黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究

目的 研究黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响.方法 采用ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验及迟发性变态反应试验测试黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide APS)对小鼠细胞免疫功能的影响;采用抗体生成细胞检测及半数溶血值实验测试黄芪多糖对小鼠体液免疫的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验测试黄芪多糖对小鼠非特异性免疫的影响.结果 黄芪多糖能明显提高小鼠的足跖肿胀度、脾脏生成抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功能,黄芪多糖对小鼠淋巴细胞增殖能力无明显影响.结论 黄芪多糖对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及巨噬细胞功能均有明显的增强作用.     

黄芪毛状根与栽培黄芪中多糖的比较

目的：比较栽培黄芪和生物技术培养的黄芪毛状根总多糖的组成与含量。方法：采用脱脂、水煎、醇沉、脱蛋白、透析、冷冻干燥的方法,用硫酸－苯酚法进行二者中多糖的含量比较,采用高效液相凝胶渗透色谱法对黄芪状根多糖为1．85％。结论：黄芪毛状根多糖低于栽培黄芪中多糖含量。     

黄芪生脉多糖两种给药途径对小鼠免疫功能的影响

目的观察黄芪生脉多糖两种给药途径对小鼠免疫功能的影响。方法取正常ICR小鼠、免疫功能低下ICR小鼠(皮下注射环磷酰胺造模),采用腹腔注射和灌胃两种给药途径,进行小鼠免疫器官重量、碳粒廓清速率、血清溶血素抗体生成水平、抗体形成细胞测定试验。结果黄芪生脉多糖(0．41 g/kg)腹腔注射,能明显升高正常小鼠和环磷酰胺致免疫功能低下小鼠的单核巨噬细胞的吞噬能力、血清溶血素HC_(50)、抗体形成细胞数、脾脏指数(P＜0．05～0．01)；而黄芪生脉多糖(0．82 g/kg)灌胃给药对血清溶血素水平、抗体形成细胞数、巨噬细胞的吞噬指数均无明显影响。结论黄芪生脉多糖采用腹腔注射的给药方式能增强小鼠的免疫功能,而灌胃给药对免疫功能基本无影响。     

黄芪毛状根药理作用的研究

目的 :了解黄芪毛状根的药理作用。方法 :口服给药 ,观察黄芪毛状根对D 半乳糖所致衰老小鼠记忆力的影响及抗氧化作用 ;制备大鼠肾缺血再灌注模型 ,测定黄芪毛状根对肾组织超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛 (MDA)含量的影响 ;测定环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠口服黄芪毛状根后NK细胞活性。结果 :黄芪毛状根能改善衰老小鼠记忆力 ,提高脑、肝组织SOD活性 ,降低肝脏MDA含量 ;能降低缺血再灌注大鼠肾MDA含量及血肌酐浓度 ;能提高免疫功能低下小鼠NK细胞活性。结论 :与天然黄芪相似 ,黄芪毛状根具有抗衰老、抗过氧化及免疫调节作用。     

当归补血汤粗多糖及其单味药多糖对正常小鼠免疫功能的影响

目的 观察当归补血汤多糖及单味药多糖对正常小鼠免疫功能的影响。方法：用正常小鼠进行实验。结果：当归补血汤多糖及相应剂量的黄芪多糖可显著提高正常小鼠腹腔巨噬功能，促进溶血素及溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化。结论：当归补血汤多糖及黄芪多糖有较好的免疫兴奋作用。     

不同分子量段黄芪多糖对整体及黏膜免疫功能的影响

目的:研究具有不同重均相对分子质量的黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)免疫调节作用的差异。方法:环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)25 mg.kg-1 sc给予复制整体免疫低下小鼠模型,重均相对分子质量分别为(157.7,69.9,22.4,13.2,1.4)×103的APS按139 mg.kg-1连续ig给予14 d,分别检测小鼠血清溶血素水平、2,4二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠迟发型超敏反应耳肿胀度、腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数,以表征不同相对分子质量段样品对细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫的影响;CY按50 mg.kg-1sc给予复制黏膜免疫低下小鼠模型,同上药物处置,检测小肠和肺灌洗液中分泌型免疫球蛋白A(secreted immunoglobulin A,sIgA)水平,小肠Peyer’s结变化,以表征样品对黏膜免疫的影响。结果:总APS及157.7×103,69.9×103 APS均可不同程度提高吞噬指数、吞噬率、耳肿胀度和溶血素水平,促进肠道及肺sIgA分泌,且在同等剂量下,具有较大相对分子质量的157.7×103 APS作用强于总APS及较小相对分子质量的组分。结论:较大相对分子质量APS可促进免疫低下小鼠整体及黏膜免疫功能,可能是黄芪免疫药理作用的主要物质基础。     

黄芪多糖对机体细胞免疫应答影响的研究进展

黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根,其味甘,性微温,具有补气升阳、益卫固表、利尿脱毒、敛疮生肌等功效[1],是一种常见的扶正中药.黄芪多糖(APS)是黄芪中重要的天然有效成分,具有增强免疫功能、提高巨噬细胞活性、抑制EAS、双向调节血糖的作用[2-4].     

山楂多糖对小鼠免疫功能的影响

目的：观察山楂多糖对小鼠免疫功能的影响。方法：水提醇沉方法制备山楂多糖，于小鼠剂量为100、200、400mg／kg，观察其对小鼠免疫器官重量，腹腔巨噬细胞吞噬功能，溶血素形成和溶血空斑形成及淋巴细胞转化功能的影响。结果：山楂多糖能增加小鼠胸腺、脾脏指数，提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，促进溶血素和溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化。结论：山楂多糖有增强小鼠免疫功能的作用。     

当归补血汤多糖及其单味药多糖对正常小鼠免疫功能的影响

当归补血汤多糖灌服 ,能显著促进正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能 ,促进溶血素和溶血空斑生成 ,促进淋巴细胞转化 ;黄芪多糖具有类似作用而当归多糖作用不显著。     

六种多糖对小鼠免疫功能调节作用的比较

目的：比较枸杞多糖、猪苓多糖、茯苓多糖、灵芝多糖、黄芪多糖、当归多糖六味中药多糖对小鼠免疫功能的影响。方法：巨噬细胞吞噬试验、α-醋酸荼酚酯酶染色计数ANAE^ T淋巴细胞百分率及测定小鼠血清溶血素判断B细胞功能。结果：六种中药多糖能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数，提高小鼠血液ANAE^ T淋巴细胞百分率，促进B细胞产生抗体，但对免疫功能的调节能力不同。结论：枸杞多糖加强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力最强，灵芝多糖显提高小鼠外周血中ANAE^ T淋巴细胞数量而上调T细胞功能，茯苓多糖增强B细胞产生抗体的能力最强。     

蒙古黄芪和膜荚黄芪水溶性蛋白表达

目的:蒙古黄芪和膜荚黄芪都为药用黄芪,二者亲缘关系近,成分相似,药用价值尚未区分。该研究旨在建立蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱,了解两种黄芪之间存在的差别。方法:样品采用水超声提取和丙酮沉淀的方法得到黄芪水溶性蛋白成分,质谱级胰酶酶解后的肽段经nano ESI-LC-MS/MS分析,采用Proteome Discoverer 1. 4软件比对豆科蛋白数据库鉴定蛋白,再使用非标记定量软件SIEVE分析蒙古黄芪与膜荚黄芪水溶性蛋白质表达的差异。最后运用生物信息学方法分析2种黄芪共有蛋白的分类、分子功能、参与的生物过程和信号通路。结果:蒙古黄芪鉴定特异性蛋白有920个,膜荚黄芪鉴定的特异性蛋白有717个,2种黄芪中共同表达的蛋白有472个,其中二者的差异表达蛋白有21个,如PR-10蛋白,NDK-1蛋白,谷蛋白A2,磷脂酶D等蛋白在两种黄芪中差异表达。蒙古黄芪高表达蛋白14个,膜荚黄芪高表达蛋白7个。结论:蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱存在显著差异,特异性蛋白、差异表达蛋白和共同表达的蛋白可为今后两种黄芪的鉴别、药理作用机制的研究和寻找作用靶点提供参考。     

蒙古黄芪与膜荚黄芪种子形态特征及其鉴别方法的研究

目的为黄芪种子鉴定提供方法,为按中药材GAP原则制定相关标准操作过程(SOP)提供基础研究资料。方法采用肉眼直接观察、光学显微镜观察和电子显微镜进行扫描观察,比较蒙古黄芪和膜荚黄芪两种药用黄芪的种子形态特征和微观结构;通过萌发试验,比较二者的差异。结果通过肉眼和光学显微镜观察,两种黄芪种子的形态差异不明显,在电子显微镜下观察,两种黄芪种子的萌发孔形状、种脐和种皮的微观结构有明显差异;蒙古黄芪较膜荚黄芪种子硬实率高,萌发不整齐,萌发高峰滞后。结论在电子显微镜下能够对两种黄芪种子准确地做出鉴定,种脐、萌发孔、种皮的微观结构可作为鉴别两种黄芪种子的指标;种子硬实率和萌发动态规律可用于两种黄芪种子的辅助鉴别。     

蒙古黄芪的化学成分研究

目的:研究豆科植物蒙古黄芪的醇提取物的化学成分。方法:采用各种色谱技术对蒙古黄芪化学成分进行分离纯化,并通过理化性质和各种现代波谱技术来确定其结构。结果:从蒙古黄芪醇提物中分离得到了12个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1),胡萝卜苷(2),芒柄花素(3),千层纸素-A(4),汉黄芩素(5),毛蕊异黄酮(6),腺嘌呤核糖核苷(7),毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(8),(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷(9),黄芪皂苷Ⅱ(10),异黄芪皂苷Ⅱ(11),D-3-甲氧基-手-肌醇(12)。结论:化合物4和5为首次从蒙古黄芪中分离获得。     

黄芪病虫害种类及为害情况调查

目的 :摸清为害黄芪的病虫害种类及其为害情况 ,为研究其防治方法提供依据。方法 :采用多点调查 ,点面结合的方式进行研究。结果 :共发现黄芪病害有7种、虫害有 49种。结论 :为害较严重的病害有白粉病和根腐病2种 ,为害较严重的虫害有小地老虎、芫菁及蚜虫等类害虫。     

膜荚黄芪3个苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与表达分析

目的克隆膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因家族成员,分析它们在不同组织中的表达模式与毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量变化,为揭示膜荚黄芪毛蕊异黄酮葡萄糖苷积累的分子机制提供理论依据。方法以膜荚黄芪总RNA为模板,采用同源克隆法和RACE技术克隆PAL基因并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术测定PAL基因在根、茎、叶中的表达量;采用HPLC法测定了根、茎、叶中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。结果从膜荚黄芪中克隆了3个PAL基因Am PAL1、Am PAL2、Am PAL3,Genbank登陆号分别为KY086279、KY086280、KY086281。Am PAL1、Am PAL2和Am PAL3的全长c DNA长度分别为2 508、2 401、2 498 bp,均含有2 157 bp的完整开放阅读框,编码718个氨基酸。蛋白质序列分析表明,它们均含典型的PAL酶活中心序列,与植物PAL蛋白同源,且与同属于豆科的植物PAL蛋白相似性最高。系统进化树表明,Am PAL1与Am PAL2和Am PAL3聚为不同的亚类。实时荧光定量PCR分析发现,这些基因在根、茎、叶中表达模式不同,在检测的所有组织中Am PAL1的表达量最高、Am PAL2的表达量次之、Am PAL3的表达量最低,只有Am PAL2的表达水平与毛蕊异黄酮葡萄糖苷积累变化一致(即根茎叶)。结论从膜荚黄芪中克隆的Am PAL1、Am PAL2和Am PAL3是典型的PAL基因家族成员,推测它们在膜荚黄芪各组织发育过程中起着不同的作用,且Am PAL2可能参与了毛蕊异黄酮葡萄糖苷的积累。     

黄芪对心房收缩力及心房钠尿肽分泌的影响

目的：观察黄芪对家兔心房收缩力及心房钠尿肽分泌的影响。方法：采用家兔离体心房灌流模型，处理0.002,0.002 5,0.003 g·L^-1的黄芪水提取液观察家兔心房收缩力及心房钠尿肽分泌的变化，并选择最佳剂量探讨其作用机制。心房钠尿肽含量的测定采用放射免疫法。结果：3个剂量的黄芪水提取液使离体家兔心房每搏输出量由给药前的(694.70±0.01) μL·g^-1分别增加到(1 003.00±8.80)，(1 120.00±17.71)，(1 195.00±8.21) μL·g^-1(与给药前比较，分别P<0.05；P<0.01及P<0.001)；并使心房搏动压由给药前的(0.82±0.01) kPa分别增加至(0.86±0.01)，(0.96±0.01)，(1.02±0.01) kPa(与给药前比较，分别P<0.01；P<0.001及P<0.001)，且呈现浓度依赖性特征，表明黄芪可增加家兔心房收缩力。0.002 5 g·L^-1黄芪水提取液显著抑制心房钠尿肽的分泌［给药前心房钠尿肽含量为(18.74±0.02 ) ng·min^-1·g^-1，给药后为(12.97±0.14) ng·min^-1·g^-1；与给药前比较P<0.001］。L-型Ca²⁺通道阻断剂硝苯地平(1.0 μmol·L^-1)及逆向Na⁺-Ca²⁺交换体抑制剂KB-R 7943(10.0 μmol·L^-1)阻断了黄芪增强心房收缩力的作用，但均未能改变黄芪对心房钠尿肽分泌的抑制效应。结论：黄芪主要通过影响L-型Ca²⁺通道及Na⁺-Ca²⁺交换体增强心房收缩力，并对心房钠尿肽分泌具有抑制性调节作用。     

蒙古黄芪叶绿体全基因组特征解析及亲缘性分析

目的 以蒙古黄芪Astragalus membranaceus var. mongholicus为材料,解析其叶绿体基因组的序列特征,并进行系统发育分析。方法 利用Illumina NovaSeq测序平台对蒙古黄芪叶绿体全基因组进行测序,完成其组装、注释、特征分析,构建系统发育树。结果 蒙古黄芪叶绿体基因组全长为123 349 bp,GC含量为34.09%,由于缺失反向重复IR区,Circos图呈现出非典型四分体结构,属于IRLC群体。获得注释基因109个,其中蛋白编码基因76个,rRNA基因4个,tRNA基因29个。蒙古黄芪叶绿体基因组的密码子偏好性较弱,密码子偏向使用A碱基和U碱基。MISA检测出263个SSR位点,以A/T重复为主;叶绿体全基因组比较分析可知17种豆科植物叶绿体基因组的基因区间组成差异较小;但trnF-GAA～trnTUGU、trnfM-CUA～psbC、trnE～trnD、psbM～rpoB、ycf1和ycf2等编码区存在差异性;系统发育树显示,蒙古黄芪与胶黄芪A. gummifer聚为一类,与阿纳卡黄芪A. nakaianus、膜荚黄芪A. membranac...     

纳米黄芪粉的显微结构和有效成分溶出的研究

目的对黄芪药材进行纳米级粉碎的研究。方法采用HSCS超细粉碎机进行纳米粉碎,Zeta PALS光散射粒度分布及电位分析仪进行粒度分析和Zeta电位测定,并采用显微观察法对药物组织结构进行显微特征的观察。结果纳米黄芪悬浮液中固体颗粒平均粒径为81.7 nm,大部分细胞壁被破碎,黄芪皂苷和多糖直接进入水中。结论黄芪纳米化后可促进有效成分的溶出。     

膜荚黄芪叶中三萜皂苷类成分的分离与鉴定

目的：研究膜荚黄芪叶中的三萜皂苷类成分。方法：采用硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)等色谱方法对膜荚黄芪叶的化学成分进行分离,通过一维核磁共振氢谱(¹D-NMR)和²D-NMR法分析鉴定化合物。结果：从膜荚黄芪叶提取物中共分离出15个化合物,分别鉴定为黄芪叶苷B(1)、黄芪叶苷L(2)、cyclounifolioside D(3)、3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃木糖基]-6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-24-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-16-乙酰基-3β,6α,16β,24(S),25-五羟基环菠萝蜜烷(4)、黄芪叶苷K(5)、黄芪叶苷A(6)、astraverrucinⅠ(7)、cycloaraloside A(8)、黄芪叶苷D (9)、astralanosaponin D (10)、大豆皂醇E (11)、3β,21α,24-三羟基-齐墩果-12-烯(12)、3β,22β,24,29-四羟基齐墩果-12-烯(13)、豌豆皂苷Ⅰ(14)、大豆皂醇B-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-...     

黄芪miRNA的预测及其干旱表达模式分析

目的利用生物信息学手段预测黄芪Astragalus membranaceus的miRNA及其靶基因,应用定量PCR分析其干旱胁迫表达模式,为黄芪miRNA研究奠定基础。方法下载公共核酸数据库中的黄芪高通量测序序列,使用Trinity软件拼接获得转录本数据。利用生物信息学预测方法进行黄芪miRNA及其靶基因的预测,并对靶基因进行功能分类分析。利用茎环引物荧光定量PCR方法验证miRNA的存在,并分析miRNA在干旱胁迫下的表达模式。结果序列拼接获得88 263条黄芪转录组数据。使用这些数据预测到分属于17个家族的17个miRNA序列以及相应的茎环结构前体。这些miRNA靶向的145个基因主要参与基因转录调控、物质代谢、信号转导、胁迫应答和蛋白翻译后修饰等生物学过程。随机选取8个miRNA进行茎环引物荧光定量PCR验证,其干旱逆境表达模式分析表明miR2118和miR166可能参与了黄芪的干旱胁迫应答。结论预测的黄芪miRNA、靶基因以及干旱应答miRNA,为理解miRNA在黄芪中的生物学功能提供了重要数据。