8种不同检材提取DNA的结果分析

在对不同检材提取、扩增、检测DNA中，如何对样本快速、正确、高效地提取出高质量的DNA图谱结果是影响DNA检验质量和效率的关键。目前DNA提取的方法有多种，其中磁珠法与ehelex-100提取法在各实验室的DNA提取检测方法比较常见。通过反复比较各种检材DNA提取方法的易操作性和结果的稳定性，确立了以磁珠法提取DNA的方法为主，ehelex-100法为辅的一系列提取方法。通过对不同检材样本的分析，选择用不同方法提取DNA。针对样本的质地、质量、数量等原因的不同，选择不同方法提取DNA，对检验结果有实际指导意义，在最后分析阶段也有不同的效果。     

植物类药材基因组DNA提取与纯化的方法学研究

本文探讨了菊科9种植物和地胆草的4种对口商品药材基因组DNA提取与纯化的原理、方法，通过对3种常用植物基因组DNA提取方法（CsC1梯度超速离心法、CTAB／CsC1梯度超速离心法和DTAB微量提取法）的条件摸索，在DNA产率、纯度以及提取纯化过程中影响PCR扩增因子方面进行比较，认为CTAB微量提取法是植物类药材基因组DNA一种比较省时、有效、经济的提取方法。     

从极少量人血凝块中快速提取基因组DNA的方法

目的建立从极少量血凝块中快速提取基因组DNA的方法,并对其应用价值进行评价。方法分别对TIANamp基因组DNA提取试剂盒和TaKaRa全能基因组DNA提取试剂盒进行方法改良,并提取DNA,比较2种方法提取DNA的含量和纯度;并用人P450酶系的CYP3A4＊4引物对提取的DNA进行PER扩增,检测生物活性。结果用TaKaRa全能基因组DNA提取试剂盒提取的DNA在含量、纯度和生物活性上均优于用TIANamp基因组DNA提取试剂盒提取的DNA。结论应用TaKaRa全能基因组DNA提取试剂盒可以对极少量的血凝块进行基因组DNA提取,方法简便快速,在分子生物学研究中有重要的实际意义和推广价值。     

川芎DNA提取方法的研究

目的 以伞形科蒿本属植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.叶为材料,研究川芎DNA的提取方法 .方法 分别采取CTAB法、高盐低pH法、木本植物DNA提取法、改良高盐低pH法提取基因组DNA,并对4种方法进行了改进.通过0.9%琼脂糖凝胶电泳和RAPD两种方法检测所提取的DNA样品.结果 比较DNA产量、质量等,确定了木本植物DNA提取法最佳.结论 木本植物DNA提取法为最佳方法.     

冰冻血样的DNA提取方法比较

目的探索冰冻血样的最佳提取方法,保证DNA检测分析的质量。方法采用离心柱法和磁珠法进行DNA提取,分析所得DNA的浓度和纯度。结果两种DNA提取方法提取DNA纯度均符合实验要求(1.6~1.9),两种方法无统计学差异;磁珠法提取冻存血样所得DNA浓度高于离心柱法,有统计学意义。结论对于冰冻血液的DNA提取,磁珠法优于离心柱法。     

丹参DNA提取方法的优化

针对药用植物丹参含有较多的多酚类、醌类等水溶性次生代谢物，在提取DNA时易发生共沉淀而很难除去等问题，设计双蒸水预洗不同次数和活性碳吸附杂质等处理，对CTAB和SDS两种DNA提取方法进行了系统优化。研究得出，采用2％的CTAB提取液和双蒸水预洗一遍并且添加样品鲜重4％的活性碳于提取液中的提取方法最佳。不仅能除去多酚类、醌类等次生代谢物，而且去多糖、蛋白质效果良好，所获DNA纯度高；RAPD-PCR实验结果稳定清晰可靠。     

三种全血基因组DNA提取方法的比较

目的比较高盐法、改良高盐法和超声波处理法三种方法对全血基因组DNA的提取效果。方法取200ul肝素抗凝血，分别采用上述三种方法提取基因组DNA，用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和含量。结果三种方法提取的基因组DNA含量分别为：高盐法38ug／ml全血；改良高盐法76．5ug／ml全血；超声波处理法20ug/ml全血；三种方法提取的基因组DNA纯度用A260／A280表示分别为：高盐法1．62；改良高盐法1．46；超声波处理法4．10。结论三种全血基因DNA提取方法操作简便、安全、快速，以改良高盐法提取效率最高。     

药用百合鳞叶中总DNA提取方法的研究

目的:对药用百合DNA的提取过程进行改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法。方法:在传统十六烷基三甲基氯化铵(CTAB)提取方法基础上,进行改良和优化,寻找出一种实用的DNA提取方法。结果:用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6~2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足引物扩增分析的要求。结论:本试验中的百合鳞叶总DNA的提取方法简便实用,所得DNA的产量和纯度均能满足基因工程操作的要求。     

发菜基因组DNA提取方法比较与分子鉴定研究

目的 以发菜为研究对象比较不同的提取DNA方法,筛选出了一种适合快速提取发菜DNA的方法。方法 分别利用自主研发的硅珠DNA纯化技术、细菌试DNA提取试剂盒和植物DNA提取试剂盒提取发菜基因组DNA。结果 本实验室开发的硅珠DNA提取纯化技术具有快速、无毒以及获得的发菜DNA纯度高等优势。通过PCR扩增和测序得到16S rRNA基因,利用Blast软件进行序列比对,与发菜同源性为99%。结论 本研究研制的发菜基因组DNA提取方法可用于发菜源性的分子鉴定。     

贝母属药用贝母总DNA提取方法的比较研究

目的 比较筛选最适于贝母属药用贝母的总DNA提取方法。方法 利用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的SDS法提取贝母属药用贝母的总DNA;通过核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度和纯度;进行ISSR-PCR扩增检测所得总DNA质量。结果 3种方法均可提取出产量较高的基因组DNA,但试剂盒法相较提取的总DNA纯度最高,质量最好,并且均能扩增出丰富清晰的条带,稳定性高,操作简单耗时短。改良的CTAB法、SDS法提取的总DNA纯度、质量均次于试剂盒法,操作复杂耗时长,不适用于下游的分子生物学实验。结论 试剂盒法为贝母属药用贝母总DNA提取的最佳方法,其所得样品适用于PCR及其他分子生物学研究。     

丝状真菌顶头孢霉染色体DNA的提取

目的探索提取头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的方法。方法采用氯化苄法、液氮研磨法和酶裂解法。结果较其他两种方法比 ,氯化苄法提取效果好。当提取液pH值为 9 0～10 0、EDTA浓度为 12 0mmol·L-1时 ,所得的顶头孢霉染色体DNA的质量和数量均较理想 ,每克(湿重 )顶头孢霉菌丝体能得到 96 μg的染色体DNA。常规琼脂糖凝胶电泳分析 ,其DNA片断大于2 3kb。结论该分离方法获得的染色体DNA质量较高 ,可进行限制性内切酶酶解并适合后续特定基因的PCR扩增反应     

PCR快速鉴定actinobacteria三种模板制备方法的比较

目的 本研究旨在建立准确、简便、快速的放线细菌鉴定技术，为普通和极端环境放线细菌资源的调查和开发利用创造条件。方法 从放线细菌固体培养基上挑取少量菌体，用微波炉法快速制备基因组DNA作为PCR模板，与液体培养法得到的菌体以超声波法或冻融法制备的模板进行了PCR扩增效果的比较研究。结果P CR检测结果表明微波炉法制备的模板可进行有效的体外扩增，目的条带特异，而超声波法或冻融法并不对所有菌株有效，并有非特异扩增产物产生。结论 组合微波炉法快速制备放线细菌基因组DNA技术和23S rRNA特异插入序列PCR扩增技术建立了准确、简便、快速的actinobacteria鉴别体系。     

MSP扩增中3种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

目的比较福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中3种DNA提取方法,研究哪种方法更简便,更适合做DNA甲基化特异性PCR(MSP)。方法分别用二甲苯脱蜡法,改良TES水浴法和试剂盒法提取乳腺癌组织中的DNA,PCR扩增进行比较。结果二甲苯脱蜡法和试剂盒法提取的DNA电泳条带清晰可见,改良TES脱蜡法未见条带。结论二甲苯脱蜡法和试剂盒法提取的DNA均可用于做甲基化特异性PCR。     

不同种类中药材的DNA提取方法

目的根据不同种类中药材来选择DNA提取方法.方法根据作者对各种药材鉴定的实践经验,结合国内外有关代表性的论文,进行归纳和整理.结果分析了不同DNA提取方法适用范围和局限性.结论根据药材种类、贮存时间,选取合适的提取方法和适当的样品量.     

结直肠癌患者粪便细菌DNA提取方法的比较研究

摘要：目的比较结直肠癌患者粪便细菌DNA提取方法的优缺点及获得DNA的质与量,有利于结直肠癌患者肠道相关分子微生态的研究。方法采用传统法,化学裂解法和TIANamp bacteria DNA Kit试剂盒法,提取粪便中细菌DNA,比较其作为模板,用于细菌16SrRNA基因PCR扩增后凝胶电泳的优缺点及用核酸蛋白检测仪Biophotmeter测定提取DNA的质与量。结果传统法提取DNA的量及纯度均较低（22．37±2．45,3．24±0．22）,化学裂解法和试剂盒方法提取的量及纯度均较高,（分别为33．87±2．06,2．18±0．44;38．60±9．00,1．70±0．09）;传统法与化学裂解法、试剂盒法相比差异有统计学意义（P〈0．05）,化学裂解法与试剂盒法相比差异无统计学意义（P〉0．05）,但以试剂盒法为佳。结论3种方法各具优缺点,不同的DNA提取方法会影响结直肠癌患者肠道相关分子微生态的研究结果。与传统法和化学裂解法比较,试剂盒提取法的效率更高,能够检测到更多种类的细菌,更合适肠道相关分子微生态的研究。     

低浓度血清HBV-DNA模板两种提取方法的比较

目的:评价、分析两种不同核酸提取方法对血清HBV-DNA定量测定的影响。方法:本文选取了煮沸裂解法和柱纯化法分别对低浓度和高浓度HBV-DNA阳性血清处理,通过荧光定量PCR法进行定量测定,比较两种方法的定量结果并计算相对提取效率。结果:经统计学t检验,柱纯化法处理低浓度血清的HBV-DNA定量值高于煮沸裂解法,但对高浓度血清,两种方法差异不显著。煮沸裂解法的相对核酸提取效率分别只有柱纯化法的23%与19%。结论:煮沸裂解法处理血清标本具有操作简单,经济快速的优点,但不能适用于处理低浓度血清标本。而柱纯化法提取核酸模板效率较高,处理低浓度标本时能提高检测灵敏度。     

贝母的分子生物学鉴定方法的研究

用ＤＮＡ指纹图谱、ＲＡＰＤ和ＤＮＡ测序等技术鉴定中药材已有不少报道[1～ 5] 。ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增是分子生物学最基本的操作步骤之一。但是由于商品药材多数经过加工处理 ,ＤＮＡ可能会受到不同程度的降解 ,再者植物药材中含有的次生代谢产物如多糖很难与ＤＮＡ和ＲＮＡ分开 ,而多糖对酶有抑制作用 ,因此将会影响ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增。本文以贝母为研究对象 ,探讨不同ＤＮＡ提取方法、不同扩增条件对ＰＣＲ产物的影响 ,为生药的分子生物学鉴定提供参考。材料与方法1　材料　托里贝母Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａｔｏｒｔｉｆｏｌ…     

Methodological Studies on Genomic DNA Extraction and Purification from Plant Drug Materials

本文探讨了菊科９种植物和地胆草的４种对口商品药材基因组ＤＮＡ提取与纯化的原理、方法通过对３种常用植物基因组ＤＮＡ提取方法（ＣｓＣｌ梯度超速离心法、ＣＴＡＢＣｓＣｌ梯度超速离心法和ＣＴＡＢ微量提取法）的条件摸索在ＤＮＡ产率、纯度以及提取纯化过程中影响ＰＣＲ扩增因子方面进行比较，认为ＣＴＡＢ微量提取法是植物类药材基因组ＤＮＡ一种比较省时、有效、经济的提取方法