抗菌肽Cecropin-His-6基因的真核表达及其生物活性研究

目的 研究家蝇幼虫Cecropin-His-6抗菌肽基因生物学功能。方法从家蝇幼虫体内扩增Cecropin-His-6抗菌肽基因，构建pcDNA3．1／Cecropin-His-6重组表达质粒并用脂质体转染CHO细胞中，G418筛选，HisTrap HP亲和层析柱纯化目的蛋白，琼脂糖平板抑菌试验检测目的蛋白的抗菌活性。结果pcDNA3．1／Cecropin-His-6重组质粒成功转染入CHO细胞中，并获得具有抗菌活性的Cecropin-His-6目的蛋白。结论家蝇幼虫抗菌肽哺乳动物型工程细胞表达系统的建立，为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。     

新型靶向多肽对变异链球菌作用的初步研究

目的：变异链球菌是主要致龋菌，本文主要研究靶向多肽对变异链球菌的杀菌作用及机制。方法：通过最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)以及杀菌动力学曲线的测定观察靶向抗菌肽对于变异链球菌的抗菌效果，以及通过部分抑菌浓度(FIC)、部分杀菌浓度(FBC)测定靶向抗菌肽和NaF(或CHX)有无协同抗菌作用，激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜状态下靶向抗菌肽的作用效果。结果：C8g3pm11、C8gpm11、C16pm11均具有抗菌活性，但抗菌活性差距较大，并且具有时间依赖性，对生物膜状态的变异链球菌也具有一定的抗菌活性。结论：C8g3pm11、C8gpm11、C16pm11对变异链球菌具有一定的抗菌活性，具有潜在的临床指导意义。     

天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因的表达及产物抗菌活性测定

目的 研究天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因[CA（1-8）-MA（1-12）]抗菌肽的抗菌活性。方法 将天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因抗菌肽的人工基因克隆到具有自切割功能的表达载体pTYB12上，并在大肠杆菌（E.coli)BL21(DE3)中进行表达，表达产物用几丁质树脂进行了亲和吸附，自切割后洗脱得到抗菌肽，进行透析以去除盐类物质，最后用大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行活性检测。结果 天蚕素A-蛙皮肽杂合肽[CA（1-8）-MA（1-12）]对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性。结论 天蚕素A-蛙皮肽杂合肽具有抗菌活性。其抑瘤活性的研究还有待于进一步研究。     

新型抗菌肽分子的计算机辅助设计

目的 通过计算机辅助设计，获得具有高活性的新型抗菌肽分子序列，为合成这类抗菌肽和通过基因工程方法生产新型药物提供理论依据。方法 通过互联网和计算机辅助比较和分析了大量有关抗菌肽的序列和空间结构，根据分析结果，设计了可能具有很好抗菌活性的抗菌肽分子，并用空间结构分析软件观察其可能的结构，进行三维结构的计算和预测，与己知的抗菌肽分子进行比较。结果 分析发现抗菌肽一般在肽分子的两头分别形成螺旋，螺旋趋势强弱与抗菌肽的活性呈一定的正相关。根据这些资料和分析结果，设计了一些抗菌肽序列。其中一个序列为：GWLRKIGKRIKRIGQYFSDAALEVLGVA。经一级结构分析和空间构象分析显示，这一设计的抗菌肽分子可能具有较强的抗菌活性。结论 随着各种数据库和分子生物学软件的完善和丰富，充分利用它们进行新分子的设计成为可能。     

Paneth细胞防御素的功能对中医药体内抗菌机理的启示

Paneth细胞防御素是一类具有广谱、高效抗微生物活性的小分子肽，在肠道的先天性免疫中起着重要作用。本文从Paneth细胞防御素的生物学特性、抗菌活性及抗菌机制等方面对其进行了较全面的综述，同时也展望了Paneth细胞防御素在中医药研究中的前途，并提出使用药物诱导机体本身产生内源性的抗菌肽以达到抗感染目的的设想。     

人精液抗菌多肽29肽的分离纯化及活性研究分析

目的研究分析人精液抗菌多肽29肽的分离纯化及活性。方法对人精液先进行粗品提制,并进行冷冻保存,然后将冷冻的精液干粉进行溶解,分别进行阳离子交换柱进行层析、凝胶过滤等,将溶解的精液干粉进行洗脱,并用收集器收集洗脱峰,低温干燥冷冻保存,然后稀释进行抑菌试验,具有抑菌性的洗脱峰即为含抗菌肽的峰。之后,对含抗菌肽的提取物进行最低抑菌浓度、抗菌谱检测,采用琼脂糖弥散法对不同浓度29肽的抗菌活性的检测分析,并对其溶血活性予以检测。结果最低抑菌浓度、抗菌谱检测：杀菌活性整体要优于抗生素,对杀菌活性从低到高进行排序,结果为：大肠杆菌（10.5ug/mL）、绿脓杆菌（18.8ug/mL）、金黄色葡萄菌（20.9ug/mL）、酵母菌（37.1ug/mL）,以及白色念珠菌（41.8ug/mL）。琼脂糖弥散法对不同浓度29肽抗菌活性的检测分析：29肽对真菌均的抑制作用很强;对G＋的抑菌活性要大于对G-的抑菌活性,对绿脓杆菌的抑制活性相对最强,对酵母菌和白色念珠菌的抑制活性相对较弱。菌肽的溶血活性的检测：抗菌肽溶血活性均呈现阴性,说明29肽不具有溶血活性。结论抗菌肽的抗菌能力较之抗生素明显要强,29肽初步确定为一种新型的生物活性多肽,是具有很强的抗菌活性,且对真菌的抑制力很强,在条件允许的情况下,值得临床推广应用。     

人β-抗菌肽与基因工程

人β-抗菌肽是近几年发现的具有广谱抗菌作用的一类小片段阳离子多肽，对革兰阳性和阴性菌等许多致病菌有杀灭作用。本文综述它们的基因结构、蛋白结构、作用机理、人体内的分布、抗菌作用及基因合成方面的进展，认为利用基因工程合成β-抗菌肽是目前解决日益严重的致病菌耐药问题的方法之一，基因工程的发展为下一代基因型抗生素的生产提供了可能。     

抗变异链球菌多肽的设计、筛选及抗菌效果评价

目的构建抗变异链球菌的低毒、高活性、快速的新型抗菌肽，并探讨其在防治龋病方面的潜能。方法根据两亲性正电性 α-螺旋结构抗菌肽的设计理念，对乳酸杆菌拮抗变异链球菌的代谢产物reuterin 6和/或gassericinA进行活性改造，分别通过细 菌敏感性实验、细胞毒性实验和杀菌-时效实验来评估衍生肽的抗菌效果和生物相容性，再进一步检测目标抗菌肽抗变异链球 菌的速率、抗多种口腔致病菌的活性和发展耐药菌株的能力。结果构建了6条AT-1衍生肽，并从中筛选出了低毒、高活性、快 速的新型抗菌肽AT-7；具有高疏水性、不完美两亲性的AT-7抑制变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和黏性放线菌等口腔致病菌的最 小抑菌浓度是3.3 μmol/L，在5 min内即可抑制88.7%的变异链球菌，以及连续诱导10代的处理仍不能产生耐AT-7的变异链球 菌。结论疏水性和不完美两亲性都是决定抗菌肽的抗菌效果的重要因素；抗菌肽AT-7具有转化为口腔临床用药的潜力。     

新型抗菌肽分子的计算机辅助设计

目的　通过计算机辅助设计 ,获得具有高活性的新型抗菌肽分子序列 ,为合成这类抗菌肽和通过基因工程方法生产新型药物提供理论依据。方法　通过互联网和计算机软件比较和分析了大量有关抗菌肽的序列和空间结构 ,根据分析结果 ,设计了可能具有很好抗菌活性的抗菌肽分子 ,并用空间结构分析软件观察其可能的结构 ,进行三维结构的计算和预测 ,与已知的抗菌肽分子进行比较。结果　分析发现抗菌肽一般在肽分子的两头分别形成螺旋 ,螺旋趋势强弱与抗菌肽的活性呈一定的正相关。根据这些资料和分析结果 ,设计了一些抗菌肽序列。其中一个序列为 :GWL RKIGKRIKRIGQYFSDAAL EVL GVA。经一级结构分析和空间构象分析显示 ,这一设计的抗菌肽分子可能具有较强的抗菌活性。结论　随着各种数据库和分子生物学软件的完善和丰富 ,充分利用它们进行新分子的设计成为可能。     

防御素与肠道疾病的关系

防御素是一类重要的内源性抗菌肽亚家族，广泛存在于植物、昆虫、哺乳动物以及人类中。它具有广谱抗菌活性、抗病毒活性以及肿瘤细胞毒性作用，是先天性免疫和获得性免疫系统的重要组成部分。近年来，防御素已成为国内外研究的热点。本文主要就防御素的分类、分布、生物活性以及与肠道疾病的关系方面作一综述。