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目的建立并优化当归的ISSR-PCR反应体系,并进行引物筛选。方法以当归基因组DNA为模板,通过单因素实验研究了ISSR反应体系中主要成分(Taq DNA聚合酶、d NTP、模板、引物)以及热循环参数(退火温度、退火时间、变性时间、延伸时间、循环数)对扩增结果的影响。结果找出了各自的最适条件,建立了适合当归ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在20μl反应体系中,内含10×Taq Buffer(含1.5 mmol·L-1Mg Cl2)、1.25U Taq DNA聚合酶、250μmol·L-1d NTP、40 ng模板、0.25μmol·L-1引物。扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸150 s,循环结束后72℃延伸7 min,-4℃保存。结论以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出17条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。该研究为当归药材DNA鉴定、种质资源研究以及优良品种选育奠定了基础。 相似文献
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目的:建立与优化药用植物开口箭ISSR-PCR实验反应体系.方法:以开口箭DNA为材料,分析了Mg2+,dNTP,引物及Taq DNA聚合酶浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响.结果:确立了稳定的、可重复的开口箭ISSR最佳反应体系,即在10 μL的PCR反应体系中,含1 × buffer,2 U Taq DNA聚合酶,2 mmol·L-1 MgCl2,0.2 mmol·L-1 dNTP,0.75 μL引物.结论:从80条简单序列重复区间(ISSR)通用引物中筛选出了16条条带清晰稳定的引物,设置了不同的引物退火温度,为进一步进行开口箭的遗传多样性分析的研究奠定了基础. 相似文献
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目的分析青天葵药材中挥发油的化学组分。方法采用气-质联用技术系统分析青天葵中挥发油的成分,每一组分根据峰面积归一法计算其含量。结果共鉴定出55种成分,占总挥发油含量的97.1%,其中6,10,14-三甲基-2-十五烷酮(2-Pentadecanone,6,10,14-trimethyl)含量最高,达13.55%。结论6,10,14-三甲基-2-十五烷酮(2-Pentadecanone,6,10,14-trimethyl)可作为同属植物鉴别的依据。 相似文献
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青天葵乙酸乙酯部位化学成分的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:对广西特产药材青天葵乙酸乙酯部位进行化学成分的研究。方法:采用硅胶柱层析,从青天葵乙酸乙酯部位中分离得到了5个化合物,并根据理化常数和光谱分析,对其进行结构鉴定。结果:5个单体化合物的结构分别为:正亮氨酸(norleucine,结晶Ⅰ)、24(S/β)-dihydrocycloeucalenol-(E)-p-hydroxy cinnamate(结晶Ⅱ)、鼠李柠檬素又名泻鼠李素(rhamnocitrin,结晶Ⅲ)、鼠李秦素又名甲基鼠李黄素(rhamnazin,结晶Ⅳ)、胡萝卜苷(dau-costerol,结晶Ⅴ)。结论:以上五种化合物首次从该植物中分离得到。 相似文献
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目的研究青天葵Nervilia fordii全草的化学成分。方法采用硅胶柱层析、凝胶柱层析和反相硅胶柱层析等色谱方法对青天葵的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从青天葵的甲醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为鼠李素(1)、鼠李秦素(2)、鼠李柠檬素(3)、鼠李秦素-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、鼠李柠檬素-4’-O-β-D-葡萄糖苷(5)、鼠李柠檬素-3-O-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-葡萄糖苷(6)、沙苑子苷(7)、豆甾醇(8)、豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(9)、酵母甾醇(10)。结论化合物9为首次从该植物中分离得到。 相似文献
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目的:优选出青天葵提取液最佳脱色工艺。方法:以青天葵中提取液的氨基酸损失率和脱色率为考察指标,在对pH、活性炭用量、脱色温度及脱色时间进行单因素考察的基础上,采用正交试验设计对工艺参数进行优选,并进行验证试验。结果:最佳脱色工艺为pH 3.0,活性炭加入量为0.01 g.mL-1,脱色温度为40℃,脱色时间为20 min。结论:优选得到的提取工艺稳定、可行。 相似文献
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目的:建立麻花秦艽的简单重复序列区间-聚合酶链反应(ISSR-PCR)最佳反应体系,为该药材的种质鉴定及遗传多样性等研究提供参考。方法:运用单因素试验和正交试验优选麻花秦艽的ISSR-PCR反应体系中DNA模板用量,Mg2+浓度,dNTPs浓度,TaqDNA聚合酶用量和引物浓度等参数,确定麻花秦艽每条引物的最佳退火温度。结果:ISSR-PCR最佳反应体系(20μL)为模板DNA1μL(36mg·L-1),10×PCR缓冲液(含Mg2+)1.75μL(20mmol·L-1),dNTPs0.8μL(10mmol·L-1),Taq酶0.1μL(0.5%)及引物0.6μL(10mmol·L-1);筛选出12条多态性高、扩增稳定的ISSR引物,UBC-809引物的最佳退火温度55.5℃。扩增出的7条带中多态性带为6条,多态性位点比率85.71%。结论:建立的麻花秦艽ISSR-PCR反应体系稳定可靠,位于500bp处的条带为非多态性条带,可作为该种属的特征性条带。 相似文献
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目的:建立一种青天葵药材中总黄酮含量测定的方法,并考察14批青天葵药材中总黄酮的含量.方法:以芦丁为对照品,AlCl3-HAc-NaAc(pH 5.5)为显色体系,采用紫外分光光度法于最大吸收波长405 nm处测定.结果:芦丁在7.28 ~30.80 mg·L-1线性关系良好(r=1.000),总黄酮平均回收率为100.73%,RSD 1.92%.14批青天葵药材中,总黄酮含量范围为1.25% ~3.12%.结论:该方法操作简便、快速、准确、稳定可靠,可用于青天葵药材中总黄酮的含量测定. 相似文献
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目的:优化蒲公英ISSR-PCR反应体系及扩增程序;筛选适合的引物,并确定最佳退火温度.方法:采用CTAB法提取蒲公英叶片的DNA,利用正交试验设计,从Taq酶MIX、模板DNA、引物3种因素2个水平,对蒲公英ISSR-PCR反应体系进行考察;采用单因素实验对其扩增程序进行优化.结果:确立了适合于蒲公英的最佳ISSR-PCR反应方法,即在25 μL反应体系中,内含Taq酶MIX 15 μL(1.25 UTaq DNA聚合酶,1.8 mmol·L-1 Mg2+,dNTPs各0.24 mmol·L-1),0.3 μmol·L-1引物,5 ng模板.在此基础上,从50条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.结论:采用单因子试验和正交设计方法可以快速建立ISSR-PCR反应体系,经过验证,证明该体系稳定可靠,可用于蒲公英遗传分析. 相似文献
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目的:首次对川产道地药材川牛膝表观遗传多样性进行研究,建立并优化川牛膝甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)最佳反应体系。方法:以川牛膝苗期叶片为材料,利用正交试验设计对川牛膝MSAP反应体系中预扩增和选择性扩增中关键影响因素进行考察,建立川牛膝MSAP反应最佳体系。结果:川牛膝MSAP最佳反应体系为:酶切体系(20 μL),300 ng DNA、1.5 μL EcoRI、1.5 μL HpaII或1.5 μL MspI(HpaII);连接体系(25 μL):15 μL酶切产物、1 μL EcoRI adaptor、1 μL HpaII/MspI adaptor、0.2 μL T4连接酶;预扩增体系(25 μL):连接产物1 μL、rTaq酶1 U、引物分别1.5 μL、dNTP 2 μL;选择性扩增体系(25 μL):预扩产物稀释50倍、rTaq酶1 U、引物1.5 μL、dNTP 3 μL,并运用优化后的体系,最终从川牛膝MSAP的256对引物中筛选出有效引物6对。结论:优化后的体系保证了稳定的图谱、清晰的条带,筛选出的6对引物组合特异性好,能够用于后续川牛膝DNA甲基化相关实验研究,同时,为其他药用植物MSAP分析提供了参考。 相似文献
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目的:采用星点设计-效应面法优选青天葵中总黄酮的提取工艺.方法:采用星点设计进行实验,以乙醇体积分数、乙醇倍量、提取时间为自变量,总黄酮含量为因变量,对各水平进行多元线性回归及二项式拟合,通过效应面法优化工艺参数,并对预测值和实测值进行比较分析.结果:建立的数学模型复相关系数较高,指标与因素的关系适合采用二项式方程拟合(R2 =0.987 0),验证试验结果与模型预测值偏差较小,确定最优提取工艺为30倍量65%乙醇提取2次,每次75 min.结论:该优选工艺简便,可预测性较优,适用于青天葵中总黄酮的开发利用. 相似文献
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采用GPY培养基对格木内生真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus菌株进行培养发酵,发酵产物经冻融处理后分离得到菌液与菌丝体.菌丝体经乙醇提取后,分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,根据肿瘤细胞毒活性筛选结果,选择菌体的乙酸乙酯萃取物进行化学成分研究.运用硅胶色谱柱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术,采用波谱学方法从中分离鉴定了5个二酮哌嗪化合物,其结构分别为cyclo-(R-Pro-R-Phe)(1),cyclo-( trans-4-OH-D-Pro-D-Phe)(2),cyclo-(R-Tyr-S-Ile)(3),cyclo- (R-Phe-S-Ile)(4),cyclo-(R-Val-S-Tyr) (5). 相似文献
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目的:研究宿半夏SRAP-PCR分子标记技术的优化体系.方法:采用L16(54)正交设计对宿半夏SRAP-PCR反应体系进行了5因素(dNTPs,Mg2+,模板DNA,引物,Taq酶)4水平优化筛选.结果:半夏SRAP最适合的正向引物是5’-TGAGTCCAAACCGGAAG-3’,反向引物为5’-GACTGCGTACGAATTACG-3’.优化的反应体系为25 μL反应体系中含有70 ngDNA模板,0.9μmol·L-引物,0.2 mmoL·L-1 dNTPs,1.5~2.0mmol· L-1Mg2+,2.0 UTaq酶.结论:宿半夏SRAP-PCR体系的建立为今后构建半夏SRAP遗传图谱奠定了基础. 相似文献
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传统中药金钱草ISSR-PCR反应体系的正交优化研究 总被引:1,自引:1,他引:1
建立稳定、可靠的金钱草ISSR-PCR反应体系,为金钱草遗传多样性分析、优良品种选育、药材分子鉴定奠定基础。该研究在7水平单因素实验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,应用SPSS 19.0进行方差分析,对影响反应体系的5个主要因素在4个水平上进行优化。利用优化的反应体系,筛选引物最适退火温度,以23份不同产地金钱草材料检测体系稳定性。结果显示模板DNA,引物,dNTP,Mg2+,Taq酶5个因素对金钱草ISSR-PCR反应结果均有极显著影响,影响大小依次为引物>Taq酶>模板DNA>Mg2+>dNTP,确定最优反应体系为总体积25 μL,模板DNA 60 ng,引物0.3 μmol·L-1,dNTP 0.2 mmol·L-1,Mg2+ 1.8 mmol·L-1,Taq酶1.25 U。经不同产地样品检测,该优化体系稳定、可靠。该研究为其他物种ISSR-PCR体系的优化提供参考。 相似文献
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M. Maldini S. Sosa P. Montoro A. Giangaspero M.J. Balick C. Pizza R. Della Loggia 《Journal of ethnopharmacology》2009