泽兰对UUO大鼠肾脏核转录因子及血管内皮生长因子的影响

目的观察泽兰对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾小管间质纤维化及肾功能的影响。方法采用UUO大鼠模型,将32只雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、泽兰组和替米沙坦组,术后每日1次灌胃,假手术组和模型组给予5mL生理盐水,泽兰组按6g/(kg·d)给药,替米沙坦组按10mg/(kg·d)给药,14d后处死大鼠,收集血清测定血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN),进行HE染色观察肾组织病理改变,Masson染色进行肾间质纤维化评估,应用免疫组织化学方法检测梗阻侧肾组织核转录因子(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果模型组与两治疗组大鼠血清Scr、BUN上升,与假手术组比较有显著性差异(P0.05);模型组、泽兰组、替米沙坦组肾间质纤维化程度均较假手术组明显增高(P0.05);模型组NF-κB表达增加,VEGF表达减少,与假手术组相比差异有显著意义(P0.01);泽兰组与模型组相比,NF-κB表达下降,VEGF表达上升,差异显著(P0.05);泽兰组与替米沙坦组各指标比较均无显著性差异(P0.05)。结论泽兰能通过下调NF-κB和增加VEGF表达而抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化,其改善肾纤维化作用与替米沙坦无明显差异。     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的应用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,研究肝细胞生长因子(HGF)对肾小管上皮细胞的表型重塑的作用和机制。方法在正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E细胞株)培养液中分别加入TGF-β1及HGF,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化;免疫组织化学方法检测肌纤维母细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;ELISA法分析测定培养细胞上清液中纤维连结蛋白(FN)的含量;RT-PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达。结果1TGF-β1诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;α-SMA的表达、上清液FN含量、细胞CTGFmRNA表达明显增加(P<0.05)。2单纯HGF对细胞形态学、α-SMA的表达及FN含量与空白对照组无明显影响;不同浓度HGF组的CTGFmRNA表达较空白对照组均增加(P<0.05)。3HGF能抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态学改变;α-SMA的表达、FN水平均比诱导组TGF-β1明显下降(P<0.05);HGF抑制了TGF-β1诱导的CT-GFmRNA表达(P<0.05)。结论HGF能够负性调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化作用,减少FN分泌;HGF对TEMT的负性调节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的。     

BMP-7在UUO模型大鼠肾组织的表达及意义

目的观察骨形态发生蛋白-7（BMP-7）在单侧输尿管梗阻（UUO）肾间质纤维化大鼠模型中的表达情况及与肾损伤的关系。方法将雄性Wistar大鼠48只随机分为正常对照组、假手术组、UUO模型组，分别采用免疫组化和原住杂交方法检测肾组织中BMP-7及BMP-7mRNA的表达和定位。结果与正常对照组和假手术组相比，UUO模型组BNP-7在肾小管上皮细胞和肾间质中表达明显下降，而肾小球中均未见表达；且术后3dBMP-7表达即有下降，随梗阻时间延长，其表达量进行性下降。结论BMP-7在肾间质纤维化早期即出现表达量下降，随病程进展而进行性降低。BMP-7表达下调可能是肾间质纤维化发生发展的机制之一。     

BMP-7在UUO模型大鼠肾组织的表达及意义

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化大鼠模型中的表达情况及与肾损伤的关系。方法将雄性Wistar大鼠48只随机分为正常对照组、假手术组、UUO模型组,分别采用免疫组化和原位杂交方法检测肾组织中BMP-7及BMP-7 mRNA的表达和定位。结果与正常对照组和假手术组相比,UUO模型组BMP-7在肾小管上皮细胞和肾间质中表达明显下降,而肾小球中均未见表达;且术后3d BMP-7表达即有下降,随梗阻时间延长,其表达量进行性下降。结论BMP-7在肾间质纤维化早期即出现表达量下降,随病程进展而进行性降低。BMP-7表达下调可能是肾间质纤维化发生发展的机制之一。     

黄芪当归合剂对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的 :研究黄芪当归合剂 (A&A)对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用 ,探讨其抗纤维化作用的可能机制。方法 :采用单侧输尿管梗阻 (UUO)诱导肾间质纤维化的动物模型 ,以目前公认具有肾脏保护作用的血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)作为阳性对照 ,将大鼠随机分为假手术组 (Sham)、模型组 (UUO)、黄芪当归合剂组 (A&A)、依那普利组 (ACEI) ,术后第 1 0天处死大鼠 ,收集血清测定肌酐、尿素氮水平 ,肾组织用Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度 ,免疫组化半定量检测各组肾间质的α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)、转化生长因子 β1 (TGF β1 )、纤维连接蛋白 (FN)和层粘连蛋白 (LN)的表达。结果 :UUO组的肾小管间质损伤指数及α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达明显高于Sham组 ,肾小管间质损伤指数与肾间质的α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达均呈正相关关系。A&A组、ACEI组的肾小管间质损伤指数及α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达均明显低于UUO组 ;两治疗组间比较 ,A&A对TGF β1 表达的抑制作用弱于依那普利的作用 ,而其余各指标差异无显著性。结论 :在单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化大鼠模型中 ,中药复方A&A的防治作用与ACEI相似 ,可能是通过减少肾间质肌成纤维细胞的数量、抑制TGF β1 表达     

加味防己黄芪汤对UUO大鼠纤维化干预作用及对JAK2/STAT3信号通路影响

[目的]证实加味防己黄芪汤对于单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠纤维化的干预作用以及对JAK2/STAT3信号通路的影响。[方法]选取SPF级雄性SD大鼠共60只,构建UUO模型,随机分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、缬沙坦组,每组10只,术后第14天取材。观测肾脏脏器系数、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量;苏木精-伊红染色法（HE）、马松（Masson）病理染色;Real-time qPCR法检测NF-κB、IκBa前后表达变化;Western Blot法检测JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动特异性蛋白（α-SMA）前后表达变化。[结果]各组大鼠肾脏脏器系数、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、HE、Masson病理染色结果显示,药物干预组较模型组明显改善,且中剂量、高剂量组整体改善较为明显。Real-time qPCR结果显示,NF-κB、IκBa药物干预组同模型组相比表达水平明显下降（P<0.01）。Western Blot结果,E-cad、α-SMA、p-Jak2、p-Stat...     

肝细胞生长因子对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏E-cd、FN和MMP-9表达的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cd)、纤维连接蛋白(FN)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法采用单侧输尿管结扎制造梗阻性肾病模型,将72只SD大鼠随机分为假手术组、UUO组和HGF组(UUO+HGF),分别于术后1、3、7、14 d观察各组肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法检测各组肾组织中E-cd、FN、MMP-9的表达。结果与假手术组比较,UUO组及HGF组FN、MMP-9蛋白表达均增高,且UUO组明显高于HGF组;UUO组及HGF组E-cd表达均减少,且UUO组显著低于HGF组。结论 HGF可以通过调节肾组织E-cd、FN、MMP-9的表达,减轻肾小管-间质纤维化,而发挥肾保护作用。     

黄芪注射液对肝纤维化大鼠模型肝细胞胶原及TGF-1表达的影响

目的 探讨黄芪注射液抗肝纤维化及对TGF-1,Ⅰ型胶原（ Col-Ⅰ）表达的影响。方法 35只SD大鼠随机分为正常对照组、CCl4诱导肝纤维化模型组和黄芪干预组。至造模第10周,处死所有大鼠,采用PV免疫组化方法检测Col-Ⅰ在各组肝组织中的表达,ELISA法检测TGF-1在各组血清中的表达。结果 ①经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型,随着肝纤维化程度的进展,肝组织中Col-Ⅰ和血清中TGF-1表达明显增强。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组肝组织中,Col-Ⅰ表达的平均光密度值为分别为0.298,0.315,0.503,模型组与前两组比较差异均有显著性,而黄芪干预组与正常组肝组织比较差异无统计学意义。②在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组大鼠血清中TGF-1表达含量分别为491.29pg/L,629.91pg/L,959.09pg/L,呈递增趋势。模型组与前两组比较差异均有显著性,黄芪干预组与正常组比较其表达含量无显著差异。结论 黄芪注射液可以显著抑制实验性肝纤维化大鼠模型的肝纤维化,这可能与抑制Ⅰ型胶原蛋白及TGF-1的表达有关。     

虫草益肾方对UUO大鼠Notch1及相关microRNA表达影响

目的:探讨虫草益肾方对单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral occlusion,UUO)模型大鼠Notch1及相关microRNA的调控作用。方法:40只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组10只及造模组30只,造模组采用UUO法进行模型制备,术后随机分为模型组、虫草益肾方组(虫草组)与厄贝沙坦组,每组10只。分别给予蒸馏水、虫草益肾方水煎液及厄贝沙坦水溶液进行灌胃,连续灌胃14 d收集肾组织。Masson染色观察肾脏病理改变,采用Real Time PCR及Western Blot法分别检测Notch1 mRNA转录与蛋白表达。通过生物信息学分析以Notch1为靶点的microRNA并采用Real Time PCR法进行检测。结果:虫草益肾方可改善UUO大鼠肾脏的病理变化程度;模型组大鼠14 d肾组织中Notch1 mRNA及蛋白表达与假手术组相比明显增加(P0.05),虫草组、厄贝沙坦组大鼠Notch1mRNA及蛋白表达与模型组相比均减少(P0.05)。通过生物信息学分析,检索并筛选出以Notch1为靶基因的miR-34a、miR-29a进行Real Time PCR检测,结果显示与假手术组相比,模型组、虫草组及厄贝沙坦组miR-34a、miR-29a表达明显降低(P0.05);与模型组相比,虫草组与厄贝沙坦组miR-34a、miR-29a表达升高,其中虫草组二者表达均明显升高(P0.05)。结论:虫草益肾方可改善因输尿管梗阻所致的肾脏结构病理变化,其作用可能是通过上调纤维化肾组织中miR-34a、miR-29a表达而靶向抑制Notch通路来实现的。     

青蒿琥酯对UUO模型大鼠肾组织CTGF和α-SMA表达的影响

目的探讨青蒿琥酯对单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平的的影响,初步探讨青蒿琥酯抗肾间质纤维化的作用机制。方法雄性W istar大鼠80只随机分为假手术组、UUO模型组、青蒿琥酯小剂量组、大剂量组和科素亚组,采用免疫组化半定量方法检测肾组织中CTGF和α-SM A的表达水平。结果UUO模型组和各治疗组中,术后3天肾间质即出现CTGF和α-SMA表达,术后14天表达最高;不同剂量青蒿琥酯组和科素亚组CTGF和-αSM A表达均低于UUO模型组,且大剂量组疗效优于小剂量组,而与科素亚组相似。结论青蒿琥酯可以降低肾间质中CTGF和α-SMA的表达,这可能是青蒿琥酯抗肾间质纤维化的作用机制之一。     

杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织MMP-2表达的影响

[目的]观察杜仲对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织MMP-2的影响并探讨其可能机制。[方法]采用单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化模型。将32只大鼠随机分为4组,每组8只,即假手术组、模型组、厄贝沙坦组和杜仲组。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦10mg·kg-1·d-1、杜仲组给予杜仲6g·kg-1·d-1治疗。术后2周处死大鼠,光镜下观察Masson和HE染色肾间质纤维化指数,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织基质金属蛋白酶-2(Matrix metal proteinase-2,MMP-2)的表达。[结果]1.UUO组与假手术组相比,BUN,Scr水平均显著增加,杜仲组较UUO组呈下降趋势。厄贝沙坦组作用效果与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。2.与假手术组相比,肾组织行HE染色UUO组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩,偶见坏死,肾间质增宽,大量的炎细胞浸润和间质纤维化,肾小球病理改变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。3.与假手术组相比,Mas-son染色结果显示UUO组可见肾间质增宽、有大量胶原纤维增生,肾小球病变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。4.MMP-2在假手术组大鼠肾间质中呈棕黄色颗粒状表达,UUO组中大鼠肾间质仅有少量表达且着色稀疏,杜仲组MMP-2表达较假手术组减轻,但其表达仍高于UUO组。厄贝沙坦组与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。[结论]杜仲可上调MMP-2的表达,进而减缓肾纤维化的病程进展。     

金匮肾气丸对单侧输尿管梗阻大鼠炎症反应的影响

目的:探讨金匮肾气丸对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质炎症反应及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、UUO模型组、金匮肾气丸治疗组、阳性对照药依那普利治疗组,UUO术后第1天开始灌胃,连续灌胃3 d或7 d后处死大鼠,取梗阻肾组织,免疫组织化学法检测CD68和CD3在肾组织的表达,组织匀浆ELISA法检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肾组织的蛋白水平,Western印迹检测磷酸化核因子-κB(P-IκB)和IκB在肾组织的表达。结果:与假手术组比较,模型组在3 d、7 d时肾间质损伤指数均明显增高,CD68阳性巨噬细胞、CD3阳性淋巴细胞增多,肾组织中MCP-1、TNF-α和p-IκB-α蛋白表达水平显著增加,IκB-α表达水平明显降低(P0.05或0.01);金匮肾气丸和依那普利治疗后,两药物组较模型组的肾间质损伤指数均明显降低,CD68阳性巨噬细胞、CD3阳性淋巴细胞明显减少,肾组织中MCP-1、TNF-α和p-IκB-α蛋白表达水平显著下降,IκB-α表达水平明显上调(P0.05)。结论:金匮肾气丸可以改善UUO梗阻肾组织的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活性有关。     

吡非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏间质纤维化的影响

目的 探讨吡非尼酮(pirfenidone,PDF)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用.方法 雌性SD大鼠42只,随机分为3组:假手术组、模型组及治疗组[PDF 500 mg/(kg*d)].UUO术后7 d和14 d分别处死各组大鼠,光镜观察梗阻肾组织病理变化;免疫组化和RT-PCR方法检测各组肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;RT-PCR方法检测各组肾组织结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平.结果 模型组肾脏间质纤维化病变最明显,治疗组病变显著减轻(P＜0.01).与假手术组相比,模型组α-SMA蛋白和基因表达及CTGF的基因表达均明显增加(均 P＜0.01);治疗组上述物质表达则较模型组明显减少(均 P＜0.01).结论 吡非尼酮可能通过抑制α-SMA和CTGF的表达进而减少细胞外基质的沉积,发挥肾脏保护作用.     

丹参注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护

目的 探讨丹参注射液对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法 采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。24只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组、模型组和丹参组。术后第10d肾组织做HE、Masson染色及TGF—β1，α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化检测。结果 丹参组显著改善梗阻侧肾组织病理变化，下调转化生长因子-β1（TGF-β1）和α-SMA表达。结论 丹参注射液对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护作用。     

单侧输尿管梗阻肾脏水通道蛋白的变化

目的:探讨单侧输尿管梗阻肾积水时肾小管水通道蛋白(AQP)的变化趋势及其与组织学变化之间的联系。方法:选取20例单侧肾积水伴无功能行肾切除术的临床肾脏标本,应用免疫组化方法分析评估AQP1及AQP2的表达水平;然后建立大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO),进一步动态观察梗阻后1,2 d及梗阻解除后1,2,7d不同时间点AQP1、AQP2的变化趋势,同时通过HE染色观察其变化与组织病理学之间的联系。结果:单侧肾积水患者肾脏病理标本肾小管水通道蛋白AQP1及AQP2表达下降明显,与正常组比较差异有显著性(AQP1,P<0.01;AQP2,P<0.05);UUO模型中,梗阻后1,2 d及解除梗阻后1 d,AQP1、AQP2表达随时间延长进行性下降(P<0.05),解除梗阻后2 d其表达开始回升(P<0.05),解除梗阻后7 d逐渐恢复,但仍然没有达到正常水平(P<0.05)。同时HE染色显示,梗阻1,2 d及解除梗阻1 d时组织学变化以集合管扩张和炎性改变为主,但均于梗阻解除7 d内较快恢复正常,与AQP的大幅变化并不完全一致。结论:输尿管梗阻将导致肾脏AQP1及AQP2表达急剧下降,且恢复十分缓慢;同时这种下降与组织学改变没有直接联系。     

输尿管结扎对小鼠肾皮质骨架蛋白与炎症因子表达的影响

目的 通过对UUO小鼠肾组织俚一平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、波形蛋白（vimentin）、炎症介质细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、单核细胞趋化因子（monocyte chemoattractant protein1,MCP-1）表达的研究,探讨肾间质纤维化机制。方法实验取单侧输尿管结扎（UUO）21天小鼠结扎侧肾组织,肾组织α-SMA、Vimentin表达采用免疫组化技术;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果 UUO模型组小鼠肾小管间质α-SMA、Vimentin的表达较假手术组显著增高,肾组织中ICAM-1蛋白表达、MCP-1基因表达亦较假手术组显著增高。结论 输尿管结扎21天可诱导肾小管间质肌成纤维细胞的大量积聚,可能与肾组织炎症因子的高度表达相关。     

羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:评价羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化影响,并探讨其作用机制。方法:21只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、肾间质纤维化组(UUO组)及羟苯磺酸钙组(CDT组),分别采用病理及免疫组织化学方法观察UUO术后14 d大鼠梗阻侧肾脏的组织学变化和MMP-9、TIMP-l表达情况。结果:与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质纤维组织面积显著增加(P<0.01),MMP-9、TIMP-1表达均有显著增高(P<0.01)。与UUO组相比,CDT组大鼠肾间质纤维组织面积减少,MMP-9表达增强、TIMP-1表达减弱(P<0.01),UUO组和CDT组大鼠左肾MMP-9/TIMP-1与肾间质纤维化面积成负相关,且有统计学意义(P<0.01)。结论:羟苯磺酸钙可缓解输尿管梗阻导致的肾间质纤维化,其机制可能与其调节MMP-9/TIMP-1紊乱、改善基质代谢有关。     

姜黄素对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化的调节

目的:研究姜黄素在单侧输尿管梗阻(UUO) 大鼠模型中能否减少肾间质中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达. 方法:将30只大鼠随机分为3组,每组10只:假手术组、模型组、姜黄素组.模型组和姜黄素组行右侧输尿管接扎术,假手术组只游离不接扎.术后第14天处死各组中的大鼠,检测血液尿素氮(BUN)、血清肌酸酐(Scr).用免疫组织化学方法测定TGF-β1、CTGF的表达情况,同时采用Masson染色,观察肾脏病理情况.结果:姜黄素降低了BUN、Scr的含量,同时姜黄素显著减少了大鼠肾间质TGF-β1、CTGF的表达,并有效改善了肾脏的病理学损伤. 结论:姜黄素可以减少输尿管梗阻后TGF-β1、CTGF的表达,从而改善UUO所致的肾脏损伤,提示姜黄素可能有延缓慢性肾脏疾病纤维化进程的潜能.     

大鼠输尿管梗阻后肾炎中的P-选择素表达及意义

目的　探讨粘附分子P-选择素在单侧输尿管梗阻后肾炎中的作用。方法　建立单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,观察肾组织病理改变和P-选择素在肾组织中的表达,以及抗P-选择素单克隆抗体(单抗)对其影响。结果　大鼠UUO第1d即见间质以单核巨噬细胞为主的炎细胞浸润和p-选择素在小管间质表达;第3d间质炎细胞增多,P-选择素明显表达;第7d间质炎细胞浸润达高峰伴间质水肿,而P-选择素表达下降。抗P-选择素单抗治疗组炎细胞浸润减轻,P-选择素表达减弱。结论　 P-选择素在UUO早期参与介导以单核巨噬细胞为主的炎细胞在肾间质浸润及肾间质损害,抗P-选择素单抗对此具有一定治疗作用。