扶正消岩汤抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的机制研究

目的 研究扶正消岩汤对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响并从药物影响线粒体功能及线粒体动力学平衡的角度探讨药物的作用机制。方法 依据扶正消岩汤对三阴性乳腺癌细胞的IC₅₀浓度确定药物的干预浓度及作用时间，设立对照组即扶正消岩汤高、中、低剂量给药组；24h后，TUNEL染色检测凋亡细胞比率；Annexin V-PI双染流式细胞仪定量检测扶正消岩汤对细胞凋亡的影响；JC-1染色流式细胞仪检测中药对细胞线粒体去极化水平的影响；实时定量PCR方法检测中药对凋亡相关因子mRNA表达水平及mir-34a表达水平的影响；Western Blot检测扶正消岩汤对细胞线粒体动力学平衡相关蛋白表达的影响。结果 扶正消岩汤具有诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡及提高凋亡基因BAX、Caspase3 mRNA表达水平的作用，且与给药浓度相关；随着扶正消岩汤药物浓度的提高，TNBC细胞内线粒体活性降低且中剂量组及高剂量组细胞线粒体去极化水平较对照组显著提高；同时中剂量组及高剂量组细胞中mir-34a的表达水平及线粒体动力学平衡关键因子mTOR、Drp-1的蛋白表达水平也较对照组显著降低。结论 扶...     

土贝母皂苷甲对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的:探讨中药土贝母主要成分土贝母皂苷甲(TBMSⅠ)通过激活Egr1/p21信号通路对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:体外培养MCF-7细胞，并把细胞分为空白组、TBMSⅠ高剂量组(20μg/ml)、TBMSⅠ中剂量组(15μg/ml)、TBMSⅠ低剂量组(10μg/ml),使用对应浓度的TBMSⅠ干预MCF-7细胞。干预24、48、72 h后，使用CCK-8法检测细胞增殖情况。干预MCF-7细胞48 h后，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡、细胞周期分布情况。采用Western blotting、qRT-PCR检测各组细胞Egr1、p21蛋白及mRNA表达。结果:干预24、48、72 h后，TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组的MCF-7细胞得到抑制，且抑制率呈时间与剂量依赖性。干预48 h后，TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组、TBMSⅠ低剂量组MCF-7细胞的凋亡率高于空白组，差异有统计学意义(均P<0.05)。TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组、TBMSⅠ低剂量组G₀/G₁期细胞占比低于空白组，G₂     

蒙药苏格木勒-3汤对异丙肾上腺素诱导HL-1心肌细胞钙超载损伤的影响

目的探讨苏格木勒-3汤治疗心力衰竭的可能作用机制。方法 HL-1心肌细胞按每孔1×10~5个细胞接种于96孔板,常规培养24h后进行分组:空白对照组的不加任何处理的正常心肌细胞;模型组加入终浓度为25μg/ml的异丙肾上腺素每孔100μl处理24h;苏格木勒-3汤高、中、低剂量组加入终浓度为25μg/ml异丙肾上腺素每孔100μl处理24h后分别加入75、50、25μg/ml苏格木勒-3汤水提液每孔100μl处理24h;苏格木勒-3汤对照组加入75μg/ml苏格木勒-3汤水提液每孔100μl处理24h。每组5个复孔。MTT法检测各组HL-1心肌细胞存活率,荧光显微镜检测细胞中钙离子浓度,Western blotting法检测HL-1心肌细胞中肌浆网钙ATP酶2a (SERCA2a)蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组HL-1心肌细胞存活率、SERCA2a蛋白表达下降(P0.01)。与模型组比较,苏格木勒-3汤高、中剂量组HL-1心肌细胞存活率增高,苏格木勒-3汤高、中、低剂量组HL-1心肌细胞SERCA2a蛋白表达量均增加(P0.01)。荧光显微镜下显示,模型组HL-1心肌细胞内钙离子浓度的荧光强度增加;与模型组比较,苏格木勒-3汤中、高剂量组对HL-1心肌细胞内钙离子浓度的荧光强度逐渐下降。结论蒙药苏格木勒-3汤对HL-1心肌细胞钙超载具有抑制作用,其机制可能与提高心肌细胞中SERCA2a蛋白表达有关。     

养阴解毒方对肺癌A549细胞增殖、凋亡及H3K27Me3修饰变化的影响

目的探讨养阴解毒方治疗肺癌的可能作用机制。方法将A549细胞分别加入梯度浓度为0、62. 5、125、250、500、1000μg/ml的养阴解毒方,分别于24、48、72 h检测不同浓度的养阴解毒方对肺癌细胞系A549增殖能力的影响,依据细胞存活率计算最佳半数抑制浓度(IC_(50))。将A549细胞分为对照组及中药低、高剂量组。对照组为未加入养阴解毒方的培养基,中药高剂量组加IC_(50)浓度的养阴解毒方干预48 h,中药低剂量组加1/2 IC_(50)浓度的养阴解毒方干预48 h。检测各组细胞周期、细胞凋亡情况; ChIP-Seq技术分析IC_(50)浓度的养阴解毒方干预A549细胞48 h后H3K27Me3全基因组修饰变化,并进行GO功能富集分析。结果养阴解毒方可以明显抑制肺癌细胞A549的增殖,并呈剂量、时间依赖性(P 0. 05),其48 h时IC_(50)为63μg/ml。中药低、高剂量组均可将A549细胞阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,且中药高剂量组阻滞效果及诱导晚期凋亡和总凋亡优于中药低剂量组(P 0. 05); ChIP-Seq结果显示,共有1058个基因H3K27Me3修饰程度发生改变,其中修饰程度增加的有601个基因,修饰程度降低的有457个基因。GO分析结果显示,上调基因与G蛋白偶联受体信号通路、凋亡过程的负调节等生物学功能有关,下调基因与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调节、神经系统发育等生物功能有关。结论 63μg/ml养阴解毒方可以明显抑制A549细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,其机制可能与改变H3K27Me3表观遗传修饰谱有关。     

消岩汤药物血清对A549/DDP细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨消岩汤在顺铂诱导A549细胞凋亡中的作用,从诱导细胞凋亡角度分析其可能的抗耐药作用机制。方法:采用Annexin V/PI双标记染色法,通过流式细胞术检测A549和A549/DDP细胞凋亡率。结果:在药物血清作用于A549/DDP 24 h后,消岩汤高剂量组细胞凋亡率为32.97%,消岩汤低剂量组为16.01%,3组细胞凋亡率对比,差别有统计学意义(P<0.05);消岩汤低剂量组与模型对照组对比,细胞凋亡率差别无统计学意义(P>0.05);而消岩汤高剂量组与模型对照组对比,凋亡率差别则有统计学意义(P<0.05)。结论:流式细胞仪分析结果显示,消岩汤对顺铂诱导的A549/DDP耐药细胞的凋亡具有显著的增强作用,细胞凋亡率呈现剂量依赖关系。     

穿心莲内酯对HL-60细胞凋亡、CytC蛋白表达的影响

目的:研究穿心莲内酯诱导人HL-60细胞凋亡及相关机制。方法:以人早幼粒白血病细胞株HL-60为模型,作用于HL-60细胞的穿心莲内酯设3.125、6.25、12.5μg/ml三个受试浓度,实验分为溶媒对照组、穿心莲内酯3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml四个组。采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率、流式细胞术结合荧光染色检测穿心莲内酯对细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响。结果:穿心莲内酯能促进HL-60细胞凋亡,且呈剂量依赖性。穿心莲内酯作用HL-60细胞24h,Cyt C蛋白表达增加,12.5μg/ml作用浓度与溶媒对照相比有统计学意义(P0.05)。结论:穿心莲内酯能诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能与Cyt C释放的增加、线粒体通路有关。     

益气活血消癥方对良性前列腺增生大鼠细胞凋亡的影响

目的观察益气活血消癥方对良性前列腺增生大鼠细胞凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法将60只8周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、阳性对照组和消癥方低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均予去势加丙酸睾酮注射法复制前列腺增生模型。正常组和模型组大鼠予生理盐水灌胃,消癥方低、中、高剂量组大鼠分别予益气活血消癥方10、20、40 mg/100 g灌胃,阳性对照组大鼠予癃开颗粒混悬液11 mg/100 g灌胃,1次/d,连续30 d。末次给药24 h后,脱颈处死大鼠,取前列腺组织,免疫组化检测大鼠前列腺组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织Bax表达显著降低,Bcl-2表达显著升高;与模型组比较,各给药组大鼠前列腺组织Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低,且消癥方高剂量组效果最优。结论益气活血消癥方可促进大鼠前列腺组织细胞凋亡,其机制与前列腺组织Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低相关,从而改善良性前列腺增生。     

蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的：观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的影响。方法：(1)采用倒置显微镜观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞形态的影响；(2)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞生长的影响。结果：蔡氏扶正消癥汤生药能抑制胃癌细胞的增殖。在实验浓度范围内，随着剂量的增加，抑制作用更加明显；同一剂量下，72h内药物作用时间越长，抑制作用越明显。结论：蔡氏扶正消癥汤能够抑制胃癌细胞的增殖。     

蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的影响.方法:(1)采用倒置显微镜观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞形态的影响;(2)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞生长的影响.结果:蔡氏扶正消癥汤生药能抑制胃癌细胞的增殖.在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72h内药物作用时间越长,抑制作用越明显.结论:蔡氏扶正消癥汤能够抑制胃癌细胞的增殖.     

长期用药嘎木朱尔涂膜剂家兔血砷浓度的检测

家兔连续外用高、中、低剂量的嘎木朱尔涂膜剂4周,2周及4周后从耳缘静脉取血,采用氢化物-原子荧光法测定血液中砷的含量。高中低剂量组及对照组用药2周后血砷浓度依次为0.266μg/ml、0.200μg/ml、0.151μg/ml、0.072μg/ml;用药4周后分别为0.352μg/ml、0.270μg/ml、0.178μg/ml、0.085μg/ml。用药组血砷含量明显高于对照组且与用药剂量呈正相关;低剂量组2周与4周血砷浓度无显著性差异（P〉0.05）,中、高剂量组给药4周时血砷浓度比2周明显增高（P〈0.05）,提示：家兔长期大剂量外用嘎木朱尔涂膜剂,制剂中的砷在体内有明显的吸收蓄积作用,但按低剂量（0.45g生药/kg）短时间（小时2周）给药,砷的吸收在血中基本无蓄积。     

丹参注射液对兔软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察丹参注射液对兔软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取健康4周龄新西兰大白兔24只,取膝关节软骨组织并建立兔膝软骨细胞体外培养体系,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测软骨细胞2-5代的增长曲线;采用梯度时间法优化丹参注射液干预软骨细胞活性的时效及量效关系;采用RT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax的表达。结果:第2-5代细胞的增殖曲线趋势:第1天各代细胞光密度值(OD值)没有显著差异(P0.05),第2天增殖缓慢,第3天增殖逐渐加快,第4天进入生长期,第5、6天增殖变慢,第7、8天增殖进入平台期,第9、10天增殖抑制。OD值随细胞传代,呈减低趋势,第1、3代OD值高于第4、5代,但没有显著差异(P0.05)。时效关系:2组干预24小时OD值没有显著差异(P0.05),干预48小时OD值中剂量组大于对照组(P0.05),干预72、96小时OD值中剂量组大于对照组(P0.01),中剂量组干预72小时OD值显著大于24、48、96小时(P0.05),故选择细胞干预72小时作为以后实验检测时间点。量效关系:第3代软骨细胞用不同丹参注射液终浓度的10%FBS DMEM溶液干预,干预前细胞OD值没有明显差异(P0.05);干预72小时后,400、200、100、50、25μg/L浓度细胞的OD值显著大于0μg/L浓度的OD值(P0.01);50μg/L浓度的OD值显著大于400、200、100、25μg/L浓度的OD值(P0.01);100μg/L浓度的OD值显著大于400、200、25μg/L浓度的OD值(P0.01);100μg/L与50μg/L比较细胞OD值没有显著差异(P0.05)。Bcl-2、Bax表达:诱导凋亡的第3代软骨细胞,加丹参注射液干预24小时后,细胞Bax表达中、高剂量组小于模型组(P0.05),高剂量组小于低剂量组(P0.05);细胞Bcl-2表达中、高剂量组大于模型组(P0.05),高剂量组大于低剂量组(P0.05)。结论:丹参注射液能抑制软骨细胞调亡;可能通过下调软骨细胞促凋亡因子Bax的基因表达,上调软骨细胞促凋亡因子Bcl-2的基因表达,抑制软骨细胞线粒体调亡通路的信号转导实现。     

清热消癥方对高糖刺激下HK-2细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的 探讨清热消癥方对高糖刺激下HK-2细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法以人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞为干预对象,采用CCK-8法检测细胞活力对高糖模型造模条件和清热消癥方最佳干预浓度进行筛选;采用Western blot法对海藻糖干预浓度进行筛选。将HK-2细胞分为对照组、模型组、清热消癥方组、海藻糖组、清热消癥方+海藻糖组,分别予含有24.4 mmol/L甘露醇的完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖+200μg/mL清热消癥方培养基、30 mmol/L高糖+50 mmol/L海藻糖培养基、30 mmol/L高糖+50 mmol/L海藻糖+200μg/mL清热消癥方培养基培养48 h。采用Western blot法和Immunofluorescence法检测HK-2细胞自噬相关蛋白表达情况。结果 与对照组比较,模型组p62蛋白相对表达量和阳性表达平均荧光强度均明显升高(P均<0.05),溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,清热消癥方组自噬相关蛋白7(Atg...     

补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响

目的探讨补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响。方法成年SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组和补肾活血汤高、中、低剂量组5组,每组12只。实验第1周,模型组和高、中、低剂量组注射20μg/kg脂多糖2次,每次间隔24 h,24 h后注射甲强龙40 mg/kg,连续注射3次,每次间隔24 h;实验第2~6周,甲强龙用量减至20 mg/kg,每周1次;正常组注射相同剂量相同频次的生理盐水;实验第7~10周,高、中、低剂量组给予2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg的补肾活血汤灌胃,正常组和模型组以5 g/(kg/d)的生理盐水灌胃;实验第11周处死大鼠,取血清,检测血清骨碱性磷酸酶(BALP)含量高低,取双侧股骨头,光镜下观察股骨头形态改变。结果高剂量组软骨层内可见大量致密结缔组织增生,软骨层内富含充血扩张的血管或静脉窦,部分栓塞或机化,管腔内炎性细胞聚集,机化的血管周围可新生类骨质。高剂量组血清BALP含量与正常组比较,P0.05;中、低剂量组和模型组血清BALP含量与正常组比较,P0.05;高剂量与中、低剂量组及模型组比较,P0.05。结论高剂量补肾活血汤可提高大鼠体内BALP含量,有利于坏死骨组织的修复。     

消癥散对荷H22移植性肝癌细胞小鼠VEGF、Cyclin-D1表达的影响

目的观察消癥散对荷H22移植性肝癌细胞小鼠的抑瘤作用及其机制。方法选择昆明种雄性小白鼠120只,造模成功实体瘤小鼠(60只),腹水瘤小鼠(60只),空白组(10只)。随机将实体瘤小鼠和腹水瘤小鼠分为模型组,消癥散低、中、高剂量组,5-氟脲嘧啶(5-Fu)组,5-Fu+消癥散中剂量组各6组,每组10只。接种H22肝癌细胞24h后按体重给药,每日1次,连续给药10天。实体瘤组小鼠停药24h后,称重并处死动物,剥取瘤块称重,计算肿瘤生长抑制率,采用免疫组化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)和细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)表达水平。记录腹水瘤组小鼠生存天数,计算生命延长率。结果消癥散对各组实体瘤小鼠有明显的抑瘤作用,与模型组比较,除消癥散低剂量组外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.01);消癥散能够降低瘤组织中VEGF、Cyclin-D1的表达水平,与模型组相比,除消癥散低剂量组外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.01);消癥散能够延长腹水瘤小鼠的生存期,与模型组相比,消癥散中剂量组差异有统计学意义(P<0.05),5-Fu组和5-Fu+消癥散中剂量组差异有统计学意义(P<0.01)。结论消癥散对荷H22移植性肝癌细胞小鼠有抑瘤和延长生存期的作用,抑制肿瘤生长的机理可能与下调VEGF、Cyclin-D1的表达水平有关。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

六君子汤合旋覆代赭汤含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞活性及钙离子浓度的影响

目的探讨六君子汤合旋覆代赭汤治疗胃食管反流病的可能作用机制。方法将2月龄Wistar大鼠分为中药低、中、高剂量组和莫沙必利组、空白组,每组10只。中药低、中、高剂量组分别予以浓度为0. 846、1. 728、3. 456 g/ml六君子汤合旋覆代赭汤溶液灌胃,莫沙必利组予以浓度0. 5 mg/ml莫沙必利溶液灌胃,每次均1. 5 ml/100g,每日2次,空白组予等量生理盐水灌胃,共5天。第5天灌胃后1h腹主动脉取血制备含药血清。出生10～15天的Wistar大鼠3只,禁食18 h后取2 cm左右胃窦组织培养大鼠胃Cajal间质细胞(ICC),并采用免疫荧光法鉴定。ICC细胞稳定培养7天后,分为中药低、中、高剂量组和莫沙必利组、空白组,每组12个样本。调整浓度为5×10~4/ml接种于96孔板,12 h后加入相应含药血清,200μl/孔,分别培养24、48、72 h,采用MTT法检测ICC细胞活性;激光共聚焦显微镜下进行Fluo-3-AM荧光检测细胞内Ca~(2+)浓度变化。结果稳定培养7天后倒置显微镜下可见ICC呈三角形、梭形或多边形,核大,周围充满胞浆,胞体发出多条大小不等的树枝状突起,突起与周围细胞的胞体和突起相互连接。免疫荧光染色后,在显微镜下观察ICC表面c-kit呈阳性,胞体和突起均明显着色,呈绿色阳性显性。与空白组和中药低剂量组同时间相比,中药中、高剂量组和莫沙必利组在24、48、72 h时ICC活性均显著增强,Ca~(2+)荧光强度升高(P 0. 05);在48 h、72 h时莫沙必利组ICC活性显著高于中药中、高剂量组,Ca~(2+)荧光强度亦高于中药中、高剂量组(P 0. 05)。结论六君子汤合旋覆代赭汤可增强ICC内Ca~(2+)浓度,从而提高ICC活性,这可能是其治疗胃食管反流病机制之一。     

化瘀消癥复方对PI3 K/Akt/mTOR信号通路及输卵管妊娠滋养细胞的作用机制研究

目的探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞的凋亡、侵袭影响及PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控机制。方法以不同浓度的化瘀消癥复方水提液干预输卵管妊娠滋养细胞,设立空白组、甲氨蝶呤作为西药组、胞磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002与雷帕霉素靶蛋白(mammalian taget of rapamycin,mTOR)抑制剂雷帕霉素作为对照组,采用流式细胞术检测干预72小时后的细胞凋亡率,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用蛋白免疫印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达情况。结果各给药组均能上调细胞凋亡率,随着中药浓度的增加,细胞凋亡率上升,中药高剂量组较西药组对凋亡的促进作用更加明显(P<0.05);各给药组均能下调细胞过膜数,随着中药浓度的增加,穿过Transwell侵袭小室的细胞数减少,侵袭减弱,中药高剂量组与西药组对细胞侵袭力影响的对比,差异无统计学意义(P>0.05);中药各组细胞中的p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平随着浓度增加而降低(P<0.05),与上下游通路抑制剂对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论化瘀消癥复方能够促进输卵管妊娠滋养细胞凋亡,抑制侵袭,且呈浓度依赖性,可能与其负调控细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性有关。     

菟丝子通过线粒体通路抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:探讨菟丝子水取物通过线粒体通路抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定菟丝子水取物对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1的存活率的影响,TUNEL实验检测细胞凋亡情况,罗丹明123(Rh123)荧光染色观察线粒体膜电位的改变,免疫印迹实验检测相关蛋白表达。结果 :不同浓度菟丝子水取物(10⁴0μg/ml)能够提高叔丁基过氧化氢作用的细胞存活率并呈时间-剂量依赖性。确定其最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为20μg/ml。菟丝子水取物(20μg/ml)作用24 h后能够显著提高细胞线粒体膜电位并上调抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达,下调促凋亡蛋白Bax、cytochrome c、caspase 3和caspase 9蛋白表达。结论:菟丝子水取物能够显著抑制叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡并通过线粒体依赖的凋亡途径发挥作用。     

建中补肾消癥汤对UUO小鼠肾间质纤维化细胞凋亡的保护作用研究

目的 通过细胞凋亡途径探讨建中补肾消癥汤对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法 采用UUO小鼠模型,以建中补肾消癥汤不同剂量干预、尿毒清颗粒阳性药对照,造模后第3天开始灌胃,于造模后的第14、21、28天每组随机抽取5只进行取材。采用全自动生化分析仪进行小鼠血清Scr、BUN检测,HE染色观察小鼠肾组织病理形态变化,TUNEL染色观察小鼠肾小管上皮细胞(RTECs)凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测小鼠梗阻侧肾组织中Bcl-2、Bax和Apaf-1的表达情况。结果 与同时期UUO模型组相比,在第28天各治疗组均能够明显降低UUO小鼠Scr、BUN浓度(P<0.05,P<0.01);HE染色显示,建中补肾消癥汤能够改善UUO小鼠肾脏组织纤维化程度;TUNEL染色显示,在第28天,中药高、中剂量和尿毒清组RTECs凋亡数量均显著减少(P<0.01);Western blot和RT-PCR结果一致,中药高剂量组与UUO模型组相比,Bcl-2表达明显增加(P<0.01,P<0.05),Bax和Apaf-1表达显著下降...     

慈菇消脂丸含药血清对HepG2细胞脂性凋亡的影响

目的探讨慈菇消脂丸含药血清对游离脂肪酸诱导HepG2细胞脂性凋亡的影响。方法 SD大鼠给予慈菇消脂丸药液(2 mL/100 g)灌胃以提取并配制不同浓度含药血清;以500μmol/L游离脂肪酸诱导HepG2细胞构建模型,随机分为空白对照组、模型组(500μmol/L FFA)、慈菇消脂丸含药血清低剂量组(500μmol/L FFA+2%含药血清),慈菇消脂丸含药血清高剂量组(500μmol/L FFA+6%含药血清),JNK抑制剂组(500μmol/L FFA+20μmol/L SP600125),诱导培养24 h,电镜观察细胞超微结构,荧光染色观察caspase-8、Fas-L、p-JNK,试剂盒检测SOD、MDA、ALT、 AST。结果空白对照组细胞内未见脂滴,模型组出现脂滴,其余各组脂滴减少。与空白对照组比较,模型组caspase-8、Fas-L、p-JNK表达增高(P0.01),细胞培养液ALT、AST、MDA水平增高及SOD水平降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,慈菇消脂丸含药血清各剂量组caspase-8、Fas-L表达降低(P0.01),慈菇消脂丸含药血清高剂量组ALT、AST、MDA水平降低及SOD水平升高(P0.05,P0.01)。结论慈菇消脂丸含药血清对游离脂肪酸诱导的HepG2脂性凋亡有干预作用,可能与凋亡蛋白caspase-8、Fas-L相关。