S100A6基因对胃癌细胞生物学特性的影响

目的探讨S100A6基因对于胃癌细胞增殖状态、细胞周期、凋亡状态等生物学特性及成瘤、浸润转移能力等恶性表型的影响。方法将S100A6基因插入载体pcDNA3.1构建PC-S100A6真核表达载体。以脂质体介导转染MKN45胃癌细胞建立稳定转染细胞系（MKN-S100A6）,而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性与恶性表型的变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果与转染pcDNA3.1空载体及空白MKN45胃癌细胞相比,转染PC-S100A6载体的稳定表达细胞株生长显著加快,前5 日细胞计数差异有统计学意义（P<0.05）,后两组之间亦无显著差异,细胞周期检测显示PC-S100A6转染组处于G₂ M期的细胞比例显著高于未处理的MKN45细胞和转染pcDNA3.1空载体的MKN45细胞（P<0.05）,而处于S期的细胞比例显著低于其他两组（P<0.05）,其他各期细胞比例差异均无统计学意义。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示各组细胞的凋亡比例均为0.8%左右,统计学检验差异无统计学意义（P>0.05）。平板克隆形成实验结果显示PC-S100A6转染组平均克隆形成率显著高于其他两组（P<0.05）,细胞迁徙实验结果提示PC-S100A6转染组穿膜率显著高于其他两组（P<0.05）。结论S100A6基因可能具有促进细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期,增加处于分裂期细胞的比例,可能具有促进细胞分裂作用,但对细胞凋亡的影响作用较小。S100A6基因可能加强胃癌细胞侵袭转移能力。总之该基因对维持细胞恶性表型有一定意义。     

Raf激酶抑制蛋白对HepG2肝癌细胞生物学特性影响的研究

目的 Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调.本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义.方法 将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体.脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系(Hep-RKIP),而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化.同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照.结果 与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC- RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC- RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组(P<0.05),细胞周期检测显示PC- RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2 细胞和转染 pcDNA 3.1空载体的HepG2细胞(P<0.05),而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异.流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组(P<0.05).细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低(P<0.05).结论 RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义.     

Raf激酶抑制蛋白对HepG2肝癌细胞生物学特性影响的研究

目的：Raf激酶抑制蛋白（RKIP）是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义。方法：将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体。脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系（Hep-RKIP）,而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果：与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC-RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC-RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组（P〈0.05）,细胞周期检测显示PC-RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2细胞和转染pcDNA3.1空载体的HepG2细胞（P〈0.05）,而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组（P〈0.05）,其它各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组（P〈0.05）。细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低（P〈0.05）。结论：RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义。     

LyGDI对肺癌A549细胞放射敏感性影响的观察

目的:研究X射线对稳定转染鸟苷解离抑制因子(LyGDI)A549细胞株放射敏感性的影响及相关机制。方法:应用生长曲线观察细胞增殖能力,流式细胞术检测不同剂量照射后转染组和对照组细胞的周期分布及凋亡率,克隆形成试验观察转染组细胞放射敏感性。结果:转染组细胞相对于对照组增殖能力减弱,F=212.55,P<0.01;克隆形成能力减弱,放射敏感性增加,F=7.56,P<0.05;流式细胞术检测到辐射诱导凋亡增加,F=18.45,P<0.01;细胞周期检测提示转染组G2期阻滞受抑制,F=6.29,P<0.05。结论:过度表达的LyGDI上调A549细胞放射敏感性,其可能机制为抑制G2期阻滞促进凋亡。     

降低S100A6基因表达对胃癌细胞生物学特性影响的研究

目的:初步探讨S100A6基因对于胃癌细胞生长、增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及成瘤、浸润转移能力等恶性表型的影响.方法:S100A6基因的RNAi载体通过脂质体介导法转染S100A6基因高表达SGC7901细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT-PCR法、免疫细胞化学法及Western-bloting法证实.对稳定表达株进行鉴定,而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验等方法分析稳定表达株相关生物学特性与恶性表型的变化,每种检测实验均设立RNAi载体稳定转染细胞组、IMG800空载体稳定转染细胞组和空白SGC7901细胞组.结果:稳定的S100A6基因RNAi细胞系经过RT-PCR法、免疫细胞化学法及Western-bloting法证实,mRNA抑制率可达75%左右,蛋白产物的抑制率达85%左右.与转染IMG800空载体及空白SGC7901胃癌细胞相比转染S100A6 RNAi载体的稳定表达细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P<0.05);后两组之间亦无显著差异,细胞周期检测显示S100A6 RNA干扰组G0-G1期比例显著高于对照组,而G2-M及S期比例显著低于对照组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异.平板克隆形成实验结果显示S100A6 RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组(P<0.05);,细胞迁徙实验结果提示S100A6 RNA干扰组穿膜率显著低于对照组(P<0.05).结论:S100A6基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,增加处于分裂期细胞的比例可能具有促进细胞分裂作用,并可促进胃癌细胞侵袭转移.降低S100A6基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为.     

胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞的影响

目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA(siRNA)转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段,退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1(含干扰片段1)、IMG-800-2(含干扰片段2)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法,比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,Annexin V FITC/PI双标记法检测凋亡细胞,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果经测序证实,干扰片段退火后正确插入小干扰RNA表达载体IMG- 800,组成重组子IMG-800-1和IMG-800-2。重组子IMG-800-1、IMG-800-2和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,mRNA的表达分别下调44.9%和49.5%;Western印迹法结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,蛋白的表达分别下调55.3%和64.2%。与转染空载体的细胞相比,转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度明显减慢,细胞周期表现为处于G0～G1期的细胞有所增加,G2/M期和(或)S期的细胞比例减少,细胞凋亡率增加,细胞克隆形成数量减少,裸鼠体内成瘤性降低。结论胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染,可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的成瘤性。     

RIN1过表达对人胃癌细胞MKN28增殖的影响研究

[目的]研究RIN1过表达对人胃癌细胞MKN28增殖和细胞周期的影响。[方法]采用PCR法扩增人RIN1基因,并构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-RIN1。采用脂质体转染法将pcDNA3.1（＋）-RIN1及空载体pcDNA3.1（＋）转染至人胃癌MKN28细胞,G418法筛选阳性克隆;Western blot法和免疫荧光法鉴定RIN1的高表达。CCK-8法和平板克隆实验检测RIN1高表达对MKN28细胞增殖的影响。流式细胞术检测RIN1高表达对MKN28细胞周期的影响。[结果]成功构建RIN1真核表达载体,RIN1基因全长为2 353bp。G418法筛选获得高表达RIN1的MKN28克隆细胞株MKN28/RIN1-1和MKN28/RIN1-2,Western blot结果显示这两株细胞分别为MKN28/3.1的3.21倍和3.17倍。过表达RIN1基因后,MKN28细胞增殖显著性加快,克隆数显著性增加;细胞周期改变,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加。[结论]RIN1基因过表达加速MKN28细胞从G1期向S期的转化促进细胞增殖;RIN1可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点。     

Survivin短发夹状RNA对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin基因短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的细胞转染技术将含人survivin基因shRNA的重组真核表达质粒pSilenc-er2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果:G418筛选34天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pSilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;细胞增殖受到抑制,最高细胞生长抑制率为:(57.8±2.1)%(P<0.05);细胞周期发生显著变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占(72.7±3.1)%(P<0.05),G2/M期明显减少,占(5.1±2.9)%(P<0.05);细胞凋亡率为:(29.2±1.4)%,明显升高(P<0.05)。结论:Survivin基因shRNA可通过下调HeLa细胞中survivin的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

c—myc基因对胃上皮细胞生物学特性影响的研究

目的探讨c—myc基因对于胃上皮细胞增殖状态、细胞周期、凋亡等生物学特性及浸润能力等表型的影响。方法将c—myc基因插入载体pcDNA3．1构建pc—myc真核表达载体。以脂质体介导转染HFE145正常胃上皮细胞建立稳定转染细胞系,而后使用流式细胞术、生长曲线法、平板克隆形成法、细胞迁徙法等方法分析稳定表达株相关生物学特性的变化。结果与转染pcDNA3．1空载体及空白HFE145细胞相比转染pc—myc载体的稳定表达细胞株生长显著加快,前5d细胞计数差异有统计学意义（P〈0．05）,后两组之间差异无统计学意义;细胞周期检测显示,pc—myc转染组处于G：～M期的细胞比例平均约25％,显著高于未处理的HFEl45细胞和转染pcDNA3．1空载体的细胞的5％（P〈0．05）,而处于s期的细胞比例平均约10％,显著均低于其他两组（P〈0．05）;流式细胞术检测结果显示,HFE—myc组细胞的凋亡比例平均5．8l％,显著高于两对照组（P〈0．05）;平板克隆形成实验结果显示,pc—myc转染组平均克隆形成率0．27,显著高于其他两组（P〈0．05）;细胞迁徙实验结果提示,pc—myc转染组穿膜率与其他两组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论myc基因可能具有促进细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期,增加处于分裂期细胞的比例,可能具有促进细胞分裂作用,但对细胞迁徙能力的影响作用较小。     

稳定转染HBx基因的HepG2细胞对raf-1表达的影响

 【摘要】　目的　探讨乙型肝炎病毒x（HBx）蛋白致癌变的分子机制。方法　构建HBx 基因真核表达载体pCDNA3.1(+)-x，脂质体转染入HepG2 细胞（HepG2X 细胞），以pCDNA3.1空载体为对照（HepG2X0细胞），G418选择培养，克隆扩增转染细胞，并用Western blot检测X蛋白的表达；MTS实验检测细胞增生情况；流式细胞仪检测细胞周期变化；检测转染组及对照组raf-1的表达变化。结果　转染组X细胞在相对分子质量为21×103位置有X蛋白的表达，而对照组HepG2X0细胞及未处理的HepG2细胞未见X蛋白的表达。MTS结果显示X细胞增生能力显著高于其他两株细胞（P＜0.01）。流式细胞仪结果显示转染后的细胞系凋亡率增高，G1／G0期细胞减少，G2期细胞增多。Western blot结果示转染组X细胞raf-1表达明显较其他两组细胞增高。结论　HBx 有推进细胞周期的作用，使细胞快速进入G2期。其机制可能是HBx增加细胞周期蛋白raf-1的表达。     

A study on the functions of ubiquitin metabolic system related gene FBG2 in gastric cancer cell line

Background

FBG2 (F-BOX6) gene is an important member in ubiquitin metabolic system F-BOX family, and forms E3 complex with the other members in the family. But its role in gastric cancer is still not clear. In the present study, we intended to investigate the influence of FBG2 on the growth, proliferation, apoptosis, invasion and cell cycle of the gastric cancer line MKN45 and gastric cell line HFE145.

Methods

As a critical component of ubiquitin-protein ligase complex, FBG2 cDNA was subcloned into a constitutive vector PCDNA3.1 followed by transfection in MKN45 and HFE145 by using liposome. Then stable transfectants were selected and appraised. The apoptosis and cell cycles of these clones were analyzed by using flow cytometry. The growth and proliferation were analyzed by cell growth curves and colony-forming assay respectively. The invasion of these clones was tested by using cancer cell migration assay. The FBG2 stable expression clones(MKN-FBG2 and HFE-FBG2) and their control groups were detected and compared respectively.

Results

MKN-FBG2 grew faster than MKN45 and MKN-PC(MKN45 transfected with PCDNA3.1 vector). HFE-FBG2 grew faster than HFE145 and HFE-PC(HFE145 transfected with PCDNA3.1 vector). The cell counts of MKN-FBG2 in the forth, fifth, sixth and seventh days were significantly more than those of others (P < 0.05). Cell cycle analysis showed that MKN-FBG2 and HFE-FBG2 proliferated faster, proportions of cells in G2-M and S were different significantly with control groups (P < 0.05). Results of colony-forming assay showed that the colony formation rates of MKN-FBG2 and HFE-FBG2 were higher than those of control groups (P < 0.05). The results of cell migration assay were all negative.

Conclusion

FBG2 can promote the growth and proliferation of gastric cancer cells and normal gastric cells. It can help tumor cell maintain malignant phenotype too. But it can have a negative influence on the apoptosis or the ability of invasion of gastric cancer cells.     

PTP1B基因对人胃癌细胞株的增殖和迁移能力的影响

背景与目的：胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤,术后易复发和转移。前期研究发现,蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)基因与胃癌肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关。本研究通过RNA干扰技术和基因克隆技术分别沉默和上调胃癌细胞中PTP1B基因的表达,观察PTP1B基因对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法：将靶向沉默PTP1B基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列和克隆人的PTP1B cDNA基因序列分别转染MKN28和MKN45细胞,采用实时定量PCR(quantitative realtime PCR,qRT-PCR)、蛋白［质］印迹法(Western blot)分别检测转染后细胞中PTP1B基因和蛋白的表达水 平,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、Transwell迁移试验和划痕试验分别观察PTP1B基因对细胞增殖和迁移能力的影响。结果：转染shRNA后,MKN28细胞中PTP1B mRNA和蛋白表达量与空白对照组、阴性对照组相比抑制显著(P＜0.05)。CCK-8增殖活性实验显示,shRNA沉默PTP1B基因表达后能显著抑制胃癌MKN28细胞在48、72和96 h的增殖活性(P＜0.05)。Transwell迁移试验和划痕实验显示,PTP1B表达下调后胃癌MKN28细胞的迁移能力受到显著抑制(P＜0.05)。而提高PTP1B在MKN45细胞中表达后,细胞的增殖和迁移能力则显著提高(P＜0.05)。结论：PTP1B基因是胃癌细胞增殖和迁移的重要调控因子。     

siRNA干扰Mig-7基因对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制迁移诱导基因7（Mig-7）基因表达,对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 化学合成靶向Mig-7基因的siRNA,脂质体法转染MKN45细胞,分别用real-time PCR和Western blot法验证其沉默效率;MTT法检测细胞的增殖情况;Transwell小室方法检测细胞侵袭及迁移能力;Western blot法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白表达。结果 化学合成siRNA转染胃癌MKN45细胞后,Mig-7的mRNA 水平下降（80±2.91）%,蛋白表达水平下降（89.1±2.67）%;沉默Mig-7基因后,各组细胞体外生长速度差异无统计学意义（P>0.05）,但侵袭和迁移能力下降,MMP-2蛋白表达水平下降,与阴性转染组和对照组相比差异有统计学意义（P=0.000）。而各组MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 下调人胃癌MKN45细胞中Mig-7的表达,可能通过下调MMP-2蛋白表达从而抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

敲低PRMT5基因表达对胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 观察蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）在胃癌细胞中的表达,探讨敲低PRMT5表达水平后对胃癌细胞生物学行为的影响。方法 Western blot检测胃癌细胞系MGC803、SGC7901、MKN45和人胃黏膜上皮细胞GES-1中PRMT5蛋白表达水平,转染siRNA1和siRNA2质粒敲低PRMT5的表达水平,细胞增殖和凋亡实验、Transwell实验分别检测细胞增殖能力、凋亡率和细胞的侵袭能力,Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和Bax蛋白表达水平。结果 与GES-1细胞比较,MGC803、SGC7901和MKN45细胞中PRMT5蛋白表达水平增加（P<0.001）。敲低PRMT5表达后细胞的增殖和侵袭能力减弱,凋亡率增加（P<0.05）,β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加（P<0.001）。结论 PRMT5在胃癌细胞中表达水平升高,敲低其表达水平后可通过减弱Wnt/β-catenin信号通路转导抑制细胞的增殖和侵袭并促进细胞凋亡。     

BTG1 expression correlates with pathogenesis,aggressive behaviors and prognosis of gastric cancer: a potential target for gene therapy

Here, we found that BTG1 overexpression inhibited proliferation, migration and invasion, induced G₂/M arrest, differentiation, senescence and apoptosis in BGC-823 and MKN28 cells (p < 0.05). BTG1 transfectants showed a higher mRNA expression of Cyclin D1 and Bax, but a lower mRNA expression of cdc2, p21, mTOR and MMP-9 than the control and mock (p < 0.05). After treated with cisplatin, MG132, paclitaxel and SAHA, both BTG1 transfectants showed lower mRNA viability and higher apoptosis than the control in both time- and dose-dependent manners (p < 0.05) with the hypoexpression of chemoresistance-related genes (slug, CD147, GRP78, GRP94, FBXW7 TOP1, TOP2 and GST-π). BTG1 expression was restored after 5-aza-2′-deoxycytidine treatment in gastric cancer cells. BTG1 expression was statistically lower in gastric cancer than non-neoplastic mucosa and metastatic cancer in lymph node (p < 0.05). BTG1 expression was positively correlated with depth of invasion, lymphatic and venous invasion, lymph node metastasis, TNM staging and worse prognosis (p < 0.05). The diffuse-type carcinoma showed less BTG1 expression than intestinal- and mixed-type ones (p < 0.05). BTG1 overexpression suppressed tumor growth and lung metastasis of gastric cancer cells by inhibiting proliferation, enhancing autophagy and apoptosis in xenograft models. It was suggested that down-regulated BTG1 expression might promote gastric carcinogenesis partially due to its promoter methylation. BTG1 overexpression might reverse the aggressive phenotypes and be employed as a potential target for gene therapy of gastric cancer.     

沉默Snail基因对胃癌MKN-28细胞的生物学影响

目的:探讨转录因子Snail对胃癌MKN-28细胞的增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:慢病毒沉默胃癌MKN-28细胞株的Snail基因,顺铂处理MKN-28细胞,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,透射电镜观察各组细胞的凋亡情况,Transwell小室观察各组细胞的侵袭能力,Real time PCR检测Snail mRNA、E-cadherin mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平。结果:细胞增殖情况,慢病毒沉默Snail基因组和顺铂处理组的细胞出现了增殖抑制,特别是shRNA-Snail+顺铂组的细胞增殖抑制率明显增高（P<0.05）。各组细胞的凋亡表现,不同刺激因素组细胞的凋亡程度明显高于单纯MKN-28细胞组。细胞侵袭实验显示,shRNA+Snail+顺铂组的细胞迁出的细胞数明显低于其他各组（P<0.05）。顺铂处理MKN-28细胞后,shRNA+Snail+顺铂组的细胞Snail mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平均低于单纯MKN-28细胞组（P<0.05）,E-cadherin mRNA的水平高于单纯MKN-28细胞组（P<0.05）。结论:慢病毒沉默Snail基因,影响胃癌MKN-28细胞的增殖、促进了细胞的凋亡,抑制MKN-28细胞的侵袭,增加了化疗药的敏感性,可为肿瘤的靶向治疗提供一定理论依据。     

miR-4465调控EZH2的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨miR-4465通过调控EZH2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法:qRT-PCR检测胃癌组织和细胞系中miR-4465的表达水平;在MKN45细胞中过表达miR-4465或沉默EZH2,采用CCK-8和Transwell检测MKN45细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;Western blotting检...     

胃癌转移相关miRNA的差异表达谱及miR-218的生物学分析

目的 探讨胃癌转移相关微小RNA（miRNA）的差异表达情况并进行miR-218的生物学分析。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）及miRNA芯片法检测低转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-NM、MKN28-NM）与高转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-M、MKN28-M）间miRNA的差异表达。提取不同转移潜能胃癌细胞系和10例胃癌冰冻组织及相应的转移淋巴结中的总RNA,利用qPCR检测miR-218在不同细胞及组织中的表达情况。结果 对不同转移潜能的胃癌细胞亚系进行芯片检测发现,与SGC7901-NM细胞比较,SGC7901-M 细胞有47个分子表达下调,15个分子表达上调。与MKN28-NM细胞比较,MKN28-M细胞有41个分子表达下调,83个分子表达上调。在SGC7901-M及MKN28-M细胞中,34个分子表达均出现下降,11个分子表达均出现上升。对不同转移潜能的胃癌细胞亚系以及人永生化正常胃黏膜细胞系GES进行检测可以发现,4种不同转移潜能的胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于正常胃黏膜细胞系GES,差异有统计学意义（P＜0.05）,且在高转移潜能胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于低转移潜能胃癌细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌转移淋巴结中miR-218的表达水平为0.23±0.02,低于胃癌原发灶的1.09±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌转移相关miRNA会出现差异表达情况,高转移潜能胃癌细胞中的miR-218表达水平上调可能与胃癌转移存在一定关系。