温肾固疏方干预绝经后骨质疏松药理研究

目的观察温肾固疏方对骨代谢造成的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、雌激素组、温肾固疏方高、中、低剂量组。假手术组仅切除卵巢周围脂肪组织,不切除卵巢,其余大鼠切除双侧卵巢,建立绝经后骨质疏松模型。造模1 m后,中药汤剂灌胃干预8 w,末次给药结束后放血处死。双能X射线法测定去势大鼠离体股骨、腰椎骨密度(bone mineral density,BMD)、骨矿含量(bone mineral content,BMC),电子式双柱万能材料试验机测定股骨弾性模型、最大承载力、刚性、最大应力,全自动生物仪测HDL-C、LDL-C、TG、TC,计算动脉粥样硬化指数(atherogen icindex,AI),采用酶联免疫吸附测定(Elisa)法测量大鼠血清OT/BGP、Lipid、Apo E、sRANKL、OPG、BMPs。结果与假手术组对比,模型组BMD、BMC下降(P0.05);股骨弾性模型、最大承载力、刚性、最大应力皆下(P0.05);OPG、BMPs下降(P0.05);Lip上升(P0.05);Apo E上升(P0.01);LDL-C上升(P0.05)。与模型组对比,雌激素、低、高剂量组大鼠股骨BMD、BMC上升(P0.05);雌激素组、中剂量组弾性模型增高(P0.05);雌激素组、高剂量组最大承载力增高(P0.05);低、高剂量组刚性增高(P0.05);雌激素组、低、高剂量组最大应力增高(P0.05);雌激素组、低、高剂量组血清OT/BGP上升(P0.05);低、高剂量组sRANKL下降(P0.05);雌激素组、低剂量组血清OPG上升(P0.05);雌激素组、低、高剂量组BMPs上升(P0.05);高、中、低剂量组血清Lip下降(P0.05);低剂量组Apo E下降(P0.05);低、高剂量组LDL-C下降;低剂量组TG下降(P0.05);低、高剂量组动脉粥样硬化指数下降(P0.05)。结论去势大鼠骨质疏松模型的脂代谢是重要调节点,温肾固疏方可以通过调控Apo E水平影响血清脂代谢与骨代谢,对绝经后骨质疏松有一定防治效果,不同剂量的温肾固疏方汤剂对绝经后骨质疏松症的防治效果不同,高剂量组较为明显。     

培本固疏方对去势大鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的观察培本固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学及骨代谢指标的影响。方法将42只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM)、模型对照组(OVX)、中药低剂量组(D)、中药中剂量组(Z)、中药高剂量组(G)和西药组(X),通过切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松症模型,假手术组仅切除卵巢周围约1 g的脂肪组织。造模4周后进行药物干预,各组持续灌胃8周。计算子宫指数,测定股骨骨密度(bone mineral density,BMD)及股骨生物力学弹性载荷、极限载荷、弹性模量等指标;采用ELISA法测定血清骨代谢指标TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化应激指标MDA、AGEs的含量。结果与SHAM组比较,OVX组子宫指数、股骨近端和股骨中段BMD、弹性载荷、弹性模量均明显降低(P0. 05),OVX组血清MDA、AGEs含量明显升高(P0. 01),血清TRACP5b含量明显升高(P0. 01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0. 01);与OVX组相比,各治疗组子宫指数、骨强度均有所改善。Z组、G组及X组BMD均明显增高(P0. 05)。Z组、G组及X组TRACP5b含量下降(P0. 05)、OPG含量升高(P0. 05)、RANKL含量降低、OPG/sRANKL比值升高(P0. 05)。Z组、G组血清MDA、AGEs含量降低(P0. 05)。结论培本固疏方可以增加骨强度,通过OPG/RANKL/RANK通路来抑制破骨细胞形成,减缓骨基质吸收,抗氧化应激机制也可能参与其中,具体机制有待探讨。     

温肾固疏方对绝经后骨质疏松大鼠骨代谢以及脂代谢的影响

目的探讨温肾固疏方改善骨质疏松和脂代谢异常的的作用机制。方法将60只大鼠的卵巢全部切除以建立绝经后骨质疏松模型,随机分为对照组(n=20)、雌激素组(n=20)和实验组(n=20)。假去势组(n=20)大鼠仅从卵巢周围切除少量脂肪。干预治疗8周后,采用酶联免疫法测定各组大鼠血清PING、TRACP5b、OPG、BGP的水平;并检测各组大鼠血脂指标。结果与假去势组大鼠比较,对照组大鼠的股骨和股骨近端的BMD明显降低(P0.05);骨代谢指标和脂代谢指标水平均明显恶化(均P0.05)。灌胃治疗后,与对照组比较,雌激素组和实验组大鼠的股骨和股骨近端的骨密度水平明显升高(P0.05),并且两组大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平均较显著提高(均P0.05),而OPG水平显著降低(P0.05)。此外,雌激素组和实验组大鼠的脂代谢指标水平均较对照组明显改善(均P0.05)。结论温肾固疏方通过有效提高绝经后骨质疏松大鼠的骨密度,调节骨代谢和脂代谢指标水平,达到改善骨质疏松和调节血脂代谢的效果。     

温肾固疏方对去势大鼠骨组织中Ⅰ型胶原及组织蛋白酶 K 表达的影响

目的 研究温肾固疏方对绝经后骨质疏松症的防治作用。方法 通过切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型。造模后,SD大鼠随机分为模型组、雌激素组、温肾固疏方高、中、低剂量组,每组8只。假手术组仅切除卵巢旁脂肪组织。干预2个月后,通过HE染色观察骨组织、肾组织形态;ELISA法测定血清PICP、ICTP、CTX、NTX的含量;免疫组化法测定Col I、Cath K表达率的变化。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清ICTP、NTX、CTX含量均明显升高（P＜0.01）,骨组织形态改变与骨质疏松症一致,肾组织出现炎性改变,骨组织中Cath K含量明显增高（P＜0.01）,Col I蛋白含量显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,血清ICTP、NTX、CTX含量显著降低（P＜0.05）,且温肾固疏方高剂量组比中、低剂量组表达明显。温肾固疏方中、高剂量组血清PICP含量显著增高（P＜0.01）。各治疗组骨组织形态改善,肾组织炎性改变减轻。各治疗组骨组织Cath K蛋白的表达均降低（P＜0.01）,Col I蛋白表达显著升高（P＜0.01）。结论 温肾固疏方能够通过下调破骨细胞Cath K的表达来抑制骨基质中Col I的分解,起到治疗绝经后骨质疏松症的作用。     

抗疏健骨颗粒对去卵巢骨质疏松大鼠血清骨代谢及骨组织自噬水平的影响

目的研究抗疏健骨颗粒对去卵巢骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨稳态及自噬相关因子的影响,探讨抗疏健骨颗粒干预OP的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、抗疏健骨颗粒低、中、高剂量组。除假手术组外,其余4组建立去卵巢大鼠OP模型。正常喂养12周检测模型建成后,给予抗疏健骨颗粒干预12周,采用ELLSA法测定血清ALP、BGP和TRACP水平和股骨GPR48、ATF4含量;蛋白印迹法(Western blotting)检测股骨中AMPK、LC3、Beclin1和P62蛋白表达。结果抗疏健骨颗粒可显著降低OP大鼠血清ALP、BGP和TRACP水平,升高股骨GPR48、ATF4含量,上调AMPK磷酸化水平及LC3、Beclin1蛋白表达,降低P62水平,差异有统计学意义(P0.05)。抗疏健骨颗粒各剂量组中,中剂量组效果显著,与其他两组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论抗疏健骨颗粒可调节血清、骨组织中骨代谢指标,减轻去卵巢大鼠OP的发生,其机制可能与通过骨组织中AMPK调节自噬通路有关,通过恢复自噬水平,促进骨生成,进而维持骨平衡。     

益肾健骨膏对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 探讨益肾健骨膏对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响及可能机制。方法 50只雌性SD大鼠被随机分为假手术组、模型组、高剂量膏方组、低剂量膏方组、阳性药物组,每组10只。假手术组、模型组给予10 mL /（kg·d）生理盐水灌胃,低、高剂量膏方组分别给予2 g /（kg·d）、13 g/（kg·d）益肾健骨膏灌胃,阳性药物组灌服6.25 mg/（kg·w）阿仑膦酸钠维D3。治疗12周后检测大鼠腰椎骨密度和腰椎最大压缩载荷,通过Elisa检测血清骨代谢指标抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）、骨保护素(OPG)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅰ),RT-PCR检测腰椎骨组织OPG、RANKL、RANK、TRAF6的 mRNA表达,RT-PCR及Western blot检测腰椎Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的基因及蛋白表达。结果 益肾健骨膏治疗12周后,与模型组比较,高剂量膏方组大鼠腰椎骨密度、最大压缩载荷,血清PINP、OPG水平,骨组织Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的mRNA和蛋白表达,OPG的mRNA表达显著升高（P<0.05）,而血清TRACP、CTX-Ⅰ水平,骨组织RANKL、RANK、TRAF6的mRNA表达显著降低（P<0.05）。结论 高剂量益肾健骨膏能改善去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、骨强度及骨代谢,其作用机制可能与Notch通路及OPG/RANKL/RANK系统有关。     

补肾方对去卵巢大鼠血清TRACP5 b和BGP影响的实验研究

目的探讨补肾方对去卵巢大鼠血清TRACP5b和BGP水平的改善作用。方法 6月龄雌性SD大鼠随机分为手术模型组、雌激素组、中药组和假手术组。造模成功后,中药组以补肾中药灌胃,1次/天;激素组给予尼尔雌醇灌胃,1次/周;手术模型组和假手术组给予蒸馏水灌胃,1次/天。治疗3个月,检测各组大鼠的骨密度和外周血清中的TRACP5b和BGP含量。结果与手术模型组比较,中药组全身、腰椎骨密度明显改善(P<0.05),TRACP-5b水平显著降低(P<0.05),BGP含量明显上升(P<0.05)。结论补肾方可以明显改善去卵巢大鼠骨密度水平,降低TRACP-5b水平,增加BGP含量;提示补肾方可以提高了体内雌激素水平,抑制骨的吸收,促进骨的形成。     

雌激素对去势骨质疏松症大鼠骨密度和骨代谢影响的实验研究

目的研究雌激素对去势骨质疏松症模型大鼠骨密度(bone mineral density,BMD)和骨代谢的影响,并探讨其治疗骨质疏松症的机制。方法将48只雌性SD大鼠随机分配成对照组、模型组、雌激素组和雌激素+三苯氧胺组,每组12只。除对照组外,其他各组大鼠采用双侧卵巢摘除法制备骨质疏松症模型。雌激素组给予尼尔雌醇(1 mg/kg)灌胃,1次/周;雌激素+三苯氧胺组给予尼尔雌醇(1 mg/kg)和三苯氧胺(3 mg/kg)灌胃,1次/周;对照组和模型组分别使用等量生理盐水灌胃,均持续3个月。3个月后取材,检测大鼠左侧股骨BMD和股骨骨矿物盐含量、血清钙含量以及胫骨中骨骼钙含量;酶联免疫法检测大鼠血清碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRAP-5b)的含量;免疫组化检测大鼠胫骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白的表达情况。结果治疗前,与对照组比较其他各组血清钙含量和血清TRAP-5b含量均显著升高(P0.05),骨钙含量、BMD和骨矿物盐含量显著降低(P0.05),血清ALP含量无显著性变化(P0.05);治疗后,与模型组比较雌激素组血清钙含量、血清TRAP-5b含量以及胫骨组织RANKL蛋白表达均显著降低(P0.05),骨钙含量、血清ALP含量、BMD、骨矿物盐含量以及胫骨组织OPG蛋白表达均显著升高(P0.05),而治疗后,与模型组比较雌激素+三苯氧胺组各项指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论雌激素通过显著性提高去卵巢骨质疏松模型大鼠骨骼钙、ALP、股骨骨密度、骨矿物盐以及OPG的含量,抑制骨钙流失、TRAP-5b及RANKL蛋白表达,达到改善骨质疏松的作用。     

神经生长因子与被动运动对失神经大鼠骨代谢指标的影响

目的拟观察外源性神经生长因子对去神经大鼠血清BGP和TRACP的影响,探讨神经生长对废用性骨质疏松的预防作用。方法 50只大鼠随机抽签法分为5组:假手术组(SHAM)、去神经组(DN)、神经生长因子组(NGF)、被动运动组(PM)、神经生长因子与被动运动联合组(NGF+PM)。假手术组不切除坐骨神经和股神经,其他各组通过切除大鼠右侧坐骨神经和股神经建立SD大鼠右侧后肢的去神经模型,通过被动运动和外源性生长因子的干预措施,观察各组大鼠血清BGP和TRACP指标。结果与假手术组相比,去神经各组血清BGP方面明显降低(P0.01),血清TRACP明显升高(P0.05);与DN组相比,NGF组和NGF+PM组与之都有显著性差异(P0.05),PM与DN组之间虽无统计学意义(P0.05);与DN组血清TRACP相比,PM组和PM+NGF组与之有显著性差异(P0.05),NGF组与之无差异(P0.05);结论大鼠下肢缺乏神经支配导致肌肉萎缩、骨正常代谢遭到破坏,被动运动和神经生长因子能提高去神经大鼠血清BGP水平、降低血清TRACP的含量,一定程度上能预防去神经型废用性骨质疏松的发生。     

卵巢切除大鼠在不同时期RANKL、OPG蛋白表达的变化及与BTMs的相关性

目的探讨卵巢切除大鼠在不同时期骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及与骨转换标志物(BTMs)的关系。方法将SD雌性大鼠随机分成假手术组(Sham)和去卵巢骨质疏松模型组(OVX),模型组行双侧卵巢切除术,术后第2、6、10、14周分批取材,采用Western blot检测各时期大鼠骨组织OPG、RANKL蛋白表达,采用Elisa检测各时期大鼠血清骨转换标志物BGP、BALP、CTX-I、TRAP-5b的变化。结果 OVX组在术后第2周(P0.01)和第10、14周(P0.05)骨组织RANKL蛋白表达均较Sham组显著升高,OPG蛋白表达在第2周(P0.01)和第6周(P0.05)均显著降低。(2)与Sham组相比,OVX组术后第2周血清BGP、BALP、CTX-I(P0.05)和TRAP-5b(P0.01)水平均显著升高;OVX组术后第6周血清BGP、BALP水平显著升高(P0.01),CTX-I(P0.05)和TRAP-5b(P0.01)水平显著下降;OVX组术后第10、14周血清CTX-I(P0.05)、BALP(P0.01)水平显著升高。(3)骨转换标志物血清CTX-I、TRAP-5b水平与骨OPG表达成负相关(P0.01),与骨RANKL表达成正相关(P0.05)。结论相关性分析显示骨转换标志物CTX-I、TRAP-5b与骨OPG成负相关,与骨RANKL成正相关。     

Soluble Fas and Fas-ligand in bladder cancer in vitro and in vivo

Circulating soluble Fas (sFas) and expression of Fas-ligand on cancer cells are mechanisms of immune escape. The aim of the present study was to investigate expression and production of Fas and Fas-ligand on bladder cancer cell lines of different grade as a basic mechanism of their secretion in vivo. sFas and sFas-ligand serum levels of patients with different stage of bladder cancer were examined to determine the possible clinical use of these molecules as tumor markers. Bladder cancer cell lines RT4 (G1), RT112 (G1), T24 (G3) and SUP (G4) were analyzed by flowcytometry for Fas and Fas-ligand expression. To determine if the Fas-ligand gene is transcribed in these bladder cancer cell lines, RT-PCR was performed on mRNA extracted from these cell lines. Production of sFas and sFas-ligand was examined in cell culture supernatants of the cancer cells as well as in the serum of 62 patients with bladder cancer by a specific ELISA test. We demonstrate that Fas is expressed in similar levels on all human bladder carcinoma cell lines. In T24 (G3) and SUP (G4) cell lines we were able to detect the Fas-ligand protein, whereas no Fas-ligand protein could be found in RT4 and RT112 (G1) cells. Fas-ligand mRNA was expressed in all bladder cancer cell lines. Furthermore, all bladder cancer cell lines produce sFas but no sFas-ligand in spite of mRNA expression. The range of sFas levels in the serum of all patients with bladder cancer was large and did not show a correlation to the histopathological stage of bladder cancer. Although there is in vitro evidence that sFas and Fas-ligand play a role in bladder cancer, no correlation between the sFas and s Fas-ligand serum levels and the histopathological stage of bladder cancer could be found. Therefore, serum sFas and sFas-ligand have to date limited clinical relevance.     

Overweight in childhood and bone density and size in adulthood

Summary  

We evaluated the adult bone structural traits in relation to childhood overweight in 832 men and women. Childhood overweight was associated with larger cross-sections at long bones in both sexes. Excess weight in childhood may also lead to higher trabecular density in females and somewhat lower cortical density in men.