幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的：制备幽门螺杆菌（Hp）尿素酶B（ureB）单克隆抗体并鉴定。 方法： 以Hp重组纯化蛋白ureB为抗原，运用杂交瘤技术制备ureB单克隆抗体，用间接ELISA法检测抗体免疫学活性，用双抗夹心的IRMA法检测不同单抗是否识别相同的表位，并用于检测Hp感染。 结果： 获得两株识别不同表位的ureB单抗杂交瘤细胞，可测得Hp 感染的相关抗原。 结论： 抗ureB单抗可特异性与Hp结合，可用于建立幽门螺杆菌现症感染的检测方法。     

人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究.方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPⅡIb/Ⅲa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响.结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集.结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体.     

特异性抗原幽门螺杆菌尿素酶B的体外表达

目的：建立自患者体内分离的幽门螺杆菌菌株及其抗原尿素酶B(ureB)体外表达的方法。方法：分离培养胃病患者感染的幽门螺杆菌，采用基因体外重组技术分离ureB基因，并经测序鉴定，所表达的抗原蛋白用Western blot进行鉴定。结果：测序结果证实克隆的基因与GeneBank中的序列相符，经Weslern blot证实获得ureB的重组蛋白。结论：获得了高表达的重组抗原蛋白，为ureB检测及Hp感染的诊断提供了物质基础。     

幽门螺杆菌空胞毒素对血小板功能的影响

目的探讨幽门螺杆菌（H pylori）空胞毒素（VacA）对血小板功能的影响。方法健康志愿者全血分离血小板,用不同浓度的VacA刺激血小板,用热灭活VacA作为对照组,观察血小板表面P-选择素的表达;采用低剂量vWF和Botrocetin刺激上述两组血小板,观察VacA对血小板凝集功能的影响。结果与对照组比较,VacA可以引起血小板表面P-选择素表达增加;增强血小板对vWF和Botrocetin刺激的凝集反应。结论VacA直接作用于血小板并引起血小板的活化。     

急性冠脉综合征患者血小板活化及聚集的相关研究

目的 观察急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者血小板聚集性及血小板活化指标P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa的变化.探讨活化血小板在ACS急性冠脉综合征发病中的作用.方法 选取健康体检者52名为正常对照组,ACS患者89例,按其病情分为不稳定心绞痛(unstable angina,UA)组43例,急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)组46例.检测两组对象的血小板聚集率及血小板表面表达的P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa表达率等活化指标.结果 与正常对照组比较,UA组患者血小板聚集率、血小板P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa表达率均明显升高,差异有统计学意义(P均＜0.001);ACS患者中,AMI组与UA组比较,血小板聚集率、血小板P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa表达率均明显升高,差异有统计学意义(P均＜0.001).结论 随着ACS患者病情加重,血小板活化水平明显升高,聚集功能明显增强,血小板功能异常改变与急性冠脉综合征病情轻重有密切关系.     

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲ a基因突变与脑血栓的关系

血小板糖蛋白（GP）是一种存在于血小板质膜表面的糖蛋白，在血小板活化和血栓形成过程中起关键作用。血小板膜上存在多种糖蛋白，其中GPⅡh／Ⅲa属于整合素家族黏附受体，是血小板膜含量最多的糖蛋白。GPⅡb／Ⅲa是纤维蛋白原的受体，参与血小板的聚集。GPⅡh／Ⅲa受体的基因突变影响血小板表面受体表达的数量与质量，从而影响血小板聚集。因此，GPⅡh／Ⅲa基因的突变与脑血栓疾病的发生、发展密切相关。研究其基因突变及其与脑血栓的关系将为脑血栓的早期诊断和防治提供分子遗传学基础。     

ITP血小板特异性自身抗体（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）与糖皮质激素和静脉丙种球蛋白临床疗效的关系

目的检测特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者体内的抗血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）特异性自身抗体,并探讨特异性自身抗体与糖皮质激素和静脉丙种球蛋白（静丙）治疗的临床疗效是否存在针对性,以便得到更经济和个体化的治疗方案,为ITP提出新的分型依据。方法应用改良的单克隆抗体特异性俘获血小板抗原（MAIPA）法检测抗GPⅡb/ⅡIa,GPIbα特异性自身抗体。结果双抗体阳性组与单一抗GPIbα抗体阳性组总疗效比较,差异无显著性（χ^2=0.995,P〉0.05）双抗体阳性组与单一抗GPⅡb/ⅡIa抗体阳性组总疗效比较,差异有显著性（χ^2=17.439,P〈0.01）,后者优于前者;单一抗GPⅡb/ⅡIa抗体阳性组,双抗体阳性组,双抗体阴性组,糖皮质激素治疗与糖皮质激素联合静丙治疗比较,差异无显著性（P〉0.05）。结论血小板特异性自身抗体种类（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）及种类数目与ITP的临床疗效（糖皮质激素、静丙）有一定关系,对临床治疗方案的选择有一定意义。以抗血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）特异性自身抗体为ITP进行新的分型依据尚不足,需扩大样本量进一步研究。     

用单克隆抗体对ITP自身抗血小板抗体及其相关抗原的初步研究

本文应用三种抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体,按ELISA 间接法、ELISA双抗体夹心法、ELISA竞争法,对ITP患者自身抗血小板抗体及其相关抗原进行了初步研究。实验结果表明,抗血小板抗体的相关抗原呈多态性,包括:GPⅠb、GPⅡb及/或 GPⅢa,以 GPⅡb及/或 GPⅢa占多数,还可能包括血小板膜蛋白以外的其它抗原成分。这提示,ITP可能是一组复杂的、不均一的自身免疫性疾病。     

幽门螺杆菌ureB基因的克隆及序列分析

目的 对幽门螺杆菌（Hp)ureB核苷酸序列及推定氨基酸序列进行同源性比较分析,确定Hp菌株的ureB基因差异性,为疫苗的研究和诊断用品的评价提供依据。方法 自选设计引物,PCR扩增来自国内不同病人的4株Hp菌株的ureB基因,与pGEM-T载体克隆连接、测序;进一步同GenBank上发表的其他4株国外Hp菌株ureB的全基因序列进行比较分析。结果 8株Hp菌株的ureB基因序列出现了33种长度,CAPMF3和CPM630分别为1269bp和1680bp,其他为1710bp。6株1710bp的ureB基因序列的分析表明,国外3株Hp的ureB同源性较高,三者氨基酸的同源性达到100％。国内3株Hp的ureB变异较大,推定氨基酸同源性为98．7％－98．9％。结论 UreB作为保护性同时存在免疫保护覆盖率问题,研究疫苗和诊断用品时要注意选择使用在人群中流行占优势的Hp菌株的高度保守的UreB抗原肽,使其具有更高的覆盖率。     

幽门螺杆菌UreB抗原表位预测及其有效表位噬菌体展示的筛选

目的 筛选幽门螺杆菌（Hp）尿素酶B亚单位（UreB）分子中的抗原表位，为研制多抗原肽（MAP）疫苗奠定基础。方法 采用生物信息学技术对UreB的T细胞和B细胞表位进行预测和分析。构建ureB基因原核表达系统，Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rUreB，常规皮内免疫法制备兔抗血清。选择UreB主要T细胞和B细胞联合表位肽并构建其噬菌体展示系统，PEG／NaCl沉淀法提纯重组噬菌体，SDS-PAGE鉴定目的重组PⅢ蛋白（rPⅢ）。分别以商品化抗跏全菌IsG和rUreB抗血清为一抗，采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选。结果 与GenBank中相关序列比较，所克隆的ureB基因核苷酸和氨基酸相似性分别为96％～99．5％和96％～100％。rUreB表达量约为细菌总蛋白的52％，提纯后仅见单一蛋白条带。预测的4个主要表位肽UreB230、UreB322、UreB479和UreB527在M13噬菌体中获得成功表达，采用不同一抗的Westernblot均显示相似的阳性结果，但UreB322和UreB527反应强度明显高于UreB230和UreB479。结论 本研究成功地构建ureB基因高效原核表达系统和UreB主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统。所采用的生物信息学技术可有效地预测抗原表位。UreB322和UreB527是UreB有效抗原表位，可作为幽门螺杆菌MAP疫苗的候选表位。     

Relationship between the audiogram and the duration of the tone measuring the threshold

Summary In addition to the data on intensity-duration curves of the threshold tones, the threshold audiograms are constructed for the different durations of the threshold measuring tone. The durations 0.5; 2; 5; 20; 100 and 850 msec and frequencies 200, 500, 1000, 2000, 3000, and 5000 cps were used. Even when the duration of the testing tone is so short that this tone becomes a noise, the pattern of an audiogram in cases of normal hearing has some resemblance to the typical audiogram. But the great remoteness of the point for 1000 cps from the minimum zone draws attention. As the duration of the testing becomes longer, the audiogram of a person with normal hearing is gradually transforrned from a V-shaped curve with a sharp minimum into a typical curve with an elongated minimum zone, and the point for 1000 cps shifts from the left ascending branch of the audiogram to the center of the minimum zone. Several audiograms are obtained for 2 patients with a partial hearing loss, resulting from growing age, and 1 patient with a severe hearing loss of traumatic origin. Peculiar changes in these audiogram could be clearly seen at the least durations of the testing tone used. The diminishing of absolute threshold, when the tone duration is prolonged from 100 to 850 msec, is less for the listeners with impaired hearing.(Presented by Academician V. N. Chernigovskii) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 54, No. 10, pp. 21–26, October 1962.