用RT-PCR法检测新鲜癌组织中多药耐药基因(mdr-1)表达的体会

恶性肿瘤细胞的多药耐药性（MDR）已普遍受到关注，其分子学基础之一是mdr-1基因的过表达。检测mdr-1基因的方法较多，本研究旨在介绍反转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测mdr-1基因表达的经验。方法：选取安阳市肿瘤医院1994年11月~1995年9月术前未作治疗的恶性肿瘤切除标本151份。以RT－PCR检测其mdr-1基因的表达情况，评价RT－PCR检测mdr－1基因中的注意事项及优点。结果：151例均经病检证实为恶性肿瘤，包括胃及贫门癌51例，食管癌46例，大肠癌16例，乳癌15例，甲状腺癌10例，肺癌9例，宫颈癌4例，mdr－1基因在上述肿瘤中的阳性表达率依次分别为对33．3％、37％、31．3％、13．2％、40％、55％、0。结论：RT－PCR检测肿瘤组织中mdr-1基因的表达简单方便、可靠准确，较其它方法为好。     

常见恶性肿瘤新鲜组织中原发性多药耐药基因表达的初步研究

目的从基因水平探讨临床常见恶性肿瘤细胞中原发性多药耐药基因（ｍｄｒ－１）的表达规律,指导临床实践。方法取安阳市肿瘤医院１９９４年１１月～１９９５年９月术前未做治疗的恶性肿瘤切除标本１５１份,以反转录多聚酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测其ｍｄｒ－１基因的表达情况,并做比较研究。结果１５１例均经病理检查证实为恶性肿瘤,包括胃及贲门癌５１例,食管癌４６例,大肠癌１６例,乳腺癌１５例,甲状腺癌１０例,肺癌９例,宫颈癌４例。ｍｄｒ－１基因在上述肿瘤中的阳性表达率依次分别为３３．３％、３７．０％、３１．３％、１３．２％、４０．０％、５５．５％、０。结论ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤组织中ｍｄｒ－１基因的表达简单方便、可靠准确。ｍｄｒ－１基因在临床常见恶性实体肿瘤组织中有较高的原发性表达,提示化疗时要区别对待,合理选药。     

mdr-1表达与食管癌相关病理因素的研究

目的：探讨食管癌组织中多药耐药基因（mdr-1)表达与相关病理因素的关系。方法：应用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法，对78例食管癌及癌旁组织中mdr-1表达进行检测，结果：78例食管癌中mdr-1阳性32例（41％），癌旁组织mdr-1阳性率8例（10％），癌组织mdr-1阴性与癌旁组织比较具有显著性差异（P＜0．001），mdr-1表达阳性与肿瘤大小，浸润深度，病理分期及淋巴结转移与否无明显关系，但在肿瘤侵犯深肌层或纤维层时的mdr-1表达阳性率（45．8％）明显高于侵犯浅肌层或粘膜层者（26．3％），低分化食管癌的mdr-1阳性分布显著高于高中分化肿瘤（P＜0．05），对术后1年以上的42例患者随访发现，mdr-1阳性的肿瘤复发，转移发生率也高于mdr-1表达阴性者，结论：食管癌组织中mdr-1基因表达增高，mdr-1的阳性表达不仅表现肿瘤的多药耐药性，还可能提示肿瘤的分化不良，并与食管癌的复发和转移密切相关。     

恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因表达在原发耐药与继发耐药中的作用研究

目的: mdr-1基因是肿瘤多药耐药现象中的主要表型,探讨mdr-1基因原发耐药与继发耐药表达状况,预期指导临床个体化疗.方法:应用RT-PCR方法对51例恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因进行定量体外诱导后检测其表达水平.结果:51例外周血淋巴细胞中原发性阴性表达34例占66 %,继发性阴性表达仅5例占9.8 %,外周血中的原发mdr-1阴性表达与继发性表达比较有显著性差异(P<0.01).在低阳性组,原发性表达11例占21 %,继发性表达31例占60.7% (P<{0.01).高阳性组原发性表达6例占11.8 %,继发性表达15例占29 %(P<0.01).继发性表达率明显高于原发性.结论:RT-PCR检测人外周血淋巴细胞mdr-1基因表达取材方便,结果可靠,提示不同程度的mdr-1基因表达水平可以客观地反映不同个体的药物耐受情况.为临床个体化疗提供指导性信息.     

肾癌组织mdr—1基因表达

目的研究ｍｄｒ１基因在肾癌组织中的表达状况。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术检测２０例肾癌和５例正常肾组织ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ的表达。结果８５％（１７／２０）的肾癌和１００％（５／５）的正常肾组织表达ｍｄｒ１ｍＲＮＡ。结论肾癌ｍｄｒ１基因的高表达是肾癌耐药的重要原因,检测ｍｄｒ１基因表达可为临床化疗药物的选择提供依据。     

多药耐药基因mdr-1在肝门部胆管癌组织中的表达及其意义

目的：检测肝门部胆管癌新鲜组织中多药耐药基因（ｍｄｒ－１）ｍＲＮＡ表达，探讨其与肝门部胆管癌临床病理间的关系。方法应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对２６例术前未作治疗的肝门部胆管癌，１２例正常胆管组织的ｍｄｒ－１ ｍＲＮＡ表达进行了检测，并与癌组织的分化程度，病理类型、部位、浸润转移作对比研究。结果：２６例肝门部胆管癌组织中ｍｄｒ－１ ｍＲＮＡ的阳性表达率为６５．４％（１７／２６），正常胆管     

p53表达与肺癌多药耐药的相关性研究

目的 :探讨 p5 3蛋白与肺癌多药耐药 (MDR)的关系。方法 :运用 S- P免疫组化法和反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术 ,对 40例肺癌组织中 p5 3蛋白、多药耐药 (mdr- 1)基因和多药耐药相关蛋白 (mrp)基因表达进行检测。结果 :癌组织 p5 3阳性的 mdr- 1、m rp阳性率高于 p5 3阴性者 (P<0 .0 5 ) ;p5 3和 mdr- 1、m rp阳性率与肺癌的病理分期、组织学类型、分化程度和淋巴结转移无关 (P>0 .0 5 ) ,但它们在低分化肿瘤和淋巴结转移标本的阳性率高于中高分化和无淋巴结转移者。结论 :p5 3蛋白对肺癌细胞的 mdr- 1、mrp表达可能起调控作用 ,促使肺癌细胞 MDR的产生。     

急性白血病患者多药耐药基因mdrl的表达及其临床意义

目的　探讨白血病细胞的抗药性与化疗效果及预后的关系。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)的方法检测了 85例不同时期急性白血病 ( AL)患者多药耐药基因 mdrl m RNA的表达 ,同时检测了 2 0例正常人作为对照。结果　初治组 mdrl的阳性率为 4 4 .7% ,mdrl 与 mdrl-患者的完全缓解 ( CR)率分别为 2 3.9%和 88.5% ( P<0 .0 0 5) ,复发及难治组患者 mdrl的阳性率明显高于CR组 ( P<0 .0 0 1) ,复发及难治组 mdrl m RNA的表达水平也高于 CR组 ( P<0 .0 0 1)。CR患者 mdrlm RNA的表达水平逐渐升高可导致临床复发。正常人和长期生存患者 mdrl的阳性率很低。另外发现mdrl的表达与法、美、英协作组 ( FAB)分型有关。结论　mdrl的表达与 AL的化疗效果及预后密切相关 ,它是 AL患者一个重要的不利预后因素。     

白血病细胞耐药基因mdr1和多药耐药相关蛋白的表达水平的研究

用ＲＴ－ＰＣＲ方法对５４例不同时期不同类型的白血病患者进行ｍｄｒ１及多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）的检测及１２例Ｐ－ｇｐ免疫组化检测，结果表明：在初发组三者的阳性表达分别为３３．３％、３３．３％和２５％。复发组三者的阳性表达分别为７９．１％、５４．２％和６２．５％。提示复发患者的耐药现象是与ｍｄｒ１、ＭＰＲ和Ｐ－ｇｐ有密切相关的，同时也说明人体内ｍｄｒ１及ＭＲＰ存在一定的内在表达性     

抗肿瘤药物体外诱导新鲜癌组织及其外周血淋巴细胞mdr-1基因表达的相关性研究

目的: 通过对恶性肿瘤患者的癌组织细胞及其外周血淋巴细胞进行抗肿瘤药物的体外诱导,用RT-PCR法检测其mdr-1基因表达状况,从而找出两者之间的相关性,从基因水平解决非手术癌患者化疗用药个体化.方法:在采集手术标本的同时抽取该患者外周血,用8种抗肿瘤药物进行体外诱导,RT-PCR法检测32例恶性肿瘤患者癌组织细胞及其外周血淋巴细胞的mdr-1基因表达状况.利用SAS软件计算两者之间的相关关系.结果:32例恶性肿瘤患者的新鲜癌组织细胞与其外周血淋巴细胞的抗肿瘤药物体外诱导mdr-1基因表达呈正相关关系.结论:对于失去手术机会或病灶很小不能取材的患者可以用外周血淋巴细胞替代癌细胞做RT-PCR体外药敏检测.这将从基因水平为肿瘤患者个体化用药提供一个新的途径.     

非小细胞肺癌mdr—1和mrp的表达及其预后的研究

目的:探讨耐多药基因(ｍｒｄ－１)和耐多药相关蛋白基因(ｍｒｐ)在非小细胞肺癌、癌旁和淋巴结组织中的表达关系及其对患者预后的影响。方法:采用逆转录－聚合酶链反应(ＲＴ－ＰＣＲ)技术,检测了４５例非小细胞肺癌、癌旁和１２５枚手术切除淋巴结组织的ｍｄｒ－１、ｍｒｐ表达。结果:在肺癌组织中ｍｄｒ－１、ｍｒｐ的表达及两基因共表达的阳性率与癌旁组织比较有显著性差异(Ｐ＜０．０１):转移淋巴结(Ｎ１~２)的ｍｄｒ－１、ｍｒｐ阳性率也高于非转移淋巴结组织(Ｎ０)(Ｐ＜０．０１)。随访发现,肺癌组织ｍｄｒ－１和ｍｒｐ阴性患者的术后１、２、３年生存率(８９．５%、７８． ６%和５０%)高于ｍｄｒ－１和ｍｒｐ阳性者(８０．８%、６８．８%和１４．３%)。结论:肺癌组织ｍｄｒ－１、ｍｒｐ的表达与相对应的淋巴结组织具有一致性,转移淋巴结组织的ｍｄｒ－１、ｍｒｐ基因表达可能与临床病理分期有关 ;ｍｄｒ—１和ｍｒｐ阴性者化疗效果好,对于阳性者,术后化疗不能提高远期生存率,而且预后不良。     

Sorcin基因和mdr1基因的相关性及临床意义

目的　探讨急性髓细胞系白血病 (AML)患者可溶性耐药相关钙结合蛋白基因 (sorcin)和多药耐药基因 (mdr1)的相关性表达及其与临床耐药和疗效的关系。方法　Northernblot检测K5 6 2 /A0 2细胞株sorcin和mdr1基因的表达 ,用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 6 5例AML患者、2 7例非白血病患者和健康人的sorcin基因和mdr1基因表达 ,并分析sorcin基因和mdr1基因表达的相关性及其临床意义。结果　AML患者中 ,sorcin和mdr1基因表达明显高于正常对照组 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1) ;在AML和对照组中 ,sorcin和mdr1基因的表达有较好的相关性 ;sorcin和mdr1基因的共表达与AML患者的临床耐药和预后具有较高的符合率。Sorcin+ 和mdr1+ 组患者临床耐药发生率为 92 .9% ,完全缓解 (CR)率为 7.1% ;sorcin-和mdr1-组患者临床耐药发生率为 8.6 % ,CR率为91.4 %。结论　白血病患者的sorcin和mdr1基因共表达与其临床耐药和预后密切相关 ,可作为检测临床耐药和判断预后的有效手段之一。     

Relevance of mdr1 gene expression in acute myeloid leukemia and comparison of different diagnostic methods.

In an attempt to determine the incidence and clinical relevance of mdr1 gene expression in acute myeloid leukemia (AML), we examined 126 specimens obtained from adult patients with de novo AML by slot blot and immunocytochemistry. We found a high incidence of mdr1 gene expression in newly diagnosed patients (27% by immunocytochemistry and 43% by slot blot). No difference was observed between newly diagnosed patients and relapsed patients. However, patients with resistant disease showed statistically higher incidence of mdr1 gene expression compared to the untreated and relapsing patients (60% versus 27% by immunocytochemistry, p 0.005; and 73% versus 45% by slot blot, p less than 0.05). The expression of mdr1 gene correlated significantly with clinical drug resistance: 62% of patients positive for mdr1-mRNA and 68% of patients positive for P-glycoprotein (P-gp) eventually developed resistance to chemotherapy, while this was the case for a lower percentage of patients who did not express mdr1 gene (only 23% by slot blot analysis, p = 0.0052, or 24% by immunocytochemistry, p = 0.0009). A combined parameter, mdr1-mRNA/P-gp, had a very high prognostic value in terms of specificity and sensitivity. All nine patients (100%) who were mdr1-mRNA+/P-gp+ progressed to clinical drug resistance afterward, whereas 11 of 13 (85%) patients who were mdr1-mRNA-1 P-gp- entered complete remission and only two patients later developed drug resistance (p = 0.0005). It could thus be used as a reliable parameter in clinical settings.     

Quantitative Analysis of Multidrug-resistance mdr1 Gene Expression in Head and Neck Cancer by Real-time RT-PCR

Progression of head and neck cancer is always associated with changes of gene expression profile. In this study, we characterized the expression of multidrug‐resistance mdr1 gene, which may play a role in tumorigenesis and multidrug resistance in head and neck cancer. A TaqMan one‐step RT‐PCR with a linear range for quantification across at least a 5 log scale of concentration of mdr1 mRNA was designed to determine the level of mdr1 expression in 50 pairs of normal vs. malignant head and neck tissues. Both the absolute level of mdr1 mRNA in tumor (T) and the relative mdr1 expression between tumor and its normal counterpart (T/N) were measured and their associations with several clinical variables were analyzed. Among the clinical variables analyzed, only the clinical stage of tumor was found to be associated with mdr1 expression. The distribution of clinical stages differed significantly (P<0.01) among the 27 specimens that had a T/N>1, with 59.3%, 22.2%, 14.8% and 3.7% in stage IV, III, H, and I, respectively. In addition, 76% of stage IV and 75% of stage III tumors had a T/N>1 compared to 25% of stage II and 20% of stage I tumors (P=0.004). Multivariate logistic regression analysis also indicated a significant difference of mdr1 expression between the early (I and II) and advanced (III and IV) stages tumors. The adjusted odds ratios (95% confidence intervals) were 1.477 (1.084–2.012) and 1.001 (1.000–1.002) for T/N (P<0.05) and T (P<0.05) treated as continuous variables, and 15.521 (3.414–70.550) and 5.074 (1.154–22.311) for T/N (P<0.001) and T (P<0.05) treated as binary variables, respectively. Taken together, the data presented here indicated that real‐time RT‐PCR provides a quantitative way to monitor mdr1 gene expression. The differential expression of mdr1 between early and advanced stages of head and neck cancer may shed light on the process of tumorigenicity and offer clues to the planning of new treatments.     

Pgp蛋白在白血病细胞中的表达及预后意义分析

目的 :应用 PHMA0 2单抗对 AL 患者 Pgp的表达进行检测 ,并对该单抗的特异性、检测结果与临床符合率以及预后的准确性进行评估。方法 :应用间接免疫荧光法、RT- PCR法检测了 10 1例 AL 患者 ;用医学统计软件分析数据。结果 :难治和复发组的 MDR+表达率 (5 2 .9% )明显高于初诊组 (19.2 % ) (P<0 .0 1) ;难治和复发组的 CR率 (2 1.4% )明显低于初诊组 (6 8.7% ) (P<0 .0 1) ;初诊组中 MDR+表达患者的 CR率 (2 1.4% )明显低于MDR- 患者 (81.1% ) (P<0 .0 1) ;PHMA0 2单抗的检测结果与国外同型单抗 JSB- 1的平行检测结果呈正的直线相关 (P<0 .0 5 ) ,与 RT- PCR的检测结果具有相关性 (P<0 .0 1)。结论 :PHMA0 2单抗的检测结果与临床有较好的符合率 ,可在临床应用。 MDR- 表达的初诊患者预后较好 ,CR率较高 ;MDR+ 表达的复发和难治的 AL患者 ,预后差 ,CR率极低 ,这两组患者的 Pgp表达具有一定的预后价值。