MPTP对多巴胺能神经细胞凋亡的影响

本就神经毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)对多巴胺能神经细胞凋亡的影响进行综述，重点从MPTP损害细胞线粒体、促进细胞氧化应激、影响细胞信号转导、促进神经胶质细胞激活以及损害多巴胺转运体等方面介绍和总结了近年来在MPTP诱导多巴胺能神经细胞凋亡的机制尤其是细胞信号转导改变方面的研究进展；并对从细胞凋亡角度阐释帕金森病的发病机制以及MPTP多巴胺能神经毒性研究的进一步发展提出了展望。     

黄连解毒汤对阿尔茨海默病小鼠闭锁小带蛋白表达的影响

目的 通过观察黄连解毒汤(huanglian jiedutang,HLJDT)对APP/PS1双转基因小鼠闭锁小带蛋白(ZO-1)表达的影响,探究其对阿尔茨海默病的保护机制。方法 将APP/PS1双转基因小鼠随机分为6组：模型组、多奈哌齐组(2 mg·kg^-1·d^-1)、黄连解毒汤低、中、高剂量(1.5、3、6)g·kg^-1·d^-1,C57BL/6小鼠为正常组,每组8只。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,采用Western blot实验对小鼠海马区β-淀粉样蛋白(Aβ)和ZO-1蛋白进行检测,采用实时荧光定量PCR技术对海马区Aβ和ZO-1 mRNA表达进行检测。结果与正常组比较,模型组小鼠的穿越平台次数明显减少(P <0.05),目标象限游程明显减少(P <0.05),Aβ蛋白表达明显增加(P <0.05),ZO-1蛋白表达明显减少(P <0.05),Aβ mRNA表达明显增加(P <0.05),ZO^-1 mRNA表达明显减少;与模型组...     

加味黄连解毒汤抗心肌缺血作用

目的评价加味黄连解毒汤耐缺氧及抗心肌缺血损伤的效果,为临床应用提供药理学依据。方法采用密闭缺氧实验,观察不同剂量加味黄连解毒汤对小鼠耐缺氧存活时间的影响;另外采用冠脉结扎致急性心肌缺血模型,观察不同剂量加味黄连解毒汤对大鼠血清心肌酶AST、LDH-L与CK-MB的活力和心电图ST段位移的影响。结果加味黄连解毒汤中、高剂量连归清心组小鼠密闭缺氧的存活时间分别为(1 153.3±100.9)s和(1 196.3±137.3)s,明显长于空白对照组(1 005.3±125.5)s(P<0.05);加味黄连解毒汤中、高剂量可有效抑制急性心肌缺血模型组大鼠血清心肌酶AST、LDH-L与CK-MB异常升高的活力(P<0.01),并显著降低冠脉结扎后不同时间段心电图ST段的抬高幅度(P<0.05)。结论加味黄连解毒汤可增强小鼠耐缺氧能力,并对心肌缺血具有明显的保护作用。     

茶对小鼠免疫功能的保护作用

目的探讨茶叶防癌的免疫调节机理。方法用致癌剂４甲基亚硝胺１（３吡啶）１丁酮（ＮＮＫ）诱发小鼠肿瘤的实验模型，观察ＮＮＫ所致小鼠免疫功能的改变及绿茶（ＧＴ）、复合茶（ＭＴ）和茶多酚（ＴＰ）的保护作用。结果小鼠注射ＮＮＫ后，在观察的４周内，腹腔巨噬细胞吞噬功能、外周血白细胞化学发光、迟发型变态反应、脾细胞抗体生成细胞数、以及脾ＮＫ活性等免疫指标，与正常对照组比较均出现不同程度的增高或降低；而ＧＴ、ＭＴ和ＴＰ对所有这些免疫功能的不良改变有明显的保护作用。结论茶及其成分对ＮＮＫ诱发小鼠肿瘤过程中早期所致免疫功能的改变具有保护作用     

黄连解毒汤对实验性高脂血症大鼠血脂及氧自由基代谢的影响

目的探讨黄连解毒汤(HJD)对实验性高脂血症大鼠血脂及氧自由基代谢的影响。方法雄性SD大鼠50只,随机分为普通饲料组、高脂血症组、HJD低、高剂量组和立普妥对照组。除正常对照组外,其他组大鼠喂饲高脂饲料建立高脂血症模型,HJD按6、12 g/kg/d剂量连续灌胃8周后测定各项指标。结果 HJD能明显降低大鼠血清TC、TG、LDL-C和MDA含量,显著升高HDL-C含量和SOD、GSH-Px活性,并能减轻肝细胞脂肪变性。结论 HJD能有效调节高脂血症大鼠血脂代谢,提高机体抗氧化能力,改善肝组织病理损害。     

黄连解毒汤治疗糖尿病的临床疗效

目的观察分析黄连解毒汤治疗糖尿病的临床疗效。方法自2008年1月—2010年1月该院收治2型糖尿病患者中选取60例,随机分为治疗组、对照组2组,每组30人。对照组予以口服盐酸二甲双胍的常规治疗,治疗组予以黄连解毒汤随症加减治疗。治疗3个月后观察患者治疗前后FPG、2hPG、HbAlc的变化以及临床治疗效果。结果治疗后FPG、2hPG、HbAlc2组较治疗前均有所降低（P〈0.05）;治疗组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,2组疗效相近。2组降糖总有效率比较无统计学意义（P〉0.05）,2组降糖疗效相近。结论黄连解毒汤可有效降低糖尿病患者的血糖,还具有毒副作用小的特点,其临床疗效与盐酸二甲双胍相近似。     

刺五加苷B对MPP~+诱导PC12细胞损伤ERK通路的影响

目的观察刺五加苷B对MPP+诱导损伤的PC12细胞ERK1/2蛋白及相关转录因子表达的影响,探究其神经保护作用机制。方法以MPP+损伤的PC12细胞为模型组,以正常PC12细胞为对照组,Western blot法检测细胞ERK1/2表达及磷酸化水平,荧光定量PCR法检测c-fos和c-jun mRNA的表达水平。结果模型组ERK1/2磷酸化水平较对照组显著降低(P<0.01),c-fos和c-jun表达明显上调,差异有统计学意义;给予刺五加苷B(10mg·L-1)后,受损细胞ERK1/2的磷酸化水平明显升高,c-fos和c-jun基因的过表达水平降低。结论刺五加苷B对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用机制可能与提高ERK1/2蛋白磷酸化水平,避免诱发c-fos和c-jun基因过表达有关。     

JNK通路在MPP~+诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞的毒性作用及其机制。方法 PC12细胞体外培养,以100、300、500μmol/L MPP+进行染毒。Western blot法检测JNK1/2磷酸化水平;使用JNK通路阻断剂SP60012预处理细胞,TUNEL法观察其对MPP+诱导的细胞凋亡的影响。结果 MPP+染毒可以引起细胞JNK1/2的磷酸化水平增高,使用JNK通路阻断剂SP600125可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡。结论激活JNK通路可能是MPP+诱导PC12细胞凋亡、产生多巴胺能神经毒性的重要分子机制。     

隔日禁食对MPTP诱导帕金森病小鼠的保护作用研究

目的探究隔日禁食(ADF)对MPTP诱导的帕金森病(PD)小鼠的保护作用;方法 44只C57BL/6雄性小鼠随机均分为:生理盐水+自由饮食(NS+AL)、生理盐水+隔日禁食(NS+ADF)、MPTP+自由饮食(MPTP+AL)、MPTP+隔日禁食(MPTP+ADF)4组。隔日禁食方案以2d为一周期,D1完全禁食,D2自由摄食,共17个周期,期间记录小鼠体质量。自第12个周期始,小鼠接受每日1次、连续5 d的MPTP腹腔注射,建立亚急性PD小鼠模型。实验结束后收集小鼠粪便,用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)检测粪便中短链脂肪酸(SCFAs)含量;收集小鼠新鲜纹状体组织,用高效液相色谱法(HPLC)检测神经递质及其代谢物,通过WB检测酪氨酸羟化酶(TH);收集小鼠全脑组织制备冰冻切片,用免疫荧光染色检测黑质区多巴胺能神经元及神经胶质细胞的数量;结果 ADF限制小鼠体质量的增加。ADF能提升PD小鼠纹状体内多巴胺(DA)与5-羟色胺(5-HT)的含量,降低其代谢,并提升TH表达。ADF可增加黑质区多巴胺能神经元数量,并抑制神经胶质细胞的增生与激活。此外,ADF还抑制PD小鼠粪便内SCFAs...     

升降散合黄连解毒汤灌肠治疗58例婴幼儿疱疹性龈口炎的临床效果观察

目的探讨升降散合黄连解毒汤灌肠治疗疱疹性龈口炎患儿的临床疗效。方法回顾该院近年来就诊的58例婴幼儿疱疹性龈口炎患儿给予升降散合黄连解毒汤灌肠治疗疱疹性龈口炎患儿的临床疗效。结果研究组疱疹性龈口炎患儿经治疗后,总有效率高达91.38%,明显高于对照组疱疹性龈口炎患儿经治疗后总有效率77.59%,且P<0.05,两组患儿治疗结果对比具有统计学意义。结论对婴幼儿疱疹性龈口炎患儿给予升降散合黄连解毒汤治疗,可显著提高患儿治疗有效率。     

MPP+对PC12细胞增殖及外信号调节激酶影响

目的研究1-甲基-4苯基-吡啶离子(MPP⁺)对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法PC12细胞体外培养,分别以100,300,500μmol/L MPP⁺进行染毒。四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)观察MPP⁺对细胞的抑制作用;免疫印迹法检测细胞ERK1/2表达及磷酸化水平。结果不同剂量以及不同作用时间的MPP⁺对PC12细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率为18.86%~58.06%。MPP⁺可以抑制细胞外调节信号激酶(ERK)的磷酸化水平,其中300μmol/L MPP⁺染毒3 d时,ERK磷酸化水平约为对照组的4.7%。ERK通路阻断剂PD98059与300μmol/L MPP⁺共同作用时,对细胞增殖的抑制率增高至78.9%。结论MPP⁺可以明显抑制PC12细胞的增殖,降低ERK的磷酸化水平可能是其重要分子机制之一。     

G6PC在体外对卵巢癌细胞生长的作用及其对卵巢癌细胞周期的影响

目的探索在G6PC在体外对卵巢癌细胞生长的作用及其对卵巢癌细胞周期的影响,评价G6PC在卵巢癌治疗中可能存在的潜力。方法利用shRNA稳定转染技术及G6PC特异性抑制剂(4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐)在OVCAR3人卵巢癌细胞株中抑制G6PC的表达。通过Western blotting及qRT-PCR技术检测shRNA的沉默效果以及4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐对G6PC的抑制作用以及CDKN1B、CDK2蛋白水平改变。检测阻断G6PC前后细胞糖代谢中关键酶糖原合成酶(GYS1)、糖原磷酸化酶(PYGL)以及关键代谢产物糖原水平的改变。对G6PC从基因水平及药物水平进行阻滞后,通过结晶紫实验、Transwell实验和软琼脂实验检测细胞增殖、迁移侵袭和非停泊性生长能力的改变,评价G6PC对卵巢癌细胞生长的影响。最后利用流式细胞技术对shG6PC对卵巢细胞周期、凋亡的影响作进一步探究。结果体外shRNA沉默G6PC后,卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭和非停泊性生长能力降低。在抑制卵巢癌细胞生长方面,应用20μM的G6PC特异性抑制剂(4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐)可以达到与基因水平阻断相似的效果。阻断G6PC后,胞内GYS1及PYGL发生改变,细胞内糖原累积,提示细胞糖异生功能的损伤。G6PC沉默引起了CDKN1B编码蛋白p27磷酸化水平增加。在细胞周期实验中,沉默G6PC使G1/S期卵巢癌细胞比例上升,卵巢癌细胞更多停滞于G1期。而在细胞凋亡方面G6PC抑制组与对照组并无显著差异。结论通过shG6PC和4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐对G6PC进行抑制可影响卵巢癌细胞的糖代谢,同时降低了肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭以及非停泊性生长的能力。G6PC沉默可使CDKN1B磷酸化蛋白的水平升高。CDKN1B蛋白磷酸化水平升高可能是导致细胞趋于停滞在G1期的原因。     

菊花提取物对帕金森病小鼠的保护作用及机制研究

目的探讨菊花提取物(Chrysanthemum morifoliuin Ramat extract,CRE)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)小鼠的保护作用及机制。方法 C57BL/6小鼠40只随机分为4组,每组10只,分别为正常组(NC)、模型组(MC)、CRE低剂量组(LC)和CRE高剂量组(HC)。LG和HC每日以CRE溶液灌胃,剂量分别为100、200mg/kg qd,NC和MC每日以等量蒸馏水灌胃,连续19 d。在第11d,除NC组外,其余组小鼠腹腔注射MPTP溶液,NC组注射等体积的生理盐水,1/d,连续5d。以爬杆法、转轴法和拉力法评价PD小鼠的行为学能力,免疫组化法(IHC)观察酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,ESI-QTOF-MS法检测纹状体多巴胺含量,采用分光光度法测定小鼠脑黑质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平的变化。结果 MPTP诱导小鼠大脑发生病变,MG组行为学评分、黑质TH阳性细胞表达量、纹状体多巴胺水平及大脑黑质SOD、GSH-Px活性均显著下降,脑黑质MDA含量显著升高。与MG比较,LG、HG组行为学障碍显著改善,小鼠黑质TH阳性神经元表达、纹状体内多巴胺含量及小鼠脑黑质内SOD、GSH-Px水平均显著提高,MDA含量显著下降。结论 CRE对MPTP诱发的PD小鼠有良好的治疗作用,可能通过抑制氧化损伤起到对PD小鼠起保护作用。     

绿茶抑制大鼠体内杂环胺-DNA加合物的形成

食物中的致突变物２－氨基－１－甲基－６－苯基咪唑并「４，５－ｂ」吡啶可诱发大鼠结肠和乳腺肿瘤，而且与人类癌症特别是结肠和直肠癌的密切关系。本研究以致癌物－ＤＮＡ加合物为生物标记物，观察绿茶对ＰｈＩＰ致癌作用的预防效果及机理。     

饮茶抑制大鼠体内杂环胺-DNA加合物形成的机理

目的我们已报告饮茶可有效抑制２氨基１甲基６苯基咪唑并［４，５ｂ］吡啶（ＰｈＩＰ）在大鼠体内形成致癌物ＤＮＡ加合物，本研究旨在探讨这一作用机理。方法ＰｈＩＰ在体内经代谢活化形成终致癌物Ｎ乙酰氧基ＰｈＩＰ，后者与ＤＮＡ结合形成ＰｈＩＰＤＮＡ加合物。本研究模拟体内条件，观察茶水或茶多酚对化学合成的［３Ｈ］Ｎ乙酰氧基ＰｈＩＰ与ＤＮＡ反应的抑制作用，并以高效液相色谱分析反应产物。结果茶水和茶多酚均可显著抑制ＰｈＩＰ与ＤＮＡ结合，抑制效果与加入的茶水或茶多酚呈浓度效应关系。在所测试的茶水和茶多酚中，在同等浓度下，绿茶抑制效果优于红茶，绿茶多酚优于红茶多酚。高效液相色谱分析未发现［３Ｈ］Ｎ乙酰氧基ＰｈＩＰ与茶多酚的结合物，而反应体系中的主要产物是母体杂环胺ＰｈＩＰ。结论茶多酚抑制Ｎ乙酰氧基ＰｈＩＰ与ＤＮＡ结合的作用机理，是直接将Ｎ乙酰氧基ＰｈＩＰ还原成ＰｈＩＰ，使之失去亲电子的能力从而抑制ＰｈＩＰＤＮＡ加合物形成。鉴于茶多酚和Ｎ乙酰氧基ＰｈＩＰ均可在血循环和组织中存在，两者之间的直接反应可能是饮茶抑制体内ＰｈＩＰＤＮＡ加合物形成的机理     

平帕汤对PD模型小鼠多巴胺能神经元保护作用的研究

目的 探讨平帕汤对帕金森病（PD） 模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP） 诱导的PD 小鼠模型基础上,随机分为正常组,模型组和平帕汤组,采用爬杆测试法观察平帕汤对PD 小鼠行为特征的影响;采用高效液相电化学法（HPLC-ECD） 检测各组小鼠纹状体内多巴胺（DA）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC） 和高香草酸（HVA） 的含量;采用免疫组化染色法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH） 阳性细胞表达的变化.结果 末次注射MPTP 后,与正常组相比,模型组爬杆时间和评分明显增加（P〈0.05）,平帕汤组显著增加（P〈0.01） ;与模型组相比,平帕汤组DA、DOPAC 值有上升趋势,DA/HVA 值则明显增加（P〈0.01,P〈0.05） ; 平帕汤组黑质TH 阳性细胞的表达程度明显提高（P〈0.05 或P〈0.01）.结论 平帕汤能保护帕金森病模型小鼠脑黑质多巴胺能神经元,挖掘其功能潜力,振奋其分泌能力,从而提高脑内黑质纹状体系统多巴胺的浓度,最终达到防治PD 的作用.     

胞二磷胆碱对神经细胞凋亡保护作用

目的探讨胞二磷胆碱对6-羟基多巴胺所致的神经细胞凋亡的保护作用机制。方法采用流式细胞仪检测神经细胞的凋亡百分比及Bax、Bcl-2蛋白表达。结果将1，0．1，0．01和0．001mmol／L胞二磷胆碱＋6-羟基多巴胺组，与6-羟基多巴胺组比较，凋亡百分比明显降低（P〈0．01）；各组Bax蛋白的表达率明显下降，0．1mmol／L胞二磷胆碱组明显低于对照组；1，0．1和0．01mmol／L胞二磷胆碱组Bcl-2表达率显著升高；Bax／Bcl-2比值下降，0．1mmol／L胞二磷胆碱组Bax／Bcl-2比值低于对照组（P〈0．01）。结论胞二磷胆碱通过减少Bax和增加Bcl-2蛋白的表达。使Bax／Bcl-2比值下降、细胞凋亡减少。发挥其神经保护作用。     

扶正解毒汤对镍电解工人体内脂质过氧化的保护作用

目的研究从事镍电解工人体内镍负荷与自由基代谢变化的关系,并用扶正解毒汤干预体内脂质过氧化作用。方法自2010年7月—2011年7月,以100名镍电解作业人员为接触组,以80名无镍接触的健康人作为非接触组,分别测定两组人员血清中镍含量作为体内负荷;同时测定接触组服用扶正解毒汤1个月后血清中镍、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)的水平。结果镍作业组血清中MDA含量明显升高;SOD活力、GSH含量明显下降,差异有统计学意义(P0.01),服用扶正解毒汤后镍、MDA含量明显下降;SOD活力、GSH含量明显升高,差异有统计学意义(P0.05),结论镍具有增加体内脂质过氧化产物、降低机体抗氧化能力的作用;扶正解毒汤对体内脂质过氧化有明显的保护作用。     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血症相关浓度及极高浓度的Hcy(0、30、100、200、500和1000μmol/L),并孵育72h,以MS-PCR分析MTHFR启动子区域甲基化状态,采用RT-PCR测定MTHFR mRNA的表达水平。结果不同浓度Hcy处理人血管平滑肌细胞后,其MTHFR基因启动子区域出现去甲基化,甲基化水平明显降低。RT-PCR结果显示MTHFR mRNA表达增加。结论Hcy可促进人血管平滑肌细胞MTHFR启动子区域去甲基化,并使MTHFR mRNA表达增加。