第53届美国血液学年会热点和重要进展报道

 目的　探讨抑癌基因FBXW7在Notch1诱导的小鼠白血病发展中的表达变化规律。方法　采用Notch1过表达小鼠急性T淋巴细胞白血病移植模型,在发病不同阶段分离骨髓单个核细胞,并在发病晚期用流式分选CD45.2+GFP+白血病细胞。实时定量PCR方法检测FBXW7的表达变化。结果　对照组和白血病组小鼠骨髓细胞均表达FBXW7。Notch1过表达导致的小鼠白血病发展过程中,FBXW7在对照小鼠中表达水平逐渐升高;而在白血病小鼠中,随着白血病的发展,表达水平逐渐下降,第12天降至对照组的1／6。分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞低表达FBXW7。结论　FBXW7在小鼠白血病模型中低表达,提示FBXW7介导的泛素化降解途径异常可能与Notch1诱导的小鼠白血病的发生及发展相关。     

FBXW7在小鼠急性T淋巴细胞白血病模型中的表达

目的探讨抑癌基因FBXW7在Notch1诱导的小鼠白血病发展中的表达变化规律。方法采用Notch1过表达小鼠急性T淋巴细胞白血病移植模型,在发病不同阶段分离骨髓单个核细胞,并在发病晚期用流式细胞术分选CD45.2^GFP＋白血病细胞。实时定量PCR方法检测FBXW7的表达变化。结果对照组和白血病组小鼠骨髓细胞均表达FBXW7。Notchl过表达导致的小鼠白血病发展过程中,FBXW7在对照小鼠中表达水平逐渐升高;而在白血病小鼠中,随着白血病发展,表达水平逐渐下降,第12天降至对照组的1／60分选后的CD45.2＋GFP＋白血病细胞低表达FBXW7。结论FBXW7在小鼠白血病模型中低表达,提示FBXW7介导的泛素化降解途径异常可能与Notchl诱导小鼠白血病发生、发展相关。     

白血病患者P2X7受体的功能性表达分析

目的研究P2X7受体在白血病患者中的功能性表达及与白血病治疗的关系。方法采用半定量RT-PCR、流式细胞术和细胞内钙离子测定的方法,从核酸、蛋白和功能水平研究白血病患者骨髓单个核细胞（BMMC）P2X7受体的表达和功能。结果白血病患者和正常人标本中可检出P2X7受体的表达,核酸、蛋白和功能水平结果一致。AML、ALL、CML患者P2X7受体表达阳性率高于正常人;但AML各亚型中P2X7受体阳性强度存在差异,M2组低于正常人,M5,M6组高于正常人;按照P2X7受体阳性强度分组,P2X7受体高表达患者诱导治疗后的完全缓解率显著低于P2X7受体阴性和P2X7受体低表达患者。结论P2X7受体在白血病患者BMMC中有功能性表达,其高表达与患者治疗不敏感相关。     

P2X7受体激活乳腺癌JNK/SAPK信号通路的研究进展

P2X7受体是ATP门控的离子通道,对二价阳离子有较强的选择性,属于嘌呤受体P2X家族。P2X7受体参与细胞信号转导、细胞因子的分泌等多种生理功能。近年研究发现P2X7受体通过增加氧化磷酸化及细胞内ATP的储备,介导细胞的存活与生长。在乳腺癌中P2X7受体表达异常,并能激活JNK/SAPK途径,诱导乳腺癌细胞凋亡。本文综述了P2X7受体与乳腺癌发生发展分子机制的相关研究。     

P2X7受体与肿瘤发生发展关系的研究进展

P2X7受体作为嘌呤类受体家族中的一个重要成员,能够被细胞外ATP激活,从而参与细胞信号转导、细胞因子的分泌,介导细胞的生长与凋亡等细胞生物学功能的调控。近些年研究表明,P2X7受体的异常表达与多种肿瘤的发生发展密切相关,有望成为肿瘤靶向治疗的新型生物学标志物。本文结合国内外最新报导,对P2X7受体在肿瘤中的异常表达及相关致癌机制研究作一综述。     

P2X7受体在Caski细胞膜上的表达及功能检测

目的:用重组质粒pcDNA6/His-V5-P2X7建立细胞膜稳定表达P2X7受体的人宫颈癌Caski细胞株。方法:采用脂质体转染法将重组质粒pcDNA6/His-V5-P2X7转染入Caski细胞后,应用RT-PCR、Western blotting及细胞免疫荧光法筛选高表达P2X7的Caski细胞株;MTT法检测细胞增殖;P2X7的天然配体ATP处理高表达细胞后,MTT检测细胞生存率,FCM检测细胞凋亡率。结果:成功获得高表达P2X7受体的Caski细胞株;与对照细胞相比,高表达P2X7受体可抑制Caski细胞生长;不同浓度ATP作用细胞株后可抑制细胞增殖,并导致细胞凋亡率增加。结论:高表达P2X7可抑制Caski细胞生长,并且在其配体ATP作用下诱导细胞凋亡。     

P2X7受体与乳腺癌的发生和发展

 P2X7受体是腺甘三磷酸（ATP）门控的离子通道,对二价阳离子有较强的选择性,属于嘌呤能P2受体家族。P2X7受体参与细胞信号传导、细胞因子的分泌等多种生理功能。近几年研究发现P2X7受体通过增加氧化、磷酸化及细胞内ATP的储备,介导细胞的存活与生长。在乳腺癌中P2X7受体表达异常,活化的P2X7受体激活位于细胞质内的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）,后者受到刺激后磷酸化进入核内,引起细胞内一系列蛋白激酶的活化,进而影响乳腺癌的发生发展。     

嘌呤能配体门控离子通道7受体与宫颈癌关系的研究进展

嘌呤能配体门控离子通道7受体(P2X7R)是嘌呤受体家族中重要的一员,在人体多种组织和细胞中均有表达。研究表明,P2X7R与宫颈癌的发生发展有关,且其表达水平与疾病恶性程度密切相关。宫颈癌细胞中P2X7R低表达,可调节肿瘤细胞的生长与增殖,继而促进宫颈癌的转移与侵袭;通过转染获得高表达P2X7R的宫颈癌细胞系,可抑制肿瘤细胞增殖,并导致细胞凋亡。现就P2X7R研究进展及其与宫颈癌发生发展的关系进行综述,以期为靶向治疗宫颈癌等肿瘤性疾病提供新的研究方向。     

P2X受体在癌痛机制中的作用

癌痛是肿瘤患者最常见且最难控制的症状之一。为了提高肿瘤患者的生活质量,癌痛治疗越早越好,最好与肿瘤治疗同步进行。P2X受体是三磷酸腺苷（ATP）的门控离子通道,其在感觉神经元、癌症细胞和胶质细胞等免疫细胞上均有表达。肿瘤微环境中含有丰富的细胞外ATP,通过P2X受体介导的嘌呤信号可能是癌症发生/发展和癌痛的共同通路。研究P2X受体在癌症进展和癌痛中的机制,可以为肿瘤患者一体化的治疗提供可能。本文对P2X受体在癌症发生/发展和癌痛中的研究近况及P2X受体拮抗剂在癌痛和肿瘤转移方面的应用研究进行了总结。     

PTK787对VEGF及VEGFR-2在急性髓系白血病中表达的影响

目的：检测酪氨酸激酶抑制剂PTK787对急性髓系白血病小鼠血清VEGF浓度及其受体VEGFR-2 mRNA表达水平的影响,进一步探讨PTK787抗急性髓性白血病的作用机制。方法：建立急性髓系白血病（AML）SCID小鼠模型,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和反转录PCR（RT-PCR）分别动态检测不同时间点正常小鼠、白血病小鼠及PTK787治疗组小鼠外周血清VEGF浓度及其受体VEGFR-2 mRNA表达的水平变化。结果：（1）正常小鼠和患病小鼠均表达VEGF及VEGFR-2 mRNA;（2）患病组外周血清VEGF浓度和VEGFR-2 mRNA的表达均显著高于正常组小鼠（P<0.05）,而且随着病程的进展逐渐升高;（3）PTK787治疗组小鼠外周血清VEGF浓度及其受体VEGFR-2mRNA表达的水平均较患病组明显降低（P<0.05）。结论：PTK78抗急性髓性白血病的作用与降低血清VEGF及其受体VEGFR-2 mRNA表达的水平密切相关。     

P2X7 receptor mediated growth-inhibitory effect in KG1a cell line

Objective  This study was conducted to investigate ATP-induced growth inhibition in human leukemic cells KG1a. Methods  ATP inhibited cell growth was analyzed by MTS assay. Externalization of phosphatidylserine could be detected by Annexin-V-FITC apoptosis staining a er activation of the P2X7 receptor. P2X7 mediated pore formation was detected in KG1a cells by Yo-Pro-1 uptake assay. Results  ATP inhibited cell growth in a dose-dependent manner. The cytotoxic effect could be blocked by P2X7 antagonists, oxidized ATP (oATP) and KN62. Externalization of phosphatidylserine could be detected in a time-dependent manner. P2X7 mediated pore formation could be detected in KG1a cells. These effects could not be observed in P2X7 null Ramos cells. Conclusion  The results and our previously reports that mRNA, protein expression and calcium response of the P2X7 receptor in KG1a cells, suggested that extracellular ATP effectively induces growth inhibition through apoptosis in KG1a cells by activation of P2X7 receptor, and that may be mediated by extracellular Ca²⁺ influx and pore formation. This work was supported by a grant from the National Natural Science Foundation of China (No.30671092).     

Extracellular ATP induces CD44 shedding from macrophage-like P388D1 cells via the P2X7 receptor

The P2X7 receptor (P2X7R) is a nucleotide receptor expressed predominantly on hemopoietic, bone, and epithelial cells. The P2X7R can be activated by extracellular ATP and induces the influx of calcium, releases cytokines, and participates in cell proliferation and apoptosis. CD44 is an adhesion molecule. The effects of CD44 include cell-cell and cell-matrix adhesion interactions, lymphocyte activation, and cell migration. Many studies have shown that P2X7R and CD44 play important roles in hematological malignancies, but no study exists regarding the relationship between P2X7R and CD44. In the present study, we characterized P388D1 cells for the surface expression of CD44 and analyzed ATP-induced shedding. The data showed that P388D1 cells express CD44. Incubation of P388D1 cells with ATP induced a rapid loss of CD44 from the P388D1 cell surface. In addition, using a receptor inhibitor and P2X7R short hairpin RNA, we showed that the loss of CD44 is mediated via the P2X7R. Finally, we demonstrated that activation of P2X7R by ATP induces CD44 shedding.     

Expression and function of the P2X(7) receptor in rat C6 glioma cells

Our results demonstrate the first findings of expression and function of the purinergic P2X₇ receptor (P2X₇R) in rat C6 glioma cells. P2X₇R mRNA and protein were present in unstimulated C6 cells and were up-regulated by cell exposure to the P2X₇R agonist, 2′,3′-(benzoyl-4-benzoyl)-ATP (BzATP). Activation of P2X₇R in C6 in response to BzATP led to increased mobilization of intracellular calcium [Ca²⁺]i and formation of large pores. Chronic exposure of C6 cells to BzATP enhanced the expression of pro-inflammatory factors including MCP-1, IL-8 and VEGF. In a scratch-wound migration assay, the P2X₇R was shown to regulate cell mobility. The overall results suggest that P2X₇R activation in C6 is linked with increased pro-inflammatory factors and tumor cell migration.     

P2X7受体在乳腺浸润性导管癌中的表达水平及临床意义

目的:检测P2X7受体(P2X7 purinergic receptor,P2X7R)在乳腺浸润性导管癌中的表达水平,并探讨其表达水平与乳腺浸润性导管癌患者临床病理参数及预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测P2X7R在170例乳腺浸润性导管癌、50例乳腺导管原位癌和34例乳腺癌旁正常组织中的表达水平。采用χ~2检验分析P2X7R表达与乳腺癌患者临床病理指参数的关系,并用Kaplan-Meier法和COX风险回归模型分析P2X7R表达水平与患者预后的相关性。结果:P2X7R在浸润性导管癌和导管原位癌组织中均高表达,且明显高于乳腺癌旁正常组织(P<0.01);P2X7R表达水平与患者淋巴结转移(P=0.039)、TNM分期(P=0.045)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)(P=0.024)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)(P=0.033)的表达水平存在相关性,且P2X7R在淋巴结转移患者、TNMⅢ期患者、ER阳性患者和PR阳性患者中高表达率更高。P2X7R与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)、p53和Ki-67无相关性。P2X7R高表达乳腺浸润性导管癌患者的无病生存(disease-free survival,DFS)时间较低表达者短(P=0.013)。单因素分析结果显示,乳腺浸润性导管癌患者的DFS与肿瘤大小(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.009)、TNM分期(P<0.001)、Ki-67(P=0.026)和P2X7R(P=0.013)相关;多因素分析结果显示,TNM分期(P=0.033)和P2X7R(P=0.043)是影响乳腺浸润性导管癌患者DFS的独立危险因素。结论:P2X7R在乳腺癌中高表达,并且P2X7R高表达的乳腺癌患者预后更差,提示其可以作为一种乳腺癌的潜在预后标志物。