OX40-OX40L信号对ApoE－/－小鼠颈动脉斑块中亲环素A表达的影响

目的 观察OX40-OX40L信号对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠颈动脉粥样硬化斑块内亲环素A（CyPA）表达的影响。方法 采用颈动脉硅胶圈植入法快速诱导ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成,48只雄性ApoE^-/-小鼠随机分成抑制组、刺激组、对照组,刺激组腹腔注射鼠抗OX40 200 μg,抑制组腹腔注射鼠抗OX40L 200 μg,对照组腹腔注射IgG2b 200 μg,均每周一次,连续6周。分别采用免疫组织化学、Western blot 和qRT-PCR检测小鼠颈动脉斑块内CyPA蛋白和mRNA的表达。结果 ApoE^-/-小鼠颈动脉置管并6周高脂饮食后,对照组可见斑块形成,部分内膜和中膜增厚,弹力板变形,刺激组颈动脉斑块面积与对照组相比显著增加,而抑制组颈动脉斑块面积明显减少。与对照组相比,刺激组颈动脉斑块内CyPA蛋白和mRNA表达明显增强,而抑制组颈动脉斑块内CyPA蛋白和mRNA表达明显减弱。结论 OX40-OX40L信号能调控ApoE^-/-小鼠颈动脉斑块中CyPA的表达。     

内质网应激介导的凋亡在糖尿病ApoE－/－小鼠内膜钙化中的作用

目的　观察内质网应激（ERS）介导的凋亡在糖尿病动脉粥样硬化（As）性载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠内膜钙化启动中的作用。方法　6周龄雄性ApoE^－/－小鼠,给予腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40　mg/（kg·d）,连续5天。2周后血糖水平＞3000　mg/L的小鼠纳入本研究,并由普通饮食转为半合成型高脂饮食（HFD）,同时给予尾静脉注射羧甲基赖氨酸（CML）10　mg/（kg·d）,连续4个月。在转换高脂饮食和给予CML注射后的0个月（0月组,n＝10）、2个月（2月组,n＝10）和4个月（4月组,n＝10）时对小鼠实施安乐死,进行相关检测与分析。结果　病理形态学研究证实STZ-CML-HFD联合处理2个月后,糖尿病ApoE^－/－小鼠可形成早期的As斑块,4个月后形成典型的晚期As内膜钙化。主动脉壁平滑肌细胞固有表型SM22α逐渐丢失,而成骨表型骨形成蛋白2、核心结合因子α1、碱性磷酸酶的表达与活性则增加。主动脉壁CML沉积信号和糖基化终产物受体（RAGE）表达主要局限于粥样斑块内。Western　blot检测显示,随着糖尿病ApoE^－/－小鼠病程的延长,主动脉壁CML、RAGE、CD36表达显著上调,而胆固醇外流调控子三磷酸腺苷结合盒转运体A1先出现代偿性增加继而又减少至基线附近。TUNEL染色与Cleaved　Caspase-3免疫组织化学染色发现,随着糖尿病As的演进,斑块内细胞凋亡率明显增加。定位分析显示ERS伴侣分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EPB同源蛋白（CHOP）主要分布在As病变区的脂质池内,而且相对于CHOP,4月组GRP78的分布位置似乎更倾向于脂质池的基底部。Western　blot半定量分析发现,ERS相关指标GRP78、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶、磷酸化eIF2α、活化转录因子4和CHOP的表达随着动物实验时间的延长均呈上调趋势。结论　STZ-CML-HFD联合干预4个月可成功诱导ApoE^－/－小鼠形成糖尿病As钙化。CML/RAGE可能首先启动了斑块ERS介导的凋亡,继而诱发了钙化级联信号。     

化瘀祛痰方通过调节ApoE-/-小鼠胆固醇代谢相关基因表达抗动脉粥样硬化

目的 观察化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠粥样斑块以及胆固醇代谢相关基因的影响,探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化（As）作用及可能的机制。方法 10只C57BL/6/J小鼠作为空白对照组,30只ApoE^－/－小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰组［20 g/（kg·d）］和辛伐他汀组［0.005 g/（kg·d）］。全自动生化分析仪检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）,HE染色观察主动脉结构及动脉粥样硬化程度,油红O染色观察主动脉脂质沉积,RT-PCR和Western blot检测肝脏低密度脂蛋白受体（LDLR）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）及主动脉CD36 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞CD36蛋白表达。结果 与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDLC水平显著升高;HDLC水平显著降低,主动脉管腔中形成较大粥样斑块,管壁形成大量脂质沉积,肝脏LDLR、LCAT 基因表达显著下调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著上调。通过药物干预,与模型组相比,化瘀祛痰组和辛伐他汀组小鼠TC、TG、LDLC水平显著下降,HDLC显著升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和管壁脂质沉积量明显减少,肝脏LDLR、LCAT 基因表达显著上调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著下调。结论 化瘀祛痰方可抑制ApoE^－/－小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血脂及胆固醇代谢相关基因LDLR、LCAT及CD36的表达有关。     

糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型的建立

目的　探讨糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型建立的方法。方法　8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠46只,随机分为对照组、高脂饮食组、链脲佐菌素低剂量组和高剂量组,链脲佐菌素低剂量组和高剂量组分别腹腔注射链脲佐菌素55　mg/kg（连续注射5天）、200　mg/kg（单次注射）。2月后测定空腹血糖、血脂、主动脉根部斑块面积。结果　链脲佐菌素高剂量组出现高死亡率,链脲佐菌素低剂量组血糖、血脂、粥样斑块面积均高于对照组和高脂组（P＜0.01）,高脂组空腹血糖呈轻度升高（7.78±0.67　mmol/L）。结论　以ApoE^-/-小鼠为基础小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素是制备糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型的理想方法,单纯高脂喂养ApoE^-/-小鼠可以导致空腹血糖升高,大剂量单次腹腔内注射链脲佐菌素不宜用于该模型的建立。     

冠心舒通胶囊对ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化斑块内MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的 观察中成药冠心舒通胶囊对高脂饮食喂养ApoE^－/－小鼠主动脉粥样硬化斑块病理变化、人组织型基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响,探讨冠心舒通胶囊对粥样斑块稳定性的影响以及对相关机制进行初步研究。方法 将8周龄雄性ApoE^－/－小鼠30只给予高脂喂养,12周时随机分为：模型组、冠心舒通胶囊高剂量［1.8 g/（kg·天）］组和冠心舒通胶囊低剂量［0.6 g/（kg·天）］组,喂养12周后处死,取主动脉中段,大体标本油红O染色观察斑块面积,冰冻切片后HE染色观察斑块厚度,冰冻切片免疫荧光法检测斑块内TIMP-1、MMP-9表达情况。结果 与模型组相比,冠心舒通胶囊组平均斑块浸润面积减小（P<0.05）,弥漫程度减轻,斑块厚度降低,MMP-9表达减少,而且冠心舒通胶囊高剂量组与低剂量组相比,各项统计指标亦有统计学意义（P<0.05） ,TIMP-1表达未见明显变化。结论 冠心舒通胶囊可以对抗ApoE^－/－小鼠动脉粥样硬化斑块的形成和进展,以及通过降低斑块内MMP-9表达,从而抑制胶原纤维分解,稳定易损粥样斑块。     

miR-31-5p通过靶向抑制胰岛素降解酶发挥促进动脉粥样硬化作用

目的　探讨miR-31-5p是否通过靶向抑制胰岛素降解酶（IDE）发挥促进动脉粥样硬化作用。方法　应用生物信息学和双荧光素酶技术筛选并验证miR-31-5p与IDE　3’UTR靶向结合情况。miR-31-5p　mimic和inhibitor转染THP-1巨噬细胞及THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞;采用miR-31-5p　agomir处理高脂饮食的ApoE^－/－小鼠;Western　blot检测IDE蛋白表达;ELISA检测ApoE^－/－小鼠血浆脂质水平;油红O染色检测小鼠肝脏脂质蓄积及主动脉粥样硬化斑块病变。结果　miR-31-5p靶向结合IDE　3’UTR　并引起转录抑制;miR-31-5p可下调THP-1细胞、小鼠肝脏和主动脉组织中IDE蛋白表达（P<　0.05）,同时引起泡沫细胞和小鼠血清中脂质含量增加（P<　0.05）,小鼠主动脉窦和主动脉树病变面积明显增加（P<0.05）。结论　miR-31-5p可通过靶向抑制IDE发挥促进动脉粥样硬化作用。     

SREBP-1/小凹蛋白1介导烟酸姜黄素酯对ApoE－/－小鼠的抗动脉粥样硬化作用

目的探寻烟酸姜黄素酯对动脉粥样硬化病变的作用及机制。方法50只7周龄ApoE^－/－小鼠,随机分为五组,即对照组、高脂组、辛伐他汀组［5mg/（kg·d）］、烟酸姜黄素酯低剂量组［33mg/（kg·d）］和烟酸姜黄素酯高剂量组（99mg/（kg·d）］,其中对照组给予普通饲料,其他组给予高脂饲料喂养。连续干预6周之后处死动物,检测血清中血脂水平;油红O染色法和HE染色法观察小鼠主动脉斑块及肝脏脂质蓄积;ELISA法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;Westernblot法检测小鼠肝脏中小凹蛋白1和SREBP-1的表达。结果与对照组相比,高脂组血清中总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）升高,高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）降低,主动脉粥样硬化斑块增多。与高脂组相比,烟酸姜黄素酯组小鼠血清中的TC和LDLC明显降低,TNF-α和IL-6水平下降,而主动脉粥样硬化斑块减轻,肝脏脂质减少;烟酸姜黄素酯组肝脏小凹蛋白1蛋白表达高于高脂组,而SPEBP-1蛋白表达低于高脂组。结论烟酸姜黄素酯预防性给药能抑制高脂喂养所致的ApoE^－/－小鼠动脉粥样硬化斑块的形成;机制可能与减少SREBP-1、增加小凹蛋白1蛋白水平,调节肝脏脂质代谢及炎症反应有关。     

红景天甙对间歇性低压低氧诱导的ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化的影响

目的　观察红景天甙对间歇性低压低氧诱导的载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠动脉粥样硬化的影响及其可能机制。方法　30只8周龄健康雄性ApoE^－/－小鼠随机分为常压常氧组、间歇性低压低氧组、低压低氧＋红景天甙组,其中间歇性低压低氧组和低压低氧＋红景天甙组被放置在模拟海拔5000　m低压低氧舱内每天8　h,每组给予相同的普通饮食喂养,低压低氧＋红景天甙组灌服红景天甙30　mg/（kg·d）,而常压常氧组和间歇性低压低氧组灌服等量蒸馏水,连续灌胃12周后取小鼠血样测空腹血糖和血脂,取小鼠主动脉根部,HE染色观察动脉粥样硬化斑块的大小,Masson染色观察斑块内胶原含量,Western　blot检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP-2）蛋白的表达。结果　三组空腹血糖和血脂水平无统计学差异（P>0.05）;与常压常氧组比较,间歇性低压低氧组动脉粥样硬化斑块面积明显增加（P<0.01）,胶原含量明显减少（P<0.01）;与间歇性低压低氧组比较,低压低氧＋红景天甙组斑块面积、MMP-2和MMP-9蛋白水平明显降低（P<0.01）,而斑块内胶原含量、TIMP-2蛋白水平明显增加（P<0.01）。结论　红景天甙能抑制间歇性低压低氧诱导的动脉粥样硬化斑块形成,并提高斑块的稳定性,其机制可能与红景天甙增加斑块内胶原含量有关。     

载脂蛋白E基因缺失促进不成熟髓系细胞的增殖和向单核细胞的极化

目的 研究载脂蛋白E（ApoE）对小鼠骨髓来源的CD11b⁺Gr-1⁺髓系细胞增殖和分化的影响,阐述ApoE基因敲除小鼠（ApoE^－/－）致动脉粥样硬化敏感的炎症相关新机制。方法 6～8周龄的ApoE^－/－小鼠和C57/B6野生型小鼠,采用流式细胞术分析骨髓、脾脏和外周血中CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞、CD11b⁺Gr-1^-单核细胞和CD11b^-Gr-1⁺粒细胞的百分比的变化。应用定量RT-PCR和免疫荧光染色,鉴定ApoE基因和蛋白在CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞的表达。从骨髓分选CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞,体外培养24 h,流式细胞术分析ApoE基因缺失对髓系细胞周期改变的作用。结果 （1）ApoE基因缺失显著增加ApoE^－/－小鼠外周血CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞和CD11b⁺Gr-1^-单核细胞;（2）ApoE基因缺失促进ApoE^－/－小鼠脾脏和骨髓中CD11b⁺Gr-1⁺ 不成熟髓系细胞的增殖;（3）定量RT-PCR和免疫荧光染色证实ApoE在CD11b⁺Gr-1⁺髓系细胞有较高水平的表达;（4）ApoE基因缺失可以促进CD11b⁺Gr-1⁺细胞周期自G₁期进入S期。结论 ApoE基因缺失显著增加ApoE^－/－小鼠脾脏和骨髓中CD11b⁺Gr-1⁺ 不成熟髓系细胞的增殖、巨噬细胞分化和动员。ApoE基因缺失促进CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞增殖与其促进细胞周期进入S期有关。     

间歇性低压低氧促进载脂蛋白E基因敲除小鼠血管重构

目的　探讨高海拔间歇性低压低氧（IHH）环境对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠血管重构的影响。方法　将14只8周龄雌性ApoE^－/－小鼠随机分为对照组和IHH组,IHH组每天在低压舱模拟的4000　m海拔低压低氧环境中放置8　h,持续60天。干预完成后采用Masson染色测定胸主动脉管壁胶原含量,采用免疫组织化学法检测基质金属蛋白酶（MMP）及其组织型基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）的表达情况。结果　与对照组比较,间歇性低压低氧组小鼠主动脉管壁胶原含量显著降低,MMP-9的表达显著增高,而TIMP-2的表达显著降低（P＜0.01）,而MMP-2、MMP-14在两组间没有显著差异（P＞0.05）。结论　IHH可能通过加重ApoE^－/－小鼠血管壁MMP-9和TIMP-2的表达失衡减少血管壁胶原含量,从而促进血管重构。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP