实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对肺结核诊断价值的研究

目的 检测实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对结核病诊断的作用。 方法 收集172例疑似肺结核患者的痰液标本2份/例,1份进行涂涂片金-胺染色,另一份进行罗氏培养基培养与菌种鉴定及SAT法检测结核分枝杆菌,如SAT法和培养结果不符合则使用痰荧光定量PCR法（FQ-PCR)进行复核。 结果 172例入组患者中有156例根据临床及实验室结果确诊为肺结核病。如果以Mtb培养鉴定结果和荧光PCR结果作为判定金标准,SAT检测的敏感度和特异度分别为97.8%（89/91）和97.5%（79/81）。如以临床诊断为标准,SAT诊断结核的敏感度为58.3%（91/156）,特异度为100.0％（16/16）。对于痰菌阳性肺结核患者,SAT 阳性率为84.9%（79/93）;对于痰菌阴性患者,SAT的阳性率为19.0%（12/63）。 结论 SAT法可以作为临床对结核病的辅助诊断方法。     

分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用

目的探讨分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的应用价值。方法采集2010年3—7月间在彭州市CDC结核病防治所门诊就诊患者的痰标本382份,其中初诊疑似肺结核患者的痰标本305份,肺结核患者随访痰标本77份,用分子信标荧光定量PCR法和抗酸染色法检测Mtb。结果382份痰标本抗酸染色法、分子信标荧光定量PCR法检测总阳性率分别为12.6%(48/382)、42.4%(162/382),分子信标荧光定量PCR法阳性率显著高于抗酸染色法,差异有统计学意义(χ2=74.5,P<0.001)。结论分子信标荧光定量PCR较抗酸染色法具有更高的灵敏度,不仅提高了肺结核早期诊断的检出率,还能间接反映药物疗效,在肺结核防治工作中具有重要意义。     

实时荧光PCR技术在不同类型结核病诊断中的应用价值

目的 分析比较实时荧光PCR与涂片镜检、培养三种方法在结核杆菌检测的差异.方法 对我院疑似结核病患者的临床标本同时进行实时荧光PCR检测、涂片镜检和培养,将三组检测结果进行比较.结果 215例疑似肺结核患者痰标本同时采用实时荧光PCR、涂片镜检和培养三种方法检测,阳性检出率分别为46.5％、32.6％和44.7％.实时荧光PCR法与涂片镜检法的阳性率间比较有统计学意义,实时荧光PCR法与培养法的阳性率同比较无统计学意义.112例疑似其他类型结核病患者的胸腹水、脑脊液、穿刺液和尿液等非痰标本同时采用上述三种方法检测,阳性率分别为18.8％、3.6％和16.1％.统计学意义同上.结论 实时荧光PCR检测技术在临床上对结核病的诊断和鉴别具有较好的应用价值.     

支气管肺泡灌洗液GeneXpert-MTB/RIF检测在活动性肺结核诊断中的效能

目的探讨支气管肺泡灌洗液Xpert-MTB/RIF检测对肺结核早期诊断的价值。方法选择2017年9月～2018年9月在苏州大学附属传染病医院肺科住院,临床诊断肺结核患者共158例,分别对其支气管肺泡灌洗液及痰标本行GeneXpert-MTB/RIF法(简称"Xpert法")检测,同时对其支气管肺泡灌洗液行涂片抗酸染色镜检、MGIT 960培养、荧光定量PCR,并对Xpert法检测法结果进行分析。结果 Xpert法检测支气管肺泡灌洗液阳性率明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液培养阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05)。Xpert法检测阳性率明显高于PCR检测结核分枝杆菌DNA,差异有统计学意义(P0.05);上述四项联合检测阳性率明显高于Xpert法、结核培养等,差异有统计学意义(P0.05)。而Xpert法检测阳性率与痰培养阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。以支气管肺泡灌洗液结核培养为金标准,Xpert法检测敏感度78.75%,特异度为65.38%。支气管镜BALF Xpert法检测阳性率57.0%,痰Xpert法检测阳性率32.3%,支气管肺泡灌洗液Xpert法检测阳性率明显高于痰标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗液Xpert法检测相比痰检及其他传统检测方法快捷、安全、高敏感性,能很大程度提高结核病及耐药结核的早期诊断率,有极大的临床应用前景。     

荧光定量PCR在肺结核临床诊断及疗效评估中的应用

目的 建立荧光定量PCR检测结核分枝杆菌方法,评估其在肺结核的临床诊断和疗效评估中的应用价值.方法 针对结核分枝杆菌保守序列IS6110基因设计引物和探针,建立荧光定量PCR方法.分别以荧光定量PCR、集菌培养和染色镜检法检测疑似肺结核和确诊肺结核患者随访的痰标本,比较各方法在结核病诊断以及治疗效果评估中的作用.结果 荧光定量PCR的检测灵敏度为4 Copies/反应,远高于抗酸染色法和集菌培养法.荧光定量PCR法与集菌培养法和抗酸染色法对临床样本的检出率分别为64.29％、35.12％和12.5％.患者治疗效果的随访检测结果显示,结核分枝杆菌的数量呈持续减少的趋势.结论 荧光定量PCR方法具有快速、敏感和特异性高的特点,可以快速、及时获取肺结核患者服药后的治疗效果,为医生的后续督导治疗提供依据,具有重要的临床意义.     

结核感染T细胞斑点试验、Xpert Mtb/RIF检测技术在老年肺结核中的诊断价值

目的评价结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT)、结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)在老年肺结核中的诊断价值。方法纳入2016年9月至2016年12月在广州市胸科医院住院的老年可疑肺结核患者81例。采集痰标本同时送检抗酸染色涂片、金标准培养并行金标准比例法传统药敏试验、荧光定量PCR和Xpert Mtb/RIF检测,并抽血送检血T-SPOT。以临床最终诊断结果为金标准,分析各种方法诊断老年肺结核的敏感度、特异度。结果 81例老年可疑肺结核患者中,最终诊断肺结核患者44例,非结核肺病患者37例。以临床最终诊断结果为金标准~([10]),血T-SPOT、痰Xpert MTB/RIF、痰荧光定量PCR、痰涂片和痰培养诊断老年肺结核的灵敏度分别为93. 18%、45. 45%、42. 22%、22. 73%和50. 00%;特异度分别为63. 89%、100%、94. 59%、83. 78%和81. 08%。结论血T-SPOT在诊断老年肺结核中有较高的灵敏度,但特异度稍差;痰Xpret MTB/RIF较痰涂片灵敏度提高,特异度达100%。     

抗酸染色全自动显微扫描识别系统的临床应用评价

目的 评价抗酸染色全自动显微扫描系统(AFB-AS)检测肺结核患者痰液标本应用价值。方法 搜集2019年1月至8月于北京结核病控制研究所确诊的462例肺结核患者作为研究对象,每例患者留取3份初诊痰液标本,共计1386份。所有标本均完成萋-尼抗酸染色,采用双盲法使用传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检查;每例患者选取2份痰液标本进行分枝杆菌分离培养,共计完成924份;其中1份同时进行GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测,共计完成462份。比较不同方法检测肺结核患者痰标本结果;以分枝杆菌分离培养结果为参照,分析传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检测肺结核患者痰标本的效能;分析传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检测均为阳性结果的等级相关性。结果 各方法检测肺结核患者痰标本阳性率从高到低依次为Xpert(69.26%,320/462)、分枝杆菌分离培养(43.61%,403/924)、AFB-AS(43.22%,599/1386)、传统抗酸杆菌染色镜检(38.24%,530/1386)。AFB-AS检测痰标本阳性率明显高于传统抗酸杆菌染色镜检,差异有统计学意义(χ²=67.015,P<0.01)。AFB-AS与传统抗酸杆菌染色镜检判读阳性结果等级的相关系数为0.954。以分枝杆菌分离培养结果为参照,AFB-AS检查肺结核患者痰标本敏感度为94.29%(380/403)、特异度为90.40%(471/521)、阳性预测值为88.37%(380/430)、阴性预测值为95.34%(471/494),Kappa值为0.841。结论 AFB-AS检测肺结核患者痰液标本具有较好的应用价值,检验性能能够满足实施萋-尼抗酸染色查找抗酸杆菌项目的要求。     

肺结核病的快速实验室诊断

检出痰中含有结核杆菌是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的重要依据。痰中结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）的检测方法常规采用痰涂片及痰培养。涂片虽简单易行，但阳性率低，培养虽为金标准，但周期太长，均难以满足临床需要。近年来，作为直接检测分枝杆菌、种系鉴定和药敏试验的许多分子学方法得到长足发展，这些方法能将诊断时间从几周大大缩短到几天、几小时。其中，实时动态荧光定量PCR（FQ-PCR）因其技术成熟具有较高的灵敏度和特异性，已逐渐应用于临床。为明确使用FQ—PCR技术检测患者痰液、血液标本时在诊断肺结核病中的意义，我们对102例肺结核患者的痰和外周血标本进行MBDNA检测．其结果报道如下。     

噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值比较

目的比较噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值。方法对168份临床诊断为肺结核患者的痰标本同时应用噬菌体裂解法和涂片法检测,对照分析结果。结果168份痰标本,噬菌体裂解法检出阳性率58.9%(99/168),显著高于涂片法萋-奈氏染色的38.1%(64/168)及金胺0染色的41.1%(69/168),(P<0.01),噬菌体裂解法对涂片阴性的标本的检出率高达39.4%(39/99)。结论噬菌体裂解法与涂片法相比,具有较高的敏感性和特异性,是一种崭新的结核分支杆菌快速快速检测方法。     

实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价

目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果。 方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的粪便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例粪便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较。 结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68%(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率［23.68%(18/76)］明显高于涂片阳性率［6.58%(5/76)］,41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例)。 结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法。     

荧光PCR诊断肺结核的临床应用研究

目的对荧光PCR(FQ-PCR)、痰涂片、结核抗体血清学试验及痰培养在肺结核诊断上进行方法学评价。方法 FQ-PCR、痰涂片及痰培养四种方法对结核组(124例)及非结核组(119例)进行检测,对四种方法进行方法学评价。结果结核组中荧光PCR、痰涂片、痰培养、血清学试验四种方法检出率分别为58.9%、30.6%、47.5%及66.1%,差异有统计学意义(P0.01),其中以血清学试验及荧光PCR检出率较高;在非结核组中,荧光PCR、痰涂片、痰培养三种方法均未检测出阳性结果,血清学试验检测出12例阳性;四种方法的方法学评价:灵敏度、约登指数、符合率、阴性预测值以荧光PCR、血清学试验较高,特异度、阳性预测值荧光PCR、痰涂片、痰培养均为100%,综合各项指标以荧光PCR方法较好。结论荧光PCR具有较高的灵敏度、特异度,快速、简单,在肺结核的诊断上具有较大的优势,适合在临床推广应用。     

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR（QNRT-PCR）检测结核分枝杆菌（MTB）DNA的临床价值。方法应用SYBR Green I建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT—PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTBDNA含量。结果以培养为金标准,QNRT—PCR敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为95．83％、61．54％、69．70％和94．12％,结核性胸膜炎的阳性率为70．37％。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义（P〉0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论QNRT—PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。     

显微镜观察药物敏感性技术检测结核分枝杆菌应用效果观察

目的 探讨显微镜观察药物敏感性检测（MODS）方法用于结核分枝杆菌（MTB）分离培养和耐药检测的应用效果.方法 收集276份肺结核临床疑似患者的痰标本,用MGIT 960 TB、罗氏法、MODS法检测MTB.用MODS法对80株MTB临床分离株进行药敏检测,并将结果与传统罗氏法进行比较.结果 MODS技术直接检测痰标本的阳性率为46％,阳性检出时间中位数为9 d（7～12 d）.MODS检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与传统罗氏法符合率分别为95.0％、96.25％、97.5％、85.0％,检测敏感度分别为83.3％、95.65％、96.15％、70.83％,特异度分别为98.3％、96.50％、98.15％、91.07％.结论 MODS方法是一种快速简便、费用低、准确的诊断和药敏检测方法,具有广泛的应用前景.     

结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值

目的 评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值。 方法 应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较。 结果 结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%（其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%）,特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%。 结论 应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测。该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点。可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一。     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分 …

探讨外周血单个核细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ检测在肺结核诊断中的价值。方法采用改良Ｔｒｉｔｏｎ－ｘ－１００法分离，制备单个核细胞中模板，ＤＮＡ，聚合酶链反应扩增结核分支杆菌２４０ｂｐ基因片段，同时分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素。结果８９例肺结核患者的血标本，８４例肺结核患者的痰标本中，结核分支杆菌ＤＮＡ阳性率分别为７３％和５７％；８４例肺结核患者外周血，痰标本配对检测总阳性率可达８７％。     

胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值

目的 评价胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体在结核病诊断中的应用价值。方法 收集结核病患者和健康人的血清样本共332份及其背景资料,采用胶体金法检测血清中特异性结核抗体IgG/IgM,与临床诊断和细菌学检测结果比较,使用SPSS 22.0统计软件对结果进行比较分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果 胶体金免疫层析法检测结核病患者中特异性结核抗体IgG/IgM的灵敏度为41.15%、特异性为91.67%,检测菌阳和菌阴结核病患者的敏感性分别为51.38%和33.77%。在全部结核病患者中,特异性结核抗体IgG/IgM检测检出率(41.15%)显著高于痰涂片法(18.84%)和痰菌培养法(36.15%)(P<0.05)。结核抗体检测、痰涂片法和痰培养法三种方法联合检测阳性率为61.54%,高于单种方法检测或其中两种方法联合检测。结论 胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌抗体具有灵敏、特异、快速和简便等优点,可用于结核病的筛查,同时该方法也具有一定的局限性,敏感度和特异度有待进一步的提高,因此不可单独用于诊断结核病,可配合痰细菌学、影像学和临床表现等进行辅助诊断。     

荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA对涂阴肺结核的诊断价值

目的探讨纤支镜肺泡灌洗液中结核分枝杆菌DNA在涂阴肺结核诊断中的价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对300例涂阴肺结核,178例菌阳肺结核及119例肺炎或肺癌患者的纤支镜肺泡灌洗液标本进行结核分枝杆菌DNA检测。结果3种病因肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA阳性检出率分别为：74.3%（223/300）、94.9%（169/178）、17.6%（21/119）。结论荧光定量聚合酶链反应检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA,用于肺结核诊断可提高肺结核诊断的敏感性和准确性,明显优于痰抗酸染色,亦较痰结核菌培养诊断灵敏、快速,可作为肺结核诊断较可靠指标。     

Evaluation of culture and PCR-based assay for detection of Mycobacterium tuberculosis from sputum collected and stored on filter paper

We evaluated the use of culture and PCR-based assay for the direct detection of Mycobacterium tuberculosis (MTB) from sputum collected and stored on filter paper at room temperature for 5 days; the results were compared with those of staining and conventional culture of fresh sputum before storage (the 'gold standard'). Out of 231 sputum specimens examined, MTB was recovered from 124 samples by culture before storage. The culture positivity rate was significantly decreased to 70% after 5 days storage. For PCR assay, a fragment of 377 bp of the IS6110 sequence was amplified and detected using three methods: first PCR product combined with agarose gel electrophoresis (AGE); first PCR product with dot blot hybridization (DBH); nested PCR with AGE. Compared with culture, the sensitivity, specificity, and efficiency for first PCR with AGE were 71.8, 100 and 84.9% respectively; PCR with DBH gave results of 89.5, 96.3 and 92.6% respectively; the same values for nested PCR were 96.0, 97.2, and 96.5% respectively. Of these three methods, nested PCR gave excellent sensitivity and specificity with no significant difference (p = 0.727) from conventional culture. The storage of sputum on filter paper and storage at room temperature for 5 days had no apparent effect on the performance of nested PCR. We propose that this collection and storage method be considered for transporting sputum specimens from peripheral health centers or from the field; specimens may be sent by post to a central point for both culture and PCR analysis by trained technicians supervised in accordance with a well-established quality control system.     

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术诊断艾滋病患者肺结核的临床应用评价

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术诊断艾滋病患者肺结核的应用价值。方法:回顾性分析2017年7月至2019年11月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的226例疑似肺结核的艾滋病患者的临床资料。分别进行痰涂片荧光染色显微镜下检查、BACTEC MGIT 960液体培养(或罗氏固体培养)和Xpert MTB/RIF检测,并分析在艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断MTB感染和利福平耐药的灵敏度和特异度。结果:226例疑似肺结核患者中,痰培养阳性94例(41.6%),其中MTB阳性51例(54.3%),非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria,NTM)阳性43例(45.7%)。以痰分枝杆菌培养阳性且结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原阳性为金标准,Xpert MTB/RIF技术诊断MTB的灵敏度为72.6%[95%可信区间(confidence interval,CI)66.7%~78.4%],特异度为97.1%(95%CI 95.0%~99.3%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阳性患者MTB的灵敏度为76.7%(95%CI 67.7%~85.8%),特异度为90.0%(95%CI 83.6%~96.5%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阴性患者MTB的灵敏度为50.0%(95%CI 41.8%~58.2%),特异度为99.3%(95%CI 97.9%~100.0%)。18例患者同时检测利福平表型和基因型耐药,以表型耐药为金标准,Xpert MTB/RIF技术检测利福平基因型耐药的灵敏度为75.0%,特异度为100.0%。结论:艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断肺结核的灵敏度和特异度均较高,且能快速区分MTB和NTM,具有较好的应用价值。