载脂蛋白M对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用

目的:研究人载脂蛋白M(apolipoprotein M,Apo M)对肾透明细胞癌细胞株(ACHN、769-P和786-O)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用装载人Apo M基因的慢病毒和阴性对照组慢病毒分别感染肾癌细胞株,建立Apo M过表达组(Apo M-OE组)和阴性对照组(NC组)细胞模型。应用CCK-8增殖实验和克隆形成实验观察细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:Apo M过表达后,ACHN和769-P过表达组细胞在72h增殖能力显著降低(分别P0.01,P0.05);786-O细胞在48 h表现出明显差异(P0.001)。克隆形成实验表明Apo M过表达后,3株细胞克隆形成能力明显减弱(分别P0.001,P0.01,P0.01)。细胞划痕实验证实ACHN和769-P过表达组细胞在12 h时出现明显差异(分别P0.05,P0.001);786-O细胞在24h时迁移能力明显受抑(P0.01)。细胞侵袭实验发现3株细胞过表达A po M后侵袭能力下降(分别P0.001,P0.001,P0.01)。结论:Apo M过表达后,肾癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱。     

慢病毒介导的赖氨酰氧化酶基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能的影响

目的探讨慢病毒介导的赖氨酰氧化酶(LOX)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能的影响及其机制。方法采用RT-PCR和Western blot检测人正常子宫内膜KLE细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞中LOX mRNA和蛋白的表达。将Ishikawa细胞随机分为对照组(未转染)、NC组(转染阴性对照慢病毒LV-NC载体)和LOX干扰组(转染慢病毒干扰LV-shRNA-LOX载体)。采用RT-PCR检测细胞中LOX mRNA表达,Western blot检测LOX、E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果与KLE细胞相比,Ishikawa细胞中LOX mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05)。与对照组相比,LOX干扰组细胞中LOX mRNA表达、LOX蛋白、N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白、MMP-2蛋白和MMP-9蛋白表达均显著降低(P0.05),细胞侵袭和迁移能力减弱(P0.05),而E-cadherin蛋白表达升高(P0.05);NC组和对照组间以上指标均无显著差异(P0.05)。结论下调LOX表达可通过引起N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9表达下降、E-cadherin表达升高,降低子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能。     

TIGAR调节肺癌细胞的增殖和侵袭能力研究

目的探讨P53下游基因TIGAR在肺癌细胞A549增殖、迁移及侵袭中的作用。方法采用siRNA技术在A549细胞中干扰TIGAR的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,小室法检测细胞迁移,肿瘤细胞侵袭实验检测细胞侵袭,免疫印迹杂交检测相关蛋白水平变化。结果在A549细胞中成功干扰TIGAR后,细胞增殖显著降低(P0.05),细胞迁移和侵袭能力显著减弱,侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达量均下调。结论 TIGAR促进肺癌细胞A549的增殖,并促进细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-135a靶向调控STAT6对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的分析微小RNA-135a(miR-135a)靶向调控信号传导和转录激活因子6(STAT6)对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法选取DU145前列腺癌细胞株,细胞培养后分为空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组,构建miR-135a慢病毒载体,空白组加入常规细胞培养液、生理盐水做空白处理,miR-135a阴性对照组加入miR-135aNC、Lipofectamine 2000试剂行无义序列转染,miR-135a转染组加Hsa-miR-135a、Lipofectamine 2000试剂行细胞转染。鉴定miR-135a转染效率及STAT6mRNA表达量,分析对细胞生物学行为、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax蛋白的影响。结果与空白组相比,miR-135a阴性对照组miR-135a表达量降低,miR-135a转染组miR-135a表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05),说明miR-135a转染成功。空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、增殖、凋亡率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、Bcl-2、Bax蛋白表达比较,差异具有统计学意义(P0.05);与miR-135a阴性对照组相比,miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、细胞增殖率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,细胞凋亡率、TIMP-2、Bax蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-135a对STAT6表达有一定的调控作用,通过调控MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达抑制前列腺癌细胞迁移和侵袭,通过调控Bcl-2、Bax相关蛋白表达抑制前列腺癌细胞增殖,促进其凋亡,为临床前列腺癌靶向治疗提供理论依据。     

慢病毒介导的IGF-1R基因沉默对肝细胞癌的增殖和迁移的影响

目的探讨慢病毒介导的胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对肝细胞癌的增殖和迁移的影响。方法设计并筛选高效特异性胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因的小干扰RNA,构建稳定遗传的慢病毒载体质粒,观察其转染沉默IGF-1R基因的肝癌细胞株Huh7细胞增殖、迁移以及侵袭能力,进一步观察其对PI3K/Akt及Bax/Bcl-2通路的影响。结果采用倒置相差荧光显微镜观察转染效果,镜下可见较多细胞特异性表达GFP绿色荧光,转染率超过80%。scrambled阴性对照组以及空白对照组IGF-1R mRNA及蛋白的相对表达量显著高于LV-IGF-1R-RNAi转染组(P0.01)。成功转染后,培养细胞72 h、96 h,LV-IGF-1R-RNAi转染组增值率显著低于scrambled阴性对照组以及空白对照组(P0.05或P0.01)。侵袭实验和迁移实验均证实细胞明显受到抑制(P0.01)。蛋白免疫印迹法显示,LV-IGF-1R-RNAi转染组p-PI3K、p-Akt及Bcl-2相对表达量显著低于scrambled阴性对照组以及空白对照组(P0.05);而Bax显著高于scrambled阴性对照组以及空白对照组(P0.05)。结论RNAi技术沉默IGF-1R基因表达能显著抑制肝癌细胞株Huh7细胞的增殖、侵袭作用,而这一作用可能与抑制PI3K/Akt通路蛋白磷酸化及调节Bax/Bcl-2通路蛋白表达有关。     

沉默Sema6A基因对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和转移的影响

目的检测信号素6A(Sema6A)基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况,探讨RNA干扰Sema6A基因对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤细胞株U-2OS、Saos-2及MG-63中Sema6A的mRNA表达水平。设计并合成针对Sema6A的小干扰RNA(siRNA)3条及阴性对照siRNA,在Lipofectamine RNAi MAX介导下转染U-2OS细胞,通过qRT-PCR检测Sema6A mRNA水平表达及蛋白质印迹法检测Sema6A蛋白水平,进而筛选出转染效率高的siRNA,CCK-8检测各组细胞活力,Transwell细胞侵袭和迁移实验检测各组细胞的侵袭及迁移能力。结果骨肉瘤细胞株中,Sema6A mRNA在U-2OS中表达最高。瞬时转染Sema6A siRNA的U-2OS细胞中Sema6A的mRNA及蛋白水平较阴性对照组均下降,与阴性对照组相比,实验组细胞的增殖、侵袭及迁移能力均增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论 RNA干扰沉默Sema6A基因可以增强U-2OS细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

siRNA沉默表皮生长因子受体蛋白表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的观察在siRNA沉默EGFR基因处理后肾癌细胞的生物学行为情况。方法将肾癌细胞株ACHN分为3组,对照组不进行任何干预,阴性对照转染组使用加入非特异性转染试剂及siRNA干预,观察组使用加入特性性转染试剂及siRNA干预,分别检测3组细胞的EGFR表达量、增殖活性、生长曲线、迁移及侵袭活性。结果经siRNA处理72 h后,观察组细胞EGFR表达水平明显低于阴性对照转染组和对照组;观察组细胞生长活跃能力显著低于对照组和阴性对照转染组,且在处理48 h后RNAi组细胞数显著低于对照组和阴性对照转染组(P0.05);较空白组和阴性对照转染组,观察组细胞生长受到显著抑制(P0.05);12 h时及24 h时观察组细胞划痕距离显著高于对照组和阴性对照转染组(P0.05);12 h时对照组、阴性对照转染组穿膜细胞数差异无统计学意义(P0.05),观察组穿膜细胞数显著低于对照组和阴性对照转染组(P0.05)。结论采用siRNA沉默EGFR蛋白后,可有效改善肾癌细胞的增殖、生长、迁移及侵袭等生物学活性。     

过表达SHIP-1对白血病细胞侵袭、迁移及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨含有SH2结构的5'肌醇磷酸酶-1(SHIP-1)对白血病细胞增殖、侵袭和迁移能力以及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法:采用脂质体Lipofectamine 2000将过表达载体p CDNA3.1-SHIP1转染白血病THP-1细胞,实验分为3组:对照组(未做处理的细胞),空载体组(转染空载体p CDNA3.1-NC)和过表达组(转染过表达载体p CDNA3.1-SHIP1);应用CCK-8法检测细胞的增殖情况,Transw ell法检测细胞侵袭、迁移能力,免疫印迹实验(Western blot)检测细胞中SHIP-1、AKT、磷酸化AKT(p AKT)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达量。结果:细胞转染过表达载体后SHIP-1的表达量显著高于对照组(P0.05);与对照组相比,空载体组细胞的吸光值没有明显差异(P0.05),过表达组细胞的吸光值显著降低(P0.05);空载体组细胞的侵袭、迁移数与对照组无明显差异(P0.05),过表达组细胞的侵袭、迁移数显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,空载体组细胞中AKT、p AKT和MMP-9的表达量没有显著差异(P0.05),过表达组细胞中AKT蛋白的表达量无显著差异(P0.05),但p AKT、MMP-9的表达量均显著降低(P0.05)。结论:SHIP-1抑制白血病细胞的增殖,且降低其侵袭、迁移能力,其机理可能与通过影响PI3K/AKT信号转导通路的活化从而下调MMP-9的表达有关。     

MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

胃癌细胞中STAT1的表观遗传学调控机制的研究

目的研究抑制信号传导和转录激活因子1(STAT1)基因表达对胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭、迁移等表观遗传学特性的影响。方法将胃癌细胞分为三组:空白对照组不做任何处理,空载体对照组、STAT1 SiRNA处理组分别转染SiRNA和特异性干扰STAT1基因表达的STAT1 SiRNA。蛋白质印迹法(Western Blot)检测STAT1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;Transwell法检测MKN-45细胞侵袭、迁移能力。结果抑制STAT1表达后,MKN-45细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力显著降低(P0.05),且STAT1 SiRNA处理组细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达量较空白对照组明显降低(P0.05);空载体对照组与空白对照组细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力、VEGF、MMP-9、MMP-2表达量比较差异均无显著性(P0.05)。结论 STAT1可能通过调控肿瘤细胞的转移能力以及血管生成等抑制胃癌细胞增殖及侵袭、迁移能力。     

MMP-2基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制。方法 Western blot和RT-PCR检测人正常前列腺上皮RWPE-1细胞和前列腺癌PC3细胞中MMP-2的表达情况;以脂质体Lipfectamine 2000将MMP-2 siRNA和MMP-2 control质粒分别转染至siRNA MMP-2组和siRNA control组细胞中,以不做处理的细胞为对照组。Western blot和RT-PCR检测其转染效果;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞的侵袭和迁移;FCM检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase-8蛋白的表达。结果与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MMP-2蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P0.05)。MMP-2在siRNA MMP-2组细胞中的蛋白和mRNA表达显著低于对照组(P0.05),而siRNA control组与对照组间MMP-2的蛋白和mRNA表达水平差异无显著性(P0.05)。siRNA MMP-2组细胞的OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数和VEGF蛋白的表达水平显著下降,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-8蛋白水平显著升高,差异均显著性(P0.05);对照组和siRNA control组间OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数、细胞凋亡率、VEGF和Cleaved Caspase-8蛋白表达均未见显著差异(P0.05)。结论 MMP-2在前列腺癌PC3细胞中高表达,干扰其表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF蛋白和上调Cleaved Caspase-8蛋白的表达有关。     

miR-152对SHI-1细胞增殖、转移及致瘤性的调控机制

目的:探究miR-152对人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1增殖、转移及致瘤性的调控机制。方法:将购买的SHI-1细胞系进行miR-152过表达(miR-152 agomir组)或抑制处理(miR-152 antagomir组)并设置阴性对照组(NC组)。应用CCK-8法检测各组细胞活力,划痕愈合实验检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力,Western blot检测各组细胞Cyclin D1、Caspase-3、MMP-2、TIMP-2、E-cadherin和N-cadherin的表达,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,裸鼠成瘤实验检测各组细胞的致瘤性。结果:与NC组相比,miR-152 agomir组细胞活力显著下降,细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P0.05),而miR-152antagomir组的细胞活力以及细胞迁移和侵袭能力均显著上升(P0.05)。与NC组相比,miR-152 agomir组细胞Cyclin D1、MMP-2、N-cadherin蛋白表达均显著下调(P0.05),但Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的表达在上述各组中明显升高;同时,细胞凋亡增强,裸鼠致瘤性降低(P0.05)。miR-152 antagomir组Cyclin D1、MMP-2和N-cadherin被显著诱导,但该组Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的蛋白表达显著下调;同时,细胞凋亡减少,裸鼠致瘤性增强(P0.05)。结论:miR-152能抑制SHI-1细胞系增殖、转移及致瘤的能力,同时诱导细胞凋亡,其机制可能与miR-152调控MMP-2以及TIMP-2等侵袭转移相关因子有关联。     

精氨酸甲基转移酶1调控铁死亡在肺癌细胞恶性生物学中的分子机制

目的 探讨精氨酸甲基转移酶1(CARM1)调控铁死亡在肺癌细胞恶性生物学中的分子机制。方法 通过免疫印迹检测正常人支气管上皮细胞（HBE4）和肺癌系中（A549、H1299、H1640、HCC827）中CARM1的表达情况。将CARM1序列或载体对照（Vector）以及针对CARM1(shCARM1)、Notch同源物2(shNotch2)的shRNA序列或阴性对照shRNA(shNC)转染到肺癌细胞中。分别通过CCK-8试验、Transwell试验测定细胞增殖、迁移和侵袭。利用RIP-PCR和MeRIP-qPCR分析探讨了CARM1的作用机制。采用经典的铁死亡诱导剂Erastin处理肺癌细胞以确定CARM1是否能影响细胞对铁死亡的敏感性。结果 与人正常气道上皮细胞HBE4相比，CARM1在肺癌系中（A549、H1299、H1640、HCC827）显著上调（P <0.05）。与Vector组相比，CARM1过表达组A549细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增加（P <0.001），而shCARM1组HCC827细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于shNC组（P <0.001）...     

miR-708对肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-708对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移能力的影响。方法对数生长期人肺腺癌A549细胞株随机分为转染组和对照组,转染组通过质粒转染上调miR-708表达,对照组采用常规质粒转染。转染24h,EDU染色后荧光显微镜下观察,计算2组A549细胞增殖率;转染后24、48h,采用细胞划痕实验检测2组A549细胞迁移距离。结果转染24h,转染组A549细胞增殖率[(19.58±1.15)%]较对照组[(42.04±1.04)%]低(P0.05);转染24、48h,转染组细胞迁移距离[(0.47±0.03)、(0.90±0.02)cm]较对照组[(0.75±0.04)、(1.44±0.02)cm]短(P0.05)。结论miR-708可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移能力。     

shRNA-FAM-38A基因对宫颈癌CS1213细胞增殖和迁移的影响

目的探讨shRNA-FAM-38A基因在宫颈癌CS1213细胞增殖和迁移中的作用。方法宫颈癌CS1213细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。空白对照组细胞不转染慢病毒载体,阴性对照组细胞转染无序序列慢病毒载体,实验组细胞转染沉默shRNA FAM-38A慢病毒载体。采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞FAM-38A、caspase-3和caspase-9 mRNA相对表达量,采用Transwell小室实验检测3组CS1213细胞迁移细胞数,采用CCK-8实验检测3组细胞增殖率。结果实验组细胞FAM-38A mRNA相对表达量(0.32±0.07)、迁移细胞数[(44.38±5.32)个]、细胞增殖率[(47.54±7.63)%]低于空白对照组[0.95±0.13、(99.72±19.63)个、(144.63±21.75)%]和阴性对照组[1.14±0.23、(119.63±21.87)个、(145.62±11.97)%](P0.05),caspase-3、caspase-9 mRNA相对表达量(5.11±1.21、12.64±2.87)高于空白对照组(0.84±0.09、0.22±0.03)和阴性对照组(0.89±0.12、0.21±0.04)(P0.05),空白对照组FAM-38A、caspase-3、caspase-9 mRNA相对表达量及迁移细胞数、细胞增殖率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 shRNA-FAM-38A基因可抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,可作为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

大蒜素对小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响

目的探讨大蒜素对肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响,为大蒜素治疗肺癌补充理论依据。方法实验分为对照组(正常培养A549细胞)、低剂量组(A549细胞+10μmol/L大蒜素)、中剂量组(A549细胞+30μmol/L大蒜素)和高剂量组(A549细胞+50μmol/L大蒜素)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖情况;采用荧光TUNEL法检测各组细胞凋亡;采用Transwell检测各组细胞迁移能力,采用Western blot技术检测各组细胞Caspase-3、p53和CHOP表达。结果不通浓度大蒜素可有效降低肺癌细胞的增殖、迁移能力,且与剂量呈负相关(P0.05);增加肺癌细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、p53和CHOP的表达,且表达水平与剂量呈正相关(P0.05)。结论大蒜素通过提高肺癌A549细胞Caspase-3、p53和CHOP等凋亡因子的表达诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖和迁移能力,从而发挥其抗肿瘤的作用。     

Biglycan及血管内皮生长因子对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制

目的:观察biglycan及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对结肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法:在稳定转染biglycan的结肠癌细胞系HCT116中转染VEGF siRNA,实验设置未转染对照组(mock组)、空载质粒和非特异性干扰片段转染对照组(vector+siRNA-NC组)、biglycan cDNA和非特异性干扰片段转染组(biglycan+siRNA-NC组)以及biglycan cDNA和VEGF siRNA共转染组(biglycan+siRNA-VEGF组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测biglycan和VEGF的mRNA表达;采用划痕实验检测细胞的迁移能力;采用Transwell法检测细胞的侵袭能力;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测SNAIL、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;采用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。结果:与mock组及vector+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-NC组细胞的迁移、侵袭能力均显著提高(P0.05),vimentin、MMP-2、MMP-9、SNAIL蛋白的表达水平显著提高,E-cadherin蛋白的表达水平则显著下降(P0.05),MMP-2和MMP-9的活性显著提高(P0.05)。与biglycan+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-VEGF组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P0.05),SNAIL、vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均显著下降,E-cadherin蛋白的表达水平显著提高(P0.05),MMP-2、MMP-9的活性显著下降(P0.05)。结论:biglycan通过促进VEGF的表达来促进结肠癌细胞系HCT116的迁移和侵袭,下调结肠癌细胞中VEGF的表达可逆转biglycan对HCT116迁移和侵袭的促进作用。     

营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法复苏培养人脑胶质瘤U251细胞,建立转染小干扰RNA(siRNA)的NAF1组(si-NAF1组)、阴性对照组(si-NC组)、未转染siRNA对照组(control组),采用CCK-8实验检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与control组比较,NAF1-siRNA干预U251细胞后,si-NAF1组NAF1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),其增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞增殖能力下降,克隆形成能力明显减弱,迁移能力明显降低,穿过Transwell膜的细胞数量明显减少(P均<0.05)。si-NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染siRNA后NAF1表达下降,进而下调PCNA水平,抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力;同时MMP-9蛋白表达水平下降,抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。     

靶向沉默Pax6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖侵袭的机制研究

目的探讨抑制Pax6基因表达对视网膜母细胞瘤增殖侵袭的影响及机制。方法 RT-PCR检测视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中Pax6基因的mRNA表达;Control组(不经任何处理)、阴性对照组(转染NC-siRNA)和Pax6沉默组(转染Pax6-siRNA)转染人视网膜母细胞瘤HXO-RB44,转染48 h后Western blot检测各组细胞中Pax6、ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达;CCK8和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果视网膜母细胞瘤中Pax6基因的mRNA表达显著高于瘤旁组织(P0.01);转染Pax6-siRNA后HXO-RB44细胞中Pax6的蛋白表达显著降低(P0.01);与Control组及NC-siRNA组比较,Pax6-siRNA组细胞存活率及细胞侵袭数显著降低,ki67、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著下调,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制Pax6基因表达可显著降低视网膜母细胞瘤增殖和侵袭能力,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

IL-32α通过调控miR-216b-5p/AKR1B10轴抑制食管癌KYSE450细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨IL-32α对食管癌KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 IL-32α诱导KYSE450细胞、IL-32α作用于转染miR-216b-5p mimics或si-AKR1B10的KYSE450细胞后,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测miR-216b-5p和AKR1B10 m RNA水平,Western Blot法检测AKR1B10、CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与AKR1B10靶向关系。结果与对照组比较,IL-32α组KYSE450细胞抑制率、p21蛋白和miR-216b-5p水平显著升高(P0.05),迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9的蛋白及AKR1B10的mRNA和蛋白水平均显著降低(P0.05),且呈剂量依赖性。mi R-216b-5p过表达或抑制AKR1B10均提高KYSE450细胞抑制率(P0.05),促进p21蛋白表达(P0.05),降低迁移和侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达(P0.05)。miR-216b-5p靶向负调控AKR1B10表达。抑制miR-216b-5p表达逆转了IL-32α对KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P0.05)。结论 IL-32α可抑制食管癌细胞KYSE450增殖、迁移和侵袭,其机制与IL-32α上调miR-216b-5p表达进而靶向负调控AKR1B10表达有关。