黄芪多糖抑制HepG2细胞增殖及可能机制研究

目的 研究黄芪多糖对HepG2细胞增殖的作用及可能机制。 方法 用不同浓度(100、200和400 μg/ml)的黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞增殖,采用Western blot检测细胞内糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)的表达。 结果 APS100组、APS200组及APS400组HepG2细胞第1~7 d吸光度和GSK3β蛋白质表达均显著低于对照组(P<0.05);APS100组和APS400组HepG2细胞D1~D7吸光度和GSK3β蛋白质表达差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于APS200组(P<0.05)。 结论 黄芪多糖可显著抑制HepG2细胞增殖,其机制可能与抑制糖原合成酶激酶3β表达有关,其中200 μg/ml抑制作用最强。     

黄芪多糖对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制作用的研究

[目的]研究黄芪多糖(APS)对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响。[方法]设不同浓度APS(12.5,25.0,50.0,100.0μg/ml)、二甲基亚砜2‰为空白对照组,顺铂2μg/ml为顺铂组。应用MTT法检测APS对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖抑制作用。[结果]与空白对照组比较,不同浓度的APS组在12、24、48、72h作用时吸光度均表现为上升的趋势,在48h时达到最大值,随后下降。不同浓度的APS组经不同的作用时间后,其吸光度与空白对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)。与顺铂组比较,12.5、25.0μg/mlAPS作用鼻咽癌CNE-2细胞12h时细胞的增殖没有明显的抑制作用(P﹥0.05),但作用24、48、72h时对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖有明显的抑制作用(P﹤0.05);50.0、100.0μg/mlAPS在不同的作用时间对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖均有明显的抑制作用(P﹤0.05)。[结论]APS可以明显地抑制鼻咽癌CEN-2细胞的生长,且存在剂量-时间的关系。     

黄芪多糖对高效氯氰菊酯致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究黄芪多糖(APS)对高效氯氰菊酯(β-CP)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将50只雄性ICR小鼠随机分为5组:对照组(玉米油)、染毒组(β-CP 40mg/kg)及不同剂量的保护组(在β-CP40mg/kg基础上分别加上100、200和300mg/kg APS),连续灌胃染毒10d。测定肝脏组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力及丙二醛(MDA)的含量。结果与对照组比较,β-CP染毒组SOD和CAT活力均有所降低,MDA含量有所升高,差异均有统计学意义(P0.01);与染毒组比较,各剂量保护组SOD、CAT活力有所升高,MDA含量有所降低,其中,各剂量保护组SOD活力、MDA含量以及200mg/kg剂量保护组CAT活力与染毒组比较,差异均有统计学意义(P0.01);各剂量保护组之间比较,结果显示200mg/kg剂量保护组的SOD和CAT活力接近对照组水平,MDA含量也相对较低。结论40mg/kg剂量β-CP能引起小鼠急性肝损伤,APS对β-CP引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用,且200mg/kg剂量APS的保护作用较为明显。     

黄芪多糖通过PI3K/Akt途径抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡的机制研究

目的探讨黄芪多糖对小鼠胰岛βTC-6细胞中PI3K/Akt信号通路和棕榈酸诱导的细胞凋亡的影响及其机制。方法Western blotting检测黄芪多糖对βTC-6细胞中Akt磷酸化的影响;将βTC-6细胞随机分为对照组(不做任何处理)、PA组(给予0.5 mmol/L棕榈酸处理24 h)、PA+APS组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸和0.1 g/L黄芪多糖作用24 h)和PA+APS+LY组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸、0.1 g/L黄芪多糖和50μmol/L LY294002作用24 h),MTT法检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果黄芪多糖能够呈剂量-时间依赖性诱导βTC-6细胞中Akt磷酸化。与对照组相比,PA组、PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05);与PA组相比,PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05);且PA+APS+LY组的变化幅度明显低于PA+APS组。结论黄芪多糖可通过激活PI3K/Akt信号通路,上调GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和下调Bax表达,进而抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡。[营养学报,2019,41(3):265-269]     

LAK细胞和HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用

[目的]对LAK细胞和HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用进行研究分析。[方法]分别将不同比例的LAK细胞和AO细胞混合培养6h(4︰1,20︰1,100︰1,500︰1),采用LDH释放法测定LAK的杀伤活性;HSV1-TKc+及HSV1-TKc-AO细胞按照不同比例培养60h(15︰85,35︰65,50︰50,75︰25,65︰35,85︰15),后更换15μg/ml GCV培养液,6d后采用LDH释放法测定其杀伤活性。对两组实验的效靶比与杀伤活性进行相关性检验,比较两组的杀伤活性。[结果]LAK细胞与靶细胞的比值与杀伤活性呈线性相关性(r=0.996,P﹤0.01),其杀伤活性随着效靶比的增大而增加;AO/HSV1-TKc+与AO/HSV1-TKc-的细胞比例与HSV1-TKc/GCV的杀伤活性成线性相关(r=0.984,P﹤0.01),其杀伤活性随着比例的增大而增加,LAK与HSV1-TKc/GCV两组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]LAK细胞与HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外具有一定的杀伤作用,但两者比较差异无统计学意义。     

冬虫夏草口服液对亚健康疲劳的影响

目的研究冬虫夏草口服液(Cordyceps Sinensis Oral Liquid,CSOL)抗亚健康疲劳的作用及其耐缺氧的作用机制。方法 24只SD大鼠随机分为三组:对照组、模型组、CSOL组。CSOL组大鼠每天灌胃给予CSOL 1.8 ml/kg。模型组和CSOL组大鼠连续睡眠剥夺5 d后,观察各组大鼠力竭游泳时间。SH-SY5Y细胞通过Co Cl2作用24 h诱导化学缺氧模型,观察CSOL(0,0.1,0.3,1.0 mg/ml)对细胞活力的影响。结果 CSOL组大鼠力竭游泳时间(12.4±1.8)min相比模型组(7.6±0.7)min显著性延长(t=-7.003,P<0.01)。SH-SY5Y细胞经Co Cl2作用24 h致化学缺氧后IC50≈600μM。与对照组细胞相比,CSOL各剂量组(0.1,0.3,1.0 mg/ml)细胞在化学缺氧后细胞活力显著增强,差异具有统计学意义(F=233.97,P<0.01)。结论 CSOL具有明显的抗亚健康疲劳的作用,这种作用可能是通过耐缺氧机制实现的。     

几丁聚糖对氯化镉诱导HepG2细胞产生ROS水平的影响

目的研究不同浓度几丁聚糖对氯化镉诱导HepG2细胞产生活性氧(ROS)的清除作用。方法实验分设6组:正常对照组(仅含10%新生牛血清的培养液,无氯化镉和几丁聚糖)、20μmol/L氯化镉组、0.50mg/ml几丁聚糖组、20μmol/L氯化镉+几丁聚糖三个联合作用组(浓度分别为0.02、0.10和0.50mg/ml)。HepG2细胞处理时间为4h。以氯化镉诱导HepG2细胞产生ROS,运用DCFH-DA作为荧光探针,采用流式细胞检测技术检测几丁聚糖与氯化镉联合作用下HepG2细胞内ROS水平。结果20μmol/L氯化镉可使HepG2细胞内ROS水平显著增加(P<0.01);0.50mg/ml几丁聚糖处理HepG2细胞后,细胞内ROS水平较正常对照组略有降低,但并无显著性差异;与氯化镉染毒组相比,几丁聚糖和氯化镉联合作用组细胞内ROS水平随几丁聚糖浓度的增加,其DCF密度值由275.593逐渐降低到174.597,并且在中、高剂量几丁聚糖(0.1mg/ml和0.5mg/ml)和氯化镉联合作用组差异有极显著性(P<0.01)。结论几丁聚糖对HepG2细胞内由氯化镉诱导而产生的ROS水平具有明确的调节作用。     

纳豆菌糖肽对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用

目的探讨纳豆菌糖肽(Bacillus natto glycopeptide,BNGP)对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法KM小鼠80只随机分成BNGP低、中、高(6.25、12.5、25 mg/ml)剂量、空白、模型、5组。试验组连续灌胃BNGP 30 d,空白组与模型组以等量生理盐水代替,除空白对照组外,其余各级于24,25,26 d按80 mg/(kg·bw)腹腔注射环磷酰胺(CTX)。灌胃结束后,测定小鼠脾脏、胸腺指数,血清溶血素水平,脾细胞转化能力,细胞因子分泌以及体外脾细胞增殖作用的测定,研究BNGP对免疫低下小鼠体外免疫活性的影响。结果 BNGP中、高剂量组小鼠脾脏指数、HC50均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01),高剂量组胸腺指数显著高于模型组(P<0.05);低、中、高剂量组ConA诱导的脾细胞增殖活性均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01);中、高剂量组IL-2水平、高剂量组IFN-γ水平显著高于模型组(均P<0.05),而IL-10水平显著低于模型组(P<0.05,P<0.01);100²00μg/ml BNGP-1-b和12.5200μg/ml BNGP-1-b和12.5²00μg/ml BNGP-2-a可显著增强体外脾淋巴细胞增殖活性(P<0.05,P<0.01),50μg/ml BNGP-1-b和50200μg/ml BNGP-2-a可显著增强体外脾淋巴细胞增殖活性(P<0.05,P<0.01),50μg/ml BNGP-1-b和50²00μg/ml BNGP-2-a对ConA诱导的体外脾淋巴细胞增殖活性也具有显著增强作用(P<0.05,P<0.01)。结论 BNGP具有增强免疫功能低下小鼠体液和细胞免疫的作用。     

微囊藻毒素与饮用水有机提取物联合致HepG_2细胞DNA损伤的研究

目的探讨微囊藻毒素(MC-LR)与管网末梢水有机提取物联合致HepG2细胞DNA损伤的作用。方法于2007年7月采集某市的管网末梢水,分别选用XAD-2、XAD-8大孔吸附树脂以及两者等体积配制的复合树脂(简称XAD-2/8)富集为100、10和30ml/ml的有机物。应用彗星试验,研究MC-LR与管网末梢水有机提取物联合致HepG2细胞(1×105个/孔)DNA损伤的作用。结果与溶剂对照组相比,0.5μg/mlMC-LR染毒组可使HepG2细胞Olive尾矩值显著增加(P0.01)。较高浓度(0.1、0.5μg/ml)MC-LR与经XAD-2树脂富集的有机物(100ml/ml)联合染毒时,所诱导的HepG2细胞Olive尾矩值较之相应的单独作用组显著增加(P0.01);0.05、0.1、0.5μg/mlMC-LR与经XAD-8树脂富集的有机物(10ml/ml)联合染毒时,所诱导的HepG2细胞Olive尾矩值较之相应的单独作用组显著增加(P0.01);较高浓度(0.1、0.5μg/ml)MC-LR与经XAD-2/8树脂富集的有机物(30ml/ml)联合染毒时,所诱导的HepG2细胞Olive尾矩值较之相应的单独作用组显著增加(P0.01)。运用析因分析统计学方法,发现MC-LR与3种树脂富集的饮用水有机提取物存在交互作用(P0.01)。结论饮用水有机提取物与MC-LR之间存在协同作用,MC-LR可以极大地增强饮用水中有机物的致DNA损伤作用。     

过氯酸铵对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞影响的研究

目的通过探讨过氯酸铵(AP)对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)损伤及对肺成纤维细胞(FB)增殖的影响,研究AP的致肺纤维化作用。方法用AP浓度分别为0.5,1.0,2.0 mg/ml和SiO2浓度为0.1 mg/ml 的培养液培养AM,对照组采用RPMI1640培养液培养,24 h 后收集培养上清液,分别检测AM内MDA含量、GSH-Px活力以及上清液中LDH活力。并用AM上清液培养FB,检测FB增殖活力和FB内羟脯氨酸含量.结果 1.0,2.0 mg/ml AP组及SiO2组MDA含量(2.21,2.58,2.32 nmol/ml)均比对照组(1.97 nmol/ml)增加,差异有显著性或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 2.0 mg/ml AP组及SiO2组GSH-Px活力(29.47,30.79 U/106 AM)比对照组(26.70 U/106 AM)明显增强,差异有显著或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 0.5,1.0,2.0 mg/ml AP组和SiO2组LDH活力(151.03,252.31,446.50,583.88U/106 AM)均明显高于对照组(77.06U/106 AM,P＜0.05或P＜0.01), 且随AP染毒剂量的增加而升高。SiO2组AM上清液使FB羟脯氨酸含量(0.900 μg/ml)及增殖活力(0.165)明显高于对照组(0.379 μg/ml,0.138,P＜0.05或P＜0.01)。结论 AP对肺泡巨噬细胞具有一定的细胞毒作用,而AP染毒的AM上清液未发现有促进FB的增殖和胶原合成的作用。     

IL—2激活肿瘤患者外周血单个核细胞特性的研究

本实验按常规方法制备了肿瘤患者外周血单个核细胞,用重组白细胞介素Ⅱ(Recombin-ant Interleukin-2r-IL-2)激活。体外检测证明此细胞对体外培养的NK敏感及不敏感的肿瘤细胞均有一定的细胞毒作用,并有一过性的增殖特性。     

抗精神病药与高催乳素血症及月经紊乱

抗精神病药(APS)可被分为典型APS和非典型APS。高催乳素血症(HPRL)表现为外周血循环中催乳素水平异常增高。所有典型APS与非典型APS中的利培酮，均可导致女性精神疾病患者血清催乳素水平较正常值显著升高。多数非典型APS仅导致血清催乳素水平短暂、轻微增高，甚至对血清催乳素水平无影响。APS所致HPRL是导致女性精神疾病患者月经紊乱，甚至闭经的主要原因之一。目前针对APS所致HPRL及月经紊乱、闭经治疗的主要措施为降低催乳素水平。不同APS所致HPRL及月经紊乱发生率不同，临床准确评估和管理HPRL，可提高女性精神疾病患者的生活质量及治疗依从性。笔者拟就APS治疗女性精神疾病患者时导致的HPRL与月经紊乱不良反应的处理进行阐述，以期为临床降低该类患者的不良反应提供参考。     

11例妊娠合并抗磷脂综合征孕妇的52次妊娠结局分析

目的:分析妊娠合并抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)与各妊娠并发症及新生儿出生体重、Ap-gar评分和抗体滴度与妊娠结局的关系。方法:回顾性分析温州医学院附属第一医院2005年6月～2011年3月的11例妊娠合并抗磷脂综合征妇女的52次妊娠过程,并与随机抽取的26例非抗磷脂抗体综合征妇女的妊娠情况进行对比。结果:抗体滴度高的APS妇女的早产率明显高于抗体滴度低的APS妇女。APS组孕妇的流产率明显高于非APS组,妊娠并发症如妊娠期高血压疾病、前置胎盘、妊娠合并肝内胆汁淤积等的发病率没有显著高于非APS组,但是胎膜早破的发生率明显增高。APS组孕妇分娩的新生儿出生体重明显低于非APS组。结论:APS易导致孕妇早产及新生儿出生体重降低,危害母儿健康,故及时、合理地诊断与治疗非常重要,尤其是在抗体滴度高的APS孕妇。     

Clinical experiences of LAK therapy in patients with hepatocellular carcinoma

A patient with hepatocellular carcinoma (HCC) was treated with newly established adoptive immunotherapy using LAK cells (LAK therapy) together with transcatheter arterial embolization therapy (TAE). This patient responded well, and the therapeutic efficacy still continues 6 months after the therapy. Since the efficacy of LAK therapy does not last long, it is recommended that LAK therapy should be employed in combination with such therapeutic maneuvers as TAE or anticancer drugs in patients with HCC.     

黄芪多糖对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎的作用

目的探讨黄芪多糖（APS）对2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠炎的作用。方法40只雄性sD大鼠随机分为5组（n=8）：对照组、TNBS组、小剂量APS组、大剂量APS组、激素组。对照组给予生理盐水灌肠,其余4组大鼠均以TNBS灌肠造模。灌肠24h后,APS组开始每天给予90％APS（小剂量组0．5g·kg-1·d-1;大剂量组1mg·kg-1·d-1）、激素组给予泼尼松1mg·kg-1·d-1灌胃治疗14d。给药结束后处死动物取结肠,观察肠道大体损伤及病理标本炎症情况,并测定肠道髓过氧化物酶（MPO）活性及细胞因子白细胞介素（IL）-4和IL-10水平。结果小剂量APS组较TNBS组结肠大体损伤及病理评分下降,MPO活性显著降低（P=0．03）;IL-4、IL-10水平升高,但与TNBS组相比差异无统计学意义。大剂量APS组较TNBS组大体损伤评分及MPO活性升高,病理评分及IL-4水平降低,IL-10略有升高,但差异无统计学意义。激素组大体损伤、病理评分以及MPO活性均较TNBS组下降,但差异无统计学意义;其IL-4、IL-10水平较TNBS组进一步下降,与对照组相比差异有统计学意义（P=0．049,P=0．001）。结论小剂量APS可缓解TNBS诱导的大鼠结肠炎,但效果不明显;而大剂量APS则轻度加重大鼠结肠炎。     

Cigarette smoking is associated with the reduction of lymphokine-activated killer cell and natural killer cell activities

Lymphokine-activated killer (LAK) cell and natural killer (NK) cell activities were determined in a group of healthy individuals with differing smoking habits. The study population consisted of 54 Japanese males, including 23 smokers, 8 ex-smokers and 23 non-smokers. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated and used as effector cells. LAK cells were generated by incubation of PBMC with interleukin-2 for 72 h. LAK cell activity against NK-resistant Raji cells and NK cell activity against NK-sensitive K562 cells were examined by 4-h51Cr-release assay. LAK cell activity in the smokers was significantly lower than that in the nonsmokers. The smokers showed significantly lower NK cell activity than the nonsmokers, whereas NK cell activity of the ex-smokers was comparable to that of the non-smokers. The proportion of NK cells (CD3-16+56-, CD3-16-56+, or CD3-16+56+ cells) in the smokers was significantly lower than that in the nonsmokers. The present study demonstrates for the first time that cigarette smokers have lower LAK cell activity than nonsmokers.     

Glutamine requirements in the generation of lymphokine-activated killer cells

The role of glutamine (GLN) in the generation of lymphokine-activated killer (LAK) cell activity was investigated. LAK cells were derived from healthy donors and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained using either unseparated PMBC or DR(-) CD3(-) CD16(+) CD56(+) enriched cells. PBMC were cultured for 6 or 10 days in medium supplemented with recombinant interleukin-2 (rlL-2; 100 U/ml) in the presence of different concentrations of GLN. K562 (natural killer-NK-sensitive targets), 1301 and U-937 (NK-resistant targets) cells were used as targets in the cytotoxic assays. Furthermore, the limiting dilution (LD) culture system was applied as an alternative to the bulk cell culture system. It was found that GLN affects the lytic potential of cultured cells while the frequency of responding cells did not significantly differ between the compared cell cultures performed in the presence of different amounts of GLN. Data on cell proliferation with IL-2 stimulation showed significant differences in cultures performed in the presence or absence of GLN. The results of present investigation suggest a supportive role of GLN in the generation of LAK cells. GLN deficit affects LAK cell killing activity by limiting the number of generated effector cells while acquisition of broad-range killing capacity was not affected.     

IL—2激活的正常人PBL裸鼠体内抗肿瘤作用的研究

给裸鼠尾静脉注射Anip973人肺腺癌细胞造成人工肺转移癌模型。应用IL-2激活的PBL细胞进行体外扩增,诱导出具有杀伤活性的淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞),对裸鼠体内抗肿瘤作用进行研究。结果表明注入新鲜淋巴细胞组和单纯注入IL-2组均不能明显抑制肿癌的肺转移,单纯注入LAK细胞组可抑制肿瘤的肺转移,LAK细胞与IL-2同时注射时抑制肺癌转移率比LAK细胞组明显提高。病理检查证实了经LAK细胞和IL-2同时治疗的裸鼠,肺转移癌结节明显减少。LAK细胞与rIL-2伍用亦可显著延长荷瘤裸鼠的生存期。     

低剂量辐射对脐血LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响

目的 探讨低剂量辐射对脐血LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响。方法 新鲜分离的脐血单个核细胞用重组白细胞介素2培养72h获取LAK效应细胞,在培养48h时给予1次不同剂量（分别为62mGy,124mGy,186mGy,248mGy）的γ射线照射,应用^3H－TdR释放实验测定LAK体外杀伤肿瘤靶细胞（K562,HL－60）活性。结果 脐血LAK细胞对K562和HL－60的杀伤活性与成人外周血相比差异无显著性（P＞0．05）。接受低剂量辐射的脐血LAK细胞K562和HL－60的细胞毒性显著高于非照射对照组（P＜0．01）。结论 脐血可作为LAK细胞的一个良好来源。低剂量辐射可增强脐血LAK杀伤肿瘤细胞的细胞毒性,从而可能用于清除微小残留病变及在脐血移植时增强移植物抗白血病效应。