Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞向成骨细胞诱导分化的体外研究

目的：探讨矿化液体外诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化的过程。方法：取妊娠12．5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞，培养于含10mmol／L β-甘油磷酸钠、100μg/mL维生素C、10nmol／L地塞米松、150mL／L胎牛血清的DMEM中。相差显微镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质，碱性磷酸酶染色及活性检测，矿化结节Von Kossa染色。结果：培养14d，细胞形态发生明显变化，呈多边形、立方形，抗I型胶原染色阳性。碱性磷酸酶活性增高，碱性磷酸酶染色阳性，矿化结节形成。结论：矿化液可诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化。     

TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化

目的：探讨TGFβ、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力。方法：取妊娠12．5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞，分别在含60、100mmol/L的TGF－β和1．6、3.2mmol/L的rhBMP-2的DMEM／F12中培养，相差显微镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质。结果：培养2d,60pmol/L的TGF－β组细胞形态发生明显变化，细胞变得大而扁平，培养4d，免疫组化鉴定约70％的细胞分化为平滑肌细胞，rhBMP-2组细胞形态未见明显改变，1.6nmol/L组免疫组化鉴定约5％的细胞分化为平滑肌细胞，未能诱导分化出神经元细胞。未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化。结论：TGFβ、rhBMP-2可诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化。     

大鼠颌突外胚间充质细胞向骨骼肌细胞诱导分化和三维培养观察

目的：探讨体外诱导外胚间充质细胞向骨骼肌细胞分化的潜能，利用分化细胞构建组织工程骨骼肌模型。方法：取妊娠10．5d胎鼠颌突外胚间充质细胞，纯化后分别在含1、5、10mL／L体积浓度二甲基亚砜的DMEM／F12培养基中培养。相差显微镜下观察细胞的形态变化，成肌相关因子免疫组化鉴定细胞性质，将诱导后的细胞种植于胶原膜，并于培养3、6d后用光镜、扫描电镜观察细胞的生长情况。结果：培养3d后，外胚间充质细胞形态出现成肌样细胞变化，细胞变得大而扁平，培养5d后细胞出现管样结构。免疫组化鉴定显示：添加二甲基亚砜后，大部分细胞出现成肌相关因子的表达，其中5mL／L实验组效果最好，约75％的细胞转化为骨骼肌细胞。对照细胞形态未见明显改变，免疫组化鉴定未能诱导分化出骨骼肌细胞。种植于BAM膜后，细胞生长良好，并可形成复层结构。结论：二甲基亚砜可诱导外胚间充质细胞向骨骼肌细胞分化，最佳浓度为5mL／L；在BAM膜上分化细胞生长状态良好，说明该生物可降解膜是构建组织工程骨骼肌的适合材料。     

酶消化法培养Balb/c胎鼠下颌突未分化外胚间充质细胞

目的：用酶消化法培养Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞，并与组织块法相比较，研究其形态和生长特性。方法：采用1.25g/L的胰酶消化法获取E12.5d Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞，用含10^6U/L LIF的D／F12培养细胞，倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况，免疫组化鉴定细胞来源及分化状况。结果：培养的细胞呈单层生长，长梭形，有2－4个突起，抗HNK－1、Vimentin、S－100、NSE染色阳性，抗GFAP、NF、MA染色阴性，证实为未分化外胚间充质细胞。结论：用酶消化法可在短期内获得大量的未分化外胚间充质细胞。     

胰岛素样生长因子1诱导外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化

目的：探讨SD大鼠颌突外胚间充质细胞向成牙本质细胞的分化机制。方法：在建立SD大鼠颌突外胚间充质细胞体外培养模型的基础上，用胰岛素样生长因子1(IGF-1)刺激外胚间充质细胞，采用倒置微镜和免疫组化等方法从形态学和功能方面检测细胞的变化。结果：在不含LIF的培养液中加入100ng/mL IGF-1培养的外胚间充质细胞，10d后在倒置显微镜下可见一些细胞出现单一细胞浆突起，似成牙本质细胞。消化后爬片经免疫组化抗DSP染色，部分细胞胞浆呈强阳性着色。结论：IGF-1可部分地诱导外胚间充质细胞向功能性成牙本质细胞分化，可能是牙齿发育过程中的重要细胞因子之一。     

诱导颌突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化

目的：探讨外胚间充质干细胞向成骨细胞分化的能力；方法：利用矿化液诱导外胚间充质干细胞分化，通过免疫组化和RT—PCR鉴定，以大鼠成纤维细胞作为对照。结果：显示外胚间充质干细胞经矿化液诱导后，细胞形态发生变化，细胞形态为立方状，紧密排列，类似成骨细胞，随着培养时间增长，可形成矿化结节；免疫组化显示诱导的外胚间充质干细胞表达Ⅰ型胶原；RT—PCR结果说明诱导的外胚间充质干细胞表达成骨细胞特异标志-骨桥素mRNA。而对照组细胞形态未出现变化，也无成骨细胞标志表达。结论：外胚间充质干细胞经矿化液诱导后成为成骨细胞。     

大鼠外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞定向诱导分化--三维诱导模型的建立

目的：探讨大鼠面突外胚间充质细胞向成牙本质细胞分化的机制。方法：以胶原作为支架，建立外胚间充质细胞三维培养模型，并在培养液中加入10ng／mlbFGF和(或)100ng／mlIGF-1等生长因子，观察和检测细胞表型的变化。结果：经bFGF和IGF-1诱导4d后，在胶原的周边细胞出现平行排列的具有细长单极突起的成牙本质细胞样细胞，通过免疫组化抗DSP抗体染色阳性。而其余组细胞排列较紊乱，抗DSP染色阴性。结论：含有bFGF和IGF-1的三维诱导模型可诱导大鼠外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化，为研究牙齿发育的分子机制奠定了基础。     

腭裂相关基因mcpr1在不同组织细胞中的表达

目的：初步探讨新基因mcpr1在腭突外胚间充质细胞、下颌突外胚间充质细胞、牙囊细胞等中的表达情况。方法：取妊娠12.5d的胎鼠第3代腭研究会外胚间充质细胞及实验室已成功培养的人牙髓细胞、牙周膜细胞、牙囊细胞及下颌外胚间充质细胞，利用已制备的MCPR1多克隆抗体，进行细胞免疫组织化学染色，分析MCPR1的表达情况。结果：腭寄突外胚间充质细胞组织块培养法培养，稳定传至3代，免疫组化结果示腭突外胚间充质细胞及人牙击膜细胞强阳性表达，在下颌突外胚间充质细胞，牙囊细胞及牙髓细胞表达较弱。结论：MCPR1在不同来源的细胞中广泛表达，但表达水平不同。进一步提示MCPR1可能参与不同组织器官的发生发展，在胚胎发育的不同时期具有不同的表达模式。     

牙胚细胞条件培养液诱导大鼠胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。方法：取妊娠12．5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞，在牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）的诱导下，通过形态学观察、免疫组化、RT—PCR等方法，探索牙胚细胞条件培养液诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的可能。结果：面突外胚间充质细胞在诱导培养基中生长良好。培养7d，在诱导组中细胞出现核极化，有很长的突起，细胞平行排列。抗牙本质涎蛋白（DSP）呈阳性反应。RT—PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白-1（DMP-1）。结论：面突外胚间充质细胞在含有多种细胞因子的TGC—CM的作用下能分化为成牙本质样细胞，能为研究牙齿的分化和发育提供良好的模型和实验依据。     

哺乳动物外胚间充质细胞的表型和形态学研究

目的：探讨胚胎中外胚间充质细胞表型和形态鉴定。方法：取E12 SD大鼠胚胎颌突组织进行免疫组化鉴定和电镜观察。结果：免疫组化抗LNGFR、NF、NSE、S100、Vimentin呈阳性着色，抗GFAP呈阴性着色；细胞主要为间充质样细胞，形状不规则，呈多突起的星形或梭形，突起不规则；核、浆比例大；核仁明显，大、靠边；常染色质多，异染色质少；含有大量的线粒体及少量粗面内质网及核糖体。电镜结果显示细胞代谢旺盛，增殖活性高，处于未分化状态。结论：外胚间充质中存在表达神经嵴前体细胞标志LNGFR的细胞，而且这些细胞在形态上也明显处于未分化状态，说明在迁移后的神经嵴细胞中仍然含有未分化的多能前体细胞。     

成体干细胞及牙源性干细胞的研究进展

人体干细胞是在人体生长和发育过程中起主干作用的细胞,干细胞研究是目前生物医学研究的前沿领域,本文着重对成体干细胞和牙源性干细胞的研究现状及进展作一介绍。     

脂肪来源干细胞诱导分化为成牙本质样细胞的体外培养研究

目的:探讨大鼠脂肪来源干细胞(ADSCs)向成牙本质样细胞分化的可能性.方法:SD仔4只,处死后取腹股沟处脂肪组织.采用细胞体外共培养的方法,在牙胚细胞条件培养液(TGC-CM)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,观察脂肪来源干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.结果:大鼠脂肪来源干细胞在诱导培养基中生长良好.培养7 d,在诱导组中细胞出现核极化,有很长的突起,细胞平行排列.抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应.RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白(DMP-1).结论:含有多种细胞因子的TGC-CM能提供较好的微环境,诱导大鼠脂肪来源干细胞向成牙本质样细胞分化,能为组织工程牙体再生提供种子细胞来源和微环境选择.     

人成牙本质细胞的分离和鉴定

目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞。方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定。结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白。结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础。     

牙髓干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展

血管内皮细胞是血管的核心,表达一些特异性标志物如血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、CD31和血浆血管性血友病因子等,具有在基质胶上形成管状结构的特征。牙髓干细胞是具有自我更新能力和多向分化潜能的一类成体间质干细胞,在添加不同成分诱导物的条件培养基中可定向分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞和神经细胞。体外研究发现,在添加血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子成分的低血清培养基培养一段时期后,牙髓干细胞可以表达内皮细胞标志物,同时具有形成血管状结构能力;体内研究发现,牙髓干细胞可促进低血区域组织血管生成和血流灌注,进一步证实牙髓干细胞亦可定向分化为内皮细胞。     

Stem cell properties of human periodontal ligament cells

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Stem cells have been used for regenerative therapies in various fields. The proportion of cells that possess stem cell properties in human periodontal ligament (PDL) cells is not yet well understood. In this study, we quantitatively characterized human PDL cells to clarify their stem cell properties, including self-renewal, multipotency, and stem cell marker expression. MATERIAL AND METHODS: PDL cells were obtained from extracted premolar or wisdom teeth, following which a proliferation assay for self-renewal, a differentiation assay for multipotency, immunostaining for STRO-1, and fluorescence-activated cell sorter (FACS) analysis for stem cell markers (including CD105, CD166, and STRO-1) were performed. RESULTS: Approximately 30% of 400 PDL cells were found to possess replicative potential and formed single-cell colonies, and 30% of these colonies displayed positive staining for STRO-1, 20% differentiated into adipocytes and 30% differentiated into osteoblasts. FACS analysis revealed that PDL cells, including cell populations, expressed the stem cell markers CD105, CD166, and STRO-1. CONCLUSION: The findings of this study indicated that PDL cells possess crucial stem cell properties, such as self-renewal and multipotency, and express the mesenchymal stem cell markers CD105, CD166, and STRO-1 on their cell surface, although there were some variations. Thus, PDL cells can be used for periodontal regenerative procedures.     

大鼠颌下腺肌上皮分化的研究

目的 :观察组织块原代培养法是否可用于涎腺肌上皮细胞发育分化的研究 ,并探讨肌上皮细胞的组织发生。方法 :采用组织块原代培养法 ,通过相差显微镜、透射电镜及免疫组化染色等检测手段 ,对不同时期大鼠颌下腺肌上皮细胞进行研究。结果 :肌上皮样细胞及含有分泌颗粒的分泌细胞见于体外培养第 3d。肌微丝及Actin阳性细胞分别最早出现于培养第 6d和 7d。此结果与体内研究结果相一致。结论 :肌上皮细胞可能来源于上皮干细胞 ;体外组织块培养方法亦适用于细胞分化研究。     

新生大鼠牙乳头细胞的体外培养和矿化特征

目的：观察体外培养的新生大鼠牙乳头细胞的生物学特征。方法：体外培养出生1d大鼠磨牙牙乳头细胞，进行组织学染色，透射扫描电镜观察。结果：体外培养的新生大鼠牙乳头细胞能形成细胞克隆，第3代细胞在含2mmol／L β-甘油磷酸钠、50mg／L抗坏血酸、10^-8moL/L地塞米松的培养液中培养7～8d后可呈现复层生长，培养14～16d后细胞结节中出现矿化，茜素红染色呈阳性反应；透射电镜观察细胞内出现大量含有致密小体的基质小泡样超微结构。结论：发育阶段较早的大鼠牙乳头细胞具有增殖和矿化能力。     

IL—6对人牙髓细胞,牙周膜细胞生长影响的实验研究

目的：了解ＩＬ－６对构成牙髓、尖周组织主要细胞生长的影响，揭示ＩＬ－６在牙髓、尖周病变过程中的作用。方法：应用细胞培养技术，采用ＭＴＴ比色法进行细胞生长及存活状态测定。结果：ＩＬ－６抑制牙髓细胞、牙周膜细胞的生长，并呈时间和剂量依赖关系，两细胞间无显著差异。结论：ＩＬ－６可能对牙髓、尖周组织损伤的修复和代谢功能有一定影响     

大鼠成釉器细胞的分离纯化

目的：寻找一种大鼠成釉器细胞分离纯化的简捷方法。方法：分离出生后6dSD大鼠上下颌第一和第二磨牙完整牙胚，剥离牙囊和成釉器，酶消化法原代混合培养。采用多次差别消化法去除成纤维样细胞，纯化上皮样细胞，并进行抗角蛋白染色和RT—PCR检测釉原蛋白、成釉蛋白mRNA表达。结果：原代细胞为混杂细胞，经2～3次差别消化可完全去除成纤维样细胞。上皮样细胞呈多角形，铺路石样生长，抗角蛋白染色阳性，表达釉原蛋白、成釉蛋白mRNA。结论：本研究通过多次差别消化获得了纯化的大鼠成釉器细胞。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚问充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨人胚胎面突外胚间允质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。方法：采用体外细胞三维立体培养的方法，在转化生长因子B1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下，通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法，探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用。结果：人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好。培养4d，在TGFβ1 DNCP组中细胞出现核极化，有很长的突起，细胞平行排列。诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。碱性磷酸酶活性增强。细胞在矿化液中能形成矿化结节。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSFP)。结论：三维立体培养下，人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFB1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。本结果将外胚间充质干细胞作为前体，诱导分化出成牙本质样细胞，为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据。