原发性肝细胞癌组织中乙肝病毒整合与p53基因突变关系研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法检测１５例原发性肝细胞癌及癌旁组织乙肝病毒（ＨＢＶ）存在状态，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（Ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）银染技术研究其ｐ５３基因突变。结果癌组织中１３例（８６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，同时３例伴游离ＨＢＶＤＮＡ；癌旁４例（２６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，而游离的ＨＢＶＤＮＡ却有６例。癌组织中ｐ５３基因变异８例（５３．３％），１例位于第５外显子，各有２例位于第６、第７外显子，３例位于第８外显子，癌旁组织未见ｐ５３基因异常，ｐ５３基因异常的癌组织中均有ＨＢＶＤＮＡ整合。研究结果表明，ＨＢＶＤＮＡ整合与ｐ５３基因突变密切相关，ＨＢＶＤＮＡ可能通过整合基因组后导致抑癌基因突变失去抑癌作用而引发肝癌。     

肝细胞癌肿瘤抑制基因p53过度表达及点突变的研究

应用一种敏感的ＡＲＦ免疫组经和ＰＣＲ、银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测了本地区３８例肝细胞癌组织中肿瘤抑制基因ｐ５３的过度表达及点突变，结果发现１６例有ｐ５３蛋白过度表达（４１．２％），７例有ｐ５３基因２４９位密码子点突变，２例２４９位密码子外第７外显子点突变。９例ｐ５３基因有突变的肝癌中８例ｐ５３蛋白阳性，两者符合率为８８．９％，ｐ５３基因蛋白过度表达和点突点与ＨＣＣ分化和转移有关。本组ＨＣＣ ｐ５     

乙型肝炎病毒X基因与肝癌p53突变蛋白的表达

应用免疫组织化学（ＡＢＣ法）对２３例肝癌和癌旁组织中ｐ５３突变蛋白进行检测，同时对其中ＨＢＶＸｍＲＮＡ进行原位杂交（ＤＮＡ－ｍＲＮＡ）检测。结果发现，９例肝癌及其癌旁组织中ｐ５３突变蛋白和ＨＢＶＸｍＲＮＡ均为阳性，１１例均为阴性，另３例仅ＨＢＶＸｍＲＮＡ阳性，χ２检验显示ｐ５３突变蛋白与ＨＢＶＸｍＲＮＡ之间有明显相关关系（Ｐ＝０．０００２７），提示ｐ５３基因突变与ＨＢＶＸ基因整合表达有关，ｐ５３基因突变可能是ＨＢＶ致肝癌作用机制之一。     

肝癌非高发区安徽省肝细胞癌p53基因249密码子点突变的研究

目的：研究ｐ５３基因２４９密码子在肝癌非高发区安徽省的点突变的发生率。方法：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术肝细胞癌ｐ５３基因２４９密码子突变的频率。结果：所检测的３８例肝细胞癌均无出现ｐ５３基因第七外显子纯合性缺失,４例有ｐ５３基因２４９密码子的点突变,且均为杂合型突变,突变率为１０．５％（４／３８）。结论：本资料说明,在肝细胞癌非高发区中,肝细胞癌中ｐ５３基因第七外显子发生的点突变并非为高发事件。提示     

c-erbB-2、H-ras p21、p53及PCNA在原发性肝癌中的表达

应用免疫组化ＬＳＡＢ法，对５０例原发性肝癌、癌周肝组织及１０例正常肝组织中ｃ－ｅｒｂＢ－２、Ｈ－ｒａｓｐ２１和ｐ５３癌基因蛋白及ＰＣＮＡ表达进行比较研究。结果表明，ｃ－ｅｒｂＢ－２、Ｈ－ｒａｓｐ２１、ｐ５３及ＰＣＮＡ阳性表达率，在癌组织中分别为７０．０％、６８．０％、４６．０％及８２．０％；在癌周肝组织中分别为２２．０％、６４．０％、４．０％及５２．０％；正常肝组织中（除Ｈ－ｒａｓｐ２１外）未见表达，且癌组织与非癌组织（Ｈ－ｒａｓｐ２１除外）及正常肝组织之间有显著差异（Ｐ＜０．０５）。ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｐ５３蛋白的表达与原发性肝癌的组织学分级有密切关系（Ｐ＜０．０５），且二者的表达有高度的相关性（Ｐ＜０．００５），在癌、癌周肝组织中，２种以上癌基因蛋白同时表达总率分别为１４４．０％、１２．０％，癌基因蛋白与ＰＣＮＡ同时表达总率分别为１５０．０％、８４．０％。提示肝癌的发生是由多种癌基因独立并协同作用伴有细胞异常增殖的恶性转化过程。     

中国高发区肝细胞癌中HBVx基因的广泛存在及与p53基因249密码子高 …

目的 乙肝病毒（ＨＢＶ）是肝细胞癌（ＨＣＣ）的主要病因。ＨＢＶ中的ｘ基因被认为是它的癌基因。为确定ｘ基因在肝癌癌变中的重要性,我们主要针对ＨＢｓＡｇ阴性的ＨＣＣ,研究ＨＢＶｘ基因的存在、表达和突挛情况;同时也对ｘ基因与Ｐ５３基因２４９密码子热点突变的相关性进行了分析。方法 应用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＤＮＡ序列分析方法,重点针对１９９１年－１９９６年在启东北京手术的的、病理确诊为Ｈ     

nm23—H1和p53基因表达与肝细胞癌临床病理学特征的关系

目的：研究ｎｍ３２－Ｈ１和ｐ基因表达与肝细胞癌（肝癌（临床病理学特征的关系。方法：采用ＡＢＣ免疫组织化学染色法检测了２９例肝癌标本的ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３基因表达。结果：ｎｍ２３－Ｈ１基因在肝癌中表达的阴性率为６０％（１８／２９）；ｎｍ２３－Ｈ１基因低表达与门静脉癌栓、肝癌分化程度Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级、血清ＡＦＰ水平等显著相关（ｐ均〈０．０５）；ｐ５３基因表达阳性率为７０％（２０／２９，ｐ５３基     

人肝细胞癌及癌周组织中p53、c-myc基因的表达及临床意义

目的：探讨ｐ５３及ｃｍｙｃ基因表达在原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）发生发展过程中的作用。方法：应用免疫组织化学方法分别检测７３例和６０例ＨＣＣ癌及其癌周组织中ｐ５３和ｃｍｙｃ基因的表达状况。结果：ｐ５３基因在ＨＣＣ中阳性表达率显著高于癌周组织（Ｐ＜０．０５,）,癌周组织中ｐ５３基因表达仅见于癌周增生结节,癌周肝硬变及正常肝组织内未见ｐ５３基因阳性表达;ｃｍｙｃ基因的阳性表达率在ＨＣＣ与癌周增生结节中相近（Ｐ＞０．０５）,且两者均显著高于癌周肝硬变和正常肝组织（分别为Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;ｐ５３及ｃｍｃｙ基因表达均与ＨＣＣ分化程度呈显著正相关,低分化组ｐ５３及ｃｍｙｃ基因的阳性表达率均显著高于高分化组（Ｐ均＜０．０５）。结论：ｐ５３及ｃｍｙｃ基因过度表达均参与了人肝细胞癌的发生发展过程;癌周增生结节属癌前期病变,与肝癌的发生有关。     

肝细胞癌组织和癌周组织中p53基因密码子249突变的比较研究

目的：本研究通过比较研究ＨＣＣ 癌组织和癌周组织中ｐ５３ 基因密码子２４９ 特征性突变来进一步阐明该基因在ＨＣＣ 发生机制中的意义。方法：收集９ 份癌组织中经单链构型多态性分析研究证实存在密码子２４９ 突变的ＨＣＣ 标本和１１ 例无此突变的ＨＣＣ 标本,采用等位基因特异性ＰＣＲ（ＡＳ－ ＰＣＲ） 方法比较研究癌组织和癌周组织中密码子２４９ 突变情况。结果：２０ 例ＨＣＣ 中,癌周组织中密码子２４９ 特征性突变检出率为７０ ％ 。９ 例ＳＳＣＰ 阳性者的癌周组织中的特征性突变检出率达１００ ％ 。１１ 例阴性患者的癌组织和癌周组织也能检出一定水平的突变。结论：ｐ５３基因密码子２４９ 突变在非癌肝组织中广泛存在。癌组织中密码了２４９ 特征性突变可能发生在肿瘤形成之前。     

肝细胞癌p53基因特异点突变的分子流行病学意义

目的研究肝细胞癌（ＨＣＣ）ｐ５３基因突变热点的特异性及其分子流行病学意义。方法取广西高、中、低流行区ＨＣＣ样品，进行ＤＮＡ测序，并用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果ＤＮＡ测序结果为２４９密码子第３碱基Ｇ→Ｔ颠换占５７％（２０／３５）。ＲＦＬＰ分析表明ＨａｅⅢ酶切点丢失占６９％（３６／５２），与低发区的１０％（１／１０）和２０％（２／１０）比较，差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论广西ＨＣＣ高发主要原因为黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）高污染。ｐ５３基因突变集中于２４９第３碱基Ｇ→Ｔ颠换。这个由ＡＦＢ１介导的特异位点、固定形式（Ｇ→Ｔ）和高频率的ｐ５３突变，应称为“ＡＦＢ１突变点”，具有分子流行病学意义，可用于确定流行区不同个体ＨＣＣ由ＡＦＢ１介导和某些地区受ＡＦＢ１污染的情况。用ＲＦＬＰ替代ＤＮＡ测序可获同样效果。     

三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶ　ＤＮＡ）。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＢＶ　ＤＮＡ的Ｓ区、前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区。以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０－６ｐｇ。以Ｓ、Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２）　７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３２）；以Ｃ引物和Ｘ引物扩增，阳性率差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。Ｓ引物扩增，阳性率与Ｃ引物比较，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）；与Ｘ引物比较，差异颇大（０．１０＞Ｐ＞０．０５）。１６例肝中均检出ＨＢＶＤＮＡ片段。结果提示，防治ＨＢＶ感染为我国ＨＣＣ一级预防的重要方面。Ｘ基因整合导致细胞恶变，Ｃ基因表达受阻逃避宿主的免疫监视可能是临床肝癌发生的机制。     

中国高发区肝细胞癌p53基因热点突变的规律性

目的 研究同发区肝细胞癌（ＨＣＣ）Ｐ５３基因２４９密码子高频度突变的规律性,为探寻癌及基于Ｐ５３的基因和免疫治疗提供依据。方法 用巢工ＰＣＲ结合测序和限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析的方法,研究１９９４－１９９７年收集的９７例启东和２２便北京的肝细胞癌标本中,Ｐ５３基因２４９密码子的突变率及突变的基因型。用免疫组化法研究癌及癌周细胞中Ｐ５３蛋白的表达程度。 １９９４－１９９７年,启东肝细胞癌中,     

原发性肝癌组织癌基因ras和抑癌基因P~（53）点突变研究

应用多聚酶链延伸反应──限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对４３例福尔马林液固定、石蜡包埋肝癌组织癌基因ｒａｓ和抑癌基因Ｐ（５３）点突变进行分析。结果表明，ｒａｓ基因总突变率为４１．９％（１９／４３），其中Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为３７．２％（１６／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为６．９％（３／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１３位、Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２和６１位密码子未发现有突变者。Ｐ~（５３）基因第２４９密码子突变率为２０．９％（９／４３），第２４８密码子未发现有突变者。结果提示Ｎ－ｒａｓ第１２密码子和Ｐ（５３）第２４９密码子突变与肝癌的发生和发展有关。     

错配修复基因hMLH1a突变384Asp在胃癌、食管癌发病中的作用

目的：研究ｈＭＬＨ１基因错义突变Ｖａ１３８４Ａｓｐ在胃癌、食管癌发病中的作用。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ测序技术，对７９例胃癌患者及其亲属、７６例食管癌患者及其亲属、１００例正常对照，进行了错配修复基因ｈＭ－ＬＨ１错义突变Ｖａ１３８４Ａｓｐ筛选，确定其检出率。结果 ：６％的正常人携带ｈＭＬＨ１基因Ｖａ１３８Ａｓｐ（杂合型）；具有癌症家族史的胃癌患者及其亲属中Ｖａ１３８４Ａｓｐ的检出率与正常对照比较具有显著差异（Ｐ〈０．０５；Ｐ〈０．０１）。以年龄分组比较，围绕中位发病年龄组的胃癌患者和低年龄的胃癌患者亲属组Ｖａ１３８４Ａｓｐ检出率较高（Ｐ〈０．０５ 管癌患者及其亲属与正常对照之间无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论：ｈＭＬＨ１基因Ｖａ１３８４Ａｓｐ等位基因频率在中国人中约为３％，该错义突变可能在部分胃癌发病     

丙型肝炎病毒核心抗原及HBxAg在肝硬化、肝细胞肝癌中分布的免疫组化研究

研究丙型肝炎病毒核心抗原在肝硬变、肝细胞肝癌中的分布规律及意义。方法以免疫组织化学方法检测丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）核心抗原及ＨＢｘＡｇ在肝硬化、肝细胞癌及其癌旁肝组织中的定位及分布。结果ＨＣＶ核心抗原既定位于肝细胞或癌细胞胞核中，又可定位于这些细胞的胞浆中。在不同的病例，有时以胞浆阳性为主，有时以胞核阳性为主，或二者同时存在。肝硬化组织中，ＨＣＶ核心抗原胞浆阳性细胞多呈灶性分布，而核阳性病例阳性细胞则为弥漫分布；肝细胞肝癌中ＨＣＶ核心抗原以弥漫胞核阳性多见，癌旁肝组织多为ＨＣＶ核心抗原胞浆阳性。ＨＣＶ核心抗原在肝硬化、肝细胞肝癌及癌旁肝中的阳性率分别为６７．３％（６６／９８），７５．０％（７８／１０４）及４８．１％（２５／５２），χ２检验，肝细胞癌中核心抗原的胞核阳性率明显高于其在肝硬化及癌旁肝中的胞核阳性率（Ｐ＜０．０１）。核心抗原在肝细胞肝癌中，其细胞核阳性率，明显高于细胞浆阳性率（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＣＶ感染在我国肝硬化、肝细胞肝癌中比较普遍，除ＨＢＶ以外，ＨＣＶ可能在我国肝硬化、肝细胞癌的发生中起着重要作用     

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和p53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应一限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和ｐ５３基因点突变进行分析，结果表明，Ｃ—Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ—Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为１．４％（１／６８）。ｐ５３基因第２４８位密码子点突变率为７．４％（５／６８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃癌组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和ｐ５３基因点突变分析。     

乳腺癌中抗癌基因p53突变及其临床预后

本研究以ｐ５３ｃＤＮＡ为探针，检测２９例散发性乳腺癌中的ｐ５３基因突变。２９例乳腺癌中有２０例乳腺癌有ｐ５３基因杂合性缺失（ＬＯＨ），缺失率为６９％。比较不同分期、肿瘤大小及ＥＲ状态的乳腺癌，ｐ５３基因缺失率无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；而不同腋淋巴结状态的乳腺癌，ｐ５３基因缺失率有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。上述结果表明ｐ５３基因突变是乳腺癌进程中的早期事件；ｐ５３基因的突变可能预示肿瘤具有较强的侵袭能力。     

Bax在肝癌和癌旁组织中的表达及与突变型p53蛋白表达的关系

目的探讨凋亡基因ｂａｘ和ｐ５３与肝癌发生的关系。方法应用免疫组织化学方法检测３４例肝细胞癌和癌旁组织中ｂａｘ和ｐ５３的表达。结果肝癌组织中ｂａｘ阳性７例，ｐ５３阳性２０例，癌旁组织中分别为２２例和６例。ｐ５３表达与组织学分级有明显关系（Ｐ＜０．０５），而ｂａｘ与组织学分级无关（Ｐ＞０．０５）。结论ｂａｘ和ｐ５３蛋白可能与肝癌发生有关，但作用途径可能不同。     

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和P53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和Ｐ５３基因．点突变进行分析，结果表明．Ｃ－Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ－Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１．４％（１／６８）。Ｐ５３基因第２４８位密码子声、突变率为７．４％（５／８８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和Ｐ５３基因。点突变分析。     

原发性肝癌组织癌基因ras和抑癌基因P^53点突变研究

应用多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对４３例福尔马林液固定、石蜡包埋肝癌组织基因ｒａｓ和抑癌基因Ｐ＾５３点突变进行分析，结果表明，ｒａｓ基因总突变率为４１．９％（１９／４３），其中Ｎｒａｓ第１２位密码子突变率为６．９％（３／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１３位、Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２位和６１位密码子未发现有突变者。Ｐ＾５３基因第２４９密码子突变率为２０．９％（９／４２３