细胞TMZ IC50值显著低于U251-TR细胞（均P<0.01）,但高于U251 细胞（P<0.01）;U251-TR细胞POU3F3 及MGMT mRNA和蛋白的表达水平均高于U251 细胞（均P<0.01）,U251-TR siPOU3F3 细胞POU3F3 及MGMT mRNA和蛋白表达水平均低于U251-TR 细胞（均P<0.01）。结论：lncRNA POU3F3 是促进高级别脑胶质瘤细胞TMZ耐药性的关键因素,可能对临床上TMZ耐药的研究有一定的意义。     

胶质瘤干细胞样细胞中MGMT表达以及与替莫唑胺的耐药关系研究

背景与目的:O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA methyltranferase,MGMT)是一种能将鸟嘌呤DNA第六位氧氧原子上的甲基加合物移除和修复损伤DNA的酶,临床上能影响甲基化类化疗药物的疗效。胶质瘤干细胞样细胞被认为是胶质瘤复发的根源之一。本研究旨在探讨MGMT在胶质瘤干细胞样细胞中的表达以及与替莫唑胺耐药的关系。方法:采用悬浮克隆球形成法自胶质瘤细胞株U251、SKMG-4、SF295、SKMG-1、U373、U87、MGR1和MGR2中富集胶质瘤干细胞样细胞。应用免疫荧光技术检测胶质瘤干细胞样细胞相关分子标志;裸鼠移植瘤试验检测胶质瘤干细胞样细胞的成瘤能力。RT-PCR和Western blot检测胶质瘤干细胞样细胞中MGMT的表达;甲基化特异性PCR分析胶质瘤干细胞样细胞MGMT启动子甲基化状况;CCK-8法检测不同浓度替莫唑胺对胶质瘤干细胞样细胞和胶质瘤细胞增殖的作用。结果:分别自8个胶质瘤细胞株中成功富集胶质瘤干细胞样细胞:U251G、SKMG-4G、SF295G、SKMG-1G、U373G、U87G、MGR1G和MGR2G。胶质瘤干细胞样细胞高表达CD133、Nestin和Sox-2等干细胞标志,而且低表达GFAP和TUJ1。胶质瘤干细胞样细胞均能在裸鼠移植成瘤。MGMT在8株胶质瘤细胞及U87G、MGR1G和MGR2G中为阴性,而在U251G、SKMG-4G、SF295G、SKMG-1G和U373G中为阳性表达。替莫唑胺对胶质瘤干细胞样细胞和胶质瘤细胞的抑制作用差异具有显著性。胶质瘤干细胞样细胞与胶质瘤亲代细胞相比更加耐药(P<0.05)。另外,替莫唑胺对MGMT阳性及MGMT阴性胶质瘤干细胞样细胞IC50间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MGMT阴性表达的胶质瘤细胞经干细胞样培养后,MGMT表达可转为阳性;胶质瘤干细胞样细胞较胶质瘤亲代细胞更耐受替莫唑胺;MGMT的表达与胶质瘤干细胞样细胞对替莫唑胺的耐受之间无明显关联,提示胶质瘤干细胞样细胞对替莫唑胺的耐药可能还有MGMT以外的机制参与。     

苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的：探讨苍术素（ATR）通过调节受体相互作用蛋白激酶（RIPK）1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样（MLKL）信号通路对非小细胞肺癌（NSCLC）A549 细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法：使用0~160 μmol/L 的ATR 处理A549 细胞, MTT 法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR 和/或RIPK1 抑制剂Nec-1（necrostatin-1）、caspase 抑制剂Z-VAD-FMK处理A549 细胞,验证ATR是否诱导A549 细胞发生程序性坏死。将A549 细胞分为对照组、ATR-L 组、ATR-M 组、ATR-H 组（分别用0、10、20、40 μmol/L ATR 处理）、ATR+Nec-1 组（40 μmol/L ATR+50 μmol/L Nec-1 处理）,处理24 h 后,采用PI 单染及Hoechst33342/PI 双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA 荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549 细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR（溶于玉米油中）对裸鼠灌胃给药5 周,观察ATR 对移植瘤生长的影响,WB 法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果：10~160 μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40 μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549 细胞存活率显著低于对照组（P<0.01）和ATR+Nec-1组（P<0.01）,而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组（P<0.01）,说明ATR可诱导A549 细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549 细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L 组、ATR-M组、ATR-H 组A549 细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低（均P<0.01）,且呈药物浓度依赖性;与ATR-H 组比较,ATR+Nec-1 组细胞死亡率、ROS 及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL 表达水平降低,线粒体膜电位显著升高（均P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR 组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低（P<0.05,或P<0.01）,而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL 蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）。结论：ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。     

The medically important dematiaceous fungi and their identification

Dematiaceous fungi include a large group of organisms that are darkly pigmented (dark brown, olivaceous, or black). In most cases the pigment is melanin, and specifically, dihydroxynaphthalene melanin. The diseases produced include chromoblastomycosis, eumycotic mycetoma, and phaeohyphomycosis. Phaeohyphomycosis is a new classification for a diverse group of previously known entities grouped together on the basis of finding dematiaceous hyphal and/or yeast-like forms in tissue; tissue involvement may be superficial, cutaneous and corneal, subcutaneous, or systemic. Identification of these fungi is based mostly upon morphology. Important structures include annellides (Phaeoannellomyces, Exophiala), phialides (Phialophora, Wangiella), adelophialides (Phialemonium without collarettes, Lecythophora with collarettes), differentiation of conidiophores (Xylohypha versus Cladosporium) and conidial hilum, septation and germination (Bipolaris, Drechslera, Exserohilum). Useful laboratory tests include the 12% gelatin test (controversial), nitrate assimilation (W. dermatitidis is negative, most other species are positive), and determination of temperature maxima (especially 37 degrees C for E. jeanselmei, 40 degrees C for W. dermatitidis and B. spicifera, 42 degrees C for X. bantiana, and 45 degrees C for Dactylaria constricta var. gallopava and Scedosporium inflatum).     

Orale Langzeitbehandlung von Onychomykosen mit Ketoconazol

Zusammenfassung: An der Studie zur Wirksamkeit und Anwendungssicherheit von Ketoconazol nahmen 27 Männer im Alter von 20 bis 80 (Median: 57) Jahre, davon 18 mit Onychomykosen und 9 als KontroUen bei den Laborwertbestimmungen, teil. Während des ersten Behandlungsmonats erhielten je 9 Patienten 200 mg und 400 mg Ketoconazol täglich. Danach wurden beide Gruppen 6 Monate mit 200 mg/d weiterbehandelt. Die klinische Beurteilung sowie hämatologische, biochemische und Plasmaspiegeluntersu-chungen erfolgten mindestens monafich, mykologische Untersuchungen wurden vor Aufnahme und bei Beendigung der Therapie vorgenommen. Erne letzte klinische Unter-suchung erfolgte 1 Jahr nach Beginn der Studie. Nach 7 Monaten Behandlung wurden 23 von 30 Nägeln mit “gebessert” bis “stark gebessert” beurteilt, nach dem behandlungsfreien Intervall galt dies für 28 von 30 Nägeln. Die Plasmaspiegel waren mit 200 mg/d ausreichend und uber den Behandlungszeit-raum konstant. Dies spricht für gute orale Resorption und Abwesenheit von Enzyminduktion. Die Laborwerte zeigten im Vergleich zu den Kontrollen und den Werten vor Behandlung keine signifikanten Abweichungen, so daß myelo-, nephro- und hepatotoxische Wirkungen von 400 bzw. 200 mg/d ausgeschlossen werden können. Der Lipidhaushalt wurde nicht beeinfluat und es trat unter Therapie als Folge der Ketoconazolwirkung lediglich Lanosterin im Serum auf. Nach Beendigung der Therapie ging der Lanosteringehalt schnell zurück. Damit erweist sich Ketoconazol in den angewandten Dosen als ein gut verträgliches und zur Langzeitbehandlung von Onychomykosen geeignetes Antimykotikum. Summary: Twenty-seven males with a median age of 57 (range: 20 to 80) years took part in this study on the efficacy and safety of ketoconazole. Eighteen men suffered from onychomycosis; nine served as controls in the safety evaluation. During the first month of treatment, nine patients received 200 mg and the nine other 400 mg ketoconazole daily. Then the treatment was uniformly continued with 200 mg/d for 6 months. Clinical evaluation and haematological, biochemical and plasma level investigations were carried out at least at monthly intervals; mycological controls were performed at the start and end of therapy. A final clinical evaluation was carried out one year after the start of the study. After 7 months of treatment, moderate or definite clinical improvement was obtained in 23 out of 30 nails. After 5 more months without antimycotic treatment this was the case in 28 of 30 nails. Plasma levels obtained with 200 mg ketoconazole daily were adequate and constant during the entire treatment period. This indicates a good oral resorption as well as the absence of induction of hepatic enzymes. The laboratory values did not show significant deviations as compared with the controls or with the pretreatment values. This excludes myelo-, nephro- and hepatotoxic effects of 400 and 200 mg ketoconazole daily. The lipid metabolism was not influenced, the only difference was the occurrence of lanosterol in the serum, which is a result of the mechanism of action of ketoconazole. After the medication period the lanosterol levels subsided rapidly. In the applied doses ketoconazole is a well-tolerated and effective drug for the systemic long-term treatment of onychomycosis.     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Laboratory Techniques Alternative to In Vivo Experiments for Studying the Liberation, Penetration and Fungicidal Action of Topical Antimycotic Agents in the Skin, Including Ciclopiroxolamine

Summary: Short-term experiments on excised skin (human, pig) gave the following results: 1. In the tissue activity test with direct inoculation (D-TAT) commercial preparations of the non-azole antimycotics ciclopiroxolamine, tolnaftate and naftifine, produced higher inhibitory activity against Trichophyton mentagrophytes (standard strain) in various levels of the horny layer than were produced by the azole antimycotics econazole, miconazole, clotrimazole, oxiconazole and bifonazole. Fast drying solutions of antimycotics invariably gave higher inhibitory activities than creams. In the ultrafiltration tissue activity test (UFT- TAT) against Candida albicans (2 strains), antimycotic agents ranked in order of effectiveness as follows: ciclopiroxolamine – most of the azole antimycotics – bifonazole and naftifine. 2. In tests of fungicidal activity against T. mentagrophytes (2 strains) and Microsporum gypseum (1 strain) the first step was to inoculate the skin surface. After the horny layer had been penetrated by fungal mycelia, antimycotic agents of documented fungicidal potency, chiefly in the form of creams, were applied to the skin surface and left to act for up to 18 hours. The horny layer and epidermis were then scraped off and the concentration of viable fungi was determined. Ciclopiroxolamine cream and lotion produced by far the greatest diminution in viable fungi; creams containing oxiconazole and naftifine were moderately effective and those containing tioconazole and bifonazole produced a relatively small decrease in viable fungi. To avoid erroneous results it is important to homogenize and dilute the skin scrapings; if this is not done certain antimycotics will give misleadingly high fungal killing rates. At this early stage the scatter of results is still wide and minor differences in efficacy cannot as yet be detected with certainty. 3. From the results of various comparative tests it is evident that pig skin can be used as a substitute for human skin in the tests listed under 1. and 2. above. This discovery may make a valuable contribution towards limiting the need for experiments on living animals and trials on human beings. Zusammenfassung: In Kurzzeitversuchen an exzidierter Haut (Mensch, Schwein) wurde gefunden: 1. Im Gewebeaktivitätstest mit direkter Inokulation (D-GAT) wurde mit Handelspräparaten der Nichtazol-Antimykotika Ciclopiroxolamin, Tolnaftat und Naftifin in verschiedenen Hornschichtniveaus eine höhere Hemmaktivität gegenüber Trichophyton mentagrophytes (Standard-Stamm) erzielt als mit solchen der Azol-Antimykotika Econazol, Miconazol, Clotrimazol, Oxiconazol und Bifonazol. Rasch trocknende Lösungen von Antimykotika ergaben durchweg höhere Hemmaktivitäten als Cremes. Im Ultrafiltrations-Gewebeaktivitätstest (UFT-GAT) gegenüber Candida albicans (2 Stämme) ergab sich nach erzielter Wirksamkeit die Rangfolge Ciclopiroxolamine – Mehrzahl der Azolantimykotika – Bifonazol und Naftifin. 2. In Fungizidie-Testen gegenüber T. mentagrophytes (2 Stämme) und Microsporum gypseum (1 Stamm) wurde zunächst die Hautoberfläche inokuliert. Nach Durchdringung der Hornschicht mit Pilzmyzelien wirkten auf die Hautoberfläche bis zu 18 Stunden lang überwiegend Cremes von als fungizid publizierten Antimykotika ein. Während sich in abgeschabter Hornschicht und Epidermis der so bearbeiteten Hautoberflächen mit Ciclopiroxolamin-Creme und -Lotion die weitaus höchste Verminderung lebensfähiger Keime ergab, bewirkten Cremes mit Oxiconazol und Naftifin eine mittlere und solche mit Tioconazol und Bifonazol eine relativ niedrige Keimeliminierung. Zur Vermeidung von fehlerhaften Ergebuissen mußten Homogenisierung und Verdünnung der Hautschabsel erfolgen, anderenfalls bei mehreren Antimykotika eine zu hohe Keimabtötung vorgetäuscht worden wäre. Wegen der vorerst noch hohen Streuung der Ergebnisse können kleinere Wirksamkeitsunterschiede noch nicht sicher erfaßt werden. 3. Nach dem Ergebnis verschiedener Vergleichstests kann in den Testen zu 1. und 2. Schweinehaut als Ersatz für Haut vom Menschen dienen und dürfte damit wesentlich zur Einschränkung von Versuchen am lebenden Tier und von Prüfungen am Menschen beitragen.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Efficiency of crude and purified fungal antigens in serodiagnosis to discriminate mycotic from other respiratory diseases

Mycotic immunodiagnosis was performed in 186 hospitalized patients with different respiratory diseases, mostly considered as tuberculosis and others with a doubtful diagnosis. Crude histoplasmin, coccidioidin, paracoccidioidin, blastomycin, candidin, aspergillin, and sporotrichin, as well as purified polysaccharide-protein complexes (PPC) of Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, and Paracoccidioides brasiliensis were used as antigens. Immune tests used included skin test (ST), gel immunodiffusion (ID), counterimmunoelectrophoresis (CIE), complement fixation (CF), and ELISA. A possible association with candidosis was observed in 17% of patients with tuberculosis and diabetes; one presumptive paracoccidioidomycosis, one confirmed aspergillosis, and six cases of active histoplasmosis were determined. Candidin ST showed 29% of positive reactions with an increased frequency in patients between 31 and 55 years of age. CF test showed the highest positivity percentages with crude antigens, specially for Candida antigen (26.3%) and histoplasmin (18.2%). Cross reactions were evident with crude antigens but decreased when PPC's were used in ELISA.